Clara Pérez Barrios (Majadahonda
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Clara Pérez Barrios R1 Bioquímica Clínica Hospital Puerta de Hierro (Majadahonda)
Electroforesis capilar.
Electroforesis en solución libre dentro de un capilar con un diámetro inferior a 100 µm. Detección directa por absorbancia a 200 nm.
Inmunotipado
Electroforesis capilar.
Es una técnica en la que la separación de las proteínas depende de dos factores: • La resultante neta del flujo electroendosmótico hacia el cátodo. • La movilidad electroforética de las proteínas hacia el ánodo (tampón alcalino) cuando se aplica una diferencia de potencial a lo largo de un capilar.
Electroforesis: gel de agarosa (AGE) vs. capilar (EC)
AGE ! 10 !l muestra.
! Tiempo aprox. 1hora.
! Poco efecto
electroendoosmótico.
! Artefacto en el punto de
aplicación.
EC ! 1 – 50 nl de muestra.
! Tiempo aprox: 4 – 5 min.
! Mayor efecto
electroendoosmótico.
! Facilidad de automatización
(detección e identificación del
CM).
! Múltiples aplicaciones.
AGE (colorantes) ! Se unen específicamente a
proteínas. ! No se tiñen bien las proteínas
glicosiladas. ! Saturación lectura densitométrica. ! Mayor posibilidad de error.
EC (Lectura directa). ! Detección enlace peptídico a 200 –
214nm ! Valor real de proteínas. ! Mayor sensibilidad. ! Linealidad hasta 12 g/dL.
Comparación sistemas de detección
Interpretación:
Electroforesis en gel agarosa (AGE) Electroforesis capilar (CE)
EC vs. AGE: Diferencias en el espectro.
1. Prealbúmina antes de albúmina.
2. Detección de lipoproteínas. (Banda de albúmina).
3. Fracción alfa 1 . E.Capilar> E. agarosa.
4. Separación de proteínas en 6 fracciones (Beta 1 y Beta 2) mediante electroforesis de zona.
! Análisis de proteínas del suero ! Isoenzimas ! Lipoproteínas ! Aminoácidos ! Fármacos ! Drogas de abuso ! Aniones inorgánicos ! Vitaminas ! Hemoglobina A1c
Aplicaciones de la Electroforesis Capilar.
Identificación del componente monoclonal.
! Inmunofijación. ! Inmunotipado.
¿Ig M, Ig A, Ig G, cadenas Kappa!?
Inmunofijación.
Es una técnica cualitativa que permite la identificación de componentes proteicos a través de la formación de bandas de precipitación antígeno-anticuerpo en un corto tiempo de incubación (1 o 2 horas).
Dos etapas: 1) Electroforesis en gel de agarosa con separación de las proteínas.
2) Inmunoprecipitación. Aplicación de un anticuerpo monoespecífico del antígeno. Precipitación antígeno-anticuerpo.
Inmunofijación.
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Inmunofijación.
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Inmunofijación con muestras de suero
Proteinograma + anticuerpos: Anti-G. Anti-A. Anti-M. Anti-". Anti-#.
&IgG K
Inmunofijación con muestras de orina
Proteinograma+anticuerpos.
Anti IgG+IgA+IgM
Anti-" Anti-#. Anti-" libres Anti-# libres
Kappa+ Kappa libres
Inmunofijación.
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Gammapatía monoclonal
IgM K
Gammapatía monoclonal
Ig E "
Inmunotipado.
! Técnica de identificación de la posible proteína monoclonal tras substracción con anticuerpos específicos.
Fases:
! Electroforesis capilar (detección del CM).
! Reacción inmunoquímica con el anticuerpo específico de cada tipo de inmunoglobulina (anti-IgG, anti-IgM, anti-IgA, y excepcionalmente anti-IgD o anti-IgE) y anti-kappa y anti-lambda.
! Nueva electroforesis capilar y comparación con la primera para identificar la desaparición del componente monoclonal.
Inmunotipado.
IgA
IgA kappa
Componente monoclonal
Inmunotipado.
! Ventajas.
! Rapidez y automatización.
! Inconvenientes.
! Clasificación difícil de bandas débiles. Identificación menos concluyente que con IF (resultado negativo vs. resultado positivo).
12+3+4+
BJ lambda
GRACIAS POR SU ATENCIÓN