Chevaliez s hcv strat diag+suiv virol2014

Hépatite CStratégie Diagnostique &

Suivi Virologique

Stéphane Chevaliez

Centre National de Référencedes Hépatites Virales B, C et delta

Laboratoire de Virologie & INSERM U955Hôpital Henri Mondor

Université Paris-EstCréteil

• 150 million people are chronically infected with hepatitis C virus (HCV)

• 1st cause of cirrhosis and HCC in European countries and in the US

• More than 350,000 deaths a year

• Curable disease by treatment

• Treatment is based on triple or dual therapy according to HCV genotype

Hepatitis C WorldwideStratégie diagnostique & suivi virologique

Stratégie diagnostique & suivi virologique

Marqueurs indirects

Anticorps anti-VHC totaux

Marqueurs directs

Ag de capside (AgC)

ARN VHC

Génotype VHC

Profil de résistance

Marqueurs Virologiques

Tests Sérologiques

• Détection et quantification de l’antigène de capside (AgC)

• Tests “Combo”– Détection simultanée de l’AgC et des anticorps anti-VHC

• Détection of des anticorps anti-VHC par EIA de 3ème génération

• TROD (test rapide d’orientation diagnostique)


Antigène de Capside : un Marqueur de la Réplication


r=0.903; p<0.001 r=0.888; p<0.001

HCV RNA level in m2000 (Log IU/mL) HCV RNA level in CAP/CTM v2.0 (Log IU/mL)

Genotype 1Genotype 2Genotype 3Genotype 4Genotype 5Genotype 6

Chevaliez et al., submitted.

0

1

2

3

4

5

Genotype 1(n=162)

Genotype 2(n=14)

Genotype 3(n=29)

Genotype 4(n=52)

Antigène de Capside en Fonction des Génotypes


Chevaliez et al., submitted.

Intérêts Cliniques de la Quantification de l’AgC

• Diagnostic de l’infection– Trousses commerciales– Facile à utiliser, automatisé, peu coûteux (30% par

rapport à une charge virale VHC)

• Décision de traiter et suivi de l’efficacité des traitements antiviraux– Quantitatif– Alternative aux techniques de détection-quantification

de l’ARN du VHC


Performances Analytiques de la Trousse Architect (Abbott)

• Spécificité– 99,2% à 100%

• Sensibilité – 3 fmol/L (i.e ~ 500 to 3 000 UI/mL d’ARN VHC)– Tous les génotypes (excepté génotype 2)

• Intervalle de quantification– 3 à 20 000 fmol/L (≤ 7,8 Log10 UI/mL d’ARN VHC)

• Stable à 37°C pendant 96 heures

Ross et al., J Clin Micribiol 2010, 48(4): 1161-8; Mederacke et al., J Clin Virol 2009, 46(3): 210-5; Miedouge et al., J Clin Virol 2010, 48(1):18-21.


Trousse Architect : Monitorage des Cinétiques Virales

RVR (G1b) RVS (G1b)

Rechuteur (G1b) Non-répondeur (G1a)

Ross et al., J Clin Microbiol 2010, 48(4): 1161-8.

Core Ag

RNA


Performances de la Trousse Architect chez Différentes Populations

Mederacke et al., J Clin Virol. 2012 Feb;53(2):110-5.


Test “Combo“ (AgC/Anti-VHC)

• Diagnostic de l’infection par le VHC– Trousses commerciales– Faciles à utiliser, automatisés– Diminution de la fenêtre sérologique d’environ

20-30 jours– Moins sensibles que les tests de 3ème génération

pour la détection des anticorps anti-VHC


Détection des Anticorps Anti-VHC

• Diagnostic de l’infection par le VHC– Trousses commerciales– Faciles à utiliser, automatisées– A l’aide d’un test de 3ème génération

. ADVIA Centaur (Siemens)

. VITROS ECi (Ortho-Clinical Diagnostic)

. AXSYM HCV 3.0 (Abbott)

. Cobas Elecsys Modular HCV (Roche)

. INNOTEST HCV Ab IV (Innogenetics)

. Monolisa anti-HCV Plus version 2 (Bio-Rad)


Tests rapides Disposant d’un Marquage CE/IVD pour la Détection des Ab anti-VHC

Oraquick HCV Toyo HCV Labmen HCV

FabricantDistrib. France

Orasure (USA)Meridian

Bioscience Eur.

Turklab (Turquie)Nephrotek

Turklab (Turquie)Nephrotek

Matrices Liq. craviculaire,Sang total, sérum,

plasma

Sang total, sérum, plasma

Sang total, sérum, plasma

Technologie IC Flux latéral Flux latéral

Délai lecture résultat 20-40 min 15 min 15 min

PU catalogue HT 15 € 6,4 € €


Performances des Tests rapides pour la Détection des Ab anti-VHC

Spécificité (IC95%)

Sensibilité (IC95%)

VPP VPN

Sang total capillaire

OraQuick® HCV Rapid Ab Test

100%(97,9-100,0)

99,4%(97,7-99,9)

100% 98,4%

TOYO® anti-HCV test

98,2%(94,8-99,4)

96,2%(93,3-98,0)

99,0% 93,1%

Labmen® HCV test

100%(94,4-100,0)

62,7%(54,8-69,5)

100% 49,6%

Liquide craviculaire

OraQuick® HCV Rapid Ab Test

100%(97,9-100,0)

98,2%(95,9-99,1)

100% 96,6%

Chevaliez S, et al., article soumis.


Tests Virologiques Moléculaires

Détermination du Génotype

Quel est le génotype du VHC ?

Détection de la résistanceDétection de la résistance

Quel type de VHC est présent ?

Est-ce que le VHC est présent et en quelle quantité ?

Tests Qualitatifs-Quantitatifs


- Make appropriate decisions. Shorten or extend treatment duration. Stop treatment due to futility

Identify treatment failure and the emergence of resistance. Virological failure is associated with selection of viral

variants with reduced susceptibility to DAAs

Clinical Utility of HCV RNA Assays in the Era of DAAs


Rx response terms

Definition New nomenclature

vRVR HCV RNA undetectable at week 2 of therapy W2UTND

RVR HCV RNA undetectable at week 4 of DAA therapy W4UTND

LI4W-W8UTND

eRVR HCV RNA undetectable at week 4 and through week 12 of therapy

W4U-12UTND

SVR12 HCV RNA undetectable 12 weeks after treatment cessation

SVR12TND

SVR24 HCV RNA undetectable 24 weeks after treatment cessation

SVR24TND

Wedemeyer et al., Hepatology 2012, 56(6):2398-403; Jacobson et al., J Viral Hepat. 2012,19(4):236-43.

New Response Categories at the Protease Inhibitor Era


Higher Rates of SVR in Patients Achieving an eRVR or an RVR

SVR

(%)

SPRINT-2ADVANCE

Jacobson et al., N Engl J Med. 2011, 364:2405-2416; Poordad et al., N Engl J Med. 2011, 364:1195-1206.


• More than 13,000 adults considered (86.2% genotype 1)• From 15 Phase II and III studies (pegIFN, AlbIFN, BOC, TVR)

SVR24 (%)

Not detected

Detected PPV NPV Se Sp

SVR12(G1)

Not detected 5428 93

98.3 98.8 99.0 98.0Detected 56 4617

SVR4(G1)

Not detected 4239 412

91.1 98.3 98.8 87.9Detected 53 3002

Chen et al., Gastroenterology 2013 Jun;144(7):1450-1455.e2.

Concordance Between SVR24 and SVR12 (or SVR4)


Requirements for HCV RNA Assays

• Real-time-based assays with– A low lower limit of detection– A broader range of linear quantification– Identical lower limits of detection (LLOD) and

quantification (LLOQ)

• Satisfactory analytical performance, regardless of the HCV genotype


Available HCV RNA Assays

• Qualitative assays– Target amplification methods

. PCR (Polymerase Chain Reaction)

. TMA (Transcription-Mediated Amplification)

• Quantitative assays– Signal amplification method

. bDNA (branched DNA)– Target amplification methods

. Real-time PCR

. Real-time TMA


10 102 103 104 107 108

Cobas AmplicorHCV Monitor v2.0

SuperQuant

LCx HCV RNAAssay

Versant HCV RNA3.0 (bDNA)

CTM HCV test v2.0 CTM HCV test v2.0 (Roche)(Roche)

RealTiRealTimme™ HCVe™ HCV(Abbott)(Abbott)

Artus HCV QS-RGQArtus HCV QS-RGQ(Qiagen)(Qiagen)

CAP/CTM HCV test, CAP/CTM HCV test, v2.0 (Roche)v2.0 (Roche)

Versant HCV RNAVersant HCV RNA1.0 (kPCR, Siemens)1.0 (kPCR, Siemens)

105 106

Chevaliez et al., Gastroenterology 2012 May;142(6):1303-1313.

Intervalles de QuantificationStratégie diagnostique & suivi virologique

Harrington et al., Hepatology. 2012 Apr;55(4):1048-57.

0

1

2

4

6

8

0 Time

HCV

RN

A le

vel (

Log 10

IU/m

L)

Detectable/quantifiable

SVR

Undetectable LLOD

Detectable/not quantifiable

HCV Treatment

LLOQ

1

2

7

6

5

4

3

LLOD or LLOQ: Which One Make Use Of?


100

0

40SVR

(%) 60

20

80

100

0

40

60

20

4

80

8 10 12 16 20

Week

4 6 10 12 16 208

Week

ADVANCE(T12PR)

SPRINT-2BOC/PR RGT

UndetectableDetectable/Below LLOQAbove LLOQ (> 25 IU/mL)Harrington et al., Hepatology. 2012 Apr;55(4):1048-57.

SVR Rates According to HCV RNA Status


Avantages Techniques de la PCR (TMA) en Temps Réel

- Diminution du risque de contamination

- Amélioration de la sensibilité

- Augmentation de l’intervalle de quantification linéaire

- Amélioration précision et reproductibilité

- Augmentation de débit à travers l’automatisation


Plates-formes de PCR en Temps Réel

CAP-CTM96 (ROCHE)

kPCR (SIEMENS)

m2000SP-m2000RT (ABBOTT)


HCV RNA Quantification(CAP/CTM v1.0, Roche)

Adapted from Chevaliez et al., 2007; Hepatology, 46(1): 22-31.

HCV

RN

A le

vel i

n CA

P/CT

M v

1.0

(Log

10 IU

/mL)

HCV RNA level in HCV 3.0 bDNA(Log10 IU/mL)

8

7

6

5

4

3876543 876543

Mean of HCV RNA levels in CAP/CTM v1.0 and bDNA (Log10IU/mL)

Diff

eren

ce b

etw

een

CAP/

CTM

v1.

0 an

d bD

NA

(Log

10 IU

I/m

L)

+1.5

+1.0

+0.5

0.0

-0.5

-1.5

-1.0

-0.15

+0.48

+1.11

Genotype 3 (n=29) Genotype 2 (n=27)Genotype 1 (n=29) Genotype 4 (n=30)

Genotype 6 (n=2)Genotype 5 (n=9)


Effect of nucleotide Substitution on HCV Genotype 4 RNA Quantification

Chevaliez et al., Hepatology 2009, 50(5): 1681; Vermehren et al., 2011; J Clin Microbiol, 49(9): 3309-3315.

WT G4 or WT G1A165T or G145AG145A+A165TG145A+A165T±A142G

HCV

RN

A le

vels

(Log

10 IU

/mL)

Mea

n tit

er (L

og10

Cp/

mL)


Chevaliez et al. J Clin Microbiol. 2013, 51(4):1078-82.

HCV

RN

A le

vel i

n CA

P/CT

M v

2.0

(Log

10 IU

/mL)


8

7

6

5

4

3876543 876543


Diff

eren

ce b

etw

een

CAP/

CTM

v1.

0 an

d bD

NA

(Log

10 IU

I/m

L)

+1.5

+1.0

+0.5

0.0

-0.5

-1.5

-1.0

+0.08

+0.35

+0.62

Genotype 4 (n=122)

Genotype 4 HCV RNA Quantification(CAP/CTM v2.0, Roche)


HCV RNA Quantification(CAP/CTM v2.0, Roche)

Zitzer et al., J. Clin. Microbiol. 2013;51:571-577.




Chevaliez et al., J Clin Microbiol, 2009,47(6):1726-32.

HCV RNA Quantification(m2000, Abbott)

Genotype 3 (n=29) Genotype 2 (n=21)

Genotype 1 (n=55) Genotype 4 (n=24)

Genotype 6 (n=3)Genotype 5 (n=9)

876543

Mean of HCV RNA levels in m2000 and bDNA (Log10IU/mL)

Diff

eren

ce b

etw

een

m20

00 a

nd b

DN

A (L

og10

IUI/

mL)

+1.5

+1.0

+0.5

0.0

-0.5

-1.5

-1.0

-0.06

+0.26

+0.58

HCV

RN

A le

vel i

n m

2000

(Log

10 IU

/mL)


8

7

6

5

4

3876543


Hang et al., ECCMID London, April 2012; Drexler et al., J Clin Microbiol 2012 Jun;50(6):2114-7.

QS-RGQ (Qiagen)kPCR (Siemens)

HCV RNA QuantificationStratégie diagnostique & suivi virologique

HCV RNA Level Assessment in Practice• HCV RNA quantification should be regularly assessed

before, during and after treatment

• HCV RNA quantification should be based on a real-time PCR (or TMA) assay– With results expressed in IU/mL– With identical LLOD and LLOQ, of the order of 10-15 IU/mL

• In a given patient, HCV RNA level monitoring must be performed with the same real-time assay


Europe or FDA Approval for HCV RNA Quantification Tests

• Only 2 tests are approved by the FDA and in Europe for HCV RNA quantification in clinical practice– m2000 since May 2011– New version of CAP/CTM since March 2013


Génotypes du VHCStratégie diagnostique & suivi virologique

Smith et al., Hepatology 2014;59(1):318-27.

Répartition des GénotypesStratégie diagnostique & suivi virologique

1a,

Adapted from Fang J., et al. J. Clin Liver Dis., 1997.

Brouard et al., EASL 2009, Abstract actualisé 167.

Répartition des Génotypes en France



• Méthodes moléculaires (genotyping)– Analyse de la séquence après séquençage direct– Hybridation inverse des produits d’amplification sur des

supports solides comportant des sondes génotype spécifique : Line Probe Assay (INNO-LiPA HCV, Innogenetics)

– PCR en temps réel à l’aide d’amorces et de sondes génotype spécifique

• Méthodes sérologiques (“serotyping”)– ELISA compétitif

Arens et al., J Clin Virol, 2001; 22:11-29; Davidson et al., J Gen Virol 1995; 76: 1197-204; Lareu et al., 1997; Le Pogam et al., 1998; J Clin Microbiol; 36: 1461-3; Ilina et al., J Clin Miocrobiol, 2005; 43(6): 2810-15.


Arens et al., J Clin Virol, 2001; 22:11-29; Davidson et al., J Gen Virol 1995; 76: 1197-204; Lareu et al., 1997; Le Pogam et al., 1998; J Clin Microbiol; 36: 1461-3; Ilina et al., J Clin Miocrobiol, 2005; 43(6): 2810-15.

• Méthodes moléculaires (genotyping)– Analyse de la séquence après séquençage direct– Hybridation inverse des produits d’amplification sur des

supports solides comportant des sondes génotype spécifique : Line Probe Assay (INNO-LiPA HCV, Innogenetics)

– PCR en temps réel à l’aide d’amorces et de sondes génotype spécifique

• Méthodes sérologiques (“serotyping”)– ELISA compétitif



Analyse Phylogénique après Séquençage Direct

Région NS5B (286 nt)CLUSTALXDNADist (PHYLIP 3.5)Matrice de distance: Kimura 2-parameter (Ts/Tv=2)Neighbor-JoiningBootstraping : 1000 replicatesNJPlot

5aSA132aHCJ6

Patient 496aEUHK2 3aNLZ1

Patient 624aED431hFrSSD98

1h98CM13571h98CM1521

1cHCG91cSR0311cKhaja11aHCV1

1aHCVH1aHCJ1

1jQC21jQC89

1kQC681kQC82

1eM4541N1eCAM10781eQC172

1g13821g2152

1gEG0241lM5186N1l98CM1427

1l98CM14571fFR2Patient 59

Patient 46Patient 54Patient 2

Patient 28Patient 64Patient 16Patient 36

Patient 18Patient 17Patient 8

Patient 71bHCJ4

1bHCVBK1bHCP01

Patient 401iFR16

1iQC771iQC181Patient 48Patient 60Patient 52

Patient 261dFR17

1dHC1N161dBA107

1mGUI171mGUI11

1mGUI24

0.05

5999

96

34100

72

100

98

43

Génotype 2

Génotype 4

Génotype 3

Génotype 1

Génotype 6

Génotype 2Génotype 5

Génotype 1, sous-type b

Génotype 3, sous-type a

Génotype 1, sous-type i

Génotype 1, sous-type ?

100


Versant® HCV Genotype 2.0 Assay (INNO-LiPA)


Intérêt de la Détermination du Sous-Type (1a vs 1b) ?

- Modeste différence d’efficacité de la trithérapie

- Profils de résistance différents en cas d’échec de la trithérapie

- Pas d’influence sur la décision thérapeutique


Intérêt du Sous-Type dans la Résistance au Telaprevir

Subtype 1aSubtype 1b

Substitutions in patients who failed to achieve an SVR


Impact du Sous-Type sur la Barrière Génétique à la Résistance

HCV-1a prototype ...PAGHAVGIFFRAAVCTRGVAKAVDFIP...HCV-1b prototype ...-S------------------------V-...

HCV-1a AGAAAA (R155K)AGAACA (R155T)

HCV-1b CGAAAA (R155K)CGAACA (R155T)



- Modeste différence d’efficacité de la trithérapie

- Profils de résistance différents en cas d’échec de la trithérapie

- Pas d’influence sur la décision thérapeutique



- OUI. Dans les essais cliniques afin de correctement stratifier

l’efficacité des DAAs et d’interpréter les profils de résistance

- NON (OUI avec le Simeprevir). En pratique clinique car le sous-type n’a pas

d’influence sur la décision thérapeutique avec les IP de 1ère génération


Résumé

• Détermination du génotype (sous-type) VHC– La détermination du génotype sur la seule

région 5’NC doit être proscrite– La 2nde génération de Line Probe Assay qui

utilise des sondes dirigées contre la région core en plus de la région 5’NC est la meilleure méthode permettant de distinguer les sous-types 1a et 1b

EASL CPG., J Hepatol. 2011 Aug;55(2):245-64.


Intérêts des Tests Virologiques en Thérapeutique

• Décision de traiter

• Optimisation du schéma thérapeutique

• Etude de la réponse virologique au traitement


Le Génotype du VHC Détermine l’Approche du Traitement VHC

• Génotypes 2/3, 4, (5/6)– Options thérapeutiques disponibles en 2014

. IFN pégylé plus ribavirine plus sofosbuvir 12 sem (Sovaldi®)

. Sofosbuvir plus ribavirine 12 sem (génotype 2)

. Sofosbuvir plus ribavirine 24 sem (génotype 3)

• Génotype 1– Options thérapeutiques possibles en 2014

. IFN pégylé plus ribavirine plus IP 1st gen 1st vague (boceprevir ou telaprevir)

. IFN pégylé plus ribavirine plus IP 1st gen, 2nd vague (simeprevir)

. IFN pégylé plus ribavirine plus sofosbuvir 12 sem (Sovaldi®)


Monitoring of Treatment Responses

S4 S24 S48 S72S36S12S8

BOC/PR

TVR/PR

PR


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Health & Medicine

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