ةـــــــوري ــ قسنطينــــــة منتـــــجامع آلية علوم الطبيعة و الحياة قسم بيولوجيا الحيوان

رــــــــــــجيستيــــــــــادة المال شهـــــــــــة لنيــــــــة مقدمـــــــــرسال ةـــــــة و الجزیئيـــــــا الخلویـــــــي البيولوجيـــف

و الجزیئي ويــــــــوم الخلـــــــــم السمـــــــ علفرع

:لجنــــة المناقشـــــة

رئيسا......................... قسنطينة ـ جامعة منتوري أستاذة محاضرة الدآتورة عبيدلي نصيرة

مقررا.........طينة قسن ـ جامعة منتوريالدآتورة خليفي التهامي آرمانجي فاطمة أستاذة محاضرة

ممتحنا....................أستاذ محاضر جامعة فرحات عباس ـ سطيف نالدآتور بغياني عبد الرحم

ممتحنا.......................... ـ قسنطينةجامعة منتوري أستاذ محاضر الدآتور بولبدة ناجي

بوبلوطة حورية:إعداد

تحت عنوان

:تاریخ المناقشة

:م الترتيبرق :رقم التسلسل

2009-2008

. سبحانه جل شأنه و أشكره جزيل الشكر على إعانته الكبرية يل يف حيايت و يف إجناز و إمتام حبثي هذا اهللاأمحد

على إشرافها، توجيهاهتا، نصائحها، خليفي التهامي فاطمةتوجه خبالص تشكرايت ألستاذيت الفاضلة، الدكتورة أ

.صربها، تعاملها، حضورها، مساعداهتا و تشجيعاهتا املعنوية خالل مراحل إجناز هذا البحثو ) ضرة جبامعة منتوري قسنطينةأستاذة حما ( عبيديل نصريةأتقدم بالشكر اجلزيل ألستاذيت الفاضلتني، الدكتورة

على املبادرة الطيبة اليت قامتا هبا من )أستاذة حماضرة جبامعة منتوري قسنطينة ( خليفي التهامي فاطمةالدكتورة احملافظة علينا، رغم نقص اإلمكانيات و الضغوطات ما بعد التدرج و على صدق نيتهما يف الدراسةخالل فتح

الدرب بكل قوة و عزمية من أجل إجناز هذه الثمرة ال أنهما أبتا أن تواصالاجلهات، إاليت كانت من كل .العلمية، فشكرا جزيال لكما

على تشريفها يل برئاسة جلنة املناقشة، كما عبيديل نصريةأتقدم بالشكر اجلزيل ألستاذيت الفاضلة، الدكتورة .زي هلذا البحثأشكرها على النصائح و التوجيهات اليت قدمتها يل أثناء إجنا

و بغياين عبد الرمحاناألستاذ الدكتور كما أتقدم بالشكر احلار و التقدير و العرفان لكل من األساتذة األفاضل، حرز اهللا ، و األستاذ الدكتور)أساتذة حماضرين جبامعة فرحات عباس سطيف ( خنوف الصديقاألستاذ الدكتور

على ما قدموه يل من ) ساتذة جبامعة فرحات عباس سطيفأ (خلميسي عرعار و األستاذ الدكتور داود أثناء فترة تربصي مبخابرهم، كما أشكرهم على املعاملة الطيبة من كيماويات و أجهزة و غريهامساعدات قيمة

.اليت حضيت هبا من شخصهمة املناقشة فله مني كل على قبوله املشاركة يف جلنبغياين عبد الرمحان كما أقدم شكري اخلاص لألستاذ الدكتور

.التقدير و االحترامعلى ) قسنطينة-أستاذ حماضر بكلية الطب منتوري ( بولبدة ناجيكما أتقدم بالشكر اجلزيل لألستاذ الدكتور .قبوله املشاركة يف جلنة املناقشة فشكرا جزيال

اذ حماضر جبامعة منتوري أست ( عدنان حممد حسن كرماجنيأقدم شكري و ثقيت اخلالصة لألستاذ الدكتور .الذي مل يبخل علي بالنصائح و اإلرشادات و املساعدة خالل حبثي هذا) قسنطينة

على ) أستاذ حماضر جبامعة عبد احلق بن محودة جيجل ( حلول مصباحأتقدم بالشكر اخلالص لألستاذ الدكتور .، فله مني كل التقدير و االحترام و مساعدته الطيبة اليت مل يتواىن يف تقدميها يلهمعاملته، تشجيعا ت

) قسم البيوكيمياء كلية الطب مبنتوري قسنطينة ( بلطرش شريفةأتقدم بتشكرايت اخلالصة لألستاذة الدكتورة الكيمياء النباتية جبامعة منتوري أستاذة( بن عياش فضيلةعلى التحاليل البيوكيميائية و كذا األستاذة الدكتورة

. مت و عرفتنا على مكان النبات اليت تكر)قسنطينة و التوكسيكولوجياأستاذ الفرماكولوجيا( بداريأسامة أمحد كما أتقدم بالشكر اجلزيل إىل األستاذ الدكتور

اليت على تعاونه و على املواد الكيميائية) بكلية الصيدلة، قسم الصيدلة اإلكلينيكية جبامعة عني مشس ـ القاهرة .قدمها لنا

الفرماكولوجيا و ةأستاذ (راجية علي حممد طهكما أتقدم بالشكر اجلزيل إىل األستاذة الدكتورة و األستاذ الدكتور) ، قسم الفرماكولوجيا جبامعة األزهرـ القاهرة)بنات( التوكسيكولوجيا بكلية الصيدلة

على ) جبامعة األزهرـ القاهرة) بنني( ة أستاذ الفرماكولوجيا و التوكسيكولوجيا بكلية الصيدل(منصور أمحد .تعاوهنما

و األستاذ ) أستاذة جبامعة منتوري قسنطينة ( خلف اهللا نظرةكما أقدم شكري إىل األستاذة الدكتورة اها يل من أجل على املساعدة اليت قدم) جبامعة فرحات عباس سطيفحماضرأستاذ (لعور حسني الدكتور

.حتديد نوع النبات& رئيسة خمرب البيولوجيا ( راشد وحيدةتقدم جبزيل الشكر إىل السيدة القديرة األستاذة الدكتورة كما أ

.على ما قدمته لنا من تسهيالت قيمة على مستوى خمربها) اإليكولوجيا جبامعة منتوري قسنطينة حبري ، و السيد)اقيأستاذ حماضر جبامعة أم البو( زالقي عمارأوجه شكري و عرفاين إىل األستاذ الدكتور

. على املساعدات اليت قدماها يل، فشكرا جزيالالعيدأستاذة (صباحو ) أستاذة مساعدة جبامعة عبد احلق بن محودة جيجل (ودادو أوجه شكري لكل من

.على النصائح و املساعدات اليت أفادوين هبا) مساعدة من جامعة برج بوعريريج عبد، السيد فريدىل كل التقنيني يف املخابر البيداغوجية و علي رأسهم السيدكما أتقدم بتشكرايت اخلالصة إ

. على املساعدات اليت قدموها يلعمار و السيد السالمأمساء، إمساعيل، : يف األخري أشكر جزيل الشكر كل الزمالء و األصدقاء سواء من جامعة منتوري قسنطينة

على بالل و أخص بالذكر زميلي نصر الدين، وهيبة،مفيدة، عواطف، رضوان،زينب، شعيب، صفية،املساعدات الكبرية اليت قدمها يل و كل زمالئي و أصدقائي من جامعة فرحات عباس بسطيف و أخص

كما ال يفوتين أن أعرب عن شكري و امتناين لكل الذين مدوا يل يد مرمي،وصليحة ، مجيلة بالذكر . بعيد فشكرا لكم جزيالاملساعدة و التشجيع من قريب أو

إىل أغلى هدية وهبين اهللا إياها الغالية اليت صورت يلأمي

احلياة شجرة حب و حتملت معي متاعب ... بصرب مجيل هذا املشوار

العزيز الذي وفر يل سبل التعلمأيب ... و جعلته شعار وجودي و عنوان دريب

الطاهرة و أعمامي أجدادي أخي و إىل جدي الغايل و روح استماعهامساندهتا و إىل أخيت الوحيدة و العزيزة فتيحة على

حممود و يوسف ومراد وبالل وإىل كل إخويت خالد اصة عمران خبو

أخوايل و خااليت و إىل كل وايتو عمأعمامي منإىل كل .األهل و األحباب أهدي مثرة جهدي

حورية

الصفحةالعنوان

vii ..........................................................................قائمة المختصرات

x ..............................................................................قائمة الجداول

xi ..............................................................................قائمة األشكال

1 ...................................................................................المقدمة I- المظاهر التشريحية و الفسيولوجية للكبد .................................... I-1 -4................................................................. مقدمة و تعريف I-2 -5............................................... لماذا يعتبر الكبد العضو المستهدف I-3 -األنماط الخلوية المختلفة ووظائفها الكبدية ......................................

I-3 -1-6.......................................................... األنماط الخلوية I-3 -1-1-6........................ الخاليا الكبدية أو الخاليا البرانشيمية I-3 -1-2-7............................................ ا الظهاريةالخالي I-3 -1-3-خاليا kupffer ............................................7 I-3 -1-4- خاليا (الخاليا النجميةIto( ................................. 7 I-3 -1-5-الخاليا القاتلة طبيعيا NK ..................................7 I-3 -1-6-7............................................. الخاليا المغزلية I-3 -2-7....................... ......................................وظائف الكبد I-3 -2-1-7.............................................. وظائف وعائية

I-3 -2-2-7............................................. وظائف اطراحية

I-3 -2-3-8....................................... ........وظائف أيضية

I-3 -2-4-9......................... للخاليا الكبدية) السائد( الدور الرائد

I-3 -2-5-9............................. دور الكبد في ميثابوليزم السموم 9 )..... مرحلة األكسدة( في إزالة السموم 450Pيثوكرومدورالس- أ

CytP ..........................10 450السيثوكروم -1- أ

10...................................... آلية التأثير-2- أ

11)..................... تابطامرحلة تشكيل المتر (IIالمرحلة -ب I -4-11.................................................................... التجدد الكبدي

I -5-12 ....................................... ير و المواد المحرضة للعطب الكبديالعقاق

I -6-14.................................................. الفحص الوظيفي للضرر الكبدي

i

II- رباعي كلوريد الكربون يةالكبد و السمية الكيميائ )CCL4( .......................................................................

II-1 -مقدمة و تعريف..................................................... II-2 -المحرض للسمية - الكربونآلية تأثير رباعي كلوريد

.......................................................................الكبد

III-الكبد و اإلجهاد التأكسدي و مضادات األكسدة............................. III-1-اإلجهاد التأكسدي......…………..………………….

III-1-1-الجذور الحرة................................... III-1-2- النشطةاألنواع األكسيجينية ...................... III-1-3- مصادر الجذور الحرة...........................

III-1-1-1 - المصدر الداخلي للجذور الحرة......... III-1-1-2 - العوامل : المصدر الخارجي للجذور الحرة

...............................الفيزيائية والكيميائيةIII-1-4- الجذور الحرةمستهدفات .........................

III-1-4-1 - أكسدة الـAND..................... III-1-4-2 -أكسدة البروتينات..................... III-1-4-3 -أكسدة الليبيدات.......................

III-1-5-كشف الجذور الحرة.............................. III-2-المضادة لألكسدةأنظمة الدفاع ...............................

III-2-1-األنظمة الدفاعية اإلنزيمية........................ III-2-1-1 -إنزيم السوبيرأوكسيد ديسموثاز......... III-2-1-2 -إنزيم الكثاالز.........................

III-2-1-3 -إنزيمات الجلوثاثيون بيروكسيداز........ III-2-2-األنظمة غير االنزيمية............................ III-2-2-1 -الجلوثاثيون..........................

III-2-2-2 - الفيثاميناتA، C ، E................ III-2-2-3 -متعددات الفينوالت....................

III -2-2 -3-1 - الفالفونويدات أهم مجموعة .....................ددات الفينولفي متع

15 15 16

18 18 18 19 20 20

21 22 22 22 23 24 24 24 25 25 26 26 27 27 27 28

29

ii

III-2-2-3-2-الفالفونويدات كمضادات لألكسدة..............

III -2 -2-3-2 -1-االلتقاط المباشر للجذور .......... ....................................................الحرة

III-2-2-3 -2-2 -مختلف اإلنزيمات تثبيط............ ..............Xanthine oxydase إنزيم - أ ..Nitrique oxyde syntases ـإنزيم ال-ب ....... Lipooxygénases إنزيمات الـ -جـ

III-2-2-3 -2-3 -دنيةالشوارد المع التداخل مع..... III-2-2-3 -2-4 -و ما فوق أكسدة الليبيدات .............................................الفالفونيدات

...…………………………………………………………خطة البحثIV -المواد و الطرق……………………………………………..

IV -1-المواد..................................................... IV -1-1-المادة النباتية................................... IV -1-1-1-جمع المادة النباتية وتجفيفها........... IV -1-1-2-صعملية االستخال.................... IV -1-2-اختيار الجرعة..................................

IV -1-3-تربية الحيوانات................................. IV -1-4-معاملة الحيوانات................................

.................. على الجرذان البيضاءالدراسة المجراة ................... على الفئران البيضاءالدراسة المجراة IV -1-5-أخذ الدم........................................ IV -1-6-و أخذ األعضاءانات قتل الحيو..................... IV -1-7 -المواد الكيميائية ...............................

IV -2-قالطر............................................................ .............................................................الجزء األول

IV -2-1- ة المخبريةالدراسin vitro المستخلصين الميثانوليين على )CIو MP(..................................................

IV -2-1-1- دراسة نشاطية المستخلصين الميثانوليين ........................................المضادة لألكسدة

IV -2-1 -1-1 دراسة الفعل االسر)Scavenger

effect ( جذر الـ للعينات على إزاحةDPPH....................

30

30

30

30

31

31

32

33

36

37

37

37

37 39

40

40

40

40

41

42

42

43

44

45

45

45

45

45

iii

IV -2-1-1-2- اختبار الـβ-حمض اللينولييك/ ن كار وتي.....................

IV -2-1-2-معايرة الفالفونويدات الموجودة في المستخلصين الميثانوليين)CI .....................................................................)MPو

IV -2-1-3- الميثانوليينمعايرة عديدات الفينول الموجودة في المستخلصين)CI ....................................................................) MPو

الجزء الثانيIV -2-2-تأثير كل من المستخلصين الميثانوليين)CIو MP ( على الحالة الوظيفية

وتم ذلك على مستوى المصل و على حالة مضادات ) الفحص الوظيفي للكبد( للكبد .........................).................كبد، كلى وقلب( األكسدة في األنسجة

IV -2-2-1- تأثير كل من المستخلصين الميثانوليين )CIو MP ( .............)الفحص الوظيفي للكبد( على الحالة الوظيفية للكبد

IV -2-2-1-1-معايرة إنزيمات الثرونزاميناز ................. IV -2-2-1-2-قياس النشاط المضاد للسمية الكبدية............

IV -2-2-1-3-قياس نشاط إنزيم الفوسفثاز القلوي............ IV -2-2-1-4-معايرة الكوليسثيرول.........................

IV -2-2-1-5-معايرة البروتينات الكلية...................... IV -2-2-1-6-ثيةمعايرة الجليسريدات الثال...................

IV -2-2-2-تأثير كل من المستخلصين الميثانوليين)CIو MP ( على

عند الفئران ) كبد، كلى وقلب( حالة مضادات األكسدة في األنسجة .................................................يضاءان البوالجرذ

IV -2-2-2-1-تقييم المؤشرات الالانزيمية.................... IV -2-2-2-1-1 -معايرة تركيزMDAولي السيثوز....

IV -2-2 -2-2-تقدير األنزيمات المضادة للتأكسد................ IV -2-2-2-2-2 -تقييم نشاط إنزيمCatalase في كل من

......................................الكبد، الكلى، القلب ...................................................................التحاليل اإلحصائية

46

48

48

51

51

51

52

52

52

53

53

53

54

54

54

56

56

57

iv

V -النتائج .......................................................................

V -1-المجراتاالختباراة: الجزء األول in vitro V -1-1-تأثير الفعل اآلسر للعينات على إزاحة جذر الـ DPPH................ V -1-1- ي المستخلصينتقدير عديدات الفينول و الفالفونويدات ف

...............................................................الميثانوليينV -1-1- اختبارβ-حمض اللينولييك/ ن كار وتي.............................

V -2- ةاالختبارات المجرا: الثانيالجزءin vivo V -2-1- تأثير كل من المادة السامة)CCL4 (ن الميثانوليين على لصيو المستخ

24 الفرق في الوزن بعد الوزن النسبي للكبد ووزن الجرذ و وزن الكبد و ....................................................................ساعة

V -2-2- تغيرات المعايير المصلية الكبدية خالل المعاملة برباعي كلوريد الكربون)CCL4) ( لوحده أو باالرتباط مع المستخلص الميثانولي لكل ) غ ك/ مل 3بجرعة

....................)كغ/ مغ800 بجرعة MPكغ و/ مغ500بجرعة CI (منV -2-2-1 -لمصليةتقدير معدل إنزيمات الثرونزاميناز ا................ V -2-2-2 -تقدير المعدل المصلي إلنزيمات الفوسفاثاز القاعدي.........

V -2-2-3 -تقدير المعدل المصلي للكوليسثيرول....................... V -2-2-4 -تقدير المعدل المصلي للبروتينات الكلية....................

V -2-2-6 -تقدير المعدل المصلي للجليسريدات الثالثية................ V -2-2-7 -النشاط المضاد للسمية الكبدية تقدير......................

V -2-3- كغ و بجرعة / مغ500بجرعة (تأثير كل من المستخلصات الميثانولية

الكلى و القلب عند ة مضادات التأكسد في كل من الكبد وعلى حال) كغ/ مغ800 ...........................................................الجرذان البيضاء

V -2-3-1 -تغيرات معدلMDA لقلب الكلى و ابد و في كل من الك...... V -2-3-2 -تقدير النشاط اإلنزيمي إلنزيم Catalase في كل من الكبد ....................................................الكلى و القلبو

59

60

61

62 64 66

66

68

69

70

71

72

73

75

v

78

78

80

83

98

101

113

126

141

150

V-2-4- تأثير كل من المستخلصات الميثانولية) CI كغ و/ مغ100بجرعةMP الكلى و ضادات التأكسد في كل من الكبد وعلى حالة م) كغ/ مغ200بجرعة

........................................................القلب عند الفئران V -2-4-1 -تغيرات معدلMDA بد، الكلى و القلب الك في كل من.....

V -2-4-2 -تقدير النشاط اإلنزيمي إلنزيم Catalase في كل من الكبد ..........................................................والكلى

VI -المناقشة...........................................................................

VII-الخالصة.......................................................................... ................................................................................المالحق

.....................................................................ملخص باللغة العربية ..................................................................للغة اإلنجليزيةملخص با

..................................................................ملخص باللغة الفرنسية ..........................................................) عربي–إنجليزي ( المصطلحات

................................................................................المراجع

vi

ATP

AlT

ALP

O2°-

AsT

BHT

CCL4

CAT

Cyt P 450

C°

DNA

DPPH

R°

g

GPx

GSSG

H2O2

ROOH

CLO-

IC50

Kg

LPO

Mg++

MDA

MeOH

أدینوزین ثالثي الفوسفاط

أالنين أمينو ثرانسفيراز

الفوسفاثاز القلوي

أنيون السوبيرأآسيد

أمينو ثرانسفيراز أسبارثات

رباعي آلورید الكربون

الزآثا

P450 السيثوآروم

°م درجة مئویة

حمض نووي ریبي منقوص

األوآسجين

الجذر الحر

غرام) غ(

الجلوثاثيون بيروآسيداز

الجلوثاثيون المؤآسد

بيروآسيد الهيدروجين

الهيدروبيروآسيد

االبوآلوریث

%50الترآيز المثبط لـ

آيلو غرام أیونات) آغ (

اللبيدیة البيروآسيدات

المغنيزیوم

مالون دیألدهيد

ميثانول

Adenosine tri phosphate

Alanine amino transferase

Alkaline phosphatase

Anion superoxyde

Aspartate amino transferase

Butylated hydroxytoluene

Carbon tetrachloride

Catalase

Cytochrome P450

Degree Celcus

Deoxyribonucleic acid

Diphenyl-1-picrylhydrazyl

Free radical

Gram

Glutathion peroxidases

Disulfid glutathione

Hydrogyn Peroxide

Hydroperoxyde

Hypochlorite

Inhibition concentration of 50%

Killogram

Lipidic peroxyde

Magnizium anion

Malondialdehyde

Methanol

: : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : :

: : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : :

vii

µl

mg

ml

m mol

M

nm

n mol

%

ONOO-

PUFAs

RO°

HOO°

ROO°

NO°

LOO°

ROS

GSH

SD

SEM

SOD

TBA

TGFB

TCA

CCL3°

TG

VLDL

ميكروليت

مميلي غرا) مغ(

ميلي لتر) مل(

ميلي مول

موالر

نانوميتر

نانومول

مئویة نسبة

البيروآسينيثریث

ض الذهنية عدیدة عدیمة التشبعااألحم

جذر األلكوآسيل

جذر الهيدروبيروآسيل

جذر البيروآسيل

جذر أآسيد النيثریك

جذر البيروآسيل

ةنشط الاألنواع األآسيجنية

الجلوثاثيون المختزل

اإلنحراف المعياري

الخطأ المعياري المتوسطي

سوبير أوآسيد دیسموثاز

حمض الثيوبربيتوریك

عامل النمو المحول

حمض ثریكلوأسيتيك

جذر ثالثي آلور الميثيل

الجليسریدات الثالثية

نخفضة الكثافةالبروتينات الليبيدیة م

Microllitre

Milligram

Millilitre

Millimole

Molar

Nanometre

Nanomole

Percent

Peroxinitrite

Poly unsaturated fatty acids

Radical alkoxyle

Radical hydroperoxyle

Radical hydroxyle

Radical oxide nitric

Radical peroxile

Reactive Oxygen Species

Reduced glutathione

standard deviation

standard error mean

Superoxide dismutase

Thiobarbituric acid

Transforming growth factor

Trichloroacetic acid

Trichloromethyl radical

Triglycerides

Very low density of lipoproteins

: : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : :: : : : : : : : : : : :

:::::::::::::::::::::::::::::::::::

viii

V

UI

W

حجم

وحدة دولية

وزن

Volume

Unit International

Weight

:

:

:

:

:

:

ix

............................................مختلف األنماط الخلوية الكبدية: 1جدول .................... آليات تأثير العقاقير و المواد المحرضة للعطب الكبدي: 2جدول .......................................مختلف األنواع األكسيجينية النشطة: 3جدول ....... غ من الوزن الجاف100المحصول و المردود بالنسبة المئوية لكل : 4جدول .................................... MDAالخطوات المنجزة لقياس تركيز: 5جدول لكل من المستخلصات الميثانولية و الجزيئات IC50 الـ قيم:6جدول

............................................................................المرجعية ....... تقدير عديدات الفينول و الفالفونويدات في المستخلصين الميثانوليين:7جدول -β على تثبيط أكسدة MP و CIقدرة المستخلصات الميثانولية لكل من : 8جدول ................................................................ عبر الزمننكار وتي CCL4تقديرالنشاط المضاد للسمية الكبدية الناتج عن المادة السامة : 9جدول

MPكغ و/ مغ500بجرعة CI (و المستخلصين الميثانوليين) كغ / مل 3بجرعة ( ..............................................................).كغ/ مغ800بجرعة

6

13

19

39

56

61

62

63

73

x

...................................................................... ...................................................................... منظر خلفي للكبد منظر خلفي للكبد:: 11شكل شكل ..........الخاليا الجيبية و القنيات الصفراويةالخاليا الجيبية و القنيات الصفراوية يوضح مكونات الفص الكبدي و المثلث البابي ويوضح مكونات الفص الكبدي و المثلث البابي و::22شكلشكل ......................................................................................................................................عضيات الخلية الكبديةعضيات الخلية الكبدية: : 33شكلشكلية ية مراحل تخطيطية للتحول الحيوي وإزالة السمية للعقاقير و المواد داخلية وخارجمراحل تخطيطية للتحول الحيوي وإزالة السمية للعقاقير و المواد داخلية وخارج ::44شكلشكل ......................................................................................................................................................................................المنشأالمنشأ ..........................................................................................................……CCyyttPP 450450 تأثير السيثوكروم تأثير السيثوكروم 55::شكلشكل .................................................................................................................. موت الخلية الكبدية و تجددها موت الخلية الكبدية و تجددها 66 :: شكلشكل ................................................................................................ البنية الكيميائية لرباعي كلوريد الكربون البنية الكيميائية لرباعي كلوريد الكربون:: 77شكلشكل ..............................................................................................................ميثابوليزم رباعي كلوريد الكربونميثابوليزم رباعي كلوريد الكربون: : 88شكلشكل ..................................................................................ية النشطةية النشطة طرق تخليق أهم األنواع األكسيجين طرق تخليق أهم األنواع األكسيجين ::99شكل شكل ............................................مختلف الطرق الميثابوليزمية لتشكيل األنواع األكسيجينية النشطةمختلف الطرق الميثابوليزمية لتشكيل األنواع األكسيجينية النشطة: : 1100شكلشكل ..................................................................................................................تفاعالت فوق األكسدة الليبيديةتفاعالت فوق األكسدة الليبيدية: : 1111شكلشكل ..........................................محددة لحالة االجهاد التاكسدي لألنظمة البيولوجيةمحددة لحالة االجهاد التاكسدي لألنظمة البيولوجيةبعض العوامل البعض العوامل ال: : 2211شكلشكل ................................................................مضادات األكسدة في الحماية من مولدات األكسدةمضادات األكسدة في الحماية من مولدات األكسدة دوردور: : 3311شكل شكل ................................................................................ةةاإلجهاد التأكسدي ينشط عمل مضادات األكسداإلجهاد التأكسدي ينشط عمل مضادات األكسد: : 4411شكل شكل ..................................................................................................................هيكل القاعدي للفالفونويداتهيكل القاعدي للفالفونويداتالال : : 1155شكلشكل ................................................................................................................التخليق الحيوي للفالفونويداتالتخليق الحيوي للفالفونويدات: : 1166شكل شكل .................................................................... عن طريق الفالفونويات عن طريق الفالفونويات((°°RR))إلتقاط الجذور الحرة إلتقاط الجذور الحرة : :1177شكل شكل

XXaanntthhiinnee ooxxiiddaassee.………………………… تفاعل إنزيمي محفز بواسطةتفاعل إنزيمي محفز بواسطة : : 1188شكل شكل

..…………………………………………الفالفونويدات و مواقعها المقترحة اللتقاط األيونات المعدنيةالفالفونويدات و مواقعها المقترحة اللتقاط األيونات المعدنية : : 1199شكل شكل ............................. ............................. العناصر األساسية للنشاط المضاد لألكسدة للفالفونويداتالعناصر األساسية للنشاط المضاد لألكسدة للفالفونويدات : : 2200شكل شكل تمثل تمثل ) ) بب((تمثل الجذور و الصورة تمثل الجذور و الصورة ) ) أأ((الصورة الصورة : : CCeennttaauurreeaa iinnccaannaa نبتة نبتة :: 2211شكلشكل

....................................................................................................................................................................................األزهاراألزهارتمثل وضع النبتة في التربة تمثل وضع النبتة في التربة ) ) أأ((الصورة الصورة : : MMaattrriiccaarriiaa ppuubbeesscceennss نبتة نبتة :: 2222شكل شكل

………………………………………………………………………………………………تمثل األزهارتمثل األزهار) ) بب((الصحراوية و الصورة الصحراوية و الصورة ..............................................................................................................بروثوكول االستخالص الميثانوليبروثوكول االستخالص الميثانولي: : 2233شكلشكل

منحنى العيارية للكرستين و الرتين لتقدير الفالفونويدات في المستخلصين منحنى العيارية للكرستين و الرتين لتقدير الفالفونويدات في المستخلصين : : 2244الشكل الشكل ..........................................................................................................................................................................................................................الميثانوليينالميثانوليين

لحمض الغاليك لتقدير عديدات الفينول الكلية في المستخلصين لحمض الغاليك لتقدير عديدات الفينول الكلية في المستخلصين منحنى العياريةمنحنى العيارية : :2255الشكلالشكل ..……………………………………………………………………………………………………………………………………………………النباتيينالنباتيين

AASSAATT………………………………………………………… و وAALLAATTالفعل التحليلي لكل من إنزيمات الفعل التحليلي لكل من إنزيمات : : 2266شكل شكل

TTBBAA……………………………………......………………………… .. مع جزيئتين من الـ مع جزيئتين من الـMMDDAAفاعل الـفاعل الـتت2277:: شكلشكل

44 55 66 88

1010 1111 1515 1717 1919 2121 2323 2525 2626 2727 2929 2929 3030 3131 3333 3333

3737

3838

3939

5151

5151 5252 5555

xi

…………………………....................مـلمـل//بالـمغبالـمغDDPPPPHH من جذور الـمن جذور الـ%% 5050التركيز المثبط لـالتركيز المثبط لـ 2288::شكلشكل نن كار وتي كار وتي--ββ على تثبيط أكسدةعلى تثبيط أكسدة MMPP و و CCIIقدرة المستخلصات الميثانولية لكل منقدرة المستخلصات الميثانولية لكل من : : 2299شكلشكل

............................................................................................................................................................................عبر الزمنعبر الزمن

و المستخلصين و المستخلصين ) ) كغ كغ / / مل مل 33بجرعة بجرعة ( (CCCCLL44تأثير كل من المادة السامة تأثير كل من المادة السامة : : 3030شكلشكل على الوزن النسبي على الوزن النسبي ))كغكغ/ / مغ مغ800800 بجرعة بجرعة MMPPكغ وكغ و/ / مغ مغ500500بجرعة بجرعة CCII ((الميثانوليينالميثانوليين

........................................................................................................................................................................................للكبدللكبد

و المستخلصين و المستخلصين ) ) كغ كغ / / مل مل 33بجرعة بجرعة ( (CCCCLL44تأثير كل من المادة السامة تأثير كل من المادة السامة : : 3131شكلشكلعلى الفرق في الوزن بعد على الفرق في الوزن بعد ) ) كغكغ/ / مغ مغ800800 بجرعة بجرعة MMPPكغ وكغ و/ / مغ مغ500500بجرعة بجرعة CCII ((الميثانوليينالميثانوليين

.............................................................................................................................. ساعة من حقن المادة السامة ساعة من حقن المادة السامة2424

، خالل المعاملة ، خالل المعاملة ))TTrraannssaammiinnaasseess ((TTGGPP))((تقدير المعدالت المصلية للثرونزاميناز تقدير المعدالت المصلية للثرونزاميناز ::3232شكلشكل

وحده أو باالرتباط مع المستخلصات الميثانولية لكل مـن وحده أو باالرتباط مع المستخلصات الميثانولية لكل مـن ) ) كغكغ/ / مل مل33بجرعة بجرعة ( ( CCCCLL44بالـ بالـ CCII كغ وكغ و/ / مغ مغ500500بجرعة بجرعةMMPP كغكغ/ / مغ مغ800800 بجرعة بجرعة......................................................................................

، خالل المعاملة ، خالل المعاملة ))TTrraannssaammiinnaasseess ((TTGGOO))((تقدير المعدالت المصلية للثرونزاميناز تقدير المعدالت المصلية للثرونزاميناز ::3333شكلشكل وحده أو باالرتباط مع المستخلصات الميثانولية لكل مـن وحده أو باالرتباط مع المستخلصات الميثانولية لكل مـن ) ) كغكغ/ / مل مل33بجرعة بجرعة ( ( CCCCLL44بالـ بالـ

CCII كغ وكغ و/ / مغ مغ500500بجرعة بجرعةMMPP مغ مغ800800 بجرعة بجرعة / / ............................................................................................................................................................................................كغكغ

CCCCLL44تقدير المعدل المصلي إلنزيمات الفوسفاثاز القاعدي خالل المعاملة بالـ تقدير المعدل المصلي إلنزيمات الفوسفاثاز القاعدي خالل المعاملة بالـ : : 3434شكل شكل بجرعة بجرعة CCIIوحده أو باالرتباط مع المستخلصات الميثانولية لكل مـن وحده أو باالرتباط مع المستخلصات الميثانولية لكل مـن ) ) كغكغ/ / مل مل33بجرعة بجرعة ( (

/ / مغ مغ800800 بجرعة بجرعة MMPPكغ وكغ و/ / مغ مغ500500 ............................................................................................................................................................................................كغكغ

وحده وحده ) ) كغكغ/ / مل مل33بجرعة بجرعة ( ( CCCCLL44تقدير المعدل المصلي للكوليسثيرول خالل المعاملة تقدير المعدل المصلي للكوليسثيرول خالل المعاملة : : 3535شكلشكل

MMPPكغ وكغ و/ / مغ مغ500500بجرعة بجرعة CCIIأو باالرتباط مع المستخلصات الميثانولية لكل مـن أو باالرتباط مع المستخلصات الميثانولية لكل مـن ........................................................................................................................................................كغكغ/ / مغ مغ808000بجرعة بجرعة

) ) كغكغ/ / مل مل33بجرعة بجرعة ( ( CCCCLL44تقدير المعدل المصلي للبروتينات الكلية خالل المعاملة تقدير المعدل المصلي للبروتينات الكلية خالل المعاملة : : 3636شكلشكل

MMPPكغ وكغ و/ / مغ مغ500500بجرعة بجرعة CCIIوحده أو باالرتباط مع المستخلصات الميثانولية لكل مـن وحده أو باالرتباط مع المستخلصات الميثانولية لكل مـن ........................................................................................................................................................كغكغ/ / مغ مغ800800بجرعة بجرعة

33بجرعة بجرعة ( ( CCCCLL44تقدير المعدل المصلي للجليسريدات الثالثية خالل المعاملة بالـ تقدير المعدل المصلي للجليسريدات الثالثية خالل المعاملة بالـ : : 3838شكلشكل/ / مغ مغ500500بجرعة بجرعة CCIIوحده أو باالرتباط مع المستخلصات الميثانولية لكل مـن وحده أو باالرتباط مع المستخلصات الميثانولية لكل مـن ) ) كغكغ/ / ململ

..................................................................................................................................كغكغ// مغ مغ800800بجرعة بجرعة MMPPكغ وكغ و

61

63

64

65

66

67

68

69

70

71

x

مل مل 33بجرعة بجرعة ( (CCCCLL44تقدير النشاط المضاد للسمية الكبدية الناتج عن المادة السامة تقدير النشاط المضاد للسمية الكبدية الناتج عن المادة السامة : : 3939شكلشكل/ / مغ مغ800800 بجرعة بجرعة MMPPكغ وكغ و/ / مغ مغ500500بجرعة بجرعة CCII ((ليينليينو المستخلصين الميثانوو المستخلصين الميثانو) ) كغ كغ / / ).............................................................................................).............................................................................................كغكغ

CCCCLL44 في الكبد بعد معاملة الجرذان البيضاء بجرعة واحدة من في الكبد بعد معاملة الجرذان البيضاء بجرعة واحدة من MMDDAAتغيرات معدلتغيرات معدل: : 4040شكلشكلد المعاملة المسبقة للحيوانات بالمستخلصين د المعاملة المسبقة للحيوانات بالمستخلصين كغ في صفاق البطن أو بعكغ في صفاق البطن أو بع/ / مل مل33بجرعة بجرعة

/ / مغ مغ800800 بجرعة بجرعة MMPPكغ وكغ و/ / مغ مغ500500 بجرعة بجرعة CCIIالميثانوليين لكل منالميثانوليين لكل من ............................................................................................................................................................................................كغكغ

CCCCLL44بجرعة واحدة منبجرعة واحدة من في الكلى بعد معاملة الجرذان البيضاء في الكلى بعد معاملة الجرذان البيضاء MMDDAAتغيرات معدلتغيرات معدل: : 4141شكلشكل

كغ في صفاق البطن أو بعد المعاملة المسبقة للحيوانات بالمستخلصين كغ في صفاق البطن أو بعد المعاملة المسبقة للحيوانات بالمستخلصين / / مل مل33 بجرعة بجرعة / / مغ مغ800800 بجرعة بجرعة MMPPكغ وكغ و/ / مغ مغ500500 بجرعة بجرعة CCIIالميثانوليين لكل منالميثانوليين لكل من

............................................................................................................................................................................................كغكغ

CCCCLL44 في القلب بعد معاملة الجرذان البيضاء بجرعة واحدة من في القلب بعد معاملة الجرذان البيضاء بجرعة واحدة من MMDDAAتغيرات معدلتغيرات معدل: : 4242شكلشكل

كغ في صفاق البطن أو بعد المعاملة المسبقة للحيوانات بالمستخلصين كغ في صفاق البطن أو بعد المعاملة المسبقة للحيوانات بالمستخلصين / / مل مل33 بجرعة بجرعة / / مغ مغ800800 بجرعة بجرعة MMPPكغ وكغ و/ / مغ مغ500500 بجرعة بجرعة CCIIالميثانوليين لكل منالميثانوليين لكل من

............................................................................................................................................................................................كغكغ

في الكبد بعد معاملة الجرذان البيضاء بجرعة واحدة في الكبد بعد معاملة الجرذان البيضاء بجرعة واحدة CCaattaallaasseeتغيرات معدل إنزيم تغيرات معدل إنزيم : : 4343شكلشكلكغ في صفاق البطن أو بعد المعاملة المسبقة للحيوانات كغ في صفاق البطن أو بعد المعاملة المسبقة للحيوانات / / مل مل33 بجرعة بجرعة CCCCLL44منمن

/ / مغ مغ800800 بجرعة بجرعة MMPPووكغ كغ / / مغ مغ500500 بجرعة بجرعة CCIIبالمستخلصين الميثانوليين لكل منبالمستخلصين الميثانوليين لكل من ............................................................................................................................................................................................كغكغ

في الكلى بعد معاملة الجرذان البيضاء بجرعة واحدة في الكلى بعد معاملة الجرذان البيضاء بجرعة واحدة CCaattaallaasseeتغيرات معدل إنزيم تغيرات معدل إنزيم : : 4444شكلشكلسبقة للحيوانات سبقة للحيوانات كغ في صفاق البطن أو بعد المعاملة المكغ في صفاق البطن أو بعد المعاملة الم/ / مل مل33 بجرعة بجرعة CCCCLL44منمن

/ / مغ مغ800800 بجرعة بجرعة MMPPكغ وكغ و/ / مغ مغ500500 بجرعة بجرعة CCIIبالمستخلصين الميثانوليين لكل منبالمستخلصين الميثانوليين لكل من ............................................................................................................................................................................................كغكغ

رعة واحدة رعة واحدة في القلب بعد معاملة الجرذان البيضاء بج في القلب بعد معاملة الجرذان البيضاء بجCCaattaallaasseeتغيرات معدل إنزيم تغيرات معدل إنزيم : : 4545شكلشكلكغ في صفاق البطن أو بعد المعاملة المسبقة للحيوانات كغ في صفاق البطن أو بعد المعاملة المسبقة للحيوانات / / مل مل33 بجرعة بجرعة CCCCLL44منمن

/ / مغ مغ800800 بجرعة بجرعة MMPPكغ وكغ و/ / مغ مغ500500 بجرعة بجرعة CCIIبالمستخلصين الميثانوليين لكل منبالمستخلصين الميثانوليين لكل من ............................................................................................................................................................................................كغكغ

72

73

74

75

76

77

77

xii

/ / مل مل33 في الكبد بعد معاملة الفئران البيضاء بجرعة واحدة من في الكبد بعد معاملة الفئران البيضاء بجرعة واحدة من MMDDAAتغيرات معدل تغيرات معدل : : 4646شكلشكل CCII بالمستخلصين الميثانوليين لكل من بالمستخلصين الميثانوليين لكل من كغ في صفاق البطن أو بعد المعاملة المسبقة للحيواناتكغ في صفاق البطن أو بعد المعاملة المسبقة للحيوانات

بجرعة بجرعة QQuueerrcceettiinn كغ و كذا جزيئة الكغ و كذا جزيئة ال/ / مغ مغ200200 بجرعة بجرعة MMPPكغ وكغ و/ / مغ مغ100100بجرعة بجرعة ........................................................................................................................................................................كغكغ/ / مغمغ0.330.33

/ / مل مل33اء بجرعة واحدة من اء بجرعة واحدة من في الكلى بعد معاملة الفئران البيض في الكلى بعد معاملة الفئران البيضMMDDAAتغيرات معدل تغيرات معدل : : 4747شكلشكل

CCIIكغ في صفاق البطن أو بعد المعاملة المسبقة للحيوانات بالمستخلصين الميثانوليين لكل من كغ في صفاق البطن أو بعد المعاملة المسبقة للحيوانات بالمستخلصين الميثانوليين لكل من بجرعة بجرعة QQuueerrcceettiinn كغ و كذا جزيئة الكغ و كذا جزيئة ال/ / مغ مغ200200 بجرعة بجرعة MMPPكغ وكغ و/ / مغ مغ100100بجرعة بجرعة

........................................................................................................................................................................كغكغ/ / مغمغ0.330.33

/ / مل مل33 في القلب بعد معاملة الفئران البيضاء بجرعة واحدة من في القلب بعد معاملة الفئران البيضاء بجرعة واحدة من MMDDAAتغيرات معدل تغيرات معدل : : 4848شكلشكل CCIIكغ في صفاق البطن أو بعد المعاملة المسبقة للحيوانات بالمستخلصين الميثانوليين لكل من كغ في صفاق البطن أو بعد المعاملة المسبقة للحيوانات بالمستخلصين الميثانوليين لكل من

بجرعة بجرعة QQuueerrcceettiinn كغ و كذا جزيئة الكغ و كذا جزيئة ال/ / مغ مغ200200 بجرعة بجرعة MMPPكغ وكغ و/ / مغ مغ100100بجرعة بجرعة ........................................................................................................................................................................كغكغ/ / مغمغ0.330.33

في الكبد بعد معاملة الفئران البيضاء بجرعة واحدة في الكبد بعد معاملة الفئران البيضاء بجرعة واحدة CCaattaallaasseeتغيرات معدل إنزيم تغيرات معدل إنزيم : : 4949شكلشكلكغ في صفاق البطن أو بعد المعاملة المسبقة للحيوانات كغ في صفاق البطن أو بعد المعاملة المسبقة للحيوانات / / مل مل33 بجرعة بجرعة CCCCLL44منمن

كغ و كذا كغ و كذا / / مغ مغ200200 بجرعة بجرعة MMPPكغ وكغ و/ / مغ مغ100100 بجرعة بجرعة CCIIين الميثانوليين لكل منين الميثانوليين لكل منبالمستخلصبالمستخلص ..........................................................................................................كغكغ/ / مغمغ0.330.33بجرعة بجرعة QQuueerrcceettiinn جزيئة الجزيئة ال

في الكلى بعد معاملة الفئران البيضاء بجرعة واحدة في الكلى بعد معاملة الفئران البيضاء بجرعة واحدة CCaattaallaasseeتغيرات معدل إنزيم تغيرات معدل إنزيم : : 5050شكلشكلكغ في صفاق البطن أو بعد المعاملة المسبقة للحيوانات كغ في صفاق البطن أو بعد المعاملة المسبقة للحيوانات / / مل مل33 بجرعة بجرعة CCCCLL44منمن

كغ و كذا كغ و كذا / / مغ مغ200200 بجرعة بجرعة MMPPكغ وكغ و/ / مغ مغ100100 بجرعة بجرعة CCIIبالمستخلصين الميثانوليين لكل منبالمستخلصين الميثانوليين لكل من ..........................................................................................................كغكغ/ / مغمغ0.330.33بجرعة بجرعة QQuueerrcceettiinn جزيئة الجزيئة ال

79

80

81

82

83

xiv

سبحان اهللا العلي القدير الذي خلق الكون بآياته الربانية الزاخرة بالظواهر المرئية، و الحافلة

تبارك . بالوحدات المادية، و العامرة بالكائنات الحية، و المحيطة بالهواء، و المحتوية على الماء

فالنبات . و اإلنسان ليسعىلنباتات لتروى، و األنعام لترعى، خلق األرض لتبقى، و االحق الذي

سابق للحيوان، و اإلنسان الحق بهما لتوفير مصادر الطعام و الغذاء، و عوامل الصحة و الشفاء،

اعتمادا على تناوله النباتات الخضراء، و استعماله لألعشاب التي تختلف في الجنس و النوع و

).1992، دأبو زي( صنف مرفولوجيا، و تتباين في المحتويات الفعالة، و المنتجات الثانوية كيميائياالالقرن السابع قبل ( امعرفة اإلنسان الستعمال النباتات كأدوية طبيعية أو مواد سامة قديمة جدإن

, Aristote( راتهم ه المعرفة من خالل األطباء الالتينيون في منشوو قد تم حفظ هذ ،)الميالد

Hipocrate و خاصة Dioscoride( )Hostettman , 2000.(

بعد نسيان دام عدة سنوات ، أصبح اآلن العالج النباتي ضرورة حتمية لما خلفته األدوية المصنعة

كيميائيا من تأثيرات ثانوية يمكن أن تشكل خطرا كبيرا على العضوية ، وعلما أن معرفة النباتات

في ةواستعماالتها جد واسع ) valnet , 1976( كباتها أصبح جد متطور في السنوات األخيرة و مر

و المعالجة باألعشاب الطبية يالطب الشعبي فقد توجهت معظم دول العالم نحو االهتمام بالتداو

. فشجعت المزارعين على زراعتها و خصصت مخابر و مراكز بحث في الجامعات لهذا الغرض

عدد من الباحثين إلحياء الماضي و العودة إلى المعالجة بالعقاقير النباتية في شكل يعتمد كما توجه

رفت العقاقير النباتية على أنها ترياق حقيقي كما ع.)1996حليمي، (على الدقة و التجربة المخبرية

.(Beloued, 1998)قدمته لنا الطبيعة للوقاية و العالج

إنها:ئية ضعيفة يع النباتات جزيئات ذات أوزان جزصنيضية األولية ، تإلى جانب منتجاتها األ

المواد األيضية الثانوية التي تشكل حاليا العديد من األبحاث الصيدالنية لما لها من عناصر فعالة

األلقلويدات ، الثيربانويدات ، الزيوت الطيارة و خاصة : التي يمكن أن نذكر منها وبيولوجيا

تأثيرات : مثل )Anton , 1999(الفينوالت الواسعة االستعمال بسبب تأثيراتها العالجية متعددات

و قد أصبح ، )Hayase & Kato , 1989( مضادة لألكسدة ) Bidet et al. , 1987( مضادة لاللتهاب

HIVالـ :لمصنعة على عالج بعض األمراض مثـل إزاء عجز األدوية اهذا االستعمال ضروريا

.إلخ...التهاب الكبد الفيروسي سرطان و و ال

مقدمة

1

تسمية مضادات األكسدة و الجذور الحرة هي تسميات شعبية استعملت من طرف مختصي التغذية و

تخصصات أخرى، وقد أظهرت السنوات األخيرة طفحان المعلومات على دور اإلجهاد التأكسدي

سرطان و أمراض القلب وأمراض بعض أنواع ال: لخطيرة مثل في ظهور بعض األنواع المرضية ا

. و كذا الدور العالجي الممكن لمضادات األكسدة على هذه األمراضالتلف المرتبطة بالشيخوخة

اإلشعاعات عوامل خارجية مثل ملوثات الهواء ويمكن أن تنتج الجذور الحرة بشكل مفرط بسبب

د صناعية بالدرجة األولى مثل حالة مواالكحول و التبغ و: العديد من المواد مثل فوق البنفسجية و

لهذا السبب، تصبح أنظمتنا الدفاعية الداخلية عاجزة على اختزال كل هذه .... رابع كلوريد الكربون

لخفض هذه األضرار التأكسدية تحتاج عضويتنا إلى تزويد غذائي غني بمضاعفات واألنواع النشطة

. و كذا متعددات الفينوالتE و A C,الفيتامينات : األكسدة الخارجية نجد من بينها

باعتبار أن الكبد العضو األكثر استهدافا من قبل المواد و العقاقير كونه الممر و المركز الرئيسي

، و علما أنه ال يوجد ثمة )أين تتم مختلف التفاعالت االستقالبية الحيوية و اإلنزيمية( لهذه األخيرة

Matricaria pubescensو Centaurea incana المحتمل لنبتتي أي من التقارير حول التأثير الواقي

على السمية الكبدية المحرضة برابع كلوريد الكربون، فقد ارتأينا في بحثنا هذا إلى التطرق إلى

:نقاط مختلفة، حيث تمثلت األهداف المثبتة في عملنا فيما يلي

طليعية طريق القيام بدراسةتحديد الجرعة المالئمة لكال المستخلصين الميثانوليين عن

. البيضاءعلى الفئران

كغ عند / مل3تقدير السمية الكبدية المحرضة برباعي كلوريد الكربون بجرعة

.لجرذان و الفئران البيضاء عن طريق دراسة المقاييس المختلفةا

Centaurea incanaتقدير التأثير الواقي لكل من المستخلصين الميثانوليين لكل من

كغ و / مغ800بجرعة Matricaria pubescens كغ و/ مغ100كغ و / مغ500عة بجر

كغ عند الجرذان و الفئران البيضاء على الترتيب و المحرضة برباعي / مغ200

كغ في صفاق البطن، و ذلك عن طريق إجراء / مل3كلوريد الكربون بجرعة

الل تقدير المعايير المصلية المقاييس و المعايير المختلفة من فحص وظيفي للكبد من خ

Transaminases TGO & TGP)(، Alkalin لكل من إنزيمات الـاإلنزيمية

phosphatase (ALP) قياس مستوى البروتينات المصلية و كوليسثيرول من يمية االإنزو

كذا قياس مؤشرات اإلجهاد التأكسدي في الكبد و و للجليسريدات الثالثية و األلبومين

.Catalase و معدل إنزيم الـ MDA من خالل تقدير معدل الـذات العالقةاألعضاء

2

I- المظاهر التشريحية و الفسيولوجية للكبد : I-1-مقدمة و تعريف :

، يصل وزنه قيدا العضو األيضي األكثر تع إنه،عضو في الجسم كبرأ كبر غدة وأيعتبر الكبد عملية األيض الغذائي و العديد يتدخل الكبد في . من الوزن الكلي للعضوية1/40يشكل . كغ 1.5إلى ة و طرح الجزيئات داخلية وه األخيرذاألدوية و السموم، أين يعد العضو األساسي في إزالة ه من

; Allen,2002 ; Wigfull&Bellamy,2000 ; Kekis, 2006 ; Dalley&Moore,2006) خارجيةالمصدر

Compbell,2006 ; Gavrilov& Tatarinov,1988).منه يتم% 80بتر( وهو الوحيد القادر على التجدد

يقع بين المعي والقلب، ذو لون أحمر (Wright et al ., 1980). ) أسابيع8 إلى 6تعويضه خالل سم 08كه سم و سم16ارتفاعه الرئيسي و سم28قرميدي، يبلغ طوله حوالي

.(Kamina&Marino,1998)وسطي و ذيلي منظمة في يتشكل من أربعة فصوص أيمن و أيسر و ,Susanna, 2004 ; Allen)تسمح لها بأداء وظائفها المختلفة ) خاليا كبدية(شكل خاليا مترابطة

2002 ; Cattley & Popp,2002 ; Gavrilov& Tatarinov,1988) ) 1شكل.(

ول عن أخد دفق الدموي، الشريان الكبدي المسؤعتبر الكبد العضو الوحيد الذي يملك مصدرين للتي

الدم الغني باألكسجين والوريد البابي الذي يحمل الجزيئات الممتصة على مستوى األنبوب الهضمي (Wigfull&Bellamy,2000 ; Lionel & Beale, 1856 ; Christofides et al., 2006 ). الفص يعد

و شكل سداسي الرؤوس ، تنتظم خالياه في شكل صفوف ذ. الكبدي الوحدة البنائية و الوظيفية للكبدنجد بين . sinusoids) (توجد بين الصفوف الشعاعية خاليا جيبيه. شعاعيه حول الوريد المركزي

يا خال ال الذي يفصلDisseمع وجود فراغ . Glisson يسمى فراغ الشكلالفصوص فراغ مثلثي ).2شكل () (Compbell,2006جيبيه عن الخاليا الكبديةال

(Sherlock & Dooley, 2002) منظر خلفي للكبد : 1 شكل

4

I-2-لماذا يعتبر الكبد العضو المستهدف ؟

يستهدف أي عضو من الجسم بالعديد من المواد الكيميائية، غير أن بعض األعضاء تكون أعضاء أخرى و يعد الكبد العضو األكثر استهدافا لعدة األكثر قابلية لهذا االستهداف مقارنة مع

:أسبابمعوي وبعد عملية -أوال، تدخل العديد من المواد السامة إلى العضوية عن طريق األنبوب المعدو

يتعرض هكذا الكبد إلى تراكيز عالية من حمل عن طريق الوريد البابي إلى الكبد ،االمتصاص ت تلتقي المواد الكيميائية في الكبد عن طريق مصدري الدم .)Reed., 1994 ; Lu.,1996(هذه المواد

& Stacey et al.,1993 ; Kulkarni(اآلتي من الشريان الكبدي و كذا الوريد البابي

Byczkowski.,1994.(، مراعاة طرقما التحويل الحيوي و إفراز المواد الكيميائية، دونيا، يملك الكبد القابلية للتركيز وثان

المواد غير الحيوية يملك تراكيز عالية من إنزيمات أيض و،)Plaa & Hewitt.,1982(التعرض (Xenobiotic) خصوصا السيثوكروم ،P450 ،أين يحول العديد من المواد األكثر سمية أقل سمية ،

ه في حين أن .)Murray.,1994(عن طريق جعلها قابلة للذوبان في الماء و هكذا تكون سهلة اإلفرازفي بعض الحاالت يتم تنشيط المواد السامة لتصبح أكثر سمية مؤدية إلى أضرار مثل حالة رباعي

).Brattin et al.,1985(كلوريد الكربون المحرض للسمية الكبدية

القنيات الصفراوية والخاليا الجيبية و المثلث البابييوضح مكونات الفص الكبدي و: 2شكل

)Dalley&Moore,2006(

5

األنماط الخلوية %العدد %الحجم الخاليا الكبدية 60-65 78 الخاليا الظهارية 15-20 2.8 kupfferخاليا 8-12 2.1 Itoخاليا 3-8 1.4

الخاليا القاتلة طبيعيا >2 -

I-3-األنماط الخلوية المختلفة ووظائفها الكبدية :

I-3-1-األنماط الخلوية :

:وفرة حسب الضرورة لمختلف األنماط الخلوية الموجودة على مستوى الكبد ال)1( الجدوليوضح I-3-1-1-الخاليا الكبدية أو الخاليا البرانشيمية:

. (Gebhardt, 1992) مختلف األنماط الخلوية الكبدية:1ل جدو

تعتبر هذه الخاليا النمط األكثر تواجدا على ، يقدر عمرها عند )%60حوالي (مستوى الكبد

. Cattley & Popp, 2002)( يوم 200 ـالجرد بتعد الموقع الرئيسي لعملية األيض المتوسطي و ميثابوليزم العقاقير و المواد و كذا عملية

ذات حجم و شكل غير متجانس بحيث . لتخزينايبين المظهر ما فوق بنيوي لخلية كبدية أنها

خاليا للتتشكل من جهة من وجه وعائي مواجه ضمن التبادالت مع ة التي ت األخير هذه،جيبيه ال

من جهة أخرى من وجه . المجرى الدمويصفراوي، قمي يتدخل في تشكيل القنيات

يمة الجدار ألنها تتشكل الصفراوية، ذات بنية عدمن ترابط األغشية البالزمية للعديد من الخاليا

شكل 3: عضيات الخلية الكبدية .)3شكل ((Gandillet, 2004) الكبدية المتالصقة (Sherlock & Dooley, 2002).

تترتب األنماط الخلوية المختلفة الموجودة في

بنيوي الكبد في شكلجد منظم حيث تتعاون

الوظائف لضمان المختلفة لهذا العضو من عمليات أيضية

.اطراحية و غيرها

6

I-3-1-2-عن طريق ( تتدخل هذه الخاليا في تعديل تكاثر الخاليا الكبدية: الخاليا الظهاريةTransforming Growth Factor B(TGFB) 6 واألنثرلوكين (IL6)( جيبيه ، تملك ال، تحيط بالخاليا

الشيء الذي يسمح بالتبادل بين . خاصية أنها تحوي ثغور ونوافذ وهي عديمة الغشاء القاعدي (Gandillet, 2004) .الكبدية والحاجز الظهاري الخاليا

I-3-1-3-خاليا :kupffer جيبيه ، تكون هذه الخاليا على اليا خالال تتواجد على مستوى لمعة عبارة عن خاليا جوارية ية وكذا الكبدية بفضل استطاالتها و هياتصال مباشر مع الخاليا الظهار

من نوع البالعات الكبدية الكبيرة التي تتدخل في االستجابة المناعية الآلنوعية وخالل مراحل إفراز . (William, 2006)السيثوكينات وعوامل النمو والتثبيط

I-3-1-4-خاليا ( الخاليا النجميةIto( : تقع في فراغ Disse خاليا ال بين الخاليا الكبدبة و تلعب دور كبير A.جيبيه، تقوم هذه الخاليا بتخزين العديد من الكريات الليبيدية الغنية بالفيثامين ال

ترتيب الحشوة خارج خلوية (الكبدي أثناء التليف الكبدي و تتدخل بصفة عامة في تنظيم النمو (Gandillet, 2004)....) انتاج السيثوكيناتوتخليق عوامل النمو و

I-3-1-5-الخاليا القاتلة طبيعيا :NK،تتموقع بشكل مرئي عبارة عن خاليا لمفاوية داخل كبدية (Gandillet, 2004). جيبيه ، تتدخل في آليات االستجابة المناعيةالخاليا ال في لمعة

I-3-1-6-ليست خاليا متخصصة في الكبد، تملك دور بنائي وهندسي جد : الخاليا المغزلية (Gandillet, 2004). مهم مع كل مركبات الحشوة خارج خلوية، تتدخل في ليونة وتجديد الكبد

I-3-2- وظائف الكبد :

: ئف التي منهانزيمات، يضمن الكبد العديد من الوظاأهمية كتلته الخلوية، و غناه باإلبسبب I-3-2-1- يعتبر الكبد الخزان الدموي الرئيسي في العضوية كما أنه يسمح : وظائف وعائية

نقل إلى الكبد انطالقا من األنبوب الهضمي عن طريق الوريد بتوصيل المركبات الغذائية التي ت (Gonzalez , 2004).البابي

I-3-2-2-األكثر أهمية للكبد في التصفية النشطة تتمثل إحدى الوظائف : طراحية وظائف إللبالزما من العديد من الجزيئات خاصة مركبات العصارة الصفراوية و كذلك هدم العديد ) الفعالة(

حيث تقوم العصارة الصفراوية بهضم ) منها عوامل التخثر الدموي( من مركبات البالزما الدموية الكبدية بصبها في القنيات الصفراوية ومنها في بيدات و طرحها بشكل مستمر عن طريق الخاليايالل

وكذا مركبات خارج . ة أو في العفجالصفراويجمع سواء في الحويصلة القنوات الصفراوية قبل أن ت (Cerf et al.,1978). األدوية والمواد السامةالعضوية مثل الملونات و بعض الجزيئات و

7

يتدخل الكبد في : وظائف أيضية-3-

I-3-2-3-يتدخل الكبد في :وظائف أيضية و هدم عملية التخليق الحيوي، التخزين، تحويل يملك . المركبات العضوية و طالئع التخليق الحيوي

أيضا بفضل الخاليا الكبدية دور في تخليق اليوريا، تخزين (األلبومين ويتدخل في الميثابوليزم السكري

وبهذا يضمن ثبات السكر في ) وتخليق الجليكوجينأكسدة ( بيديييتدخل أيضا في الميثابوليزم الل. الدم

و تخليق الكوليسثرول والذهنيةاألحماض ). هونفوسفوليبيدات و كذا تخليق الدال

تحويل األحماض األمينية، تشكيل ( والبروتيني ة ما عدا الجلوبيولينات المناعية البروتينات البالزمي

يسمح بصفة خاصة ). هدم األمونياك إلى بولةو وكذا الحديد B12 و B,A فيثامينالبتخزين كل من .وفيريتين في الخاليا الكبديةبسبب وجود األب

يملك أيضا الكبد دور سائد، تضمنه الخاليا الكبدية، في عملية إزالة سمية العضوية بفضل ميثابوليزم العقاقير و المواد و الجزيئات داخلية و خارجية

زيمية، عن طريق سلسلة من التفاعالت اإلنالمنشأدهون حيث يتم تحويل المركبات القابلة للذوبان في ال

، زال فيما بعد عن طريق البولةإلى مشتقات مميهة ت) 4(بالشكلالعصارة الصفراوية كما هو موضح

تضم هذه التفاعالت األنزيمية التحول الحيوي من تضم خاصة تفاعالت األكسدة المحفزة ( )I(النمط

بواسطة نظام إنزيمي متعدد متعلق بالسيثوكروم P450 Cytية للجزيئة الذي يضيف مجموعة قطب(.

التزاوج بين مجموعة مميهة و ()II(ومن النمط مركب قابل للذوبان في الدهون أو مع نواتج وسطية

مؤدية إلى تشكيل ) Iتنتج خالل تفاعالت المرحلة ; Wright et al.,1980)مركبات غير سامة

Lehnincer, 1989 ; Polonovski et al., 1971).

صة جزیئات خا جزیئات خارجية بالعضویة

هرمونات ستيرويدية- صبغات صفراوية-

و غيرها

مراحل تخطيطية للتحول: 4شكل الحيوي وإزالة السمية للعقاقير و المواد

.داخلية وخارجية المنشأ(Koolman & Röhm, 1994)

العقاقير و المواد- حافظات صيدالنية-ملونات -

- قليلة الدوبان في الدهون

بيولوجيا نشطة -

تفاعالت المرحلة

I

تفاعالت التحول اضافة مجموعة -

الهيدروآسيل اضافة مجموعة -

األبوآسيد نزع األلكيل- نزع األمين- األرجاع- - المتللة-ة نزع مجموع-

الكبریت

ناتج التحول

تفاعالت المرحلة

II

تشكيل المتزاوجات األرتباط مع حمض -

الجلوآورونبك األسترة باضافة -

مجموعة الكبریت الرتباط مع الجليسين - األرتباط مع حمض -

الجلوثاميك

قابلة للدوبان في -تمتراوجاالماء،غير نشطة،

غير سامة

الصفراء لبولةا

8

I-3-2-4-للخاليا الكبدية) السائد( الدور الرائد : ولة عن أغلبية الوظائف الكبدية ، المسؤ) من كتلة الكبد%60 التي تشكل حوالي ( الخاليا الكبديةتعد

لك تلعب دور ذو ب. إذ تتدخل مباشرة في حياة الفرد عن طريق عدد و أهمية الوظائف التي تضمنها :جد مهم في

آليات إزالة سمية العضوية عن طريق تفاعالت إنزيمية تسمح بتشكيل مشتقات .أيضية غير سامة تطرح خارج العضوية

. الجلوسيدات و البروتيدات وبيداتيميثابوليزم الل .وظائف اطراحية و إفرازية يضمنها الكبد

يمكنها أن تملك محتوى مضاعف من األحماض خاصية جد مهمة تتمثل في كون هذه الخاليا بحيث خالل نشأتها تكون ثنائية الصيغة الصبغية ثم بعد ذلك وتدريجيا تصبح (DNA).النووية

خاصية أخرى تتمتع بها الخاليا الكبدية و هي كون التعبير الوراثي . متعددة الصيغة الصبغية. هذه الحالة عن عدم التجانس األيضييتناسب مع توزعها الفراغي ضمن الفص الكبدي نتكلم في

(Gandillet, 2004) . الشيء الذي يعكس التخصص الوظيفي المرتبط بالتقسيم الفراغي I-3-2-5-دور الكبد في ميثابوليزم السموم :

: يتم التخلص من السموم في الكبد عبر طريقين : )مرحلة األكسدة( في إزالة السموم450CytP دور السيثوكروم -أ

يتم غالبا تثبيت أو نزع مجموعات جديدة . هذه المرحلة على تغيرات الوظائف الفعالة يعتمد مبدأتؤدي هذه التغيرات في المجموعات الوظيفية غالبا إلى تثبيط النشاط . على الجزيئة، لرفع فعاليتها

يئة مما يؤدي البيولوجي للجزيئة، كما يمكن لهذه التغيرات من جهة أخرى أن ترفع من قطبية الجزللوصول إلى هذا الهدف، يمكن . إلى زيادة الذوبانية في الماء و هذا ما يقود إلى إزالتها بسهولة

بعضها منتشر بكثرة خاصة تفاعالت األكسدة االرجاعية التي تؤثر على . تخيل العديد من التفاعالت (Horn et al., 2003). الفعالية و الذوبان في الماء

تحفز بواسطة إنزيمات ،)I(ت األكسدة من أهم التفاعالت التي تحدث في المرحلة تعتبر تفاعال السيثوكروم ( تستعمل األكسجين الجزيئي عن طريق مساعدة مرافق األنزيم ،450CytP السيثوكروم

450CytP و NADPH /H+.( يتم هكذا إدماج ذرة O2،مشكلة منطقة قطبية في الجزيئة المستهدفة. إذا تم ،)Hydroxylation( مع ذرة هيدروجين نتكلم عن تفاعالت الهدركسلةO2 ـطت ذرة الإذا ارتب

، أما إذا تم دمجها مع ذرة أزوت Sulfoxydationإدماجها مع ذرة كبريت، نتحدث عن تفاعالت

9

و إذا حدث نزع للمجموعات الوظيفية مثل مجموعة ألكيل . N-oxydationفنتكلم عندئذ عن تفاعالت Désamination (Horn et al., 2003). أو نزع مجموعة أمينDésalkylation عن تفاعالت نتكلم

ـاسم عائلة لمجموعة إنزيمات الCytP 450 يعتبر السيثوكرومCytP: 450السيثوكروم -1-أ

Oxygenases توجد هذه . عائلة12 نوع موزع على 100 متعددة الوظائف أين تم معرفة أكثر منمات خاصة على مستوى غشاء الشبكة األنذوبالزمية الملساء، تتواجد أنزيماته بشكل كبير في األنزييتدخل (Guengerich et al., 2005). يتدخل في ثبات الوسط الداخلي. (Saorikoski et al., 2005)الكبد

يملك .منشأفي عملية ميثابوليزم العقاقير و المواد السامة باإلضافة للمواد داخلية و خارجية ال ككل أنواع السيثوكرومات مجموعة هيم مع ذرة حديد مركزية التي يمكن أن 450CytPالسيثوكروم

إنزيم غير CytP (EC.1.14.14.1) 450 السيثوكروم يعتبر. يكون فيها في شكل مؤكسد أو مرجع يتكون نظام ( Monshouwer& Hoebe, 2003 ; Soucek, 1999).نوعي يحفز أكسدة العديد من المواد

CytP. 450 المرجع و السيثوكرومCytP 450 السيثوكروم : من بروتينينCytP 450 السيثوكروم.(Horn et al., 2003)

يتمثل مبدأ وظيفة : آلية التأثير-2-أ : في اآلتيCytP 450 إنزيمات السيثوكروم

يتم دمج ذرة منه في الناتج النهائي و الذرة الـ جزيئة ماء بعد عملية تجزئةاألخرى في

O2يتمثل العامل . في الظروف األرجاعية حيث يتم نقل +NADPH /Hالمرجع في

الكتروناته في شكل ذرات هيدروجين ناحية بروتين فالفوني الذي يرسلها بدوره إلى ذرة

يتم تحويل CytP. 450 حديد السيثوكرومبح التي تص(األلكثرونات من ذرة الحديد

Fe3+ ( ـناحية جزيئة ال O2 مؤدية إلى ظهورO2 محفز هذا األخير الذي يمكنه االندماج مع

OHالناتج النهائي في شكل مجموعة.(Horn et al., 2003)

مرآب ألزالة سميته

Fe3+

+Fe3 الهيم

Cyt P450 المرجع

Fe2+ o

Fe3+ o

Fe2+

o-oأل الجزئي

o

غير ساممرآب مؤآسد

o

H2O

سيثوآروم

CytP 450 تأثير السيثوكروم 5:شكل

NADPH+H+

NADP

10

).Wright et al.,1980 ; Polonovski et al.,1971( : )تمرحلة تشكيل المترابطا (II المرحلة-بترتبط بعض المركبات خارجية المصدر و المواد المهدركسلة خالل مرحلة األكسدة بجزيئات داخلية المصدر لتشكيل مركبات متزاوجة ذائبة، تكون عامة غير نشطة و غير سامة، تزال عن طريق

: الصفراء أو الكلية و منهايتم طرحها ترتبط األحماض العطرية التي ال يمكن هدمها قبل أن : االرتباط مع الجليسين

.داخل العضوية مع الجليسين الفينولية على مستوى الكبد بالكبريت ت ترتبط العديد من المركبا: االرتباط مع ايونات الكبريت

.كبريتية-ويتم طرحها في شكل أستراتو الهرمونات التي تحتوي على ترتبط العديد من العقاقير : االرتباط مع حمض الجلوكورونيك

.بحمض الجلوكورونيك لتشكيل مركبات تطرح عن طريق البول) كحولية أو فينولية(مجموعة ترتبط المركبات العطرية األمينية في الكبد مع حمض الخل لتشكيل : االرتباط مع حمض الخل

N-acétyl- transféraseالمشتقات األيضية الموافقة له حيث يتم تحفيز التفاعل عن طريق إنزيم .و الجلوثاثيون

في الظروف العادية، يبدأ الكبد البشري بالتجدد خالل األيام الثالثة األولى و يستعيد حجمه العادي أسابيع من 3 إلى2بدية في أغلب الحاالت عادية خالل تصبح الوظائف الك. خالل ثالثة أشهر

يتم في حين أنه عند الجرذ .بد أو في حاالت عالج تلقائي بعد التهاب كبدياالستئصال الجزئي للك .(Court et al.,2004) أيام 10 و 7تجدد الكبد بين

I-4-يالتجدد الكبد : نعني بكلمة تجديد القدرة على تصحيح الكتلة النسيجية و

في حين يملك . الوظيفية بعد قصور أو بتر جزئي للكبد. األعضاء لهاالكبد هذه القدرة الساحرة، تفتقد العديد من

كحالة بعض الديدان ( بمعنى الكلمةال يتعلق األمر بتجدد إذ ال ينمو ). البرمائيات و الزواحفو الحشرات و

مرة أخرى و لكن ) عن طريق البتر(الجزء المضمحل ال يتم استعادة البنية األولية . األجزاء المتبقية تتضخم

و نمو للكبد، ولكن يمكن أن نقول أنه فرط في التنسج، أيمكن أن يحدث نمو و تضاعف خلوي للكبد . مكمل

خالل عملية تجدده بصفة مماثلة للتي تحدث عند . و حتى عند الثديياتوذبابة الخل الخمائر

.موت الخلية الكبدیة و تجددها 6 : شكل(Sherlock&Dooley,2002)

11

I-5-العقاقير و المواد المحرضة للعطب الكبدي: و المواد المحرضة للسمية الكبدية رد فعل فطري مفاجئ على الجرعة العالجية أو رحدث العقاقيت

).Fareel, 1994 ; Timbrell, 1995( متوقعة للعوامل ذات السمية الذاتيةكنتيجة تعتبر السمية الكبدية الظاهرة الوحيدة الناتجة عن التأثيرات الدوائية غير المرغوبة فيها، أو تكون

).Schiano&Black,1998( مرفقة بأضرار تمتد إلى أنظمة عضوية أخرى directثوكسينات كبدية مباشرة(د كيميائية مستقرة تنقسم مسممات الكبد الذاتية إلى موا

hepatotoxins( مثل (Anders, 1988) ethionine و .(Farber, 1982) galactosamine ومشتقات ,indirect hepatotoxins( )Fareel ثوكسينات كبدية غير مباشرة(أيضية تسمى أنواع كيميائية نشطة

:ى، حيث تضم ثالث مجموعات كبر)1994 جذور حرة مثل حالة رباعي كلوريد الكربون المحرض للسمية الكبدية -1

)Recknagel&Glende,1973.( Dahlin( مشتقات أيضية الكثروفيلية مثل حالة البراسيثامول المحرض للسمية الكبدية -2

et al., 1984.( مثل حالة البراكات المحرض للسمية الكبدية)ROS(األنواع األكسيجينية النشطة -3

)Bus&Gibson,1984.(

:تحدث األضرار الكبدية من خالل العديد من التفاعالت البيوكيميائية منها . (Tribble et al., 1987) فوق أكسدة الليبيدات- .(Bridges et al., 1983) تثبيط عملية التخليق البروتيني . (Plaa& Priestly, 1976) خلل في تخليق العصارة الصفراوية .(Bellomo& Orrenius, 1985) بات الوسط الداخلياضطراب في ث .)ATP ()Schiano&Black,1998( انخفاض في األدينوزين ثالثي الفوسفاط DNA ( Stacey et al., 1993) .الـ ر تضر- ).Reed et al., 1994( GSH الـو) Pr-SHs( انخفاض البروتينات الحاملة لمجموعة الثيول

.( Stacey et al., 1993) كوندريوى الميثوخلل وظيفي على مست

ويمكن تلخيص بعض آليات تأثير العقاقير و المواد المحرضة للعطب الكبدي مع بعض األمثلة في CCL4) .( و نأخذ بالدراسة كمثال رباعي كلوريد الكربون )2 ( الجدول

12

العقاقير و المواد آلية التأثيرسببا التشحم تخريب الميثابوليزم الليبيدي م

.الكبدياألميودارون، أمينبتين، ثيثراسيكلين،

.ليندوكسيسيكانخفاض تصفية األمالح الصفراوية مسببا

. Cholestasisـ الحالة -د-لوسبورين ، اسثراديول، بثاسيك

.جلوكورونيد، األثينيل اسثراديولارتفاع اإلجهاد ألتأكسدي مؤديا إلى أضرار

.خلوية .ونازولان، ديكلوفيناك، كيثوكسيثوأمينوفثاأل

.، الكلوروفورمرباعي كلوريد الكربون .انخفاض تنظيم األنسجة المصححة

تخريب فيزيوكيميائي مباشر و تخريب العديد .من العضيات و الميثابوليزم البنائي الخلوي

.، البراكاترباعي كلوريد الكربون

التداخل بين الطرق األيضية النوعية أو التأثيراالختياري للمستقبالت الغشائية الخلوية ،

مؤديا إلى أضرار RNAو DNAـ الجزيئات .بنيوية

.األسيثوأمينوفثان، السثيرويدات

.لين، أسبيرينثيثراسيك . للميثاكوندريβ-Oxidation الـتثبيط عملية

خفض إفراز البروتينات الليبيدية من طرف .الخاليا الكبدية

-الجليكواألميودارون، ميثوثريكساث، .ويد، ثاموكسيفانكورتيك

تنقرز المركز الفصي مؤديا إلى انخفاض الجلوثاثيون وتشكيل روابط بروتينية قوية

.مسببا قصور كبدي حاد

.األسيثوأمينوفثان

عن (toxin) نشيط الميثابوليزمي للسمين تال CytP. 450 طريق نشاط السيثوكروم

، يد الكربونرباعي كلورالبراسيثامول، .الثيوأسيثامين، البروموبنزن

العطب الخلوي الناتج عن فوق أكسدة الليبيدات .الغشائية

، األسيثوأمينوفثان، رباعي كلوريد الكربون .البروموبنزن

.المعادن .انخفاض كبريت البروتين

بدي آليات تأثير العقاقير و المواد المحرضة للعطب الك:2جدول .(Sahu, 2007 ;Tsui,2003 ; Brind,2002 ; Holt & Ju, 2006 ; Kaplowitz &Deleve, 2002)

I-6-الفحص الوظيفي للضرر الكبدي : بالتقدير التجريبي للضرر الكبدي إلى أربعة مجموعات يمكن تقسيم االختبارات الكبرى التي تسمح

تخريب المكونات الكيميائية اختبارات المصل األنزيمية و اختبارات اإلفراز الكبدي و: كبرى ).Plaa & Hiwitt,1982 ( الكبدية و التحليل النسيجي للعطب الكبدي

وية الداخلية مؤشر غير عكسي عن يعد عموما عدم قدرة الخاليا الكبدية على حصر األنزيمات الخل أين يتم تحديد النشاط األنزيمي الكبدي على ، )Story et al.,1983( بالغشاء البالزميقالضرر الالح

).Zimmerman.,1976( مستوى الدم الذي يعد األكثر استعماال في دراسة السمية الكبدية

لكبدي إلى أربعة مجموعات على أساس يمكن تقسيم المؤشرات المصلية األنزيمية الخاصة بالعطب اتضم المجموعة األولى إنزيمات مثل .)Zimmerman.,1978( نوعية و حساسية الضرر الكبدي

gamma glutamylو alkaline phosphatase( ALP، 5- nucleotidase ( الفوسفاثاز القاعدي

transpeptidaseالكوليسثاتيكي التي تعكس الضرر cholestatic ) Plaa and hiwitt., 1982 ;

Stacey et al., 1993 ; Martin and Friedman.,1998(. مثل إنزيمات الثرونزاميناز،ي تسمح بتحديد الضرر البرانشيمي تضم المجموعة الثانية األنزيمات الت

lactate dehydrogenase, alanine aminotransferase(ALT), aspartate amino transferase (AST) (Balazs et al., 1962 ; Stacey et al., 1993).

في حين أن المجموعتين الثالثة والرابعة تضم األنزيمات األقل حساسية للضرر الكبدي، أين يتم و إنزيمات االنهيار في حالة Creatine phosphokinaseتقديرها خارج النسيج الكبدي مثل إنزيمات

. Cholinesterase( Plaa and hiwitt., 1982 ;Lu.,1996)ـ إنزيمات الالعطب الكبدي مثل

ول عن ران عن وظيفة الكبد بما أنه المسؤكما يعتبر البروثرومبين و العصارة الصفراوية مؤش .)Plaa & hiwitt, 1982 ;Lu.,1996(التشكيل و اإلفراز

نات الكبد أين تستعمل في كشف يمكن أن تؤدي المواد الكيميائية المسممة للكبد إلى تغيرات في مكو

، Triglycerides و تقدير مدى الضرر الكبدي الناتج، حيث تضم مستوى الجليسريدات الثالثية microsomalفوسفاثاز و مستوى المتزاوجات المترابطة الميكروزومية-6-نشاط إنزيم الجلوكوز

conjugated dienesية الناتجة عن فوق أكسدة الليبيدات الميكروزوم )Plaa & Witschi,1976 ; Zimmerman,1978.(

14

II- رباعي كلوريد الكربون (الكبد و السمية الكيميائية )CCL4( Carbon tetrachloride( II-1-مقدمة و تعريف

أو رباعي كلوريد الميثان )7شكل(ريد الكربون ما فوق كلور الميثان يسمى أيضا رباعي كلو و قد ،19كان يستعمل كمخدر في القرن . عن مذيب مهم يستعمل غالبا في الصناعة عبارة و هو

و عديم اللون (Recknagel,1967). 20ـ األولى من القرن ال25ـتم التأكد من سميته في السنوات السائل ذو رائحة و هو (Sundari et al., 1997 ; Bahcecioglu et al., 1999) متبخرغير التهابي و

( Basu, 2003).)البروبن( األيثان و البروبان مع الماء، ينتج عن تكلور الميثان وة و ال يمتزج مميز °109.5 ــــ دالثون، يملك بنية رباعية األوجه، تقدر زواياه ب153.82ذو وزن جزيئي

.(Hickox & Denton, 2000)

البنية الكيميائية لرباعي كلوريد الكربون: 7شكل

كان . أدى إلى خفض استعمال رابع كلوريد الكربون في الصناعةةسرطنصائصه المبسبب خ الراتنجات و غالبا ما يستعمل في و الزيوت و الشموع و الطالء ويستعمل سابقا، كمذيب للدهون

يستخدم أيضا في إخماد الحريق، و كعامل تنظيف جاف، بل استخدم . تنظيف المعدات واآلالت .(Parker et al., 2005) طري باعتباره مادة طاردة لديدان األمعاءأيضا في الطب البي

أن إال1970عام بالرغم من أن هذا المركب تم منع استعماله في الواليات المتحدة األمريكية منذ

العودة لتصنيعه أصبحت مالحظة بشكل كبير خالل السنوات األخيرة، حيث أصبح يستعمل في يستعمل حاليا كمذيب و( Basu, 2003) تثل المبنجات و المسكناصيدالنية مالتحضيرات ال

(Kovacic et al., 2002).عضوي

الكلى من أهم اآلثار الناتجة عن يعتبر انهيار الجهاز العصبي المركزي و تخريب كل من الكبد و

من تظهر األعراض الناتجة عن العطب الكبدي خالل يوم إلى عدة أيام. رابع كلوريد الكربونكما يمكن مالحظة . التعرض الحاد، في حين أن تطور التلف الكلوي يتم في غضون أسابيع قليلة

. (Parker et al., 2005)بعض الحاالت كاضطراب الجهاز التنفسي و تسمم الرئتين عند الحيوان

15

ي انهيار يتمثل التأثير المبكر للتعرض الحاد لرابع كلوريد الكربون عند اإلنسان بجميع المسارات فمثل الغثيان و معوية -الجهاز العصبي المركزي، و الذي يمكن أن يكون مصحوب بآثار معدو

تظهر . كما يمكن أن يصحب انهيار الجهاز العصبي المركزي العطب الكبدي و الكلويالتقيؤ، تنقرز ، دقيقة من التعرض، و تغيرات نسيجية في غضون الساعة30اآلثار المسممة للكبد بعد

.(Parker et al., 2005)فص المركزي، تحلل الدهون و اليرقانال

و أكثر و قد تم التوصل إلى أن استنشاق هذا المركب لمدة طويلة عند الحيوان خالل ستة أشهر أكما لوحظ إصابة . ية و تخريب الدهون الكبدية زيادة الليبيدات الكليؤدي إلى زيادة وزن الكبد و

رابع كلوريد ت وكالة حماية البيئة األمريكية و قد صنف. د من أنواع القوارضالكبد بالورم عند العدي .(Parker et al., 2005) الكربون كمادة مسرطنة للبشر

II-2-المحرض للسمية الكبدية-آلية تأثير رباعي كلوريد الكربون :

، األمينات (CCL4) يحدث للعديد من المواد المسممة للكبد بما فيها رباعي كلوريد الكربون النشاط األيضي و ذلك بصفة خاصة ،النيثروزية و الحلقات المتعددة العطرية الهيدروكربونية

الكبدي، لتشكيل جزيئات أيضية نشطة و سامة، أين تسبب 450CytP بواسطة انزيمات السيثوكروم .العطب الكبدي على الحيوان تجريبيا و الفرد

يستعمل . الكربون مادة سامة ألنه يؤدي إلى أضرار كبدية سريعة رباعي كلوريد منذ القديم يعتبر

يعتبر (Yu et al., 2002 ; Toniguchi et al., 2004). غالبا كنموذج لدراسة آلية تأثير العطب الكبديعبارة عن جزيئة ذات تسمم خلوي و هو (Cawthorne,1970)أكثر سمية عند الرجل منه عند المرأة

على الخاليا الكبدية بالجرعة و مدة التعرض له، و CCL4 ـال يرتبط تأثير .(Tsui,2003)مباشر و أخيرا و تنقرز الفص المركزي ) ارتشاح شحمي( ل التشحم الكبدي يظهر ذلك نسيجيا من خال

و قد لوحظ أن هناك تشابه بين رباعي كلوريد الكربون (Recknagel et al., 1960). تشمع الكبديسبب أخذ .(Tamayo , 1983) و التشمع الكبدي الناتج عند الفرد)تجريبيا (ديالمحرض للتشمع الكب

خلوية حادة مع تنقرز و تشحم الفص المركزي في -لمدة زمنية قصيرة أضرار كبدوCCL4 ـ ال ). Jimenez et al., 1992( يؤدي إلى التشمع الكبديCCL4 ـ حين أن األخذ المزمن لل

معروف بتحريضه على إنتاج األنواع األكسيجينية النشطة، خفض إن رباعي كلوريد الكربون

الجلوثاثيون ، واختزال مضادات األكسدة األنزيمية و غير األنزيمية محرضا اإلجهاد ألتأكسدي الذي تنتج األضرار الكبدية المحرضة من . يعتبر أهم عامل في إحداث أضرار كبدية حادة و مزمنة

. الخاليا الكبديةرة و فوق أكسدة الليبيدات مسببة عطبحعن الجذور ال CCL4 الـطرف

16

أحد اآلليات المؤدية للسمية الكبدية الحادة رباعي كلوريد الكربونيعد اإلجهاد التأكسدي الناتج عن .(Muriel& Mourelle, 1990) رباعي كلوريد الكربون مباشرة عن طريق أنزيمات يتأيض

لى مستوى الشبكة األنذوبالزمية منتجا جذر ثالثي كلور الميثيل المتواجدة ع450CytPالسيثوكروم (Brent and Rumack, 1993 Poyer et; al., 1978 ; ( CCL3°)(Trichloromethyl free radical)

Stoyanovsky et al., 1999; Poyer et al., 1978)

. (Weber et al., 2003) بداية ظهور السرطان الكبدي DNAوCCL3° الـينتج عن تشكل جسور بين يمكن أن يتحول جذر ثالثي كلور الميثيل ،ي لرباعي كلوريد الكربوندفي غياب الميثابوليزم التاكس

لتشكيل سداسي كلور األيثان الجزيئة الذي يمكنه أن يتفاعل مع نفس، )CHCL3( إلى كلوروفورم (Parker et al., 2005)،مكنه أن يتفاعل مع الجزيئات الخلوية الكبيرة منتجا فوق أكسدة كما ي

.( Gastro et al., 1997 ; Muriel,1997 ; Recknagel et al.,1974)الخلويةدم البروتينات الليبيدات وه

يمكن أن تفسر هذه المعطيات . في وجود األكسجين، يكون التفاعل مع هذه المركبات جد سريع بالنسبة ا عبارة عن عامل الكثروفيلي خارجي كبير و جد نشط كيميائي°CCL3OO الـبكون جذر

.CCL3° (Brattin et al., 1985) ـلل

(Tortoriello et al., 1990). رباعي كلوريد الكربونميثابوليزم : 8شكل

17

III- الكبد و اإلجهاد التأكسدي و مضادات األكسدة: III-1-أكسدياإلجهاد الت:

لى مستوى السلسلة التنفسية يتحول األكسجين في الحالة العادية إلى جزيئة ماء ع لضمان ATP ألنه يوفر للخلية الطاقة الضرورية في شكل للميثوكوندري، يعتبر هذا التفاعل مهما

بالرغم من أنه .)Pincemail et al., 2003; Cyprus & Pratico, 2007( مختلف وظائفها الحيوية فهو يعد رفيق )Cadenas)2006 و Packer وري، إال أنه يجسد حقيقة متناقضة، حيث أنه حسب ضر

، من جهة ضروري للحياة ومن جهة أخرى قادر على " Oxygen is a dangerous friend" سيء أما الجزء المتبقي ة منه يستعمل في الناحية االيجابي%98تحريض أضرار عضوية كبيرة، فحوالي

يسمى باألنواع األكسيجينية تشكيل مامؤديا إلى الكالسيكي الميثابوليزميعلى الطريق فيتمرد و )°free radicals R(التي تضم الجذور الحرة ( «reactive oxygen species « ROS) النشطة

).Palazzetti, 2005( األخيرة الجزيئات المماثلة لهذه

لفيزيولوجية و الباثولوجية مثل التقدم في العمر، و لى أن العديد من الحاالت اإ تشير الدالئل االلتهاب، و العدوى الفيروسية، و األمراض التنكسية العصبية قد تحدث بفعل أنواع األكسيجين

سنوات العشرة األخيرة، توفرت الدالئل بكثرة على أن عدد كبير من المسارات الالنشطة، و خالل Kehrer, 1993; Chen et al., 2000; Al-Omar) كسيجين النشطةداخل الخلية يتم تنظيمها بأنواع األ

et al., 2004; Blair et al., 2007; Durand et al., 2003). وعليه يعرف اإلجهاد التأكسدي كحالة ناتجة عن عدم التوازن مع السيادة في األنواع المولدة

ظهور أضرار خلوية غالبا ما تكون لألكسدة بالنسبة لمضادات التأكسد، فيؤدي عدم التوازن هذا إلى ; Packer, 2000 ; Cornard et al., 1997 ; Ducharme et al., 2007 ; Halliwell, 2000)غير عكسية

Rosen et al., 2000; Sawyer & Colucci, 2007; Schiffrin & Touyz,2007).

III-1-1-الجذور الحرة : سطة الكترونات حلزونية متعاكسة، تكون تجتمع الذرات في الجزيئات بروابط قوية بوا

حاملة لطاقة كافية قادرة على أن تؤدي إلى تخريب هذه الروابط و بهذا تؤدي إلى ظهور وحدات تسمى هذه الوحدات الكيميائية الجذور . تملك إلكترون غير مرتبط على المدار الخارجيةكيميائي Gutteridge و Halliwell الحر كما عرفهبهذا يمكن أن نعرف الجذر و .)Milane, 2004(الحرة

أي نوع قادر على التواجد مستقل يحتوي على إلكترون أو عدة الكترونات غير "... any species capable of independent existence that contains one or more...” "مرتبطة

unpaired electrons”) Halliwell & Gutteridge, 1984; Halliwell & Gutteridge., 1999 .( هي ويكون عدم االستقرار هذا مؤقت سواء عن طريق استقبال إلكترون آخر أو عن . حالة عدم االستقرار

تنتج هذه األنواع الجذرية غير ،(Bierl et al., 2007)طريق نقل اإللكترون الحر إلى جزيئة أخرى

18

ار العديد من الظواهر البيولوجية طإالمستقرة و النشطة جدا بشكل مستمر في العضوية، في )Baynes & Thorpe, 2000 ; Marfak, 2003( . وبسبب قدرتها على تخريب الخاليا، األنسجة و

.)Gutteridge, 1993 (األعضاء تدخل في العديد من األمراض الحادة منها و المزمنة

III-1-2-األنواع األكسيجينية النشطة على التشكل في الخلية، يمكن أن نميز مجموعة مقتصرة من بين األنواع الجذرية القادرة

. على المركبات الجذرية التي تلعب دور خاص في الفيزيولوجيا و التي نسميها الجذور األوليةتشتق الجذور األولية من . تتشكل الجذور الثانوية بتفاعل الجذور األولية مع الجزيئات الخلوية

حيث أن إضافة إلكترون إلى األكسجين يؤدي إلى تشكيل . األكسجين بواسطة تفاعالت الكترونيةO2)أنيون السوبيرأكسيد

الذي يكون أقل نشاطا، لكن يمثل أحد طالئع األنواع الجذرية األكثر (-° إلى بيروكسيد Dismutationيتحول أنيون السوبيرأكسيد عن طريق عملية. )9شكل(خطورة

ا لكن جد نشط حيث يتدخل في تخليق جذر الذي ال يعتبر جذرا حر(H2O2)الهيدروجين .(Bierl et al., 2007)السمية الخلوية المسؤول عن هذا األخير ،(°OH) (Favier, 2003)الهيدروكسيل

. 3الجدول و 9 الشكل أهم و مختلف األنواع األكسيجينية النشطة في طرق التخليق وويمكن تلخيص

األنواع األكسيجينية النشطة الصيغة الكيميائية

O2°-

OH° HOO° ROO° ROOH

RO° H2O2 NO°

ONOO- CLO-

أنيون السوبيرأآسيد جذر الهيدروآسيل

جذر الهيدروبيروآسيل جذر البيروآسيل الهيدروبيروآسيد جذر األلكوآسيل

بيروآسيد الهيدروجين جذر أآسيد النيثریك البيروآسينيثریث

البوآلوریثا

Superoxide anion Hydroxyl radical Hydroperoxyl radical Peroxyl radical Hydroperoxyde Alkoxyl radical Hydrogen peroxyde Oxide nitric radical Peroxinitrite Hypochlorite

طرق تخليق أهم :9شكل األنواع األكسيجينية النشطة(Kunsch & Chen., 2007).

مختلف األنواع : 3جدول األكسيجينية النشطة

(Kunsch& Chen., 2007)

19

III-1-3-ذور الحرةدر الجا مص: مختلف األنواع األكسيجينية النشطةفي الواقع، الحياة الخلوية عبارة عن مصدر مستمر إلنتاج

(ROS)والجذور الحرة.(Lairon, 2004) تكون خاليانا مستهدفة باستمرار من طرف هذه حيث .األخيرة، و خاصة المرتبطة بالعوامل داخلية وخارجية المنشأ

III-1-3-1-صدر الداخلي للجذور الحرةالم: . تملك الخاليا عدد كبير من األنظمة اإلنزيمية، وعليه تعتبر من أهم المصادر المنتجة للجذور الحرة

ة على مستوى يتمثل أول مصدر إلنتاج األنواع األكسيجينية النشطة الخلوية في الفسفرة التأكسدي Sandere et al., 1993; Nishikawa et al., 2000; Wet& Lee, 2002; Albert et) كوندريالميثو

al., 2003 ))ـكوندري الالميثوخالل التنفس الخلوي، تخلق . )10شكلATP عن طريق اختزال على مستوى الغشاء الداخلي (+Hاألكسجين الجزيئي من خالل السلسلة االلكترونية و أيونات

H2O2سوبيرأكسيد الذي يتحول فيما بعد إلى وخالل النقل االلكتروني، ينتج أنيون ال)كوندري وللميثيؤدي التسرب في االلكترونات خالل تفاعالت نقلها إلى أكسدة يمكن أن. )OH° )Brookes, 2005أو

.األكسجين الجزيئي

بالتفاعل مع الجزيئات داخلية H2O أو/، أنيون السوبيرأكسيد و P450تنتج إنزيمات السيثوكروم ).10شكل( )xenobioticـ حالة إزالة سمية ال( الجزيئات خارجية المنشأو مع) السثيرويدات(المنشأ

يتأيض حمض األراشيدونيك Lipooxygenase و Cyclooxygenase ـتحت تأثير كل من إنزيمي ال

(arachidonic acid) ـعلى الترتيب إلى كل من ال prostaglondineـ و ال leucotrienes محفزة يحدث خالل هذا الميثابوليزم سلسلة من مراحل األكسدة بتدخل جذور حرة .بيةبذلك الظواهر االلتها

.(Schiffrin & Touyz, 2007)وسطيةفي حاالت اإلصابة البكتيرية أو الطفيلية، تملك العضوية العديد من أنظمة الدفاع مثل ظاهرة

-NOو NADH-Oxidase ،myeloperoxidaseبتنشيط المعقد " respiratory burstااللتهاب التنفسي"

Synthase التي تتفاعل بانسجام إلزالة األعضاء الدقيقة بإنتاج األنواع األكسيجينية النشطة القادرة في تخليق NADPH-Oxidase ـيختص إنزيم ال .على تخريب متعددات السكاكر للكبسولة البكتيرية

در لتخليق جذر الهيدروكسيل و جذر السوبيرأكسيد بعد عملية التحفيز، هذا األخير الذي يعتبر مصتعتبر األيونات . والن عن تخريب المادة المبتلعة من طرف الخاليا البالعةالمسؤاالبوكلوريث ول ـــمن أهم مولدات الجذور الحرة، بحيث أن األول يح Xanthine Oxidase الـالمعدنية و كذا

يون السوبيرأكسيد في وجود األكسجين إلى جذر الهيدروكسيل النشط جدا و الثاني يولد أنH2O2 الـ Hypoxanthine.الـ أوXanthine الـ و

20

في O2ـتكون العديد من الخاليا قادرة على إنتاج أحادي أكسيد اآلزوت انطالقا من األرجنين و ال NO-Synthase.. (Schiffrin & Touyz,2007)تفاعل محفز من طرف انزيم

فيه األكسجين قادر على أن يكون مصدر إلنتاج الجذور بصفة عامة كل تفاعل بيوكيميائي يتدخل . الحرة

III-1-3-2-العوامل الفيزيائية والكيميائية: المصدر الخارجي للجذور الحرة التعرض لمختلف العوامل البيئية الفيزيائية عنديمكن أن تنتج األنواع األكسيجينية النشطة

الصوتية و الحرارة و الموجات فوق عات فوق البنفسجية و تحت الحمراء و منها، اإلشعاوالكيميائية و رض الخاليا لبيروكسيد الهيدروجينتعأثناء ....بعض المعادن مثل الحديد و التدخين

البيروكسينيثريك أو إلى المركبات المولدة للجذور الحرة مثل رباعي كلوريد الكربون الذي يمارس

H2O2 ،O2تنتج األنواع األكسيجينية النشطة مثل°OH و -°

O2 ـيتخلق ال. في الخلية بمختلف الطرق عن طريق -°

المختزل وP450 السيثوكروم NADPHضا عن طريقيمكن أن يتشكل أي. كوندريدان االلكترونات على مستوى الميثوفقXanthine/Hypoxanthineو NADPH-Oxidaseـ ال وcyclooxygenase و Lipooxygenase . يحول انزيم

O2 ـالSOD ـال في وجود انزيمي الجلوثاثيون بيروكسيداز وH2O حيث يهدم هذا األخير إلىH2O2 إلى -°

.Haber-Weissأو Fentonالنشط جدا عن طريق تفاعالت °OH الـ جذر إلى إنتاجH2O2 ـيؤدي ال. Catalaseالـ .(Haton, 2005)يمكن أن تنتج األنواع األكسيجينية النشطة عن طريق االشعاعات المتأينة

10 مختلف الطرق الميثابوليزمية لتشكيل األنواع األكسيجينية النشطة: شكل

(Haton, 2005)

21

CCL3. الـطة جذرسميته بواسCCL3إلىCCL4 ـ لا حيث أن اختزال °

يحدث إما تحت تأثير ° الكبدي، P450السيثوكروم

+Fe2 و إما في وجود

CCL3 جذر الـ أن Knecht & Mason من بين كل 1988في سنة قادر على تحريض األكسدة °

في زيادة مهمة للهيدروبيروكسيدات و بهذا تتسبباض الذهنية المتعددة غير المشبعةالذاتية لألحم . الليبيدية

III-1-4-مستهدفات الجذور الحرة:

بسبب نشاطها الكبير، يمكن للجذور الحرة أن تلحق الضرر بالمكونات البيولوجية الهامة ). (Halliwell, 2000 ; Baynes & Thorpe, 2000 بروتينات و ليبيدات وDNAمن

III-1-4-1-ـأكسدة ال DNA: حسب إلى تشكل أربعة أنواع من األضرارDNA ـدي أكسدة المكونات المختلفة للتؤ

(Halliwell, 2000 ; Singal et al., 1988) .تغيرات على مستوى القواعد النووية .تغيرات على مستوى المواقع غير القاعدية .و البروتين DNA الـتشكيل جسور بين تعتبر مصدرا للعديد من ). زدوجةاألحادية و الم(كسر على مستوى السالسل

OXO-7,8-dihydroxy-guanine (8-oxoG)-8.األضرار التي تصيب القواعد مثل و نتيجة هذه . من جهة أخرى يالحظ خالل سلسلة من التفاعالت عملية المتللة على مستوى القواعد

، في حالة اإلشعاعاتباإلضافة إلى ذلك. األضرار تقود إلى خطأ في القراءة خالل عملية االستنساخ . بجذر الهيدروكسيلDNA ـ ترتبط إصابة الو

III-1-4-2-أكسدة البروتينات: فيما يخص البروتينات، يمكن أن تتأكسد تقريبا كل األحماض األمينية بواسطة األنواع األكسيجينية

الثيروزين ( رية و العط) سيستيين و الميثيونين(النشطة ، و تعد كل من األحماض األمينية الكبريتية تؤدي أكسدة األحماض األمينية إلى تشكيل ).Singal et al., 1988(األكثر حساسية ) و الثريبثوفان

مجموعات الهيدروكسيل و الكربونيل على البروتينات، لكن يمكن أن تؤدي إلى ظهور تغيرات ار إلى تغيرات في بنية وقد تؤدي هذه األضر. هابنائية جد مهمة مثل التشابك داخل الجزيئات أو بين

في حالة اإلنزيمات، يمكن أن تقود التغيرات الحادثة على مستوى الموقع النشط إلى . البروتينات .تثبيطه

(CCL4 + Fe2+ Fe3+ + CL- +CCL3°)

(CCL4 + é CL- + CCL3°)

P450 السيثوكروم

22

III-1-4-3-أكسدة الليبيدات: تمس . هذه الظاهرةب مساسايخص اإلجهاد التأكسدي كل المكونات الخلوية، لكن تعد الليبيدات األكثر

األحماض الذهنية المتعددة غير المشبعة أو المؤشرة لألغشية الخلوية، مثل فوق أكسدة الليبيدات يمكن أن تحدث ظاهرة فوق أكسدة . أسترات الكوليستيرول، الفوسفوليبيدات و الجليسريدات الثالثية

.الليبيدات في الظروف الفيزيولوجية و تزداد حدة في الحاالت المرضية الهيدروكسيل و ( وم األنواع النشطة التي تستلزم هجبدايةالتبدأ األكسدة الليبيدية بمرحلة، مؤدية إلى نزع ذرة )األكسجين األحادي و البيروكسينيثريثاأللكوكسيل و البيروكسيل و

مما يؤدي إلى تشكيل جذر ).LH(هيدروجين من الحمض الذهني المتعدد غير المشبع pantandienylـ الذي بعد إضافة الO2يروكسيل يعطي جذر الب)LOO°.( أين يمكن لهذا األخير أن

،)LOOH(يتفاعل مع حمض ذهني آخر و يشكل الهيدروبيروكسيد تنتمي . االنتشار إنها مرحلة، القادرة على التحول )Lipidic peroxyde LPO(الهيدروبيروكسيدات لعائلة البيروكسيدات اللبيدية ، تعتبر رسل ثانوية سامة أين تزيد من األضرار إلى مواد ثانوية، بمعنى إلى ألدهيدات جد نشطة

الـ نجد DNAـومن بين هذه المواد األكثر نشاطا ضد قواعد ال. الناتجة عن الجذور الحرة)MDA(الـ و )4-HNE(ـ، أين يمكن لهذين األخيرين أن يشكال ما يسمى ب adduitsـ مع ال

DNA.الـ من جهة أخرى يتفاعل هذا من جهة و MDA 4 الـو-HNE مع مضادات األكسدة مثل يمكن أن . مؤديا إلى خفض تراكيز هذا األخير الذي يترجم بخفض معدل الدفاع الخلويGSHالـ المدرج في الطبقة الليبيدية الثنائية )E(حمى التفاعل المتسلسل ألكسدة الليبيدات بواسطة الفيثامين ي

جذور البيروكسيل إلى E ع، يحول الفيثامين في الواق. لألغشية أين يلعب دور معطي للهيدروجينتسمى هذه المرحلة . هيدروبيروكسيد ويضع حد لنهاية التفاعالت المتسلسلة ألكسدة الليبيدات

).11الشكل (يلخص هذه التفاعالت. (Badouard, 2006) ةـالنهايلة ـــبمرح

:LH الحمض الدهني المتعدد غير المشبع(PUFAs) :LOOH هيدروبيروآسيد

:LOO° جذر البيروآسيل

االنتشار.2

النهایة.3 البدایة.1

.(Badouard, 2006)تفاعالت فوق األكسدة الليبيدية:11شكل

23

III-1-5-كشف الجذور الحرة: نه عادة ما يقاس لحرة عن طريق التجارب المباشرة فإسهل كشف الجذور ابما أنه ليس من ال

النهائية للتفاعالت مع الليبيدات ونشاطها بالطرق غير المباشرة مثل تعيير مختلف النواتج ).DNA )Holley & Cheeseman, 1993; Bourassa & Tardif, 2007الـالبروتينات و

إليه الباحثون عند الحاجة الذي يلجأل األحيان المقياس األوتعتبر فوق أكسدة الليبيدات في أغلب

وتوجد العديد ).Holley & Cheeseman, 1993(إلثبات تشكل الجذور الحرة في الخلية المتضررة أوال، تعد أكسدة الليبيدات النتيجة الحدية عندما يتشكل الجذر الحر في . من األسباب الكافية لذلكثانيا، تعتبر أكسدة . الذهنية المتعددة غير المشبعةضن تتواجد بوفرة األحمااألنسجة البيولوجية أي

. إلى أضرار خلويةيالليبيدات من أهم المسارات المرضية الناتجة عن الجذور الحرة أين تؤد ).Cheeseman, 1989(أخيرا، تطور التقنيات التحليلية بشكل واسع باتجاه قياس فوق أكسدة الليبيدات

اسة األضرار التأكسدية الخاصة بالبروتينات بشكل أقل أهمية بالمقارنة بأكسدة الليبيدات و يتم در

يرجع ذلك إلى العديد من المشاكل األساسية الناتجة عن البروتينات المستهدفة المختلفة و كذا تعدد ). Holley & Cheeseman, 1993( بقايا األحماض األمينية

III-2-دة لألكسدةأنظمة الدفاع المضا:

في إزالة سمية الجذور الحرة الناتجة بإفراط في ا مهماتلعب أنظمة الدفاع المضادة لألكسدة دور على أنه جزيئة بيولوجية قادرة بتراكيز ضعيفة على ةيمكن أن نعرف مضاد األكسد. العضوية

/ ألكسدة يجب أن تكون مضادات ا.(Halliwell & Guatteridge, 1999)التقاط الجذور الحرة التأكسدي في حالة اختالل التوازن بين مولدات التأكسد، في حالة توازن، حيث يظهر اإلجهاد

في هذه الحالة تحدث أكسدة المكونات الخلوية بشكل غير ،مضادات األكسدة و الجذور األكسيجينية .)12شكل (عادي

زن بين كمية الجذور الحرة الناتجة عن طريق آليات داخلية يرتبط التوازن الداخلي لألنسجة بالتواأو خارجية، و القدرة على تخريب األنظمة المضادة للتأكسد التي تنقل إما عن طريق الغذاء أو

تختلف تراكيز اإلنزيمات و المركبات المضادة للتأكسد باختالف . الناتجة من طرف الخاليايات المختلفة من بيروكسيزوم و خل الخلية نفسها العضباإلضافة إلى ذلك، تهيأ دا. األنسجة

. سيثوزول أو غشاء خلوي لحماية مختلفة ونوعيةميثوكوندريا و

24

األنواع األآسيجينية النشطة

III-2-1-األنظمة الدفاعية اإلنزيمية: III-2-1-1- إنزيم السوبيرأوكسيد ديسموثاز)Superoxide dismutase SOD:(

انطالقا من الكريات الدموية الحمراء البشرية 1969عام McCord و Fridovichفصل األمريكيان رأوكسيد ـنظام إنزيمي مضاد لألكسدة ألول مرة، إنها إنزيمات السوبي

تضمن هذه اإلنزيمات التي عبارة عن بروتينات معدنية (Pincemail et al, 2004).ازــوثــديسمO2) ألنيون السوبيرأوكسيد dismutationـعملية ال

أول جذر سام يتشكل انطالقا من )13شكل ((-°يضمن هكذا الخط اإلنزيمي الدفاعي األول ضد اإلجهاد . O2(Fridovich, 1989 )ـال

.(Dikalov & Harrison, 2007; Cyprus & Pratico, 2007)التأكسدية األيونات المعدنية الداخلة في تشكيل الموقع حسب طبيعSOD ـ تختلف المتماكبات اإلنزيمية لل

بنيتها المتعددة الوحدات و موقعها الخلوي ، )Bierl et al., 2007() نحاس، زنك ومنغنيز(النشط يقع الموقع النشط في مركز البروتين . الزمنعبرتتميز بنية الموقع النشط بثبات جيد . والنسيجي

و تحدث آلية التفاعل حسب المعدن الموجود . لسوبيرأوكسيدويكون كاره للماء، أين ينزلق أنيون ا عبارة عن ثنائي وحدات هو، الذيCuZnSOD للبروتين SOD1 يشفر الجين . في قلب اإلنزيم

يقع هذا الشكل اإلنزيمي . +Zn2و +Cu2 كيلودالثون 18 إلى 16متماثلة أين تثبت تحت الوحدتين من الذي عبارة عن رباعي Mn SODللبروتين SOD2 حين يشفر الجينفي . في السيثوبالزم الخلوي .كوندريالمتواجد علىمستوى الميثو+Mn2 ـال كيلودالثون 24 ت تحت الوحدةوحدات متماثلة أين تثب

بعض العوامل المحددة لحالة االجهاد التاآسدي لألنظمة البيولوجية: 12شكل.( Baynes & Thorpe, 2000)

مضادات األآسدة مضادات األآسدة االنزیميةSOD , CAT, GPx مضادات األآسدةالفيثامينية

A, C, E أخرى مضادات أآسدة

العصارة الصفراویة الجلوثاثيون

المعادن األلبومين الثرونسفيرین

العوامل الغذائية الفالفونویدات السيلينيوم

مولدات األآسدة ارتفاع ضغط األآسيجين

المعادن الميثابوليزمية

ارتفاع السكري مناعية

التهاب نشاط المتمم األمراض المناعية

الذاتية البلعمة

NADPH oxidase Myeloperoxidase

مواد غير حيویة &العقاقير التدخين الكحول

توى حالة قياس مس األنواع األكسيجينية النشطة

اإلجهاد التأآسدي

25

III-2-1-2- الكثاالز إنزيمCatalase: O2) الناتجة عن تحليل أنيون السوبيرأوكسيدdismutation الـيتمثل أحد نواتج عملية

في (-°، "الحديد"كعامل مرافق Catalase الـ يملك إنزيم H2O2 (Halliwell& Guatteridge, 1989).الـ

عبارة عن ).13شكل ( (Bierl et al., 2007) الهيدروجين إلى ماء و أكسجين ديقوم بهدم بيرو كسياليا الثدييات يتواجد بشكل أساسي في خ. كيلودالثون240رباعي وحدات متشابهة ذو وزن جزيئي

يوجد هذا اإلنزيم بتراكيز مختلفة في األنسجة كبد . على مستوى البيروكسيزوم (Morris& Albright, 1981 ; Felton, 2000).المخ>القلب>كلى>

III-2-1-3-الجلوثاثيون بيروكسيداز إنزيمات: Glutathion peroxidases ، تعمل على هدم )Se( مرافق السيلينيوم كعاملGlutathion peroxidases ـتملك إنزيمات ال

تتواجد هذه اإلنزيمات على مستوى . )13شكل (الهيدروجين و الهيدروبيروكسيد بيروكسيد األغشية الخلوية و يوجد إنزيم نوعي على مستوى ظهارية األنبوب و البالزما والسيثوزولتعتبر . الموقع الخلوي والنسيجيوا بينها على مستوى البنية و مادة التفاعل تختلف فيم. الهضمي

لكن أيضا H2O2 الـهذه اإلنزيمات من دون شك من أهم أنظمة الحماية ألنها ال تهدم فقط Bierl et)البيروكسيدات العضوية السامة المتشكلة خالل أكسدة األحماض الذهنية أو الكوليسثيرول

al., 2007) .ة الغذائية من السيلينيوميرتبط نشاط هذه اإلنزيمات بشكل كبير بالقيم.

.(Dikalov & Harrison, 2007)األكسدة األكسدة في الحماية من مولدات مضاد دور: 13شكل

26

III-2-2-األنظمة غير االنزيمية: III-2-2-1- الجلوثاثيون)Glutathion GSH:(

تكون غنية بالكبريت . (Yaworsky et al., 2000) تتشكل جزيئة الجلوثاثيون من ثالث أحماض أمينيةتوجد إنزيمات مسئولة عن تخليق، هدم و إعادة . الشيء الذي يمنحها دور ملتقطات الجذور الحرة

في ثبات هذا المركب و ضمان التوازن ا مهماتملك بعض هذه اإلنزيمات دور. تشكيل الجلوثاثيون بواسطة)GSSGوثاثيون ثنائي الكبريت، جل ( ديرجع الجلوثاثيون المؤكس. )Redox(إرجاع -أكسدة

مؤشر مهم للحالة 2GSSG/2GSHإرجاع للزوج-تشكل حالة أكسدة Glutathion reductase.الـ .الخلوية

III-2-2-2- الفيثاميناتA، C ، E: ترتبط تراكيزها البالزمية بشكل كبير بالتغذية و التغيرات . صنع الفيثامينات من طرف العضويةت ال

تمنح الخاصية . )α, β, δ, σ(التي تضم Tocopherols عائلةE نجمع تحت اسم فيثامين . يةالكبد الذهنية لألغشية الخلوية والبروتينات ض فرصة االندماج مع األحماEالكارهة للماء للفيثامين

;Delorgeril & Salen, 2007) انتشار السالسل الجذرية لليبيداتEيمنع الفيثامين . الليبيدية

Leonhardt, 2000; Nawroth et al., 2000) ،بالمقابل، . يضمن أية حماية مباشرة للبروتينات لكن الة ــذور األكسيجينيــيدات غير المشبعة البروتينات بلعبها دور ملتقطات للجـي الليبـتحم

)Dean & cheeseman, 1987; Dikalov & Harrison, 2007(. ضد رباعي كلوريد الكربون المحرض للعطب الكبدي مضاد أكسدة جد فعال E فيثامين يعد

.(Parola et al., 1992 ; Danni et al., 1991) ات، لكن يدخل في بشكل فعال البروتينات دون حماية الليبيد) حمض األسقوربيك (Cيحمي الفيثامين E( Packer, 2000; Leonhardt, 2000; Nawroth et al., 2000). تجديد الفيثامين

.A (Machlin& Bendich, 1987) الطليعي الرئيسي للفيثامينcarotenoid ـال ، β-caroteلـ ايعتبر 1O2 فهي تعتبر ملتقطات لجذر األكسجين األحادي تعتبر الكاروتينويدات من أهم مضادات األكسدة

.(Young et al.,2004)يتفاعل الفيثامين A )بالتعاون مع الفيثامين ) كاروتينويدEوى على مست ).14شكل( المؤكسد Eثامين يمكن أن يدخل في تجديد الفي. الغشاء الخلوي اللتقاط الجذور الحرة

اإلجهاد: 14شكل التأكسدي ينشط عمل

ةمضادات األكسد.(Packer, 2000 )

27

III-2-2-3- متعددات الفينوالت :Polyphenols من بين هذه المركبات نجد في ،تملك الجزيئات الطبيعية النباتية فوائد متعددة تستعمل في الصناعة

نجد منها متعددات الفينول ،اد األيضية الثانوية التي تستعمل خاصة في العالج المو األولالمقياس( Marouf ; 2000). تمثل متعددات الفينول مجموعة من المواد األيضية الثانوية المتميزة باحتوائها

متغيرة أو غير متغيرة مرتبطة بأنوية حلقية ، على مجموعة أو عدة مجموعات هيدروكسيل( Guignard et al ; 1985 ).

، و األنوية المشتقة من تمدد C1-C6و C3-C6 نجد العديد من الجزيئات، ذات األنوية البسيطة في (Marouf ; 2000 ; Baharun, 2003 ). ، مثل الفالفونويدات C6-C3- C6الفينيل بروبان في

ركيبات كيميائية جد و تملك ت،تشكل متعددات الفينول مجموعة جزيئات متنوعة و منتشرة الوجودو تم توزيعها في مختلف تم تحديد عدة آالف من الجزيئات في العديد من النباتات، حيثمتنوعة

الفالفونويدات و الثنينات ، لكن في األكثر أهمية ، و تتمثلاألقسام بداللة طبيعة هيكلها الكربوني إلخ...األستراتتوجد أيضا مركبات أخرى مثل األحماض الفينولية ، اللجنينات ،

( Guigrard et al ; 1985 ; Richter ; 1993 ) . أثبت العديد من الباحثين أن أخذ مختلف المشروبات الغنية بمتعددات الفينول مثل الشاي و عصير

.(Young et al., 1999 ; Serafini et al., 1998)الفواكه يزيد من القدرة االرجاعية في البالزما

III-2-2-3-1-متعددات الفينول أهم مجموعاتالفونويداتالف :

تعني كلمة فالفونويد مجموعة جد واسعة من المركبات الطبيعية المنتمية إلى عائلة متعددات ، وهي من أهم المركبات الفعالة المتواجدة (Miller, 1996)الفينول، تعتبر أصبغة نباتية شاملة تقريبا

. (Haihong et al., 2004)في النباتات الطبية و الغذائيةعبارة عن أصبغة صفراء جد منتشرة عند النباتات، ) أصفر: كلمة التينية ، فالفون ( الفالفونويدات

ه ـــــولة عن تلوين األزهار و الفواك و هي مسؤقابلة للذوبان في الماء تقريبا دائما،( Cook et Somman ; 1996 ; Harbarne ; 1988 ). بكثرة في أوراق الخضر تنتشر الفالفونويدات

بينت حديثا ، العديد . ، و كذا في القشرة الخارجية للفواكه)الخ ... السبانخ السلطة و الملفوف و( الفالفون و الفالفانون و من األعمال أن بعض الفواكه و الخضر تكون جد غنية بالفالفونول

.( Bronner ; 1995 ; Crozier ; 1997 ; Hollman ; 1996 ) فهي تملك مصدر تخليق حيوي مشترك و ، نوع من الفالفونويدات4000 قد تم تحديد أكثر من و

مكونة من وحدتين ،نتيجة لذلك فهي تملك كلها نفس الهيكل القاعدي بخمسة عشرة ذرة كربون )15شكل ( C3 ـ مرتبطة بواسطة سلسلة ب، )B و C6 )A ـ حلقتين ب،عطريتين

(Bruneton; 1999).

28

يتم تقسيمها ، ممثلة بتغيرات تركيبية كبيرة،ئية ضعيفةيتعتبر الفالفونيدات مركبات ذات أوزان جز، رابطة ثنائية بين ذرة -4–مجموعة مؤكسدة في الموضع ) أو غياب ( إلى عدة أقسام حسب وجود

يتم .-C- من الحلقة غير المتجانسة -3– أو مجموعة هيدروكسيل في الموقع ،3 و 2الكربون ; dihydroflavonol: من المركبات األكثر أهمية نجد . توزيعها بنيويا على خمسة عشرة عائلة

isoflavones ; flavanones ; catechin ; flavonols (Lorgeril & Salen, 2007). يمكن تلخيص .16 الشكلالحيوي في تخليقها

القاعدي للفالفونويداتالهيكل:15 شكل(Cook& Samman, 1996)

.(Bruneton ; 1999)التخليق الحيوي للفالفونويدات :16شكل

29

III-2-2-3-2-يدات كمضادات لألكسدةالفالفونو : ; Peterson et al ., 1998) يمكن للفالفونويدات أن تؤثر بطرق مختلفة على تنظيم اإلجهاد التأكسدي

Dicarlo et al ., 1999 ; Cotelle et al ., 2001 ; Pietta et al ., 2000 ) بااللتقاط المباشر لألنواع و )Fentonمانعة بذلك تفاعل ( (Fer ) مثل الحديد األكسجينية النشطة، بحجز معادن االنتقال

(Halliwell , 1994 ). ولة عن إنتاج الجذور الحرة المسؤبتثبيط نشاط بعض اإلنزيمات

III-2-2-3-2-1-االلتقاط المباشر للجذور الحرة : العناصر الكبرى تم استعمال تداخل الفالفونويدات مع الجذور الحرة في العديد من الدراسات لتحديد

بسبب ضعف قوتها الكامنة لألكسدة و (Fl – OH ) تعتبر الفالفونويدات. للنشاط المضاد لألكسدة: ، قادرة ثارموديناميكيا على اختزال الجذور الحرة المؤكسدة مثل (Jovanovic ; 1994 )اإلرجاع

عن طريق نقل الهيدروجينجذر السوبيرأكسيد ، جذر البيروكسيل ، األلكوسيل و جذر الهيروكسيل (Erben – russ et al ., 1987 ; Javanavic et al ., 1994):

Fl –OH + R° Fl-O° + RH يمكن أن يتفاعل الجذر Alkoxyle.ـ و ال، peroxyle الـ ،superoxyde ـ أيون ال°R الـأين يمثل

).17شكل ( مستقرة quinone مع جذر آخر لتشكيل تركيبة (°Fl – O)الفالفونوكسي

. عن طريق الفالفونويات (°R)إلتقاط الجذور الحرة :17شكل و أنيون quinone ـ إلعطاء الO2 ـزيادة على ذلك ، يمكن للجذر الفالفونوكسي أن يتفاعل مع ال

المؤكسد غير المرغوب للفالفونويدات ، ول عن التأثيرمسؤ، يكون هذا التفاعل superoxyde ـال ليس فقط بالقوة الكامنة نالحظ أن قدرة الفالفونويدات على التفاعل كمضادات لألكسدة ترتبط

. و لكن أيضا بنشاط الجذر الفالفونوكسي°Fl- OH / Fl-O زوجـــللIII-2-2-3-2-2-تثبيط مختلف اإلنزيمات

: جهاد التأكسدي و الممكن تثبيطها بواسطة الفالفونويدات هي اإلنزيمات المتدخلة مباشرة في اإلglutathione S-transferase الـ ، lipooxygenases الـ cyclooxygenases ، xanthine

oxidase و الـ Nitric oxide synthase ( NOS). : Xanthine oxidase الـإنزيم-أ

إلى حمض xanthine و الـ xanthine إلى hypoxanthineيحفز هذا اإلنزيم تحويل الـ O2(يكون هذا التفاعل مرفوق بإنتاج الجذور الحرة . اليوريا

انطالقا من ثنائي ) H2O2 و -° ) 18شكل ( األكسجين

30

.Xanthine oxidase (Cotelle ; 2001) تفاعل إنزيمي محفز بواسطة : 18شكل O2 ( أنيون السوبيرأوكسيد مصدر بيولوجي مهم لجذر Xanthine oxidaseو عليه يعتبر إنزيم

°-.(

على أن مرافقوهوHansaki ، برهن (maladie de la goutte)في دراسة أجريت على مرض القطرة و بالنتيجة يمكن أن تقهقر xanthine oxidaseثر على نشاط إنزيم الـ الفالفونويدات يمكن أن تؤ

في superoxydeوقت تراكيز حمض اليوريا و جذر الـ من هذا المرض باختزال في نفس ال و معاونوه Cosو قد تم تأكيد و إثبات هذه النتائج من طرف (Hansaki , 1994) األنسجة البشرية

, Cos et al)حيث قاموا بقياس نشاط ما يقارب ثالثون نوع فالفونويدي على إنتاج حمض اليوريا

1998 ).

Nitric oxide syntase :( NOS) إنزیم الـ-ب

انطالقا من oxide Nitric (ON)ولة على تخليق الـ مسؤ مجموعة إنزيمات NOSالـ تشكل إنزيمات و مختلف المرافقات O2 في وجود الـ L-Arginineذرة اآلزوت النهائية للحمض اآلميني

في وسط مجموعة ( د ، تكون ذرة حدي(Stryer , 1991 ) (FAD) و (NADPH)اإلنزيمية مثل .مسؤولة عن تفاعل األكسدة و اإلرجاع الضروري لتشكيل أحادي أوكسيد اآلزوت) الهيم

عالجت العديد من المنشورات هذا الموضوع واعتبرت الفالفونويدات كمرجع تثبيطي فعال إلنزيم (NOS) (Harris et al ., 1997 ; chen et al ., 2001 )لى المستوى الجزيئي لكن ال يوجد أي دليل ع

.(Fiorucci , 2006)لتوضيح آلية التثبيط

Lipooxygenases إنزيمات الـ -جـ أكسدة تشكل هذه اإلنزيمات قسم إنزيمات الحديد غير المرتبط بمجموعة الهيم المسؤولة عن

يدخل هكذا مركب . ( Delattre et al ., 2005 )هنية عديمة عديدة التشبعاألحماض الدهني البدائي و عالت الخلوية و ذلك حسب الحمض الدهيدروبيروكسيد الناتج في العديد من التفاال

جزيئات ضرورية في ،Leucotriene مجموعة الـ ، مثال المعتبر، Lipooxygenaseإنزيم الـ ر غي. Lipoxygenase -5: بتدخل إنزيم Linoleate من تتشكل انطالقا ،تفاعالت االستجابة االلتهابية

جد مدروسة و آلية أكسدة األحماض الذهنية معروف نسبيا، Lipooxygenaseأن الحلقة المحفزة للـ و يبقى تثبيطها بواسطة الفالفونويدات هدف الدراسات الحديثة

( Chi et al ., 2001; Sadik et al .,2003).

31

III-2-2-3-2-3-التداخل مع الشوارد المعدنية : أساسية في بعض الوظائف الفيزيولوجية ، يمكن أن (+Cu) و النحاس (+Fe2)تكون أيونات الحديد

إما كمرافقات إنزيمية مختلفة لألنظمة الدفاعية المضادة ،تكون ، إما من مكونات البروتينات الدموية superoxyde بالنسبة إلنزيم Zn والـ Cu والـ Catalase الـ بالنسبة إلنزيم Fe ،مثال( لألكسدة

dismutase ( يمكن أن تكون هذه األيونات مصدرا إلنتاج جذور الهيدروكسيل (OH°) األكثر fenton عن طريق تفاعل H2O2 مثل الـقل نشاطانشاطا انطالقا من أنواع أ

. ( Stryer , 1992 ; Dlatrez et al ., 2005 )

، ( Morris ,1995 ; Brown ,1998 ) جيدة لهذه األيونات المعدنيةاتتعتبر الفالفونويدات كملتقطتعرف الفالفونويدات بقدرتها على تشكيل معقدات مستقرة مع األيونات المعدنية فهي إذن قادرة

و بهذا تمنع إنتاج الجذور الحرةfentonعلى تثبيط تفاعل (Ferrali et al ., 1997 ; Engelmann al ., 2005 ).

و مرافقوه أن المواقع األساسية اللتقاط األيونات المعدنية Van Ackerبينت الدراسات التي قام بها

. – B – على الحلقة catechol نواة الـ )i(: هي (ii) 3 المجموعتين- hydroxyl 4 و-OXO على الحلقة –C – .

(iii) 4 المجموعتين-OXO 5 و-hydroxyl بين الحلقتين A و C.

، أن الفالفونيدات ) ,. Moridani et al ., 2003 ; Di carlo et al 1999( فرضت دراسات حديثة ، معتبرة بشكلبخضوعها لتفاعالت األكسدة و اإلرجاع في وجود المعادن تملك نشاط مضاد لألكسد

أكثر نشاطا من الشكل االبتدائي ، -Semiquinone -يكون هكذا الشكل الجذري المتحصل عليه ، يتفاعل شكلين من ، disproportionationل آخر، حيث يتعلق األمر بتفاعل الـ يمكن أن يتدخل تفاع

- - Semiquinone شكل ( أحدهما مؤكسد : مع بعض لتشكيل نوعين متعادلين quinone ( و الشكل .آخر يكون عموما الشكل االبتدائي

الفالفونويدات و مواقعها :19شكل المقترحة اللتقاط األيونات المعدنية

(Men+) حسب) Van acker ; 1996( .

32

الفالفونويدات على التقاط ص المجمع العلمي إلى أن المركبات األكثر نشاطا المتعلقة بقدرةو قد خل :الجذور الحرة هي التي تحتوي على الخصائص الثالثة التالية

التي تمنح ) catecholمجموعة ( B على الحلقة ortho-dihydroxyphenolsالصيغة .االستقرار للجذر الفالفونوكسي و تشارك في حركية اإللكترونات

.OXO-4ظيفة المتزاوجة مع الوC3-C2الرابطة الثنائية

. C3-C2 باالرتباط مع الرابطة الثنائية OH-3وجود المجموعة

لكل هذه الخصائص و نتيجة لذلك، يعد المركب quercetin الـ جزيئةو كمثال نموذجي تخضع و قد اقترحت ( Marfak ,2003 ;Milane ,2004)) 20شكل (األكثر نشاطا في عائلة الفالفونويدات

عبارة عن مكمل غذائي مهم quercetin الـاألمريكية خالل هذه السنوات أنالواليات المتحدة ول عن مقاومة المعالجة ا أنه قادر على تثبيط الجين المسؤيحتوي على العديد من الخصائص، منه

. (Adenot, 2000)الكيميائية المضادة للسرطان

III-2-2-3-2-4-نيدات ما فوق أكسدة الليبيدات و الفالفو:

تعد الليبيدات المكونات األساسية لألغشية الخلوية و البروتينات الليبيدية، يتدخل ما فوق أكسدتها ، ما فوق أكسدة ( Delattse et al ., 2005)الليبيدية في بعض األمراض المستلزمة لإلجهاد التأكسدي

تشكيل، مركب الهيدروبيروكسيد الليبيدات عبارة عن آلية هدم متسلسلة لألحماض الذهنية مؤدية إلى . ول خاصة عن انخفاض ميوعة الغشاء الخلويالمسؤغير المستقر،

يمكن للفالفونويدات أن تتدخل في مستويات مختلفة من مراحل ما فوق األكسدة الليبيدية

.(Leake,1998) ر فهي قادرة على التقاط المركبات الجذرية مباشرة، و بهذا تكسر انتشاالتفاعل الجذري المتسلسل، تكون الفالفونويدات المتواجدة على سطح األغشية قادرة على

و بهذا تثبط الفالفونويدات Jessupe et al ., 1990)( و حماية األغشية الخلوية Eتجديد الفيتامين

ط المضادالعناصر األساسية للنشا : 20شكل . (Rice-Evans, 1996)لألكسدة للفالفونويدات

33

ويؤدي التفاعل بين E .( Terao& Piskula, 1999)فوق أكسدة الليبيدات بالتعاون مع الفيثامينإلى زيادة الفعل المضاد glutathion peroxidase الفالفونويدات و الجزيئات الداخل خلوية مثل

كما تحمي الفالفونويدات النباتية من األضرار التأكسدية الناتجة (Nagata et al., 1998). لألكسدة . (Terao, 1999)في الدم

34

:خطة البحث :خالل دراستنا هذه، عدة نقاط أساسية تم انجازها

يتمثل في عملية البحث العميقة في عالم النباتات و التي خرجنا منها بتسليط الضوء على ؛أولهاو ) Centaurea incana (CI)أم البواقي و المتمثلة في نبتة من مدينة ( نبتتين إحداهما من الشرق

.) Matricaria pubescens (MP) من صحرائنا الشاسعة( األخرى

على المستخلصات in vitro القيام بعملية االستخالص مع إجراء بعض االختبارات ؛ثانيها، مع β-Carotene الـ وDPPHتبارالـ و المتمثلة في اخةالميثانولية لمعرفة القدرة المضادة لألكسد

تقدير عديدات الفينول الكلية و الفالفونويدات، إذ تعتبر خطوة مهمة سمحت لنا بمواصلة العمل، و قد تم انجاز هذا الجزء من العمل على مستوى مخابر البيولوجيا بجامعة فرحات عباس والية

.سطيف

و ذلك من خالل مزاوجة wistar albinoن ساللة م) الجرذان البيضاء( تربية الحيوانات ؛ثالثها .الذكور مع اإلناث و الحصول على العدد الكافي من الذكور لغرض العمل التجريبي

القيام بدراسة أولية على الفئران البيضاء، حيث سمحت لنا باختيار الجرعة المناسبة لكال ؛رابعها

.المستخلصين

/ مغ500 بجرعة CI(تخلصين النباتيين على الجرذان البيضاء دراسة التأثير الواقي للمس؛خامسها MPكغ و/ مغ100 بجرعة CI( يوم و على الفئران 30لمدة ) كغ/ مغ800 بجرعة MPكغ و

) كغ / مل 3بجرعة (CCL4لمدة أسبوع و المعاملة بالمادة السامة ) كغ/ مغ200بجرعة .المحرضة للسمية الكبدية

: للمستخلصين النباتيين عن طريق ر الواقي المحتمل تقدير التأثي؛سادسها Transaminasesالفحص الوظيفي للكبد بمعايرة اإلنزيمات المصلية لكل من

(TGO & TGP) ، Alkaline phosphatase (ALP)و الكوليسثيرول ،(Cholesterol) . . و الجليسريدات الثالثيةقياس مستوى البروتينات المصلية في كل من الكبد Catalaseالـ و إنزيم MDAالـإلجهاد ألتأكسدي مثل تقدير مؤشرات ا

. القلبوالكلى و .و قد تم انجاز هذا الجزء من العمل على مستوى مخابر البيولوجيا بجامعة منتوري والية قسنطينة

36

IV-المواد و الطرق IV -1-المواد IV -1-1-المادة النباتية IV -1-1-1-جفيفهاجمع المادة النباتية وت

Centaurea incana (CI) الـ اتيبة لمعظم النباتات الزهرية فان نبكما هو الحال بالنس

يزهران في أواخر فصل الربيع، وعليه فقد تم تجميع هاتين Matricaria pubescens (MP) الـوحيث تم ألولى بلك من مدينة أم البواقي بالنسبة للنبتة ا و ذ2008النبتتين في شهر ماي من سنة

و قد )أ، ب و جـ:22شكل( الثانية من الصحراء النبتةو) و ب أ: 21شكل(اقتالعها من جذورها بعد ذلك أجريت عملية التجفيف لهذه األعضاء . اقتصر اهتمامنا على األوراق و األزهار فقط

.بوضعها في أماكن خاصة مهواة و بعيدا عن الرطوبة

:تصنيف النظامي للنباتاتضمن ال Centaurea incana وضع نبتة

)ب( )أ( تمثل األزهار) ب(تمثل الجذور و الصورة ) أ(الصورة : Centaurea incana نبتة : 21شكل

Angiospermes Dicotyledones Asterales Compositea Tubiflores Cynares Centaurea incana

الفرع الصنف الرتبة

العائلة المرآبة تحت العائلة

"الفصيلة" القبيلة الجنس النوع

37

:ضمن التصنيف النظامي للنباتات Matricaria pubescens بتةوضع ن

)ب( )أ(

)جـ(

) ب(الصورة ي التربة الصحراوية، النبتة فتمثل وضع ) أ(الصورة : Matricaria pubescens نبتة : 22شكل .تمثل النبتة في حالة شبه جافة) جـ(تمثل األزهار و الصورة

الصنف الرتبة

لعائلة المرآبةا الجنس النوع

Monocotyledones

Asterales

Compositea

Matricaria

pubescens

38

IV -1-1-2-صعملية االستخال: ا ثم نقعت بعد ذلك مبعد طحن األوراق و األزهار طحنا جيدا لكل من النبتتين، تم وزنه

بوع مع إغالقه بإحكام لمنع ترك الخليط لمدة أس. النقي)MeOH( مل من الميثانول 80غ في 100التبخر مع الرج، تم ترشيح المحلول بالقطن ثم ورق الترشيح و أخيرا تم استعمال المضخة للحصول على مرشح كحولي خالي من الشوائب، حيث استقبل في دورق، و الرشاحة أعيدت من

عدها عت بجم. وهذا ثالث مرات مع تجديد المذيب في كل مرة مل ميثانول80جديد في م، ثم وضع °45زت جيدا باستعمال المبخرة في درجة حرارة المستخلصات الكحولية و رك

م بغرض تجفيفه كليا إلى أن تم الحصول على °37المستخلص في الحاضنة في درجة حرارة Matricaria و مستخلص شبه جاف بالنسبة Centaurea incana بالنسبة %100مستخلص جاف

pubescens.

صولالمح غ100 لكل

المردود بالنسبة (%)المئوية

Centaurea incana 1515 غ%

Matricaria pubescens 1616 غ%

جمع المادة النباتية

عملية التجفيف

عملية الطحن

من غ 100وزن المادة النباتية المطحونة

النقع في الميثانول النقي لمدة أسبوع

الترشيح على القطن، ورق

الترشيح و المضخة

التبخير في م45°

الحاضنة في م37°

المستخلص الميثانولي الخام

و الجاف

.بروثوكول االستخالص الميثانولي:23شكل

وتم حساب المحصول المردود بالنسبة المئوية

غ لكل من 100 عنالناتج جافتين و النبتتين ال )4جدول( المطحونتين

غ من الوزن الجاف100لكل المردود بالنسبة المئوية المحصول و: 4 جدول

39

IV -1-2-اختيار الجرعة: ألن النبتتين تحت الدراسة ،على كال النبتتين سة مجراة أية درا ثمةعلما أنه ال توجد

المعطاة للحيوانات و قد ة الجرعتحديد فقد قمنا بإجراء دراسة أولية بغرض (Endemic) أصليتين غ، حيث تم إعطاء 30 -25أجريت هذه الدراسة على الفئران البيضاء ذات أوزان تتراوح بين

كغ، فلم يالحظ أيا من أعراض السمية أو الوفاة من كال المستخلصين على / مغ6000جرعة تفوق كثر و عليه تم اختيار الجرعة بالمطابقة مع تصنيف مستوى السمية حسب ساعة و أ72مدار

Gleason إلى أنه إذا كانت الجرعة القاتلة الذي خلصDL50 عند الفئران البيضاء محصورة بينو على هذا األساس تم اختيار . كغ فان المستخلص يكون ذو سمية ضعيفة/ مغ15000 و 5000

كغ بالنسبة / مغ800 و جرعة Centaurea incanaتخلص كغ بالنسبة لمس/ مغ500جرعة .Matricaria pubescensلمستخلص

IV -1-3-تربية الحيوانات :

IV -1-4-معاملة الحيوانات: على سمية رباعي كلوريد )MP وCI (من أجل دراسة التأثير الواقي للمستخلصين النباتيين

:وعين من الحيوانات فكان العمل كمايليأجريت الدراسة على ن ،الكربون : على الجرذان البيضاءالدراسة المجراة

جرذان في 7 و5قسمت الحيوانات إلى ستة مجاميع متوافقة من ناحية الوزن و يتراوح عددها بين :كل مجموعة و قد أجريت معاملتها كاآلتي

تتراوح أوزانها (wistar albino rats)استخدمت في هذه الدراسة التجريبية ذكور بالغة للجرذان البيضاء و قد تم .غ30-25وح أوزانها بين تترا(albino mice) للفئران البيضاء ذكور بالغةو ،غ130 -110بين

الذي في كل قفص مع وفرة الغذاء حيواناتتربيتها في أقفاص من البالستيك و الحديد بمعدل سبعة ، كما قدمت للحيوانات )أم البواقي( بعين مليلة O.N.A.Bتحصلنا عليه من مصنع غذاء الحيونات

رة المكان المخصص لتربية الحيوانات مثلى و قد كانت درجة حرا. تحتوي على ماء الحنفيةترضاعا . م°25 في حدود

حقنت جرذان هذه المجموعة بزيت ): جرذان5(المجموعة األولى . ساعة قبل قتلها في صفاق البطن و اعتبرت مجموعة الشاهد24الزيتون

حقنت جرذان هذه المجموعة بالمادة ): جرذان5( المجموعة الثانية

/ مل3تساوي مزجه في زيت الزيتون بجرعة واحدة بعد)CCL4(السامة ساعة قبل قتلها و كان الحقن في صفاق V :V( 24/1:1(كغ بنسبة

.(Wu et al., 2006)البطن40

o البيضاءن الفئرا على الدراسة المجراة: ثمانية عددها كان مجاميع متوافقة من ناحية الوزن و خمسةقسمت الحيوانات إلى

: كل مجموعة و قد أجريت معاملتها كاآلتيفئران في

أعطيت جرذان هذه المجموعة ): جرذان5(المجموعة الثالثة 500بجرعة Centaurea incana ــة لنبتـالمستخلص الميثانولي

. يوم30وزن الجرذ عن طريق الفم لمدة / ل م1كغ بحجم / مغ

أعطيت جرذان هذه المجموعة ):جرذان7(المجموعة الرابعة بجرعة Centaurea incana ة ـــلنبتـالمستخلص الميثانولي

يوم 30وزن الجرذ عن طريق الفم لمدة / مل1كغ بحجم / مغ500البطن ساعة قبل قتلها تم حقنها في صفاق 24 و31في اليوم و

3بعد مزجه بزيت الزيتون بجرعة واحدة ) CCL4(بالمادة السامة .كغ/ مل

أعطيت جرذان هذه المجموعة ): جرذان5( المجموعة الخامسة

800 بجرعة Matricaria pubescensلنبتة المستخلص الميثانولي . يوم30وزن الجرذ عن طريق الفم لمدة / مل1كغ بحجم / مغ

أعطيت جرذان هذه المجموعة ): جرذان7 ( المجموعة السادسة

800 بجرعة Matricaria pubescensلنبتة المستخلص الميثانولي يوم و في 30وزن الجرذ عن طريق الفم لمدة / مل1كغ بحجم / مغ

ساعة قبل قتلها تم حقنها في صفاق البطن بالمادة 24 و31اليوم .كغ/ مل3واحدة بعد مزجه بزيت الزيتون بجرعة )CCL4(السامة

ساعة قبل 24 هذه المجموعة بزيت الزيتون فئران حقنت:المجموعة األولى .قتلها في صفاق البطن و اعتبرت مجموعة الشاهد

بعد )CCL4( هذه المجموعة بالمادة السامة فئرانحقنت :المجموعة الثانية

)V :V/1:1(كغ بنسبة / مل3تساوي مزجه في زيت الزيتون بجرعة واحدة . ساعة قبل قتلها و كان الحقن في صفاق البطن24

41

:مالحظة وCentaurea incana تم إذابة كل من المستخلصين الميثانوليين لنبتتي

Matricaria pubescens ل / غ9(في المحلول الفيزيولوجي.( تم إعطاء تحضيرات المستخلصات عن طريق الفم باستخدام أنبوبة معدية )Gastric tube(بالفئرانأنبوبة معدية خاصة بالجرذان و كذا خاصة .

خذ أوزان الحيوانات قبل بدء المعامالت و بعدها، و كذلك روقبت يوميا وذلك قصد تسجيل أو قد تم عراض اإلكلينيكية أو حاالت الوفاة، كما قدرت أوزان الحيوانات أسبوعيا حتى نهاية أيا من األ .المعاملة

هذه المجموعة المستخلص فئران أعطيت :المجموعة الثالثة

كغ / مغ100بجرعة Centaurea incana لنبتـة الميثانولي و في سبعة أياموزن الجرذ عن طريق الفم لمدة / مل1بحجم في صفاق البطن ساعة قبل قتلها تم حقنها24 والثامناليوم

3بعد مزجه بزيت الزيتون بجرعة واحدة ) CCL4(بالمادة السامة .كغ/ مل

هذه المجموعة المستخلص فئران أعطيت :المجموعة الرابعة

كغ / غ م200 بجرعة Matricaria pubescensلنبتة الميثانولي و في سبعة أياموزن الجرذ عن طريق الفم لمدة / مل1بحجم ساعة قبل قتلها تم حقنها في صفاق البطن 24 ونالثاماليوم

3 بعد مزجه بزيت الزيتون بجرعة واحدة )CCL4(بالمادة السامة .كغ/ مل

جزيئة هذه المجموعةفئران أعطيت :المجموعة الخامسة

وزن الجرذ عن / مل1كغ بحجم / مغ0.33 بجرعة الكرستين و في اليوم أيام سبعة لمدة(Kebieche et al., 2008)طريق الفم

ساعة قبل قتلها تم حقنها في صفاق البطن بالمادة 24 والثامن/ مل3 بعد مزجه بزيت الزيتون بجرعة واحدة )CCL4(السامة

. و قد أخذت كمجموعة مرجعيةكغ

42

IV -1-5-أخذ الدم:

IV -1-6-قتل الحيوانات و أخذ األعضاء:

بعد استنزاف الدم من الجرذان البيضاء المعاملة و غير المعاملة، قتلت الحيوانات و بالتالي تمكن من كل جرذ فرادى ) و قلب كلى وكبد ( ءراء تشريح كل جرد على حدة حيث عزلت األعضاإلج

أين وضعت ) م°4- ( المبرد (Nacl 0.9%) بسرعة و قد تم غسلها جيدا بالمحلول الفيزيولوجي بين ورقتي ترشيح الدمصاص المحلول الفيزيولوجي و قد تم وزنها على حدة بغرض ءاألعضا

و الوزن النسبي لكل عضو و من ثم قطعت إلى قطع صغيرة حيث أخذت المطلق حساب الوزن لغرض الدراسة الهيسثوباثولوجية في حين أخذت قطعة %10قطعة بسرعة ووضعت في الفورمول

Kcl و لتحضير هذه األخيرة قمنا بإضافة،أخرى ووزنت بهدف تحضير القطفات السيثوزولية و بعد عملية التجانس باستعمال )Kcl( مل 9في ) وعض( غ 1 للقطعة الموزونة بنسبة )1.17%(

تم الحصول على خليط متجانس أين قسم إلى جزئين، ) Homogenizer(الخالط الكهربائي المتجانس و MDA) (malondialdehydeاإلنزيمية مثلغير م لغرض قياس المؤشرات °20-جزء وضع في

دقائق في درجة حرارة 10 دورة لمدة 4000 ـالجزء اآلخر تمت له عملية فوق الطرد المركزي ب إلزالة البقايا الخلوية و أخذت القطفة الطافية 6K15 جهاز الطرد المركزي لم باستعما4°-

. Catalase الـأنزيمالستعمالها كمصدر لإلنزيمات السيثوزولية بغرض قياس

و . ساعة من المعاملة األخيرة لكل جرذ عن طريق أنبوبة شعرية على مستوى العين24تم أخذ الدم بعد مضاد ( في أنابيب تحتوي على الهيبارين ) مل4.5 إلى 3من ( م الحصول على حجم كافي من الدم قد ت

تم وضع المصل . دقيقة15 دورة لمدة 6000 ـ، أين أجريت له عملية الطرد المركزي ب)للتخثر الدمويقد تم غسله ثالث أما الراسب ف. لغرض المعايرة اإلنزيمية و البيوكيميائيةeppendorfفي أنابيب من نوع

و ذلك )Seymen et al., 1997(حسب طريقة ) ل / غNacl9 (مرات بواسطة محلول فيزيولوجي معقم 4، حيث تم تخفيف العينة Catalase الـلتحضير حالالت الكريات الدموية الحمراء بغرض قياس إنزيم .حين استعمالهاإلى ) م°20-(مرات بواسطة الماء المقطر و تم تخزينها تحت درجة حرارة

43

IV -1-7-المواد الكيميائية : :يما يلتعملة في بحثنا هذا فييائية المسيمكن حصر المواد الكيم

، العامل الكيميائي Sigma من شركةDPPH (diphenyl-1-picrylhydrazyl-'2,2)جذر الـ كاروتين -β، حمض اللينولييك، الـ)BHT) butylated hydroxytolueneالمضاد لألكسدة

Tween 40. و

وهيSigma ة استعملت أيضا في هذه الدراسة ثالث مركبات فينولية نقية، تم جلبها من شركو التي استعملت ) Gallic acid(و حمض الغاليك ) Quercetine(، الكرستين )Rutin(الروتين

.كجزيئات مرجعية لما لها من فاعلية قوية و ذلك (mmol/L 19)لتر/ ميليمول19 الذي استعمل بتركيز (H2O2)بيروكسيد الهيدروجين

.(Catalase Activity)لتقدير نشاط انزيم الكثالز Methanol :

Matricaria pubescens و Centaurea incana استعمل لعملية االستخالص لكل من نبتتي n- Butanol :

. الكلية في مختلف األنسجة TBARsلـاستعمل في تقدير كميات

Potassium dihydrogen phosphate : . Phosphate buffersتم استعماله في تحضير محاليل دوارئ متعددة

Sodium Chloride (NaCl) :

لتر و استعمل في عملية غسل مختلف األنسجة و كذا في / غ9حضر كلوريد الصوديوم بتركيز .Erythrocyte lysatesعملية انحالل الكريات الحمراء لتحضير حالالت الكريات الحمراء

Thiobarbituric acid (TBA) :

من الماء (ml 100) مل 100 في Thiobarbituric من حمض(mg 670 ) مغ670تمت إذابة إلى غاية الحصول على محلول متجانس Magnetic stirrerالمقطر باستخدام قطعة مغناطيسية

. في مختلف األنسجةTBARs لغرض استعماله في تقدير الكمية الكلية للـ Trichloroacetic acid ( TCA) :

TBARs في تقدير الكمية الكلية للـ بغرض إستعماله TCA من الـ %20تم تحضير محلول .في مختلف األنسجة

Carbone tetrachloride (CCl4) : كغ لتحريض السمية الكبدية عند حيوانات /مل3تم استعمال رباعي كلوريد الكربون بجرعة

.التجارب

44

IV -2-الطرق: :قسمت دراستنا إلى جزئين

: الجزء األولIV -2-1- الدراسة المخبرية in vitro المستخلصين الميثانوليين على)CIو MP(: IV -2-1 -1-ةالمضادة لألكسد المستخلصين الميثانوليين دراسة نشاطية:

للمستخلصين الميثانوليين تم إجراء إختبارين مهمين؛ تمثل األول المضادة لألكسدة لتقدير النشاطية باستعمال جذر و الذي سمح بقياس قدرة العينات على إزاحة الجذور الحرة DPPHاختبار الـ في ذه المستخلصات أما الثاني فتمثل في معرفة قدرة ه ، DPPH (diphenyl-1-picrylhydrazyl-'2,2)الـ

ولييكـينحمض ال/ ن كار وتي-β الـعلى تثبيط نواتج أكسدة الليبيدات عن طريق اختبار.(β- carotene/ linoleic acid)

IV -2-1-1-1 الفعل االسر دراسة)Scavenger effect ( إزاحة جذر الـعينات على للDPPH:

:المبدأ أكسد للمستخلصين الميثانوليين لكل من الـ لغرض تقدير الفعل اآلسر للجزيئات المضادة للت

CIوالـ MP تم استعمال اختبار الـ ،DPPH )Diphenyl-2-picryl-hydrazyl.stable free

radical( للجزيئات المضادة يعتبر من أكثر الطرق استعماال في تقدير التأثير اإلزاحي الذيحيث تتناسب قدرة ، (Burits & Bucar, 2000., Cuendet et al., 1997)للتأكســـد

تكون الجزيئات التي تملك هذه .أسر الجذور الحرة بداللة القدرة على إرجاع هذا الجذرذو اللون ( DPPH (diphenyl-1-picrylhydrazyl-'2,2)الخاصية قادرة على إرجاع جذر الـ

). ذو اللون األصفر( )2,2'-diphenyl-1-picrylhydrazine (DPPH-Hإلى ) البنفسجي المستقر ).nm( نانومتر517يترجم هذا التغير في اللون بانخفاض االمتصاصية الضوئية في

+ RH

+ R°

لون بنفسجي2,2'-diphenyl-1-picrylhydrazyl

لون أصفر2,2'-diphenyl-1-picrylhydrazine

45

:الطريقةحيث ) nm( نانومتر517 باختصار يحدث االختبار بقياس انخفاض االمتصاصية الضوئية في

ذات MP وCIكل من من المستخلصين الميثانوليين ل) 50µl( ميكروليتر 50تم إضافة ، يكرر % 0.004 ذو التركيزDPPH من المحلول الميثانولي5ml) ( مل5التراكيز المختلفة إلى

دقيقة مع مراعاة الظالم تم تسجيل الكثافة 30كل تركيز ثالث مرات و بعد فترة حضن لمدة عليها لكل و قد تم التعبير عن النتائج المتحصل . نانوميتر517الضوئية لكل تركيز في ثم المقارنة مع نظيرتها بالنسبة للكرستين و الروتين Reagent blankمستخلص بالمغايرة مع

.و حمض الغاليك أين أخذت كمضادات أكسدة مرجعية بواسطة المستخلصين الميثانوليين DPPH الـلجذر )% I(و قد تم حساب نسبة التثبيط المئوية

:كما يلي

:حيث أنAD :افة الضوئية الكث)OD( في وجود المثبط دقيقة30للتجربة بعد . AN : الكثافة الضوئية)OD( في غياب المثبط دقيقة30 للشاهد بعد.

لكل مستخلص DPPH (IC50) من نشاط الـ %50 فيما بعد تم حساب التركيز المثبط لـ مل و / عبر عنها بالميليغرامي. انطالقا من المعادلة التي تحدد نسبة التثبيط بداللة تركيز المثبط .تم مقارنتها مع مثيلتها للكرستين و الروتين و حمض الغاليك

IV -2-1-1-2- الـ اختبار β-حمض اللينولييك/ ن كار وتي : β- carotene/ linoleic

acid :المبدأ

قد لذرة تعتمد هذه الطريقة على زوال اللون عبر الزمن، إذ أنه خالل عملية األكسدة يحدث فالهيدروجين من مجموعة الميثيالن النشطة لحمض اللينولييك الواقعة في ذرة الكربون رقم

11( Frankel, 1998) . تقوم جذور الهيدروبيروكسيد(hydroperoxide radical ) المتشكلة بمهاجمة البرتقالي الستعادة استقرارها مؤدية بذلك إلى فقدان اللون نوتي كار-βالروابط المزدوجة للـ

إن وجود المركبات . المميز للكاروتينويدات بصفة عامة، حيث يترجم ذلك بخفض امتصاصهاالفينولية كعوامل مضادة لألكسدة يسمح بالتقليل من امتداد عملية زوال اللون عن طريق تعديل

. (Dapkevicius et al., 1998)جذور البيروكسيد و الجذور المتشكلة من هذا النظام

I % = (AN – AD) / AN * 100

46

:الطريقة :حمض االينولييك كما يلي/ ن كار وتي-β الـتم تحضير محلول

ميكروليتر 25 إضافة ت مل من الكلوروفورم، و تم1 في ن كار وتي- β الـ مغ من0.5 إذابة تتمم °40تم تبخير الكلوروفورم في . مع الرجTween 40 مغ من 200 و من حمض اللينولييك

) دقيقة30/ مل100( مل ماء مقطر مشبع باالكسجين 100 إضافة تتعمال جهاز التبخير و تمباس مل من الخليط التفاعلي في أنابيب االختبار، و2.5ضع وفي األخير. إلى الخليط مع الرج الجيد

مل، تجرى نفس العملية مع/ مغ2ر من العينات المحضرة بتركيز ميكروليت350 أخيرا تمت إضافةكشاهد موجب، و مع الماء المقطر و الميثانول كشواهد سالبة، حيث يكرر اإلختبار مع كل BHT لـا

تحضن األنابيب في درجة حرارة المخبر في الظالم، لنقيس امتصاصية المحاليل في طول . عينة تقارن النشاطية. ساعة48 و24 ،6، 4، بعد ساعة، ثم بعد ساعتين و0 نانومتر في الزمن 490موجة

و يتم حساب نشاطية المستخلصات . و الشاهد السالبBHT الـالمضادة لألكسدة للعينات مع : حسب المعادلة التالية (%RAA)المضادة لألكسدة النسبية

: أنحيث .للعينة )O D(الكثافة الضوئية : Aالعينة

A BHT: الكثافة الضوئية)OD(للـ BHT.

RAA% = A العينة / A BHT * 100

RH

ROO° جذور الهيدروبيروآسيد

RH جزیئة مضادة لألآسدة

اللون زوال

ROOH + O2 حمض اللينولييك

47

IV -2-1-2- ات الموجودة في المستخلصين الميثانوليينديمعايرة الفالفونو)CIو MP:( :المبدأ

تعتمد معايرة الفالفونويدات على الخصائص المخلبية للجزيئات الفينولية ضد كلورور األلومينيوم )AlCl3( يتم تحديد معدل الفالفونويدات . المذاب في المحلول الميثانولى النقي%2 ذو التركيز

يعتمد مبدأ . م1996 و رفقائه عام Boharunكما وضح من طرف AlCl3بطريقة التفاعل مع التفاعل على تشكل معقد بين كلورور األلومينيوم و ذرات األوكسجين الموجودة على ذرات

. للفالفونويدات5 و4الكربون

:الطريقة مل من التخفيف المختار للمستخلصين 1 إلى %2 بتركيز AlCl3 مل من محلول 1باختصار نضيف

دقائق و بعد فترة التفاعل 10لميثانوليين ثم ترج األنابيب و تحضن في درجة حرارة المخبر لمدة ا- 1(نأخذ كل من الكرستين و الروتين . نانومتر430 طول موجة عندنقيس اإلمتصاصية الضوئية

بعدد ، و يتم التعبير عن النتائج )24الشكل(لتحديد منحنى العيارية الموضح في ) مل/ ميكروغ 40 . الميليغرامات المكافئة للكرستين و الروتين لكل غرام من وزن المستخلص الجاف الخاص بكل نبتة

IV -2-1-3- المستخلصين الميثانولييندات الفينول الموجودة في يعدمعايرة)CIو MP :(

:المبدأاستعمال طريقة تعتمد هذه الطريقة على تقدير عديدات الفينول الكلية في المستخلصين النباتيين ب

باستعمال حمض الغاليك كمرجع، وصفت هذه الطريقة في البداية (Prussian bleu)أزرق بروسي باستعمال م1992 عام Grahamم و تم تعديلها من طرف 1977 عام Butler و Priceمن طرف

Fecl3 كعامل مؤكسد بدال من FeNH4(So4)2 استقرارا لونيا عاليا و تعطي هذه التعديالت.

: الطريقة

MP وCIالمستخلص الميثانولي الخام لكل من (مل من العينة 0.1 )مذاب في الميثانول النقي

+ مل ماء مقطر مع الرج 3

+ ) موالريةK3Fe(CN)6 ) 0.016 مل من 1

ثانية60بعد

48

، )25 الشكل( لتحديد منحنى العيارية الموضح في) مل/ ميكروغ175-25(نستعمل حمض الغاليك و يتم التعبير عن النتائج بعدد الملغرامات الموافقة لحمض الغاليك لكل غ من وزن المستخلص

.الجاف

و المذاب في 0.002ذو الموالرية Fecl3 مل من 1نضيف

) نظاميHcl) 0.1حمض الكلور

ترج األنابيب و تحضن في درجة دقيقة15حرارة المخبر لمدة

ل التثبيت الذي يحتوي على مل من محلو5نضيف

%85 و حمض الفوسفوريك %1صمغ عربي )ح:ح:ح3:1:1(و الماء المقطر بالنسب التالية مع الرج

نانومتر في جهاز 700تقاس امتصاصية المحلول في طول موجة التحليل الطيفي بالمغايرة مع الماء المقطر

49

. منحنى العيارية للكرستين و الرتين لتقدير الفالفونويدات في المستخلصين الميثانوليين:24الشكل (SD). اإلنحراف المعياري ± قياسات 3كل نقطة من المنحنى تمثل الوسيط الحسابي لـ

.نباتيين لحمض الغاليك لتقدير عديدات الفينول الكلية في المستخلصين ال منحنى العيارية :25الشكل (SD). اإلنحراف المعياري ± قياسات 3كل نقطة من المنحنى تمثل الوسيط الحسابي لـ

y = 0,0052x + 0,0445R2 = 0,9982

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

0 50 100 150 200 250

ترآيز حمض الغاليك بالميكرو غ / مل

يةوئضة الثافالك

y = 0,0405x + 0,0069R2 = 0,9989

y = 0,0177x + 0,0275R2 = 0,997

0

0,20,4

0,6

0,81

1,2

1,41,6

1,8

0 5 10 15 20 25 30 35 40 45

لترآيز بالميكرو غ/ مل

يةوئض الفةلكثاا

Quercetin

Rutin

50

:الجزء الثانيIV -2-2- التجريبيةدراسةالأجريت in vivo الجرذان و الفئران البيضاء( على الحيوانات :( IV -2-2-1-المستخلصين الميثانوليين تأثير كل من )CIو MP ( الوظيفية للكبد وتم على الحالة

):كبد، كلى وقلب( ذلك على مستوى المصل و على حالة مضادات األكسدة في األنسجة IV -2-2-1-1- المستخلصين الميثانوليين تأثير كل من )CIو MP(ى الحالة الوظيفية للكبد عل : )الوظيفي للكبدالفحص (

IV -2-2-1-1-1 - معايرة إنزيمات الثرونزاميناز : (TGO & TGP)Transaminases .فحص الكمال البنيوي و القدرة الوظيفية للخاليا الكبدية: الهدف AsTـلل من حمض األسبارتيك بالنسبة (NH2)تحفز هذه األنزيمات نقل مجموعة األمين : المبدأ

(ASAT/TGO) الـ إلىألميني األالنين بالنسبة ا و الحمض AlT (ALAT/TGP) باتجاه يتم معايرة هذين .)26(الشكل وثاريك، التفاعالت موضحة في سيثوجل-αالـ حمــــض

فوق البنفسجي بربط يويتم غالبا عن طريق جهاز المطياف الضوئ. األنزيمين على مستوى المصل سيثوجلوثاريك المتشكل - α الـتفاعل نزع مجموعة األمين مع تفاعل نزع الهدروجين من حمض

.خالل هذا التفاعل

سيثوجلوثاريك في -α الـوكزالوأسيتيك من حمض األسبارتيك و حمضبعد تشكل حمض األ desydrogenase الـ يتم اختزاله إلى حمض الماليك في وجود إنزيمAsT الـوجود إنزيم

malate ، يتم خالل التفاعل تحويلNADH2إلى NAD. الـ يترجم نقصان NADH2 بانخفاض إنزيم سرعة هذا االنخفاض كقياس لنشاطأخذت. nm 340تدريجي لالمتصاصية عند طول موجة

نقوم بقياس انخفاض حمض البيروفيك انطالقا من األالنين الذي AsTفي حالة معايرة . AsT الـ NADH2 الـفي وجود ) حمض اللبن(يتم من خالله إرجاع حمض البيروفيك إلى حمض الآلكتيك

.AsT اثلة لما تحدث فيتكون ظروف التفاعل مم. desydrogenase lactateوإنزيم

ASAT و ALATات الفعل التحليلي لكل من إنزیم: 26شكل 51

حيث يحدث . في البالزماAlT و AsT ـخلوية إلى زيادة في معدل ال-تؤدي اإلصابة الكبدوتحرير لهذه األنزيمات من الخلية الكبدية باتجاه المجرى الدموي و ذلك في حالة حدوث تغيرات

وتبقى اآللية الدقيقة لحدوث . رز خلويعلى مستوى النفاذية الخلوية، و بشكل أكبر في حالة تنقأن نزيمات وإن أدنى تخريب للغشاء يسمح بمرور األ. التحرير األنزيمي في البالزما غير معروفة

.ارتفاع نشاط هذه األنزيمات يعبر بشكل قاطع عن إصابة الخلية الكبدية في الكبد و AsT ـيتواجد بصفة خاصة ال. داخل العضوية بصفة كبيرةAlTو AsTيتم انتشار

في جميع األنسجة AlTمن جهته يتواجد . المخ والعضالت الهيكليةالقلب و الكلى و البنكرياس و .و لكن بشكل جد كبير في الكبد وأقل درجة في العضالت

IV -2-2-1-1-2-قياس النشاط المضاد للسمية الكبدية:Hepatoprotective Activity (H) (Diallo et al.,

1990) : عن طريق المعادلة التالية(H)تم قياس النشاط المضاد للسمية الكبديةي

TGP : T1 ـالـبالمسممة للمجموعةCCL4 كغ/ مل3 بجرعة.

TGP : T2المعاملة مسبقا بالمستخلصين المثانوليين للمجموعة ) CI وكغ / مغ500بجرعةMP ).كغ/ مل3 بجرعة CCL4(و المتبوعة بالمادة السامة ) كغ/ مغ800بجرعة

TGP : T3المجموعة الشاهدة . IV -2-2-1-1-3 -قياس نشاط إنزيم الفوسفثاز القلوي :) Alcalin Phosphatase (ALP

يتواجد خاصة على مستوى phosphoric monoesterase عبارة عن إنزيم الفوسفثاز القلوي المصلي ALPيأتي . صفراوية-الكبدويستعمل هذا اإلنزيم لتحديد اإلصابة . الكبد، العظام و الكلى

في الكبد يقع في . أما داخل األنسجة فيتواجد عموما في األغشية الخلوية.خاصة من الكبد و العظام .أغشية الخاليا و أقل درجة في أغشية القنيات الصفراوية

ذو لون (p-Nitrophenol(PNp) إلى p-Nitrophenyl phosphatase (PNpp)، يتحللALPتحت تأثير، أين تقرأ الكثافة الضوئية على طول موجة )++Mg(و فوسفاط في وجود أيونات المغنيزيوم ) أصفر

، حيث تتناسب الشدة اللونية طرديا مع Spectrophotometre الـ بجهاز)nm( نانومتر 402 ).UI( بالوحدة الدولية ALP يعبر عن نشاط. في المصل ALPنشاط

H = (T1-T2)/(T1-T3)*100

ALP+Mg++

Phosphatase + p-Nitrophenol p-Nitrophenyl phosphatase + H2O

52

IV -2-2-1-1-4 - يرة الكوليسثيرولمعا : يمتص جزء منه عن طريق . الكوليسثيرول عبارة عن سثيرويد ذو وزن جزيئي عالي

ينقل الكوليسثيرول في البالزما عن . التغذية، لكن يمكن أن يخلق عن طريق الكبد و أعضاء أخرىاض يطرح كما هو في العصارة الصفراوية أو بعد تحوله إلى أحم. طريق البروتينات الليبيدية

يتواجد كل من الكوليسثيرول الحر و كذا المؤستر في المصل أين يعطي معقد ملون . صفراوية . نانومتر500يمتص الكثافة الضوئية على طول موجة

IV -2-2-1-1-5 - معايرة البروتينات الكلية:

تخلق البروتينات المصلية بشكل أساسي في الكبد، خاليا الدم، العقد اللمفاوية، الطحال و يمكن أن يحيد تركيز البروتينات الكلية و كذا مختلف الجزيئات البروتينية في . النخاع العظمي

بوجود اضطرابات مثل يترجم انخفاض تركيز البروتينات. الحالة المرضية عن الحالة العاديةتالل في عملية امتصاص البروتينات و حروق اخأعراض كلوية و فقدان في الدم بشكل كبير و

م اورجفاف كبير و حالة األمراض مثل أ و يالحظ ارتفاع تركيز البروتينات في حالة ...خطرة .ةالمتعددالنخاع

و متابعة مجموعة من أمراض الكبد و الكلى وتستعمل معايرة البروتينات الكلية في تشخيص .النخاع العظمي و كذا أمراض استقالبية و غذائية أخرى

IV -2-2-1-1-6 - ريدات الثالثيةمعايرة الجليس:

جزء يأتي من . عبارة عن أسترات الجليسيرول و ثالث أحماض ذهنية ذات سلسلة طويلةية في تشخيص و ستعمل معايرة الجليسريدات الثالثت. جزء آخر يصنع على مستوى الكبدالغذاء و

م تخريب المسالك الصفراوية، في حالة اضطراب ميثابوليزمعالجة مرض السكري و النفرون و . الغذية وكذا العديد من األمراض الليبيدات

53

IV -2-2-1-2 - المستخلصين الميثانوليين تأثير كل من )CIو MP( على حالة مضادات األكسدة : عند الفئران والجرذان البيضاء)كبد، كلى وقلب( في األنسجة

IV -2-2-1-2-1 - تقييم المؤشرات الالانزيمية: IV -2-2-1-2-1 -1- الـرة تركيزمعاي MDAالسيثوزولي :

:مبدأ البروثوكول التجريبيحسب TBA(acid thiobarbituric)حمض الثيوباربيتوريك بواسطة اتتم قياس فوق أكسدة الليبيد

في عملنا ( ناتج ثانوي لفوق أكسدة الليبيداتعبارة عن MDA الـ.(Okhawa et al., 1979)طريقة CCL3 الحر بالجذر هنا المحرضة

من جزيئتين مع منه واحدة جزيئة تتفاعل ، ) )(° ضــــحمفي ) أحمر وردي( في وسط حامضي إلعطاء خضاب ملون بلون قرنفلي thiobarbituric الـ

أين يأخذ هذا الخضاب و يستخلص 3 و2 محصور بين PH دقيقة و15م لمدة °100درجة حرارة ة ــبواسط . نانوميتر530 الكثافة الضوئية على طول موجة قدرها و أخيرا تقرأn-Butanol الـ

TBA مع جزيئتين من الـMDAتفاعل الـ27: شكل

:الكواشف و المواد المستعملة

1- acid thiobarbituric 0.67% 2- acid trichloroacetic 20% 3- n- butanol 4 ml / tube 4- Homogenat (liver, kidney and heart) 0.5 ml / Simple

:طريقة العملغ من 1 لكل )1.17%( بتركيز Kcl مل 9 السيثوزولي، قمنا بإضافة MDA الـلغرض معايرة تركيز

Homogeneizer ، ثم قمنا بعملية التجانس بواسطة جهاز)قلب كبد و كلى و( العضو المدروس و اتبعت طريقة المعايرة حسب الخطوات ). م°4-(للحصول على مزيج متجانس في وجود الجليد

:5الممثلة في الجدول

54

انبوب العينة Blancانبوب اضافة المحاليل مل 0.5 - الخليط المتجانس

ل م 0.5 مل TCA 0.5 %20محلول مل1 ملTBA 1 %0.67محلول

- مل 0.5 الماء المقطر . دقيقة، يبرد الخليط15يسخن المزيج في حمام مائي عند درجة الغليان لمدة

n- butanol 4 ml 4 ml . دقيقة15 دورة لمدة 3000تجرى عملية الطرد المركزي على سرعة

نانوميتر 530 عند طول موجة )OD(ضوئية يأخذ السائل الطافي لكل أنبوبة و تقرأ الكثافة ال Spectrophotometreبواسطة جهاز

MDA الـالخطوات المنجزة لقياس تركيز: 5جدول

للمنحنى MDA (n mol/ ml) في الخليط المتجانس باستعمالMDA الـو قد تم حساب قيمة : باستعمال المعادلة التالية n mol/ g weight tissue القياسي ثم تحويلها إلى

:حيث

Tissue: و قلبأ كلى كبد أو( النسيج المستعمل.( F: معامل التخفيف. P: وزن النسيج .

MDA (n mol/ ml) x F Tissue MDA ( n mol/ g weight tissue) =

P (Tissue Weight)

55

IV -2-2-1-2-2 - تأكسدتقدير األنزيمات المضادة لل : IV -2-2-1-2-2 -1- الـ تقييم نشاط إنزيم Catalase في كل من الكبد، الكلى، القلب و الكريات

:الدموية الحمراء يعتمد مبدأ التفاعل على .(Clairborne, 1985) باستعمال طريقةCatalase الـيتم تحديد نشاط إنزيم

م حسب °25في درجة حرارة Catalase الـ في وجود إنزيم)H2O2(زوال بيروكسيد الهيدروجين :التفاعل التالي

. nm240 ويترجم هذا الزوال بانخفاض االمتصاصية الضوئية على طول موجة :الكواشف و المواد المستعملة

1- Potassium Phosphate Buffer PH 7.4 , 0.1 M 2- Hydrogen Peroxide (H2O2) 19 m mol / l 3- Supernatant (liver, kidney and heart) 50 µl / Simple

:طريقة العمل

:حيث أنA1 :االمتصاص في الزمنt=0 A2: االمتصاص في الزمن t=1 T :الزمني بالدقائق الفرق .

CAT 2H2O2 2H2O + O2

UI/g weight tissue 2.303

Log A1/ A2

= T

g weight tissue

10 المخففة المختبرة من العينة (50µl) ميكروليتر50مل، يوضع بها 3 حجمها Cuvetteباختصار تأخذحضيره في تالذي تم ميلمول من مادة فوق أكسيد الهيدروجيـن19 مل من محلول 2.95مرات مع

بواسطة استمرار تسجيل يضبط التفاعل و ينظم. ( 19 m mol / l H2O2) (PH 7.4 , 0.1 M) دارئ . نانومتر خالل الدقيقتين240طول موجة التغير في االمتصاص على

لكل غ من وزن نسيج )UI /g weight tissue(يعبر عن النشاط اإلنزيمي بمفهوم عدد الوحدات الدولية : وذلك حسب الفاعل التاليالعينة

56

: Statistical Analysis:التحاليل اإلحصائية

و SEM) ± (means الخطأ المعياري المتوسطي ±بالمتوسطات (Data) تم إيضاح كل المعطيات ]One way analysis of variance)أنوفا([ليل التباين لقد تم مقارنتها باستعمال طريق واحد لتح

(ANOVA).[ مقارنات الـ Post- hoc استخدمت بين المجاميع تحت الدراسة باستعمال اختبار :أما مستوى المعنوية فدون و حدد كما يلي . Tukey- Kramer ( test) كرامار-توكاي

P*<0.05, P**<0.01, P***<0.001 : ns ويتغير غير معن.

57

وCIاختير في هذه الدراسة كما سبق ذكره مستخلصين ميثانوليين لنباتي الـ

: و قد تمت في جزئينMPالـ

، β-Carotene الـ ،DPPH إختبار الـالمتمثلة في( in vitro أجريت فيه اختبارات:الجزء األول

لمعرفة مدى القدرة المضادة للتأكسد لهذين المستخلصين ) معايرة الفالفونويدات وعديدات الفينول . الروتين و حمض الغاليك و الكرستين وBHT الـفيبالمقارنة مع الجزيئات المرجعية والمتمثلة

) male wistar albino rats( البالغة أجريت خالله تجارب على ذكور الجرذان البيضاء :الجزء الثاني

لمدة ) كغ/ مغ800 بجرعة MPكغ و/ مغ500بجرعة CI (المعاملة مسبقا بالمستخلصين الميثانوليين وعلى ذكور الفئران ). كغ/ مل3بجرعة ( CCL4 يوم متتالية و المتبوعة بالمادة السامة 30

اءــــالبيض(male albino mices)خلصين الميثانوليين المعاملة مسبقا بالمست)CI كغ و/ مغ100 بجرعةMP

أيام متتالية و 7كغ لمدة / مغ0.33بجرعة quercetine بالمقارنة مع الـ ) كغ/ مغ200بجرعة فكانت النتائج المتحصل عليها في كال ). كغ/ مل3بجرعة ( CCL4المتبوعة بالمادة السامة

:الدراستين كاآلتي

59

:in vitroاالختبارات المجراة : الجزء األولV -1- إزاحة جذر الـتأثير الفعل اآلسر للعينات علىDPPH:

عن طريق اختبار CI و الـ MP الـ تم تقدير التأثير اإلزاحي للمستخلصين الميثانوليين لكل من التيIC50 الممثلة بالـ28 الشكل و6الجدول حصل عليها في ت وقد تم تدوين النتائج المDPPHالـ

و القيمة األقل لها تعني التأثير االزاحي األفضل DPPH جذور الـمن% 50تمثل التركيز المثبط لـ . للعينة

في التركيز نتيجة قابلية الجزيئات p< 0.001نالحظ من خالل الجدول و الشكل انخفاض جد معنوي كان بقيمة حيث وجد أن الفعل األقصى لهاMP و تعلق األمر بالـ DPPHعلى أسر جذور الـ

مل/ مغ) 0.058 و0.361، 0.340 ، 0.369( بالمقارنة مع البقية التي كانت قيمها مل/ مغ 0.162 .الترتيب على و الكرستين و الريتين و حمض الجاليك CIبالنسبة لكل من الـ

Gallic acid

Rutin Quercetin Matricaria pubescens

Centaurea incana

Sample

0.058± 0.00056

0.361± 0. 0065

0.340± 0. 0053

0.162±

0.0011*** ###

@@@

0.369±

0.0014 ns

@@@

IC50 DPPH mg/ ml

لكل من المستخلصات الميثانولية و الجزيئات المرجعية IC50 الـ قيم: 6جدول )SD±Mكل قيمة ممثلة بالـ (

مـل/بالـمغDPPH من جذور الـ%50لـ التركيز المثبط 28:شكل

تحاليل اإلحصائية باستعمال تمت ال . المعياري االنحراف standard deviation SD ±لثالثة قيمتمثل النتائج بالمتوسط Tukey- Kramer multiple comparisons)كرامار–متبوع باختبار المقارنة المتعدد لتوكاي (ANOVA) تباين أنوفا

test). P***<0.001 بالمقارنة مع جزيئة الكرستينتمثل الفرق المعنوي .

P###

.بالمقارنة مع جزيئة الريتينتمثل الفرق المعنوي 0.001>P@@@<0.001 بالمقارنة مع جزيئة حمض الجاليكتمثل الفرق المعنوي.

ns : تغير غير معنوي.

0

0 , 0 5

0 , 1

0 , 1 5

0 , 2

0 , 2 5

0 , 3

0 , 3 5

0 , 4

1

M a t r ic a r ia p u b e s c e n s C e n t a u r e a in c a n aQ u e r c e t in e Ru t in eG a llic a c id

60

V -2- تقدير عديدات الفينول و الفالفونويدات في المستخلصين الميثانوليين: تم تدوين ،)25شكل ( و استعمال منحنى العيارية لحمض الغاليك Prussian bleuباستخدام طريقة

إذ انطالقا من . 7 الجدوللميثانوليين فيالنتائج المتعلقة بتقدير عديدات الفينول الكلية للمستخلصين ا غير أنه عديدات الفينول يحتويان على كميات معتبرة من لمستخلصينهذه النتائج نالحظ أن كال ا

مكافئ لحمض مغMatricaria pubescens )53.27يالحظ أن المحتوى الفينولي لمستخلص الـ Centaureaلفينولي لمستخلص الـ يضاعف تقريبا المحتوى ا)غ من الوزن الجاف/ الغاليك

incana )27.11غ من الوزن الجاف/ مكافئ لحمض الغاليك مغ(.

و باستعمال منحنى العيارية لكل من الكرستين و الروتين AlCl3بتقدير كمية الفالفونويدات بطريقة القا من وانط ).24شكل ( وجد أن هناك تناسب طردي بين زيادة االمتصاصية و ارتفاع التركيز

نالحظ أن كمية الفالفونويدات المكافئة للروتين مضاعفة لكمية 7النتائج المدونة في الجدولالفالفونويدات المكافئة للكرستين في كال المستخلصين الميثانوليين، حيث كانت أعالها عند

، )افغ من الوزن الج/ مكافئ للروتين مغ 43.44( بقيمةMatricaria pubescensمستخلص الـغ من الوزن / مكافئ للروتين مغ 24.46( فكان بقيمة Centaurea incanaمستخلص أما عندو نفس الحالة بالنسبة للفالفونويدات المكافئة للكرستين فكان أعالها عند مستخلص . )الجاف

Matricaria pubescensمستخلص أما عند ،)غ من الوزن الجاف / للكرستينمكافئ مغ 20 ( بقيمةCentaurea incana غ من الوزن الجاف / للكرستينمكافئ مغ 11.70( فكان بقيمة(.

غ من الوزن / الغاليك ينول الكلية بالمغ مكافئ لحمض تمثل كمية عديدات الف) A: (7جدول الجاف

)B ( و)C ( غ من الوزن / الروتين تمثل كمية الفالفونويدات بالمغ مكافئ لكل من الكرستين و )SD±Mكل قيمة ممثلة بالـ ( على الترتيب الجاف

C B A 24.46± 0.0036

11.708± 0.0036

27.11± 0.0026

Centaurea incana

43.44± 0.002

20.004± 0.002

53.27± 0.002

Matricaria pubescens

61

V -3- الـاختبار β-حمض اللينولييك/ ن كار وتي: أن المستخلصات الميثانولية لها القدرة على تثبيط29 و الشكل8 من خالل الجدولنالحظ

دةأكســــإذ نالحظ أن المستخلص الميثانولي . و تعديل جذور الهيدروبيروكسيد عبر الزمننوتي كار-β الـ

فاقت تلك عند نوتي كار-β يملكان قدرة جد عالية في تثبيط أكسدة الـCI الـو MP الـ لكل من 24و المستقر نسبيا عبر الزمن، حيث بعد مرور %)BHT )96 ـائي المصنع الـمركب الكيمي

CIالـ تالها مستخلص ،%100 بقيمة تفوق الـ MPساعة قدرت نسبة التثبيط عند مستخلص الـ %.97بقيمة تفوق

من خالل النتائج المتحصل عليها نالحظ أن هناك توافق نسبي بين النشاطية المضادة لألكسدة و كار -β الـى الفينولي، إذ عند مقارنة قدرة المستخلصات الميثانولية المضادة لألكسدة معالمحتو ذات القدرة العالية على التثبيط يحتويان MP و CI نجد أن نباتي )29شكل ( ساعة 24 خالل نوتي

.على كميات معتبرة من عديدات الفينول و الفالفونويدات

Centaurea incana

Matricaria pubescens

H2Od MeOH BHT Sample

97,053 ±

0,002ns

100,257 ±

0,003ns

48,455 ±

0,005**

40,457 ±

0,0032**

96,043 ±

0,0025

(AA%) β- carotene

كار -β على تثبيط أكسدة CI والـMP الـ قدرة المستخلصات الميثانولية لكل من: 8 جدول )SD±M بالـ كل قيمة ممثلة( عبر الزمن نوتي

)أ(

0

2 0

4 0

6 0

8 0

10 0

12 0

0 10 2 0 3 0 4 0 50 6 0

Time (h)

AA

%

MeOH MPCI H2OBHT

62

)ب(

على تثبيط أكسدة MP و CIقدرة المستخلصات الميثانولية لكل من : 29شكل . عبر الزمنن كار وتي-βالـ

الخطأ standard error of the mean SEM ±تمثل النتائج بالمتوسط لخمسة إلى سبعة جرذان .المعياري المتوسطي

–ع باختبار المقارنة المتعدد لتوكاي متبو(ANOVA) التحاليل االحصائية تمت باستعمال تباين أنوفا .(Tukey- Kramer multiple comparisons test)كرامار

P*<0.05, P**<0.01, P***<0.001 المعنوي بالنسبة للمجموعة الشاهدةتمثل الفرق. ns: تغير غير معنوي.

0

20

40

60

80

100

120

BHT

MeOH

H2O

Matrica

ria pube

scens

Centau

rea i

ncana

AA

%

63

: in vivo المجراتاالختباراة: الجزء الثاني) male wistar albino rats( رذان البيضاء البالغةأجريت خالل هذه الدراسة تجارب على ذكور الج

لمدة ) كغ/ مغ800 بجرعة MPكغ و/ مغ500بجرعة CI (المعاملة مسبقا بالمستخلصين الميثانوليين وعلى ذكور الفئران). كغ/ مل3بجرعة ( CCL4 يوم متتالية و المتبوعة بالمادة السامة 30

بجرعة CI( لـة مسبقا بالمستخلصين الميثانوليينالمعامل(male albino mices) البيضــــاء أيام 7كغ لمدة / مغ0.33بجرعة Quercetin بالمقارنة مع) كغ/ مغ200 بجرعة MPكغ و/ مغ100

فكانت النتائج المتحصل عليها ). كغ/ مل3بجرعة ( CCL4متتالية و المتبوعة بالمادة السامة : كاآلتي

V -1- ة تأثير كل من المادة السام)CCL4(وزن لصين الميثانوليين على وزن الجرذ و و المستخ : ساعة24 الفرق في الوزن بعد الوزن النسبي للكبد و و الكبد

في المجموعة )P<0.001( نالحظ تغير معنوي في الوزن النسبي للكبد )30 الشكل( من خالل ). اهدة عند المجموعة الشغ 4.353±0.109 ـغ مقارنة ب 5.71 ±0.216(المسممة

ساعة من حقن المادة 24 تغير معنوي في الفرق في الوزن بعد )31 الشكل(نالحظ أيضا من خالل غ عند 1.666±0.333 (+) ـمقارنة ب غ15.00±1.528 )- (( في المجموعة المسممة )P<0.001(السامة

). المجموعة الشاهدة

) كغ / مل 3بجرعة (CCL4تأثير كل من المادة السامة : 30شكل بجرعة MPكغ و/ مغ500بجرعة CI ( الميثانوليينو المستخلصين

. على الوزن النسبي للكبد )كغ/ مغ800

.الخطأ المعياري المتوسطي standard error of the mean SEM ±تمثل النتائج بالمتوسط لخمسة إلى سبعة جرذان -Tukey)كرامار–ار المقارنة المتعدد لتوكاي متبوع باختب(ANOVA) التحاليل االحصائية تمت باستعمال تباين أنوفا

Kramer multiple comparisons test). P*<0.05, P**<0.01, P***<0.001 تمثل الفرق المعنوي بالنسبة للمجموعة الشاهدة.

P#<0.05, P

##<0.01, P

### .تمثل الفرق المعنوي بالنسبة للمجموعة المسممة 0.001>

ns: تغير غير معنوي.

0

1

2

3

4

5

6

7

1

الغ ي بسب النكبدن ال

وز

Control CCL4 ( 3 ml/kg)CI (500 mg/kg) CI ( 500 mg/kg+ 3ml/kg)MP (800 mg/kg) MP ( 800 mg/kg + 3ml/kg)

***

**

###

###

ns

###

ns

#

ns

64

في حين أنه ال توجد زيادة . الوزن أنه قد حدثت سمية كبديةنستنتج من خالل نتائج التغير في في الوزن النسبي للكبد بالنسبة للمجموعات المعاملة مسبقا بالمستخلضات الميثانولية و معنوية

500بجرعة CI ) (غ 4.94 ±0.105غ و 4.18 ±0.126غ، 4.23±0.115(المتبوعة بالمادة السامة بجرعة MPكغ وحدها و/ مغ800بجرعة MP كغ، / مل 3ة بجرعCCL4ـالـكغ متبوعة ب/ مغ

(على الترتيب عند مقارنتها بالمجموعة الشاهدة) كغ/ مل 3 بجرعة CCL4كغ متبوعة ب/ مغ800

. )غ0.109±4.353

/ مل 3بجرعة (CCL4تأثير كل من المادة السامة : 31كلشكغ / مغ500بجرعة CI (و المستخلصين الميثانوليين) كغ ساعة24الفرق في الوزن بعد على ) كغ/ مغ800 بجرعة MPو

.من حقن المادة السامة

الخطأ المعياري standard error of the mean SEM ±تمثل النتائج بالمتوسط لخمسة إلى سبعة جرذان .المتوسطي

–متبوع باختبار المقارنة المتعدد لتوكاي (ANOVA) التحاليل االحصائية تمت باستعمال تباين أنوفا .(Tukey- Kramer multiple comparisons test)كرامار

P*<0.05, P**<0.01, P***<0.001 تمثل الفرق المعنوي بالنسبة للمجموعة الشاهدة.

P#<0.05, P

##<0.01, P

### .تمثل الفرق المعنوي بالنسبة للمجموعة المسممة 0.001>

ns: تغير غير معنوي.

-16

-14

-12

-10

-8

-6

-4

-2

0

2

4

1

عةسا

24 عدغ ب

بالن وزي ال

ق فلفر

Control CCL4 ( 3 ml/kg)

CI (500 mg/kg) CI ( 500 mg/kg+ 3ml/kg)MP (800 mg/kg) MP ( 800 mg/kg + 3ml/kg)

***

**

###ns

##

***###

###ns

65

V -2 -لكربون تغيرات المعايير المصلية الكبدية خالل المعاملة برباعي كلوريد ا)CCL4() بجرعةكغ / مغ500بجرعة CI (لوحده أو باالرتباط مع المستخلص الميثانولي لكل من) كغ / مل 3 ):كغ/ مغ800 بجرعة MPو V -2-1- تقدير معدل إنزيمات الثرونزاميناز المصلية)Transaminases:(

البيضاء بجرعة واحدة من تغيرات المعدل المصلي إلنزيمات الثرونزاميناز خالل معاملة الجرذان CCL4 كغ في صفاق البطن أو بعد المعاملة المسبقة للحيوانات بالمستخلصين / مل3بجرعة

كغ تكون موضحة في / مغ800 بجرعة MPكغ و/ مغ500 بجرعة CIالميثانوليين لكل من .33و 32 الشكلين

TGP (P<0.001) وTGO (P< 0.01 (نالحظ ارتفاع جد معنوي في المعدل المصلي لكل من

إذ . كغ بالمقارنة مع المجموعة الشاهدة/ مل3 وحده بجرعة CCL4 الـللجرذان البيضاء المعاملة ب الــدل ـــو مع) UI/L 130.75±1304.25 ( يساوي TGO ساعة معدل24نالحظ أنه خالل

TGPاويـ يس )UI/L 50. 62± 869.50( بالمقارنة مع) 2.50 UI/L ±128.50 9.50 و UI/l± 94.50 ( على

تدل النتائج على أنه حدثت سمية كبدية أدت إلى تخريب الغشاء . الترتيب عند المجموعة الشاهدة. البالزمي مما سمح بنفاذية إنزيمات الثرونزاميناز ذات الموطن السيثوبالزمي إلى الدورة الدموية

. انشيميةتترجم النتائج بحدوث خلل وظيفي سببه تخريب الخاليا البر

TGPوTGO الـغير أنه ال يوجد تغير معنوي مع المجموعة الشاهدة في المعدل المصلي لكل منكغ / مغ500بجرعة CI ( بالنسبة للمجاميع المعاملة مسبقا سواء بالمستخلصات الميثانولية لوحدها ). كغ/ مل3بجرعة ( CCL4الـأو المتبوعة ب) كغ/ مغ800 بجرعة MPو

TGO) 3.50± 93.50 ،63.00±573.00 ،12.00± 136.00 272.50±58.50و ( UI/L )

CIـا، ــوحده CIمع CCL4 ، MPوحدها و MP معCCL4 (و)2.50 UI/L ±128.500 ( TGP)3.00±84.00، 42.00± 405.00 ،13.00±103.00مات ينزبالنسبة للمجموعة الشاهدة و إ

±UI/l 9.50( و)CCL4مع MP وحدها وCCL4 ، MP مع CI وحدها،CI ( UI/L )251.00±27.00و . بالنسبة للمجموعة الشاهدة على الترتيب)94.50

66

Transaminases(تقدير المعدالت المصلية للثرونزاميناز:33شكل

(TGO)(بالـ، خالل المعاملة CCL4 ) وحده أو ) كغ/ مل3بجرعة/ مغ500بجرعة CI الـباالرتباط مع المستخلصات الميثانولية لكل مـن

. كغ/ مغ800 بجرعة MPكغ و

Transaminases(تقدير المعدالت المصلية للثرونزاميناز:32شكل

(TGP)(بالـ، خالل المعاملة CCL4 ) وحده أو ) كغ/ مل3بجرعة/ مغ500بجرعة CI لـ اباالرتباط مع المستخلصات الميثانولية لكل مـن

.كغ/ مغ800 بجرعة MPكغ و

.الخطأ المعياري المتوسطي standard error of the mean SEM ±تمثل النتائج بالمتوسط لخمسة إلى سبعة جرذان–متبوع باختبار المقارنة المتعدد لتوكاي (ANOVA) التحاليل االحصائية تمت باستعمال تباين أنوفا

.(Tukey- Kramer multiple comparisons test)كرامارP*<0.05, P**<0.01, P***<0.001 تمثل الفرق المعنوي بالنسبة للمجموعة الشاهدة.

P#<0.05, P

##<0.01, P

### .تمثل الفرق المعنوي بالنسبة للمجموعة المسممة 0.001>

ns: تغير غير معنوي.

0

100

200

300

400

500

600

700

800

900

1000

1

TGP

UI/l

C o n tro l C C L 4 ( 3ml/kg )C I ( 500 mg / kg ) C I ( 500 mg / kg + C C l4 3ml/kg )MP ( 800 mg /kg ) MP (800mg /kg + C C l4 3ml/kg )

**

ns###

*##

ns###

ns###

***

0

200

400

600

800

1000

1200

1400

1600

1

TGO

(UI/l

)

Control CCL4 ( 3ml/kg)CI ( 500 mg/ kg) CI ( 500 mg/ kg + CCl4 3ml/kg)MP ( 800 mg/kg) MP (800mg/kg + CCl4 3ml/kg)

**

ns##

*##

ns##

ns##

67

V -2-2-تقدير المعدل المصلي إلنزيمات الفوسفاثاز القاعدي:: )Alkalin Phosphatase(ALP)( الفوسفاثاز القاعدي خالل معاملة الجرذان البيضاء بجرعة واحدة اتتغيرات المعدل المصلي إلنزيم

في صفاق البطن أو بعد المعاملة المسبقة للحيوانات بالمستخلصين )كغ/ ملCCL4 )3من الشكلكغ تكون موضحة في / مغ800 بجرعة MPكغ و/ مغ500 بجرعة CIالميثانوليين لكل من

34 . مادة السامة لوحدها أدت إلى زيادة غير معنوية في المعدل المصلي نالحظ أن معاملة الحيوانات بال

UI/L(بالمقارنة مع المجموعة الشاهدة ) UI/L 15.00±399.00(الفوسفاثاز القاعدي إلنزيماتو كذا بقية المجاميع المعاملة مسبقا بالمستخلصات الميثانولية سواء لوحدها أو ) 10.00±230.00

،248.00±38.00 ،140.00±7.00(). كغ/مل3(ة المتبوعة بالمادة السام UI/L )252.00±16.00و30.00±255.00

) CI ،وحدها CIمع CCL4، MPوحدها و MP معCCL4 (و)UI/L 10.00±230.00( بالنسبة .للمجموعة الشاهدة على الترتيب

تقدير المعدل المصلي إلنزيمات الفوسفاثاز القاعدي خالل:34شكل وحده أو باالرتباط مع ) كغ/ مل3بجرعة ( CCL4 بالـالمعاملة

MPكغ و/ مغ500بجرعة CIالمستخلصات الميثانولية لكل مـن .كغ/ مغ800بجرعة

.الخطأ المعياري المتوسطي standard error of the mean SEM ±تمثل النتائج بالمتوسط لخمسة إلى سبعة جرذان–متبوع باختبار المقارنة المتعدد لتوكاي (ANOVA) اين أنوفاالتحاليل االحصائية تمت باستعمال تب

.(Tukey- Kramer multiple comparisons test)كرامارP*<0.05, P**<0.01, P***<0.001 تمثل الفرق المعنوي بالنسبة للمجموعة الشاهدة.

P#<0.05, P

##<0.01, P

### .ةتمثل الفرق المعنوي بالنسبة للمجموعة المسمم 0.001>

ns: تغير غير معنوي.

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

1

ALP

(UI/L

)

Control CCL4 ( 3ml/kg)CI ( 500 mg/ kg) CI ( 500 mg/ kg + CCl4 3ml/kg)MP ( 800 mg/kg) MP (800mg/kg + CCl4 3ml/kg)

*

ns##

ns## ns

##

ns##

68

V -2-3-تقدير المعدل المصلي للكوليسثيرول:CHOLESTEROL (HDL):

CCL4) 3 خالل معاملة الجرذان البيضاء بجرعة واحدة من المعدل المصلي للكوليسثيرول تقدير CIفي صفاق البطن أو بعد المعاملة المسبقة للحيوانات بالمستخلصين الميثانوليين لكل من) كغ / مل

.35 الشكل في موضحةون كغ تك/ مغ800 بجرعة MPوكغ / مغ500 بجرعة في المعدل المصلي P< 0.01 من خالل النتائج المتحصل عليها، نالحظ أن هناك انخفاض معنوي

كغ / مل3للكوليسثيرول بالنسبة للمجموعة المعاملة بالمادة السامة لوحدها بجرعة G/L)0.015±0.515( بالمقارنة مع المجموعة الشاهدة G/L)0.050±0.97( .مجموعات و كذا ال

±0.020وG/L)0.010±0.95 ،0.035 ±0.765، 0.040±0.84 المعاملة مسبقا بالمستخلصات الميثانولية (0.98) CI ،وحدها CIمع CCL4، MPوحدها و MP معCCL4(على الترتيب .

تقدير المعدل المصلي للكوليسثيرول خالل المعاملة:35شكلوحده أو باالرتباط مع ) كغ/ مل3بجرعة ( CCL4 بالـ

كغ / مغ500بجرعة CIالمستخلصات الميثانولية لكل مـن .كغ/ مغ800 بجرعة MPو

.الخطأ المعياري المتوسطي standard error of the mean SEM ±تمثل النتائج بالمتوسط لخمسة إلى سبعة جرذان–متبوع باختبار المقارنة المتعدد لتوكاي (ANOVA) التحاليل االحصائية تمت باستعمال تباين أنوفا

.(Tukey- Kramer multiple comparisons test)كرامارP*<0.05, P**<0.01, P***<0.001 للمجموعة الشاهدةتمثل الفرق المعنوي بالنسبة .

P#<0.05, P

##<0.01, P

### .تمثل الفرق المعنوي بالنسبة للمجموعة المسممة 0.001>

ns: تغير غير معنوي.

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

1

CH

OLE

STE

RO

L G

/L

Control CCL4 ( 3ml/kg)CI ( 500 mg/ kg) CI ( 500 mg/ kg + CCl4 3ml/kg)MP ( 800 mg/kg) MP (800mg/kg + CCl4 3ml/kg)

**

ns##

*#

ns##

ns##

69

V -2-4-تقدير المعدل المصلي للبروتينات الكلية: TOTAL PROTEIN :

الــخالل معاملة الجرذان البيضاء بجرعة واحدة من تقدير المعدل المصلي للبروتينات الكلية CCL4

في صفاق البطن أو بعد المعاملة المسبقة للحيوانات بالمستخلصين الميثانوليين لكل من)كغ/ مل3( . 36 الشكلكغ تكون موضحة في / مغ800 بجرعة MP الـوكغ / مغ500 بجرعة CIالـ

لمعدل البروتينات المصلية عند المجموعة P< 0.01 من خالل النتائج، نالحظ انخفاض معنوي .G/L )82.50±0.50( بالمقارنة مع المجموعة الشاهدة G/L )62.00±2.00(المسممة

كغ و / مغ800 بجرعة MPولي في الواقع، لم تؤدي المعاملة المسبقة للحيوانات بالمستخلص الميثانإلى تغير معنوي في معدل البروتينات المصلية ) كغ/ مل3(المتبوعة بالمادة السامة

بالمقارنة مع المجموعة الشاهدة ) CCL4مع MP وحدها وMP ( G/L )72.50±0.50و3.00±73.00()0.50±82.50( G/Lعلى الترتيب .

بالـتقدير المعدل المصلي للبروتينات الكلية خالل المعاملة:36شكلCCL4 ) وحده أو باالرتباط مع المستخلصات ) كغ/ مل3بجرعة

بجرعة MPكغ و/ مغ500بجرعة CIكل مـن الميثانولية ل .كغ/ مغ800

.الخطأ المعياري المتوسطي standard error of the mean SEM ±تمثل النتائج بالمتوسط لخمسة إلى سبعة جرذان–متبوع باختبار المقارنة المتعدد لتوكاي (ANOVA) التحاليل االحصائية تمت باستعمال تباين أنوفا

.(Tukey- Kramer multiple comparisons test)كرامارP*<0.05, P**<0.01, P***<0.001 تمثل الفرق المعنوي بالنسبة للمجموعة الشاهدة.

P#<0.05, P

##<0.01, P

### .تمثل الفرق المعنوي بالنسبة للمجموعة المسممة 0.001>

ns: تغير غير معنوي.

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

1

TOTA

L PR

OTE

IN G

/L

Control CCL4 ( 3ml/kg)CI ( 500 mg/ kg) CI ( 500 mg/ kg + CCl4 3ml/kg)MP ( 800 mg/kg) MP (800mg/kg + CCl4 3ml/kg)

***

**#

**ns

ns# ns

70

V -2-6-لمعدل المصلي للجليسريدات الثالثيةتقدير ا:

تقدير المعدل المصلي للجليسريدات الثالثية خالل معاملة الجرذان البيضاء بجرعة واحدة من CCL4الـ

في صفاق البطن أو بعد المعاملة المسبقة للحيوانات بالمستخلصين الميثانوليين لكل من)كغ/ مل3( .38 الشكلكغ تكون ممثلة في/ مغ800 بجرعةMP الـكغ و/ مغ500 بجرعة CIالـ

في المعدل المصلي P< 0.001 معنوي جد انطالقا من النتائج المتحصل عليها، نالحظ انخفاض بالمقارنة مع المجموعة الشاهدة G/L )0.415±0.005( للجليسريدات الثالثية عند المجموعة المسممة

)0.025± 0.925( G/L. و نالحظ تغير معنوي P< 0.01 فيما يخص المجموعات المعاملة مسبقا ،0.68±0.030. () كغ/ مل3(بالمستخلصات الميثانولية سواء لوحدها أو المتبوعة بالمادة السامة

)0.415±0.005(و) وحدهاCCL4 ، MP معCI وحدها، CI ( G/L )0.77±0.020 و0.025±0.665G/Lبالنسبة للمجموعة المسممة على الترتيب .

جليسريدات الثالثية خالل المعاملة تقدير المعدل المصلي لل:38شكلوحده أو باالرتباط مع ) كغ/ مل3بجرعة ( CCL4 بالـ

كغ / مغ500بجرعة CIالمستخلصات الميثانولية لكل مـن .كغ/ مغ800 بجرعة MPو

.لمتوسطيالخطأ المعياري ا standard error of the mean SEM ±تمثل النتائج بالمتوسط لخمسة إلى سبعة جرذان–متبوع باختبار المقارنة المتعدد لتوكاي (ANOVA) التحاليل االحصائية تمت باستعمال تباين أنوفا

.(Tukey- Kramer multiple comparisons test)كرامارP*<0.05, P**<0.01, P***<0.001 تمثل الفرق المعنوي بالنسبة للمجموعة الشاهدة.

P#<0.05, P

##<0.01, P

### .تمثل الفرق المعنوي بالنسبة للمجموعة المسممة 0.001>

ns: تغير غير معنوي.

0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

0,7

0,8

0,9

1

1

TRIG

LYCE

RIDE

G/L

Control CCL4 ( 3ml/kg)CI ( 500 mg/ kg) CI ( 500 mg/ kg + CCl4 3ml/kg)MP ( 800 mg/kg) MP (800mg/kg + CCl4 3ml/kg)

***

**##

**##

*##

**#

71

V -2-7-النشاط المضاد للسمية الكبدية تقدير:Hepatoprotective Activity (H%)

النشاط المضاد للسمية الكبدية خالل معاملة الجرذان البيضاء بجرعة واحدة من تقدير CCL4الـــــ

ثانوليين لكل من في صفاق البطن أو بعد المعاملة المسبقة للحيوانات بالمستخلصين المي)كغ/ مل3( وموضحة 9الجدولكغ تكون ممثلة في / مغ800 بجرعة MP الـكغ و/ مغ500بجرعة CIالـ .39 الشكلفي

نالحظ أنه توجد حماية كبدية واضحة ناتجة عن المستخلصين 39 و الشكل9 من خالل الجدول على قوة الفعل تدل النتائج. على الترتيب%79.80 و %60 بنسبة MP وCIالمثانوليين لكل من

المضاد للسمية الكبدية الناتج عن المركبات الفعالة التي يحتوي عليها كل من المستخلص الميثانولي . MPالـ وCIللـ

و ) كغ / مل 3بجرعة (CCL4النشاط المضاد للسمية الكبدية الناتج عن المادة السامة تقدير: 9جدول ).كغ/ مغ800 بجرعة MPكغ و/ مغ500بجرعة CI (المستخلصين الميثانوليين

المجموعة

النشاط المضاد للسمية الكبدية

CI بجرعةكغ/ مغ 500

CI بجرعة+كغ /مغ 500

CCL4 كغ/ مل 3بجرعة

MP 800 بجرعة كغ/مغ

MP 800بجرعة CCL4+ كغ /مغ

كغ/ مل 3بجرعة

H% %101.35 %60.00 %98.90 %79.80

النشاط المضاد للسمية الكبدية الناتج عن المادة تقدير:39شكل و المستخلصين الميثانوليين) كغ / مل 3بجرعة (CCL4السامة

) CI كغ و/ مغ500بجرعةMP كغ/ مغ800 بجرعة.(

0

2 0

4 0

6 0

8 0

10 0

12 0

1

C I ( 500 mg / kg )C I ( 500 mg / kg + C C l4 3ml/kg )MP ( 800 mg /kg )MP (800mg/kg + C C l4 3ml/kg )

72

V -3- تأثير كل من المستخلصات الميثانولية)CI كغ و/ مغ500بجرعةMP كغ/ مغ800 بجرعة ( :على حالة مضادات التأكسد في كل من الكبد، الكلى و القلب عند الجرذان البيضاء

V -3-1-الـ تغيرات معدلMDA في كل من الكبد، الكلى و القلب : لكبد، الكلى والقلب بعد معاملة الجرذان في كل من اMDA الـلمعدلتكون التغيرات الموافقة في صفاق البطن أو بعد المعاملة المسبقة للحيوانات )كغ/ ملCCL4) 3 البيضاء بجرعة واحدة من

كغ موضحة في / مغ800 بجرعة MPوكغ / مغ500 بجرعة CIبالمستخلصين الميثانوليين لكل من ).42و 41، 40( األشكال

لكل من MDA الـليها، نالحظ أنه هناك ارتفاع جد معنوي في معدلمن خالل النتائج المتحصل ع

بجرعة CCL4بالنسبة للمجموعة المعاملة بالمادة السامةP< 0.001 الكلى والقلب وP< 0.01 الكبد n mol/ g) )92.27 ±3.40، 86.13 ±7.49، 83.97±2.84( في صفاق البطن )كغ/ مل3(واحدة

weight tissue)54.20± 6.92، 59.42±1.24، 58.29 ±0.34( المجموعة الشاهدة بالمقارنة مع(( n

mol/ g weight tissue) على الترتيب. بالنسبة للمجموعات المعاملة مسبقا لوحدها P< 0.01 وP< 0.001 و نالحظ تغير بين

50.11±3.74، 57.5±0.45، 46.22±1.92(ة ــــبالمستخلصات الميثانولية و المتبوعة بالمادة السام

±4.08 ،72.27± 50.22،4.08±0.22(بالنسبة للكبد و (n mol/ g weight tissue) )58.86±1.13 و 61.35)±1.59و 60.22

(n mol/ g weight tissue) 26.81±1.36 ،69.31±2.27 ،45.67±3.17(و للكلىبالنسبة 31.81)±2.04و

(n mol/ g weight tissue) بالنسبة للقلب) CI وكغ وحدها/ مغ500رعة بج CI كغ / مغ500 بجرعةكغ / مغ800 بجرعة MPكغ وحدها و/ مغ800 بجرعة MP وكغ/ مغ3 بجرعة CCL4الـمتبوعة ب CCL4بالمقارنة مع المجموعة المعاملة بالمادة السامة) كغ/ مغ3 بجرعة CCL4الـمتبوعة ب

)2.84±83.97 ،7.49± 86.13 ،3.40± 92.27(( n mol/ g weight tissue)على الترتيب . تفسر هذه التغيرات على مستوى األنسجة الثالث للمجموعة المسممة برباعي كلوريد الكربون بحدوث ظاهرة فوق أكسدة الليبيدات أين تغيب في بقية المجموعات سواء المعاملة بالمستخلصات

.مةالنباتية وحدها أو المتبوعة بالمادة السا

73

.

املة الجرذان في الكلى بعد مع MDA الـتغيرات معدل:41شكلكغ في صفاق البطن / مل3 بجرعة CCL4البيضاء بجرعة واحدة من

أو بعد المعاملة المسبقة للحيوانات بالمستخلصين الميثانوليين لكل .كغ/ مغ800 بجرعة MPكغ و/ مغ500 بجرعة CIمن

في الكبد بعد معاملة الجرذان MDA الـ معدلتغيرات:40شكلكغ في صفاق / مل3 بجرعة CCL4البيضاء بجرعة واحدة من

البطن أو بعد المعاملة المسبقة للحيوانات بالمستخلصين الميثانوليين .كغ/ مغ800 بجرعة MPكغ و/ مغ500 بجرعة CIلكل من

.الخطأ المعياري المتوسطي standard error of the mean SEM ±تمثل النتائج بالمتوسط لخمسة إلى سبعة جرذان–متبوع باختبار المقارنة المتعدد لتوكاي (ANOVA) التحاليل االحصائية تمت باستعمال تباين أنوفا

.(Tukey- Kramer multiple comparisons test)كرامارP*<0.05, P**<0.01, P***<0.001 تمثل الفرق المعنوي بالنسبة للمجموعة الشاهدة.

P#<0.05, P

##<0.01, P

### .تمثل الفرق المعنوي بالنسبة للمجموعة المسممة 0.001>

ns: تغير غير معنوي.

0

20

40

60

80

100

120

1

Kid

ney

TBA

RS

(n m

ol/ g

wet

tiss

ue)

Control CCL4 (3 ml/kg) CI (500 mg/kg)

CI (500 mg/kg + 3 ml/kg) MP (800 mg/kg) MP (800 mg/kg + 3 ml/kg)

***

*###

**##

ns###

ns###

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

1

Live

r TB

ARS

(n m

ol/ g

wet

tiss

ue)

Control CCL4 (3 ml/kg) CI (500 mg/kg)

CI (500 mg/kg + 3 ml/kg) MP (800 mg/kg) MP (800 mg/kg + 3 ml/kg)

**

*###

ns##

ns###

ns###

74

V -3-2-الـتقدير النشاط اإلنزيمي إلنزيم Catalase في كل من الكبد، الكلى و القلب :

في كل من الكبد، الكلى والقلب بعد معاملة Catalase الـتكون التغيرات الموافقة لمعدل إنزيم في صفاق البطن أو بعد المعاملة )كغ/ ملCCL4 )3 الـالجرذان البيضاء بجرعة واحدة من

800 بجرعة MPكغ و/ مغ500بجرعة CI المسبقة للحيوانات بالمستخلصين الميثانوليين لكل من ).43،44،45(األشكال كغ موضحة في / مغ

>P د معنوي في الكبد ـط بشكل جــ يكون نشCatalase الـمن خالل النتائج نالحظ أن إنزيم0.01 / مل3بالنسبة للمجموعة المعاملة بالمادة السامة بجرعة واحدة P< 0.05 عنوي في الكلى والقلبو م بالمقارنة مع (UI/G weight tissue) )34.375±1.335، 129.645±3.355، 168.225±10.025(كغ

على (UI/G weight tissue) )23.44±1.030 ،103.345±3.645، 74.86±2.930(المجموعة الشاهدة ساعة يدل على حدوث 24 في المجموعة المسممة خالل Catalase الـو ارتفاع إنزيم. لترتيبا

.Catalaseالـاإلجهاد التأكسدي و تحفيز الخلية على إنتاج مضادات التأكسد التي منها إنزيم يكون منخفض في القلب في جميع المجاميع مقارنة بتركيزه في Catalase الـنالحظ أن تركيز

)23.44±1.030 ،103.345±3.645، 74.86±2.930(إذا أخذنا مثال المجموعة الشاهدة . والكلىالكبد(UI/G weight tissue)) على الترتيب و نفس المالحظة في بقية المجاميع) كبد، كلى و قلب.

في القلب بعد معاملة الجرذان MDA الـتغيرات معدل:42شكلكغ في صفاق / مل3 بجرعة CCL4البيضاء بجرعة واحدة من

ليين البطن أو بعد المعاملة المسبقة للحيوانات بالمستخلصين الميثانو .كغ/ مغ800 بجرعة MPكغ و/ مغ500 بجرعة CIلكل من

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

1

Hear

t TBA

RS (n

mol

/g w

et ti

ssue

)

Control CCL4 (3 ml/kg) CI (500 mg/kg)

CI (500 mg/kg + 3 ml/kg) MP (800 mg/kg) MP (800 mg/kg + 3 ml/kg)

***

*###

**#

**###

ns###

75

في الكبد بعد معاملة Catalaseالـتغيرات معدل إنزيم :43شكلكغ في صفاق / مل3 بجرعة CCL4الجرذان البيضاء بجرعة واحدة من

البطن أو بعد المعاملة المسبقة للحيوانات بالمستخلصين الميثانوليين لكل .كغ/ مغ800 بجرعة MPكغ و/ مغ500ة بجرع CIمن

بعد معاملة الكلى في Catalaseالـتغيرات معدل إنزيم:44شكلكغ في صفاق / مل3 بجرعة CCL4الجرذان البيضاء بجرعة واحدة من

البطن أو بعد المعاملة المسبقة للحيوانات بالمستخلصين الميثانوليين لكل .كغ/ مغ800جرعة بMPكغ و/ مغ500 بجرعة CIمن

0

20

40

60

80

100

120

140

160

180

200

1

Liv

er C

AT

( UI/G

wet

tiss

ue)

Contro l CCL4 (3 ml/kg) C I (500 mg/ kg)

C I (500 mg/ kg + 3 ml/ kg) MP (800 mg/ kg) MP ( 800 mg/ kg + 3 ml/kg)

**

*## ns

##

ns###

ns##

0

20

40

60

80

100

120

140

1

Kid

ney

CA

T (U

I/g w

et ti

ssue

)

Control CCL4 (3 ml/kg) CI (500 mg/ kg)

CI (500 mg/ kg + 3 ml/ kg) MP (800 mg/ kg) MP ( 800 mg/ kg + 3 ml/kg)

*ns ns

*##

ns##

.الخطأ المعياري المتوسطي standard error of the mean SEM ±تمثل النتائج بالمتوسط لخمسة إلى سبعة جرذان -Tukey)كرامار–متبوع باختبار المقارنة المتعدد لتوكاي (ANOVA) التحاليل االحصائية تمت باستعمال تباين أنوفا

Kramer multiple comparisons test). P*<0.05, P**<0.01, P***<0.001 تمثل الفرق المعنوي بالنسبة للمجموعة الشاهدة.

P#<0.05, P

##<0.01, P

### .تمثل الفرق المعنوي بالنسبة للمجموعة المسممة 0.001>

ns: تغير غير معنوي. 76

بعد معاملة القلب فيCatalaseالـتغيرات معدل إنزيم:45شكلكغ في صفاق / مل3 بجرعة CCL4يضاء بجرعة واحدة منالجرذان الب

البطن أو بعد المعاملة المسبقة للحيوانات بالمستخلصين الميثانوليين لكل .كغ/ مغ800 بجرعة MPكغ و/ مغ500 بجرعة CIمن

الخطأ standard error of the mean SEM ±تمثل النتائج بالمتوسط لخمسة إلى سبعة جرذان . المتوسطيالمعياري

متبوع باختبار المقارنة المتعدد (ANOVA) التحاليل اإلحصائية تمت باستعمال تباين أنوفا .(Tukey- Kramer multiple comparaisons test)كرامار–لتوكاي

P*<0.05, P**<0.01, P***<0.001 تمثل الفرق المعنوي بالنسبة للمجموعة الشاهدة.

P#<0.05, P

##<0.01, P

### .تمثل الفرق المعنوي بالنسبة للمجموعة المسممة 0.001>

ns: تغير غير معنوي.

0

5

10

15

20

25

30

35

40

1

Hear

t CAT

( UI

/g w

et ti

ssue

)

Control CCL4 (3 ml/kg) CI (500 mg/ kg)

CI (500 mg/ kg + 3 ml/ kg) MP (800 mg/ kg) MP ( 800 mg/ kg + 3 ml/kg)

**

*###

ns##

ns##

ns#

77

V -4- تأثير كل من المستخلصات الميثانولية) CI وكغ / مغ100بجرعةMP مغ200 بجرعة / :الكلى و القلب عند الفئران مضادات التأكسد في كل من الكبد وعلى حالة) كغV -4-1- الـمعدلتغيرات MDA الكلى و القلب في كل من الكبد و :

الكلى والقلب بعد معاملة الفئران لكبد ون ا في كل مMDA الـتكون التغيرات الموافقة لمعدل في صفاق البطن أو بعد المعاملة المسبقة للحيوانات )كغ/ مل CCL4 )3 البيضاء بجرعة واحدة من

كغ و كذا جزيئة / مغ200 بجرعة MPكغ و/ مغ100 بجرعة CIبالمستخلصين الميثانوليين لكل منQuercetin 46،47،48(األشكال كغ موضحة في / مغ 0.33بجرعة.(

لكل من MDA الـمن خالل النتائج المتحصل عليها، نالحظ أن هناك ارتفاع جد معنوي في معدل

CCL4 بالنسبة للمجموعة المعاملة بالمادة السامة(P< 0.01 )، و الكلى (P< 0.001)والقلب الكبد n) )87.835 ±1.475، 111.7 ±3.070، 88.18±1.590(البطن كغ في صفاق / مل3بجرعة واحدة

mol/gweight tissue)49.54 ±1.820( دةـــــــــــالشاهالمجموعة بالمقارنة مع ،2.840±75.56 ،0.795 ±68.745(

(n mol/g weight tissue) و نالحظ تغير بين. على الترتيب P< 0.001و P< 0.01 بالنسبة/ مغ 0.33بجرعة Quercetin ـال و كذا جزيئة بقا بالمستخلصات الميثانوليةللمجموعات المعاملة مس

n mol/ g) )57.61±1.480 و 49.315±1.135 ،57.495±0.905( كغ و المتبوعة بالمادة السامة

weight tissue) 69.585±1.315 و 66.585±0.6850، 66.585±2.955(بالنسبة للكبد و ((n mol/ g

weight tissue)78.85±1.760 و 82.835±1.935، 80.11±1.250(سبة للكلى و بالن(n mol/ g weight

tissue) ( بالنسبة للقلب)ـال جزيئة Quercetin كغ ،/ مغ0.33بجرعةCI كغ / مغ100 بجرعة/ مغ3 بجرعة CCL4الـكغ متبوعة ب/ مغ200 بجرعة MPوكغ / مغ3 بجرعة CCL4الـمتبوعة ب

1.590±88.18 ،3.070± 111.7 ،1.475±( CCL4لمعاملة بالمادة السامةبالمقارنة مع المجموعة ا )كغ87.835 ((n mol/ g weight tissue)حيث تفسر هذه التغيرات على مستوى األنسجة . على الترتيب

الثالث للمجموعة المسممة برباعي كلوريد الكربون بحدوث ظاهرة فوق أكسدة الليبيدات أين .تنخفض في بقية المجموعات

78

في الكبد بعد معاملة الفئران MDA الـتغيرات معدل:46شكل في صفاق البطن أو )كغ/ ملCCL4 )3 البيضاء بجرعة واحدة من

CI بعد المعاملة المسبقة للحيوانات بالمستخلصين الميثانوليين لكل من ـكغ و كذا جزيئة ال/ مغ200 بجرعة MPكغ و/ مغ100رعة بج

Quercetin كغ/ مغ 0.33بجرعة.

بعد معاملة الفئران البيضاء الكلى فيMDA الـتغيرات معدل:47شكل في صفاق البطن أو بعد المعاملة )كغ/ ملCCL4) 3بجرعة واحدة من

/ مغ100 بجرعة CI منالمسبقة للحيوانات بالمستخلصين الميثانوليين لكل بجرعة Quercetin ـكغ و كذا جزيئة ال/ مغ200 بجرعة MPكغ و .كغ/ مغ0.33

.الخطأ المعياري المتوسطي standard error of the mean SEM ±تمثل النتائج بالمتوسط لخمسة إلى سبعة جرذان–بار المقارنة المتعدد لتوكاي متبوع باخت(ANOVA) التحاليل اإلحصائية تمت باستعمال تباين أنوفا

.(Tukey- Kramer multiple comparaisons test)كرامارP*<0.05, P**<0.01, P***<0.001 تمثل الفرق المعنوي بالنسبة للمجموعة الشاهدة.

P#<0.05, P

##<0.01, P

### .تمثل الفرق المعنوي بالنسبة للمجموعة المسممة 0.001>

ns: تغير غير معنوي.

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

1

Live

r TB

ARS

(n m

ol/g

wet

tiss

ue)

C o n tro l C C L 4 ( 3 ml /kg ) Qr ( 0,33 mg / kg )

C I (100 mg /kg + 3 ml /kg ) MP ( 200 mg /kg + 3 ml/kg )

***

ns### ns

###

ns###

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

1

Kid

ney

TBAR

S (n

mol

/g w

et ti

ssue

)

C o n tro l C C L 4 ( 3 m l/kg ) Qr ( 0,33 m g / kg )

C I (100 m g /kg + 3 ml /kg ) MP ( 200 m g /kg + 3 m l/kg )

**

ns##

ns##

ns##

79

V -4-2-الـتقدير النشاط اإلنزيمي إلنزيم Catalase الكلى في كل من الكبد و :

بعد معاملة الفئران في كل من الكبد و الكلى Catalase الـتكون التغيرات الموافقة لمعدل إنزيم في صفاق البطن أو بعد المعاملة المسبقة للحيوانات )كغ/ ملCCL4 )3 البيضاء بجرعة واحدة من

كغ و كذا جزيئة/ مغ200 بجرعة MPكغ و/ مغ100بجرعة CIبالمستخلصين الميثانوليين لكل من ).49،50(األشكال موضحة في . كغ/ مغ 0.33بجرعة Quercetin الـ

P< 0.01 نشط بشكل جد معنوي في الكبد يكون Catalase الـمن خالل النتائج نالحظ أن إنزيم )كغ/ ملCCL4)3 من بالنسبة للمجموعة المعاملة بالمادة السامة بجرعة واحدة P< 0.001الكلى و بالمقارنة مع المجموعة الشاهدة (UI/G weight tissue) )77.42±1.080 و2.215±92.215( . على الترتيب (UI/G weight tissue) )107.925±1.925 و2.695±111.365(

بعد معاملة الفئران القلب فيMDA الـتغيرات معدل:48شكل في صفاق البطن أو )كغ/ ملCCL4 )3 البيضاء بجرعة واحدة من

CI بعد المعاملة المسبقة للحيوانات بالمستخلصين الميثانوليين لكل من ـكغ و كذا جزيئة ال/ مغ200 بجرعة MPكغ و/ مغ100بجرعة

Quercetin كغ/ مغ 0.33بجرعة.

0

20

40

60

80

100

120

140

1

Hear

t TBA

RS (n

mol

/g w

et ti

ssue

)

Control CCL4 ( 3 ml/kg) Qr ( 0,33 mg/ kg)

CI (100 mg/kg + 3 ml/kg) MP ( 200 mg/kg + 3 ml/kg)

***

ns##

ns##

ns###

80

الفئران البيضاء بعد معاملة الكلى فيCatalase الـتغيرات معدل إنزيم: 50شكلكغ في صفاق البطن أو بعد المعاملة / مل3 بجرعة CCL4بجرعة واحدة من

كغ / مغ100 بجرعة CIالمسبقة للحيوانات بالمستخلصين الميثانوليين لكل من .كغ/ مغ 0.33بجرعة Quercetin ـ ال و كذا جزيئةكغ/ مغ200رعة بجMPو

الفئران بعد معاملة الكبد فيCatalaseالـتغيرات معدل إنزيم :49شكلكغ في صفاق البطن أو بعد / مل3 بجرعة CCL4بجرعة واحدة منالبيضاء

بجرعة CIالمعاملة المسبقة للحيوانات بالمستخلصين الميثانوليين لكل من ـ ال و كذا جزيئةكغ/ مغ200 بجرعة MPكغ و/ مغ100

Quercetin كغ/ مغ 0.33بجرعة.

.الخطأ المعياري المتوسطي standard error of the mean SEM ±تمثل النتائج بالمتوسط لخمسة إلى سبعة جرذان– متبوع باختبار المقارنة المتعدد لتوكاي(ANOVA) التحاليل اإلحصائية تمت باستعمال تباين أنوفا

.(Tukey- Kramer multiple comparaisons test)كرامارP*<0.05, P**<0.01, P***<0.001 تمثل الفرق المعنوي بالنسبة للمجموعة الشاهدة.

P#<0.05, P

##<0.01, P

### .تمثل الفرق المعنوي بالنسبة للمجموعة المسممة 0.001>

ns: تغير غير معنوي.

0

20

40

60

80

100

120

1

Kidn

ey C

AT (U

I/g w

et ti

ssue

)

C o n tr o l C C L 4 ( 3 m l /kg )Q r ( 0,33 m g / kg ) C I (100 m g /kg + 3 m l /kg )MP ( 200 m g /kg + 3 m l /kg )

***

*## **

#

ns##

0

20

40

60

80

100

120

140

1

Live

r C

AT (

UI/g

wet

tiss

ue)

Control CCL4 ( 3 ml/kg) Qr ( 0,33 mg/ kg)

CI (100 mg/kg + 3 ml/kg) MP ( 200 mg/kg + 3 ml/kg)

**

ns##

ns###

ns##

81

VI-المناقشة: مثل أنيون السوبيرأوكسيد ROS)(تتسبب الجذور الحرة و األنواع األكسيجينية النشطة

)(O2 في ظهور اإلجهاد (°OH)ذر الهيدروكسيل و جH2O2) (بيروكسيد الهيدروجين ،-°

يتم إنتاجها خالل عملية األيض . (Landmessen & Drexler, 2006 ; Bierl et al., 2006)التأكسدي ,Cadenas & Davies) الميثاكوندريا) ميثابوليزم(عملية أيض : الداخل خلوي بصفة عادية، مثل

2000 ; Cadenas, 2004) ، نشاط السيثوكرومP450 (Zangar et al., 2004) و إنزيم السوبيرأكسيد . التهاب الخاليا عند و(SOD) (Kinnula & Crapo, 2003 ) ديسموثاز

كسدي عن طريق التعرض غير المختار للجذور الحرة و ينتج عن عدم التوازن التأيظهر اإلجهاد يؤدي توليد . نسجةبين مولدات التأكسد و مضادات األكسدة مؤديا إلى تلف الخاليا و تضرر األ

& Yuan & Yankner., 2000 ; Klaunig)الجذور الحرة إلى زيادة العديد من الحاالت المرضية

Kamendulis., 2004)بما فيها أمراض القلب، السكري، العطب الكبدي، السرطان و الشيخوخة ،… .(Giordano, 2005 ; Rolo & Palmeira., 2006 ; Jaeschke, 2000 ; Bokov et al., 2004) الخ

تشير الدراسات الحديثة إلى أنه قد يكون لإلجهاد التأكسدي منشأ محوري في أمراض الكبد بما فيها العقاقير المحرضة للعطب الكبدي، التهاب الكبد الناتج عن الكحول، التهاب الكبد الفيروسي، العطب

. (Albano, 2002 ; Amin & Hamza., 2005 ; Jaeschke et al., 2002 )الكبدي الناتج عن االنسداد

و يتسبب في موتها بوساطة بدأ تسلسل . يؤدي اإلنتاج المفرط للجذور الحرة إلى تسمم الخلية الكبدية ; Gutteridge, 1993 ; Pessayre, 1995 )األنواع األكسيجينية النشطة مما يؤدي إلى تلف حاد للكبد

Sies, 1991). الجذور الحرة و مضادات األكسدة خاصة السوبيرأوكسيد ديسموثاز يكون الحفاظ على التوازن بين

(SOD) الكثاالز ، (CAT) الجلوثاثيون بيروكسيداز ، (GPx) الجلوثاثيون ،(GSH) الفيثامينات،

(E,C,A) و متعددات الفينول و الفالفونويدات، ذو أهمية كبرى، و يمكن أن يكون آلية رئيسية فييقترح هذا التوازن لعب دور هام في السمية .تجة عن اإلجهاد التأكسديالوقاية من األضرار النا

.(CCL4)الناتجة عن العقاقير، مثل رباعي كلوريد الكربون

يعرف قديما أن رباعي كلوريد الكربون عبارة عن مركب يتسبب في السمية الكبدية الناتجة عن و يتسبب في تليف الكبد بعد (Recknagel, 1967 ; Recknagel et al., 1989 )التعرض الحاد

أين يتفاعل أساسا مع األعضاء و خاصة . (Rubin & Poper,1967))لمدة طويلة(التعرض المزمن الكبد عن طريق خصائصه الكيميائية النشطة مع الجزيئات األساسية المحيطة، عن طريق روابط

83

-Gastro & Diaz-Gomez, 1972 ; Diaz) قوية مع الليبيدات الميكروزومية و البروتينات الغشائية

Gomez et al., 1973)و من خالل األكسدة الليبيدية (Comporti et al., 1965 ; Ghozal & Recknagel, 1965 ; Recknagel, 1967).

ساعة عند 24 خالل %86 ( رباعي كلوريد الكربون بسهولة من طرف الجهاز الهضمييمتصشر هذا المركب بطريقة اختيارية في األنسجة الذهنية و يتواجد ينت. (Paul et al., 1963) )الجرذ

.(Mc collister et al., 1951) المخ، الكبد، الكلى و الدم،بتراكيز مرتفعة جدا في النخاع العظميحيث يعتقد غالبا أنه . يبقى نمط تأثير رباعي كلوريد الكربون على المستوى الجزيئي محل خالف

. (Cawthorne et al., 1970 )قي وسيطي مسمم للكبديتأيض إلى عامل حقيأثبتا ".مولد أكسدة"رباعي كلوريد الكربون عبارة عن أول من اقترح أن 1948 عام Hoveعتبري

Rouiller & Oberling أن تطور األمراض يحدث عن طريق الشبكة األونذوبالزمية و م1956 عام 1961 عام Bulterبين .من خالل المسار الميكروزوميرباعي كلوريد الكربون يتم يعتقد أن تنشيط

و قد اعتبر . أن رباعي كلوريد الكربون يتأيض حيويا إلى كلوروفورم و هذا في غياب األكسيجينأن رباعي كلوريد الكربون يتحول إلى، جذر حر، عن طريق المسار الميكروزومي، الذي من

وى الليبيدات البنائية للميكروزومات و خالله تحفز سلسلة من األكسدة الذاتية على مست عام Ghoshal & Recknagelاعتقدا .الميثاكوندري، مما يؤدي إلى تراكم الذهون و تنخر خلوي

أن أول تخريب بيوكيميائي يحدث من خالل السمية الناتجة عن رباعي كلوريد الكربون هو 1966رباعي كلوريد الكربون يتحول في ن ، أ1966 عام Slaterافترض أيضا .فوق أكسدة الليبيدات

CCL3الميكروزومات إلى جذر الذي يشرع في عملية فوق أكسدة الليبيدات، و يرى أنه يتسبب في ° )".تمركزي(الموضعي "و تراكم الدهون عن طريق المسار " االنتشار"التنخر عن طريق عملية

Phospholipase A2 ينشط إنزيمرباعي كلوريد الكربونم أن 1987و رفقاءه عام Van Kuijk أثبالذي يلعب دور جوهري في موت الخلية، حيث يؤدي إلى تحليل األحماض الذهنية المؤكسدة

.المتواجدة على مستوى األغشية

يؤدي إلى رباعي كلوريد الكربون أن المشتق الحر لم 1992 و زمالءه عام Orrenius بين كل من في (++Ca)بيدات مما يؤدي إلى زيادة تركيز أيونات الكاليسيوم تحريض فوق أكسدة اللي

Endonucleasesو Proteases ، الـ Lipasesتؤدي هذه الزيادة إلى تنشيط إنزيمات الـ. السيثوبالزم .مما يقود إلى تنقرز الخاليا

84

بكة رباعي كلوريد الكربون على ما يبدو يتمركز على مستوى نظام الشإن التأثير السام ل، أين يشمل في نهاية األمر (SER)( System of the Endoplasmic Reticulum)األونذوبالزمية

.(Brattin et al., 1985 )جميع أجزاء خاليا الكبد

CCL3 الـفي وجود األكسجين، يمكن أن يتحول جذر

ميثيل ال إلى جذر بيروكسي ثالثي كلور°

(Packer et al., 1978) (Trichloromethyl peroxy radical)(CCL3OO°) . أين يعتبر هذا األخير جد CCL3 (Mico & Pohl, 1983) الـنشط و بالتالي أقصر زمن عمر مقارنة بجذر

يكون زمن عمر . ° من رتبة الميليثانية و يختفي من األنسجة من خالل التفاعل مع الجزيئات °CCL3OO الـجذر

CCL3 الـ أكثر عرضة من جذر°CCL3OO الـبريعت. المستقرة الستكمال إلكترونه الزوجي°

مؤديا إلى فوق (Forni et al., 1983) (PUFA)لتجريد هيدروجين األحماض الذهنية عديدة التشبع .(Muriel, 1997)أكسدة الليبيدات

األحماض الذهنية عديدة التشبع تبدأ بتفاعالت متتابعة حتى تنتهي بتشكيل إن عملية أخذ هيدروجين

من المهم أن نشير إلى أن . فوق أكسدة الليبيداتيدات، الكربونيل و األلكانات في عملية تسمىاأللدهفوق أكسدة الليبيدات تؤدي إلى أضرار عن طريق المساس بسالمة األغشية و عن طريق تشكيل

، أخيرا تؤدي إلى عملية GSHروابط قوية للوسائط النشطة مع الجزيئات البيولوجية المهمة مثل .خر و تلف الكبد بشكل عامتن

يمكننا أن نتكلم عن خلل وظيفي على مستوى الكبد إذا تمت مالحظة على األقل نتيجتين من تسمح نتائج التحليل في أغلب األحيان بتقسيم اإلصابة . االختبارات المجرات في حالة غير عادية

:الكبدية إلى مجموعتين كبيرتيناختبارات المخبر حدوث إصابة البرونشيم خلوي إذا أثبتت -يصنف المرض كبدو - أ

(Ramaiah, 2007 ; Meyer et al., 2004 ). الكبديصفراوي إذا دلت اختبارات المخبر على حدوث إصابة في إفراز -يصنف المرض كبدو - ب

. (Hoffman et al., 1994 ; Amacher, 2002)العصارة الصفراويةصفراوية خاصة عن طريق النتائج التحليلية -كبدوخلوية و ال-يتم التمييز بين اإلصابة الكبدو

و يعود السبب إلى التموقع الخاص لهذه اإلنزيمات في (ALP, AsT , AlT)لألنزيمات المصلية تتواجد في شكل ذائب في (AsT , AlT)بحيث يالحظ أن المؤشرات اإلنزيمية للكبد. النسيج الكبدي

ي حالة العطب الكبدي أو إصابة البرونشيم الكبدي عن سيثوبالزم الخلية الكبدية بصفة طبيعية، فطريق تحلل الخلية الكبدية، تعبر هذه اإلنزيمات إلى الدورة الدموية نتيجة تخريب نفادية

85

من جهة أخرى أنزيمات . (Zimmarman & Seeff, 1970 ; Recknagel et al., 1989,1991)األغشية و أغشية تتواجد على مستوى الخاليا الجيبية. غشية تكون مرتبطة باأل(ALP) الفوسفثاز القلوي

-في حالة اإلصابة الكبدو (Gaskill et al., 2005). القنيات الصفراوية المتواجدة خارج الخلية الكبدية .صفراوية يتم إفرازه بشكل مرتفع نتيجة تأثير األمالح الصفراوية

عادة ما يقدر نشاط الجذر الحر عن طريق نهرة غير قابلة للتجريب المباشر، فإبما أن الجذور الح

الطرق غير المباشرة مثل قياس العديد من النواتج النهائية الناتجة عن التفاعالت مع الليبيدات، ).DNA )Holley & Cheeseman, 1993البروتينات و

الحاجة إليه الباحثون عند الذي يلجألتعتبر فوق أكسدة الليبيدات في أغلب األحيان المقياس األووتعتبر ذات ). Holley & Cheeseman, 1993 (إلثبات تشكل الجذور الحرة في الخلية المتضررة

أهمية خاصة باألضرار التفاعلية الناتجة عن تشكل الجذور الحرة، و ذلك بسبب وقوعها في أغشية مالحظة فوق أكسدة ، أين تبدأ العملية التحليلية الذاتية بصفة طبيعية و (Pater et al., 1992)الخاليا

Maellaro et al., 1990; Mohamed et)الليبيدات و التنخر الكبدي الذي وجد أنه يحدث كنتيجة نهائية

al., 1999) .

إن الهدف من هذه الدراسة التي قمنا بها هو التحقق من القدرة المضادة للتأكسد و الفعل الواقي للكبد على الجذور الحرة المتلفة Matricaria pubescens (MP) و Centaurea incana (CI)لكل من

.للكبد و المسببة برباعي كلوريد الكربون عند الجرذان والفئران البيضاء

و قبل الشروع في الدراسة المجرات تجريبا على الحيوانات قمنا بداية بدراسة تجريبية فيثوكيميائية، حيث قمنا DPPHالـ تمثلت في اختبار و التي in vitroحيث تم من خاللها إجراء بعض اإلختبارات

بالمقارنة مع نشاط CI والـMPبقياس النشاط المضاد للتأكسد للمستخلصين الميثانوليين لكل من الـ مثل الكرستين، الريتين و حمض DPPHجزيئات مضادة لألكسدة معروفة بتثبيطها لجذر الـ

لمستخلصين الميثانوليين لفوق أكسدة الليبيدات باإلضافة إلى ذلك، تم قياس قدرة تثبيط ا. الجاليكإذ أنه خالل عملية األكسدة يحدث فقد لذرة الهيدروجين من نوتي كار-βباستعمال اختبار الـ

. (Frankel, 1998 )11مجموعة الميثيالن النشطة لحمض اللينولييك الواقعة في ذرة الكربون رقم ط المزدوجة ــ المتشكلة بمهاجمة الرواب( hydroperoxide radical)تقوم جذور الهيدروبيروكسيد

الستعادة استقرارها مؤدية بذلك إلى فقدان اللون البرتقالي المميز للكاروتينويدات نوتي كار-βللـ إن وجود المركبات الفينولية كعوامل مضادة . بصفة عامة، حيث يترجم ذلك بخفض امتصاصها

ة زوال اللون عن طريق تعديل جذور البيروكسيد و الجذور لألكسدة يسمح بالتقليل من امتداد عملي

86

تتسبب الجذور الحرة في حدوث فوق أكسدة .(Dapkevicius et al., 1998) المتشكلة من هذا النظام .الليبيدات التي تلعب دور جد مهم في العديد من األمراض

,Oyaizu(اد لألكسدة ككاشف لتقييم النشاط اآلسر للجذر الحر المضDPPH يستعمل عادة الـ

عبارة عن جذر حر مستقر، يمكنه أن يستقبل إلكترون أو جذر DPPH يعرف على أن الـ. )1986 يتم تحديد القدرة اإلرجاعية لجذر ).Soares et al., 1997(الهيدروجين ليصبح جزيئة أكثر استقرارا

ر المحرضة بواسطة نانومت517 عن طريق اإلنخفاض في اإلمتصاصية الضوئية عند DPPH الـتكون . تستعمل كل من الكرستين و الروتين و حمض الجاليك كجزيئات مرجعية. مضادات األكسدة

يكون ترتيب . المستقر الى ذو اللون األصفرDPPH المستخلصات قادرة على إرجاع جذر الـ Matricaria و الـ Centaurea incana ـللالفعل اآلسر لكل من المستخلصين الميثانوليين

pubescensو كذا الجزيئات المرجعية مع جذر الـ DPPHعلى النحو التالي : Centaurea incana Matricaria pubescens< ) مل/ مغ0.34(الكرستين < )مل/ مغ0.361(الروتين < ) مل/ مغ0.369( كشفت المعطيات التجريبية عن الفعل اآلسر ).مل/ مغ0.058(حمض الجاليك < )مل/مغ0.162( .)28شكل (لجذور الحرة من طرف المستخلصات الميثانولية ل

حمض اللينولييك بقياس/ ـ كاروتينβ يتم تحديد القدرة المضادة لألكسدة عن طريق معايرة الـ Tepe (تثبيط المركبات العضوية و كذا جذور الهيدروبيروكسيد الناجمة عن أكسدة حمض اللينولييك

et al., 2005 Tepe et al., 2005( و قد إستخدم هذا الفحص لمحاكاة أكسدة مكونات الليبيدات ، تكون النتائج المتحصل عليها ).Mata et al., 2007(الغشائية الخلوية في وجود مضادات األكسدة

موضحة في الجدول Matricaria pubescens و الـ Centaurea incana إنطالقا من مستخلصي الـتثبيط عالي لفوق أكسدة الليبيدات بنسبة ذين المستخلصين ه، إذ تظهر عينات 29 و الشكل 8

في %)BHT )96.04 مل أعلى من نسبة الـ/ مغ2على الترتيب في تركيز % 100.25و % 97.05 .نفس التركيز

تشير المنهجية المتعلقة بهذه الدراسة الى أن الفينوالت النباتية تشكل واحدة من المجموعات الرئيسية

و لذلك فالجدير بالذكر هو تحديد . اعلة كمضادات أكسدة أولية أو جذور حرة طرفيةللمركبات المتفباعتبار أن الفالفونويدات واحدة من أهم . المحتوى الكلي لهذه المركبات في النباتات تحت الدراسة

المركبات األكثر تنوعا على نطاق وسع ، فإنها تعتبر من أهم المركبات الفينولية الطبيعية )Agrawal, 1989 Agrawal, 1989( . تملك هذه المركبات مجال واسع من األنشطة الكيميائية و

.البيولوجية بما في ذلك الخصائص اآلسرة للجذور الحرة

87

Matricaria pubescens و الـ Centaurea incana يكون المحتوى الفينولي الكلي الموجود في الـ و الـ Centaurea incana من الـ) غ1(حيث تم الكشف على أن . 7موضح في الجدول

Matricaria pubescens مغ من الفينوالت المكافئة لحمض الجاليك 53.27 و 27.11 يحتوي على ,Shahidi & Wanasundara(تعرف المركبات الفينولية بقدرتها المضادة لألكسدة . على الترتيب

رتها اآلسرة الحتوائها على مجموعات إذ تعد الفينوالت مركبات نباتية جد هامة بسبب قد).1992 تساهم مباشرة المركبات الفينولية في ).Hatano et al., 1989 Hatano et al., 1989(الهيدروكسيل

تعتبر قدرة هذه . التأثير المضاد لألكسدة فهي تنتشر بشكل واسع في المنتجات النباتية الثانوية متعددات الفينول ذات وظائف عديدة بالتفاعل تعد. المركبات كمضادات أكسدة واضحة بشكل جيد

-Rice(كعوامل مرجعية، و مضادات أكسدة معطية للهيدروجين و كآسرات لألكسجين األحادي

Evans et al., 1996.(

Matricaria و الـ Centaurea incana يكون المحتوى الكلي للفالفونويدات الموجود في الـ

pubescensمن الـ) غ1( الكشف على أن تم. 7 موضح في الجدول Centaurea incana و الـ

Matricaria pubescens مغ من الفالفونويدات المكافئة للكرستين على 20.00 و 11.7 يحتوي على . مغ من الفالفونويدات المكافئة للروتين على الترتيب43.44 و 24.46الترتيب و كذا

ل التأثير الواقي الخلوي و الكبدي للفالفونويدات، ال كان هناك اهتمام كبير في السنوات األخيرة حوتكون الفالفونويدات المعطية لإللكترونات معروفة . سيما فيما يتعلق بنمط تأثيرها كمضادات لألكسدة

,.in vitro ()Bors et al. 1995; Castelluccio et al(جيدا بخصائصها المضادة لألكسدة مخبريا

1995, Rice-Evans et al., 1996 .( يتم تحديد القدرة اإلرجاعية للفالفونويدات بنيويا، بواسطة نمودج ثنائي هيدروكسي كاثيكول على الحلقة ـ ، الرابطة الثنائية المتزاوجة مع 4، 3الهدركسلة،

. على الحلقة -4الوظيفة

دة الليبيدات بينت العديد من الدراسات فعالية الفالفونويدات المضادة لألكسدة في تثبيط أكس)Castelluccio et al., 1995, Salah al., 1995; Hirano et al., 2000.( باإلضافة إلى ذلك، فإن

Brown et(قدرتها على التفاعل كمضادات ألكسدة في المخبر يستند على قدرتها المخلبية للمعادن

al., 1998; Morel et al., 1998 Brown et al., 1998; Morel et al., 1998( و كذا على أسر و لكن، على الرغم من أن . )Tournaire et al., 1993 Tournaire et al., 1993(األكسجين األحادي

الفالفونويدات تتفاعل بسرعة مع األنواع األكسيجينية النشطة في األنظمة الكيميائية ، فإن تفاعلها .حيويا يعتمد على النموذج البيولوجي للخاليا و األنسجة

88

ى الرغم من أن مجموعة المعطيات الموضحة لفعل الفالفونويدات أنها مضادات أكسدة أو على علأنها معدالت للوظائف البروتينية على نطاق واسع، فإن القليل فقط يعرف عن قدرتها المضادة

وقد أشارت الدراسات. لألكسدة و كذا النشاط الحيوي لمشتقات الفالفونويدات على المستوى الخلويم عند الثدييات إلى أن معظم الفالفونويدات تكون متزاوجة و تستقلب بشكل رئيسي 1960-1950منذ

).Schoeter et al., 2002(في الكبد أو تهدم عن طريق ميكروفلورا الكولون

Matricaria و الـ Centaurea incana بصفة عامة، أظهرت المستخلصات الميثانولية لكل من الـ

pubescensاط عالي مضاد لألكسدة، جذر الـ نش DPPHو الـ βحمض اللينولييك / ـ كاروتينقد يكون . BHT بالمقارنة مع الجزيئات المرجعية مثل الكرستين و الروتين و حمض الجاليك و الـ

و الـ Centaurea incana التأثير المضاد لألكسدة للمستخلصين الميثانوليين لكل من الـ

Matricaria pubescensو بالتالي، فإن النشاط اآلسر لجذر الـ. راجعا إلى المكونات الفينولية

DPPHبواسطة المستخلصين الميثانوليين لكل من الـ Centaurea incana و الـ Matricaria

pubescensيتفاوت تركيز بيروكسيد . يكون مرتبط بشكل أساسي بمجموعات الهيدروكسيل الفينوليةء وفقا للمركبات الفينولية ، و بالتالي فإن هذه األخيرة المتواجدة في المستخلص الهيدروجين في الما

,.H2O )Ruch et al إلىH2O2 عبارة عن مانحات جيدة لإللكترونات، وعليه فإنها تعجل بتحويل الـ

1984.( إلى+Fe3 باعتبار أنها مانحات جيدة لإللكترونات فإنها تظهر القدرة اإلرجاعية على إختزال الـ

Fe2+ Fe2+. تحتويان على كمية Matricaria pubescens و الـ Centaurea incana و عليه نخلص إلى أن الـ

كبيرة من الفينوالت و كذا الفالفونويدات، و هكذا يمكن أن تلعب دورا رئيسيا في القدرة التثبيطية Matricaria و الـ Centaurea incana بينت نتائج هذه الدراسة أن الـ. المضادة لألكسدة

pubescens يمكن استخدامهما كمصدر طبيعي مضاد لألكسدة سهل الوصول إليه و كذا إمكانية .استعمالهما في المستحضرات الصيدالنية

ادة لألكسدة و من خالل النتائج المتحصل عليها نالحظ أن هناك توافق نسبي بين النشاطية المض

نوتيكار-β الـ قدرة المستخلصات الميثانولية المضادة لألكسدة معإذ عند مقارنةالمحتوى الفينولي، ذات القدرة العالية على التثبيط يحتويان على MPالـ و CI الـ ساعة نجد أن نباتي24 الـخالل

.المتميزة بنشاطها المضاد لألكسدة كميات معتبرة من عديدات الفينول و الفالفونويدات

89

قمنا بمواصلة in vitroلية هذين النبتتين المثبط و اآلسر للجذور الحرة و عليه و بعد التأكد من فعا على السمية الكبدية المستخلصات الميثانولية و ذلك من خالل دراسة تأثيرin vivoالدراسة

. عند الجرذان والفئران البيضاء المحرضة بواسطة رابع كلوريد الكربون

ول عن استقالب العقاقير و المواد الكيميائية السامة، المسؤئيسي يعرف الكبد جيدا بأنه العضو الر

;Bessel et al., 2001)كما يعد العضو الرئيسي المستهدف تقريبا بجميع المواد الكيميائية السامة

Larrey, 2000; Lee, 2003). رباعي تعرف العديد من الجزيئات الصيدالنية و الكيميائية بتسببها في األعطاب الكبدية، مثل

يؤدي التعرض إلى جرعة مفرطة من هذه المادة المسممة للكبد إلى تحريض . كلوريد الكربون، تنقرز أو تنخر الخاليا )تلف(عطب كبدي حاد يتميز بخلل في الوظيفة الكبدية، انحالل

.(Basu, 2003; Higuchi & Gores, 2003; Kaplowitz, 2002; Nelson, 1990)الكبدية

ا أن إعطاء رباعي كلوريد الكربون للجرذان و الفئران البيضاء يسبب أضرار كبدية أظهرت نتائجن

ساعة من إعطاء المادة 24 الفرق في الوزن بعد (حادة، تظهر من خالل انخفاض وزن الجسم أو ,.Ko et al., 2006; Jeon et al., 2002; Oh et al) و ارتفاع معنوي في الوزن النسبي للكبد)السامة

2002).

تحتوي الخاليا الكبدية على العديد من اإلنزيمات التي تحرر في الدم في حالة تضرر أغشية بسبب تراكيزها المرتفعة و تحررها من سيثوبالزم الخلية الكبدية، .(Stacey et al., 1993)الخاليا

د بين خلوي على مستوى الكبد، وق- مؤشرات جد حساسة للخلل الكبدوAlT و AsTتعتبر إنزيمات العديد من الباحثين ارتفاع اإلنزيمات المصلية للثرونزأميناز بعد إعطاء جرع سامة من رباعي

. للجرذان و الفئرانكلوريد الكربون

برباعي الجرذان المعاملة عندAlT و AsTأظهرت نتائجنا زيادة جد معنوية في نشاط إنزيمات & Wills & Asha, 2006; Gopal) دراسات و هذا ما ذهبت إليه العديد من الكلوريد الكربون

Sengottuvelu, 2008; Nakahira et al.,2003; Young et al., 2008) . تفسر الزيادة في نشاط هذه على أنه حدثت سمية كبدية أدت إلى تخريب الغشاء البالزمي مما سمح بنفاذية إنزيمات اإلنزيمات

-كبدو تترجم النتائج بحدوث خلل. لدورة الدمويةالثرونزاميناز ذات الموطن السيثوبالزمي إلى ا . وظيفي سببه تخريب الخاليا البرانشيميةخلوي

90

حدوث خلل (Alkalin Phosphatase (ALP)) يعكس ارتفاع إنزيمات الفوسفاثاز القلوي المصليا هذيتواجد .(Zimmerman, 1978) أكثر من تضرر البرونشيم الكبدي(Cholestatic)كوليسثاتيكي

يتواجد أيضا على مستوى العظام، خاليا . اإلنزيم عادة على مستوى ظهارية القنوات الصفراوية .األمعاء و الكلى

المصلي، غير مرتفع بشكل معنوي عند المجموعة المسممة ALPفي دراستنا وجد أن مستوى ج بمقارنتها مع يمكن تفسير هذه النتائ. برباعي كلوريد الكربون بالمقارنة مع المجموعات األخرى

و مع تصنيف نتائج المخبر التي تفيد أنه في )خلوي-المؤشر الكبدو(AlT و AsTنتائج إنزيمات صفراوية يجب أن يكون هناك ارتفاع في مستوى العصارة الصفراوية -حالة اإلصابة الكبدو

(Hoffman et al., 1994 ; Amacher, 2002) ب البرونشيم نه حدث خلل أصا هذا األساس فإعلى والكبدي و هذا ما يثبت حدوث الضرر الكبدي الحاد و ليس الكوليسثاتيكي الناتج عن إعطاء جرعة

. واحدة من رباعي كلوريد الكربون

تحدث آلية . بواسطة رباعي كلوريد الكربون(TG)يثبط إفراز الخلية الكبدية للجليسريدات الثالثية Very Low)ير داخل الخلية و تنتهي بإخراجها في شكل إفراز الجليسريدات الثالثية بشكل كب

Density Lipoproteins) VLDL ترتبط هذه العمليات بالكمال البنيوي و الوظيفي للعناصر المشكلة ، .(Brattin et al., 1985 )للهيكل العظمي

دية في في دراستنا، وجد انخفاض جد معنوي في إفراز الجليسريدات الثالثية من طرف الخلية الكب و هذا ما أكدته المجموعة المعاملة برباعي كلوريد الكربون بالمقارنة مع المجموعات األخرى

.(Brattin et al., 1985 ; Ohta & Sahashi2002).الدراسات

Smuckler et ) بواسطة رباعي كلوريد الكربونتيثبط أيضا بسرعة تخليق الخلية الكبدية للبروتينا

al., 1962). في .هذه الحالة يدخل الكمال البنيوي و الوظيفي للشبكة األنذوبالزمية في خطر في Brattin et )النهاية، تخضع الليزوزومات، الميثاكوندري، و الغشاء البالزمي ألضرار غير عكسية

al., 1985).

على مستوى الشبكة األنذوبالزمية بواسطة CCL4كما هو معروف يبدأ ميثابوليزم الـ لتشكيل الجذر الحر مع إزالة C-Cl عن طريق نقل إلكترون إلى الرابطة P450(CYP2E1)كرومالسيثو

ارجـــــــاع يحدث لهذا الجذر الحر تفاعالت حيوية تحويلية من أكسدة و. جزيئة الكلوريد

et al., 1977) (Sipesيتمثل المماكب اإلنزيمي المستلزم في هذا المظام في الـ ، CYP2E1 . البعض و CYP2E1 نشاط الـCCL4 ؛ إذ يثبط الـCCL4 هذه األشكال يكون قابل للهدم من طرف الـمن

91

عندما يتم تثبيط تخليق البروتينات . (Dai et al., 1995)يختزل مستوى البروتينات الكلية في الخلية .CCL4 بواسطة الـCYP2E1 فإنه يظهر بشكل واضح تخريب الـ

في تخليق البروتين من طرف الخلية الكبدية في المجموعة في دراستنا، وجد انخفاض معنوي و هذا ما أكدته الدراسات المعاملة برباعي كلوريد الكربون بالمقارنة مع المجموعات األخرى

.(Smuckler et al., 1962 ; Brattin et al., 1985 )

يستخدم . الموت الخلوير حالة مشتركة منتعد فوق أكسدة الليبيدات عملية تحليلية ذاتية و تعتبيؤدي رباعي كلوريد الكربون عن . تثبيط فوق أكسدة الليبيدات كمؤشر مهم للنشاط المضاد لألكسدة

و في وجود األكسجين إلى توليد P450طريق تنشيط المسارات االستقالبية من خالل السيثوكروم الشيء الذي يؤدي إلى تخريب هذا األخير الذي يهاجم األغشية الخلوية،. °CCL3OOالمشتق النشط

هذا MDA (Malondialdehyde)البنية الغشائية الدقيقة، فوق أكسدة الليبيدات و زيادة مستويات .األخير الذي عبارة عن ناتج نهائي لفوق أكسدة الليبيدات و الذي يدرس بشكل واسع

لكل من MDA الـعدلمن خالل النتائج المتحصل عليها،الحظنا أن هناك ارتفاع جد معنوي في مالكلى و القلب بالنسبة للمجموعة المعاملة برباعي كلوريد الكربون بالمقارنة مع المجموعات ، الكبد

و تخريب ميوعة أغشية الخاليا و هذا ما بحدوث ظاهرة فوق أكسدة الليبيدات و يفسر ذلك األخرى . (Raja et al., 2007; Wen et al., 2006; Wu et al., 2007)أكدته العديد من الدراسات

عندما يختل التوازن بين المستويات الداخل خلوية لمولدات األكسدة و مضادات التأكسد، تنتج

من أجل الحماية و الوقاية من األفعال السامة . الجذور الحرة بشكل مفرط و تتراكم داخل الخليةلدفاع اإلنزيمية و غير اإلنزيمية التي لهذه الجذور الحرة، تقوم الخاليا بتطوير العديد من آليات ا

، جزيئات (GPx) الجلوثاثيون بيروكسيداز،(CAT)، الكثاالز(SOD)منها، السوبيرأوكسيد ديسموثاز ات منشأ لفينول و الفالفونويدات و أخرى ذ و متعددات ا(E,C,A)ذات منشأ خارجي مثل الفيثامينات

.(GSH)(Aust & Svingen, 1985 ; Guemouri et al., 1991)داخلي مثل الجلوثاثيون

من أجل استراتيجيات عالجية للعطب الكبدي و األمراض، علينا التسليم بأنه من المهم العثور على مركبات مضادة لألكسدة قادرة على توقيف األضرار الكبدية الناتجة عن الجذر الحر

Trichloromethyl عن الـ المتولد CCL4 . و قد لوحظ أن كل منCentaurea incana و Matricaria pubescens لهما القدرة على الحماية ضد األمراض التي تسببها الجذور الحرة، ألنها .تملك نشاط جذري آسر

92

Matricaria و Centaurea incana من خالل دراستنا وجدنا أن المستخلص الميثانولي لكل من

pubescens و يظهر ذلك جليا من خالل . األفعال الجذريةيمكن أن يقي و يحمي الخاليا الكبدية منالنتائج المتحصل عليها و المتمثلة في انخفاض تركيز إنزيمات الثرونزأميناز بشكل جد معنوي في

MPوكغ / مغ500 بجرعة CIالمجموعات المعاملة مسبقا بالمستخلصين الميثانوليين لكل من .ي كلوريد الكربونكغ سواء وحدها أو المتبوعة برباع/ مغ800بجرعة

في كال الدراستين المجرات على )العالج الواقي( انطالقا مما تحصلنا عليه، أدت المعاملة المسبقة

المحرضة MDA الـ بالمستخلصات الميثانولية إلى خفض معدالت البيضاءجرذان و الفئرانالن الفعل المضاد لألكسدة و برباعي كلوريد الكربون بصفة جد معنوية و واضحة، إنما يدل هذا ع

Centaurea الواقي للكبد من طرف المركبات النشطة المتواجدة في المستخلص الميثانولي لكل من

incana و Matricaria pubescens. و هذا سواء عند الجرذان أو الفئران البيضاء و كذا من خالل المجرات على خالل نتائج البحثمن عند الفئران البيضاء، في حين وجد CATارتفاع معدالت الـ المعاملة برباعي كلوريد الكربون ل الكثاالز في المجموعة، أن هناك زيادة في معدالجرذان البيضاء

Dwivedi et al., 2005 ; Padhy) و هي المالحظة التي ذهب إليها بالمقارنة مع المجموعات األخرى

et al., 2007) . متحصل عليها لدى الفئران البيضاء التي تتوافق مع وهي نتيجة مناقضة للنتائج الالعديد من النتائج و يمكن أن ننسب ذلك إلى المسار األيضي الذي يتأثر بظروف العمل لكال

السام الناتج عن رباعي كلوريد الكربون الذي النوعين من الحيوانات أو يمكن أن نفسر ذلك بالفعل . ساعة24لكثاالز المضاد لألكسدة بكميات مرتفعة خالل اأدى إلى حث الخلية على إنتاج إنزيم

، تجدر اإلشارة إلى Centaurea من بين التأثيرات البيولوجية التي تمارسها مختلف أنواع جنس الـ

.Centaurea iberica Trev(أن العديد منها موصى به بصفة خاصة ضد اإللتهابات مثل الخراجات

Ex Sprengel( و البواسير )Centaurea drahifolia Sm(، في التئام الجروح )Centaurea iberica

Trev. ex Sprengel, Centaurea virgata Lam., pterocaula Centaurea Trautv(، للحد من الحمى)Centaurea calcitrapa L., Centaurea iberica Trev. ex Sprengel, Centaurea jacea L.,

Centaurea solstitialis ssp. solstitialis( و الصداع ،)Centaurea solstitialis L. ssp. solstitialis ()Yesilada, 2002.(

و المستعملة بشكل Centaurea هناك طائفة واسعة من التأثيرات العالجية التي نسبت إلى أنواع الـمرض ( ء واسع في الطب الشعبي في جميع أنحاء العالم؛ منها المستعملة في أمراض الغدد الصما

، و األعراض المعدوـ )اآلالم الروماتيزمية، خافضة للحرارة( ، و اضطرابات التهابية )السكري، و )مدرة للبول، للحث على الحيض(، و األمراض البولية التناسلية )اإلسهال، عسر الهضم( معوية

ت ية و االلتهاباو الطفيل). مخفضة للضغط الدموي(مشاكل القلب و األوعية الدموية

93

Kaij-AKamb et al., 1992; Farrag(، و ما الى ذلك )، مضادة للمالريامضادات حيوية( الجرثوميةet al., 1993; Barrero et al., 1997; Orallo et al., 1998.(

في الطب التقليدي الصيني ضد الحمى و إلزالة السموم و Centaurea uniflora لقد استخدم نوع الـتيل األسيتات لهذا النوع يثبط فوق أكسدة الليبيدات الغشائية كما أظهرت قد أثبت أن مستخلص إ

و قد تم استخدام المستخلص المائي لنوع الـ. )Wei et al., 1997(تأثير مضاد لتصلب الشرايين

Centaurea chilensis في الطب الشعبي للحد من الحمى و اآلالم الروماتيزمية )Negrete et al.,

1984, 1993; Sepulveda et al., 1994( .كما تستعمل أيضا نوع الـ Centaurea ornate ضد اآلالم للحد Centaurea sinaica تستخدم الـ). Bastos et al., 1994; Vazquez et al., 1997(الروماتيزمية

و جد أيضا أن الشاي المحضر من أوراق مختلف أنواع الـ).Al-Easa et al., 1992(من الحمى

Centaurea يستعمل في تخفيض نسبة السكر في الدم، نأخذ كمثال على ذلك الـ Centaurea

Ornato )Bastos et al., 1994; Vazquez et al., 1997(،الـ Centaurea aspera, Centaurea seridis var. maritima et Centaurea melitensis) Kamanzi et al., 1983; Chucla et al., 1988.(

أيضا في الجهاز الهضمي أو كمنشط معدي، Centaurea طعم و المذاق، تستخدم أنواع الـبسبب ال في Centaurea pallascens و الـ)Centaurea melitensis )Kamanzi et al., 1983 مثل نوع الـ

Centaurea sinaica ، فضال عن ذلك تستخدم أيضا الـ)Ali et al., 1987 Ali et al., 1987(مصر ).Al-Easa et al., 1992( مدر للبولكمنشط

التي من أهم مميزاتها أنها Centaurea sinaica تنسب العديد من التأثيرات البيولوجية لنوع الـتأخر تكاثر الخاليا، مدرة للبول، مضادة للمالريا، مانعة لألورام، تستعمل للحساسية و كذا منشطة

).Al-Easa et al., 1992(للمعدة السسكويثربانويد القثون التي تملك مجال جد على كميات معتبرة من Centaureaع الـ تحتوي أنوا

; Rodriguez et al ., 1976)واسع في النشاط البيولوجي كمضادات ميكروبية، مضادة للفطريات

Robles et al., 1995) مضادة للسرطان، مخفضة لحرارة الجسم(Lee et al., 1977; Giordano et

al., 1992; Akbar et al., 1995). ية المعدمضادة للقرحةal., 2004) .(Yesilada كما تملك أنواع الزيوت الطيارة ذات النشاط المضاد Centaurea aladagensis الـ مثل Centaurea الـ

. (Bülent et al ., 2007)للميكروبات

يبيدات لألغشية جد واضح، و يرتبط بالبنية يعتبر الفعل الواقي للفالفونويدات إزاء فوق أكسدة الل

في نفس السياق، لهذه القدرة . الجزيئية و القدرة على التفاعل و الدخول في الطبقة الليبيدية الثنائيةالوقائية عالقة مباشرة مع توجيه الفالفونويدات في األغشية الحيوية و بالتالي بمعامالت االنتشار في

.الطبقات الليبيدية

94

دور موقف للتفاعالت المتسلسلة لفوق أكسدة 2.8 بمعامل انتشار يساوي quercetine الـهكذا،تلعب

+Fe2. المضاد لفوق أكسدة الليبيدات بقدرته على التقاط أيونات quercetineو يرتبط نشاط . الليبيدات األخرى مع توجد ثالث ميادين ممكنة تشكل معقدات مع المعادن التي يمكن أن تأثر الواحدة على

الموجودة على 'dihydroxy3' ،4 هذه األيونات، عن طريق الرابطة الهيدروجينية بين المجموعات ' hydroxy-5 و بين المجموعة C في الحلقة 'Carbonyl-4 و 'hydroxy-3، بين المجموعة Bالحلقة

.A في الحلقة'Carbonyl-4و كال النبتتين و المتعلقة بتقدير عديدات الفينـــول على in vitro و انطالقا من الدراسة المجرات

. و الفالفونويدات وجدنا أن كال النبتتين تحتويان كميات معتبرة من هذه الجزيئات المضادة لألكسدة

علــى فالفونويـــدات نبتـة 1992بينت الدراسة الفيثوكيميائية التي قام بها األستاذ عكال عام :تتركب أساسا من أنها Centaurea incana الـ

Methoxy-6 Quercetine, Methoxy-6 Apigenine, Methoxy-6 Luteoline, Methoxy-6 Kaempferol,

تملك العناصر البنيوية الثالث Methoxy-6 Quercetine جزيئة الـمن بين هذه المركبات نجد أن متزاوجة مع 3-2،رابطة ثنائية B على الحلقة Cathecolبنية: المضاد لألكسدةالضرورية للنشاط

لهذا السبب . أين تسمح بنشاط أقصى5 و3المجموعات الهيدروكسيلية في الموقع و oxo-4 الوظيفة .فان هذه المركبات عبارة عن مصائد فعالة للجذور الحرة

تتمتع بالخصائص و المميزات التي Centaurea incana الـمن خالل ما سبق نالحظ أن نبتة MDAالـ تسمح لها بأداء وظائفها المضادة لألكسدة و يبدو ذلك جليا من خالل انخفاض معدالت

بالنسبة للمجموعتين المعاملتين بالمستخلص الميثانولي سواء أكان لوحده أم المتبوع بالمادة السامة اء عند الجرذان أو الفئران البيضاء و كذا من خالل و هذا سوالمتمثلة في رباعي كلوريد الكربون

المجرات على من خالل نتائج البحث عند الفئران البيضاء، في حين وجد CATارتفاع معدالت الـ المعاملة برباعي كلوريد الكربون ل الكثاالز في المجموعة، أن هناك زيادة في معدالجرذان البيضاء

Dwivedi et al., 2005 ; Padhy) و هي المالحظة التي ذهب إليها بالمقارنة مع المجموعات األخرى

et al., 2007) . وهي نتيجة مناقضة للنتائج المتحصل عليها لدى الفئران البيضاء .

و يمكن تفسير هذه النتائج عن الفعل السام الناتج عن رباعي كلوريد الكربون الذي أدى إلى حث . ساعة24ز المضاد لألكسدة بكميات مرتفعة خالل الكثاالالخلية على إنتاج إنزيم

95

إال Matricaria pubescens الـال توجد دراسات ال فيثوكيميائية و ال بيولوجية أجريت على نبتة Matricaria discoidea أن نوع الـحيث وجدالدراسات المجرات على نفس الجنس؛أنه هناك بعض

luteolin (Prosovskii &Oleshko, 1986) المركبات في جزيئة الـتمثل أبرزغني بالفالفونويدات و ت

و قد وجد أن نوع الـ. هذه األخيرة المصنفة في المراتب األولى لنشاطها المضاد لألكسدة

Matricaria recutita ،يستعمل بشكل واسع في الطب الشعبي بسبب تأثيراتها المضادة لإللتهابكما . (al., Avallone et 2000; Fidler et al., 1996 ) و كذا الفطرياتمسكن لآلالم، مضاد للبيكتيريا

هذه rutin و gallic acid, quercetin يتميز هذا النوع بغناه بالمركبات الفالفونية التي منهاالمركبات المشهورة بفعاليتها المضادة لألكسدة من خالل تثبيطها لفوق أكسدة الليبيدات و كذا

). Pereira et al., 2008) DPPHة لجذر الـفعاليتها اآلسر

Matricaria والتي قادت إلى غنى نبتة 2007 و مرافقوه عام Zaiterأما الدراسة التي قام بها

chamomilla بالسسكويثربانويد القثون هذه الجزيئات المشتهرة بفعاليتها القصوى المضادة للبيكتيريا الذي يتمتع بغناه بجزيئات Centaureaعائلة نبات الـ و هي نفس المالحظات التي وجدت عند

. السسكويثربانويد القثون

و انطالقا من النتائج ،Matricaria pubescens الـبما أنه ال توجد أية دراسات بيولوجية على نبتة

الـ المتحصل عليها في دراستنا، يمكننا القيام بعملية اسقاطية التي من خاللها نستنتج أن نبتةMatricaria pubescens بشكل فعال و ذلك تملك بدورها مركبات تتمتع بخصائص مضادة لألكسدة

. Matricariaمن خالل عملية المطابقة مع أنواع أخرى من نفس جنس نبات الـ نسبة النشاط الواقي للكبد لهذه النبتة و الذي يساوي من خالل واقية للكبد أنها يمكن إثبات كما

و أيضا انطالقا من 60% الذي يساويCentaurea incana إذا قمنا بمقارنته مع نبتة %79.80 في المجموعات المعاملة مسبقا بالمستخلص الميثانولي عند الجرذان MDA للـ المعدالت المنخفضة

.و الفئران بمقارنتها مع المجموعة المسممة برباعي كلوريد الكربون

Centaurea نة للوقاية الكبدية الناتجة عن المستخلصين الميثانوليين لكل منقد تكون لآلليات الكام

incana و Matricaria pubescens صلة بكل من الخصائص الجذرية المخلبية و الفعل غير لكن العديد من الدراسات ينبغي أن تتطرق لهما في . المباشر كمنظمات لألنظمة المضادة لألكسدة

.المستقبل

96

VII-الخالصة: منها رباعي كلوريد الكربون على السمية الكبدية، حيث الكيميائية ثر العديد من العقاقير و المواد تؤ

هذا العطب، و ذلك بالرغم من تأكيد العديد من ثال يزال يخيم الكثير من الغموض على آلية حدوالحديثة التي تمحورت حول هذا الموضوع على التأثير الكبير الذي يلعبه اإلجهاد نتائج الدراسات

التأكسدي الناتج عن تحول رباعي كلوريد الكربون إلى جذر ثالثي كلور الميثيل على مستوى الشبكة األنذوبالزمية و الدور الرائد لمضادات األكسدة سواء بالتخفيف أو القضاء على األضرار

من بين مضادات األكسدة النشطة نجد متعددات الفينول المتواجدة على . ا الجذور الحرةالمتسببة فيه حيث بينت ائيا فعاال في إلغاء هذه األضرار،مستوى المستخلصات الميثانولية و التي لعبت دورا وق

:الدراسة التي أجريت على الجرذان و الفئران البيضاء ما يليول عن السمية ؤكغ في صفاق البطن مس/ مل3 بجرعة يكون حقن رباعي كلوريد الكربون -

ارتفاع مستويات اإلنزيمات ( ساعة و ذلك من خالل الفحص الوظيفي للكبد24الكبدية بعد و المتمثلة في تضرر الخاليا البرانشيمية أي حدوث عطب كبدوـ خلوي البالزمية الموضحة ل

.MDA و المتمثلة في الـو كذا مؤشرات اإلجهاد التأكسدي )TGP و الـTGOالـ

لكل من في حين أن، المعاملة المسبقة للحيوانات بالمستخلصين الميثانوليين سواء بالنسبة -

Centaurea incanaكغ للفئران البيضاء أو / مغ100كغ للجرذان البيضاء أو /مغ 500 بجرعةMatricaria pubescens لفئران البيضاء كغ ل/ مغ200كغ للجرذان البيضاء أو/ مغ800 بجرعة

ة ــأدت إلى خفض حدة السمية الكبدية الناتجة عن المعاملة برباعي كلوريد الكربون بجرعو ال يمكن أن نفسر ذلك إال بفعل الجزيئات المتواجدة في . كغ في صفاق البطن/مل 3

الحيوي المستخلصين الميثانوليين الملتقط و اآلسر و المعدل للجذور الحرة الناتجة عن التحوللرباعي كلوريد الكربون إلى جذر ثالثي كلور الميثيل عن طريق نظام إزالة السمية على

المستخلصين الميثانوليينمن خالل منح اإللكترونات المتواجدة على مستوى ( مستوى الكبدCCL3 إلى الجذر الحر

إلرجاعه أكثر استقرارا أو من خالل تقديم ذرات الهيدروجين °ي عديد التشبع المؤكسد مانعا بذلك عملية أكسدة الليبيدات من خالل تثبيط مرحلة للحمض الذهن

).اإلنتشار بجرعة Centaurea incana لم تؤدي المعاملة بالمستخلصين الميثانوليين لوحدهما لكل من -

كغ للجرذان البيضاء إلى تحريض أي / مغ800 بجرعة Matricaria pubescensكغ و /مغ500سمية، في حين أنها قامت بتدعيم حماية العضوية ضد األنواع األكسيجينية النشطة عالمة

.الناتجة فيزيولوجيا

98

أظهرت المعطيات الخاصة بالدراسة الحالية بوضوح مدى فعالية المستخلصين الميثانوليين لكل من محرضة برابع المضادة لألكسدة و ال Matricaria pubescens و الـ Centaurea incana نباتي الـ

كلوريد الكربون و هي دراسة طليعية تمهد المجال للعديد من اآلفاق المستقبلية للتجدر و التعمق في :فهم آليات تأثير الجزيئات الفعالة و ذلك من خالل

o فصل و تحديد و دراسة المركبات ذات الفعالية المضادة لألكسدة الناتجة من

و Matricaria pubescens الـ و Centaurea incana الميثابوليزم الثانوي لنباتي الـ -ذلك باإلعتماد على تقنيات الكروماثوغرافيا بأنواعها المختلفة كروماثوغرافيا الورقة

و UV و كذلك باإلستعانة بالطرق الفيزيوكيمائية من طيف...كروماثوغرافيا العمودصيغ البنيوية للمركبات لتحديد الRMNطيف الكتلة و الرنين النووي المغناطيسي

.الفعالة

o تحديد الجزيئة أو الجزيئات الفعالة المسؤولة عن الوقاية من السمية الكبدية المحرضة مع تحيد الجرعة أدت إلى تنشيط آليات الدفاع الخلويبرابع كلوريد الكربون و التي

.المالئمةo زيئات الفعالة على مستوىدراسة على المستوى الجزيئي لمعرفة كيفية تأثير الجالقيام ب

.الجيناتo إجراء دراسة الحركية الصيدالنية للجزيئات الفعالة من أجل تحديد موقع و آلية تأثيرها

.على مستوى الخاليا الكبدية

o تحديد التراكيز إذا زاد الشيء عن حده انقلب إلى ضده، انطالقا من هذا المفهوم يجب .ن الميثانوليين المستخلصيالناتجة عنالمحرضة لألكسدة

99

:امللخص بالعربية

جمموعة متنوعة من املواد الكيميائية املختلفة، مبا يف ذلك اجلذور احلرة )ROS (تضم أنواع األكسجني النشطة و غريها ،)°OH(، و جذور اهليدروكسيل )-O2°(لسوبريأوكسيد ، مثل أنيون ا)احملتوية على إلكثرونات حرة جد نشطة(

و جذور -O2° وبناء عليه، فإن بعض هذه األنواع، مثل .)H2O2(من األنواع اجلزيئية، مثل حالة بريوكسيد اهليدروجني يكون ذو انتشار حر و عمر طويل H2O2 تكون غري مستقرة، يف حني أن البعض اآلخر، مثل الـ°OH الـفهي اليت تنتج أثناء . التأكسديدهلذه اجلذور احلرة عالقة سببية باإلجها .(Landmesser & Drexler, 2006)نسبيا

و السوبريأوكسيد P450 إنزميات السيثوكروم عملية االستقالب اخللوي العادي، مثل األيض امليثاكوندري، و حتت تأثريحالة عدم التوازن حب لألنواع األكسجينية النشطة حيث تؤديينتج اإلجهاد التأكسدي من التعرض غري املست. أوكسيداز

يزداد ختليق اجلذور احلرة يف العديد من . بني مولدات األكسدة و املواد املضادة لألكسدة إىل تلف اخلاليا و إصابة األنسجة .إخل...فيها أمراض القلب و السكري، إصابات كبدية، السرطان و الشيخوخة، احلاالت الباثولوجية، مبا

(Giordano, 2005 ; Rolo & Palmeira., 2006 ; Jaeschke, 2000 ; Bokov et al., 2004).

تشري الدراسات احلديثة إىل أنه قد يكون لإلجهاد التأكسدي منشأ حموري يف أمراض الكبد مبا فيها العقاقري احملرضة للعطب دادــج عن االنســدي الناتــب الكبـلفريوسي، العطالكبدي، التهاب الكبد الناتج عن الكحول، التهاب الكبد ا

( Albano, 2002 ; Amin & Hamza., 2005 ; Jaeschke et al., 2002) .

وبداية سلسلة وسائط من األنواع األكسجينية النشطة مسببة . يؤدي اإلنتاج املفرط للجذور احلرة إىل تسمم اخللية الكبدية .(Gutteridge, 1993 ; Pessayre, 1995 ; Sies, 1991 ) تلف حاد للكبدموت اخللية الكبدية مما يؤدي إىل

، الكثاالز (SOD)يكون احلفاظ على التوازن بني اجلذور احلرة و مضادات األكسدة خاصة السوبريأوكسيد ديسموثاز

(CAT)، اجللوثاثيون بريوكسيداز (GPx)، اجللوثاثيون (GSH) الفيثامينات، (E,C,A)الفينول و و متعددات .الفالفونويدات، ذو أمهية كربى، و ميكن أن يكون آلية رئيسية يف الوقاية من األضرار الناجتة عن اإلجهاد التأكسدي

.(CCL4)حيث يعتقد أن هذا التوازن يلعب دور هام يف السمية الناجتة عن العقاقري، مثل رباعي كلوريد الكربون

ادـرض احلـد بعد التعـــم للكبـل مسمــون كعامــد الكربــيي كلورــى أن رباعـيعرف قدميا عل( Recknagel, 1967 ; Recknagel et al., 1989) ملدة ( و يتسبب يف تليف الكبد بعد التعرض املزمن

أين يتفاعل أساسا مع األعضاء و خاصة منها الكبد عن طريق خصائصه الكيميائية .(Rubin & Poper,1967))طويلة ع اجلزيئات األساسية احمليطة، عن طريق تشكيل روابط قوية مع الليبيدات امليكروزومية و الربوتينات الغشائيةالنشطة م

(Gastro & Diaz-Gomez, 1972 ; Diaz-Gomez et al., 1973)ديةــ و من خالل األكسدة الليبي (Comporti et al., 1965 ; Ghozal & Recknagel, 1965 ; Recknagel, 1967).

& Rouillerأثبتا ". مولد أكسدة"ي كلوريد الكربون عبارة عن ــ أول من اقترح أن رباعم1948 عام Hove يعترب

101

Oberling أن تطور األمراض املتقدم حيدث عن طريق الشبكة األونذوبالزمية و يعتقد أن تنشيط رباعي م1956 عام م أن رباعي كلوريد الكربون يتأيض حيويا 1961 عام Bulterبني . كلوريد الكربون يتم من خالل املسار امليكروزومي أن أول ختريب م1966 عام Ghoshal & Recknagelاعتقدا . إىل كلوروفورم و هذا يف غياب األكسيجني

Bulter و قد اعترب. بيوكيميائي حيدث من خالل السمية الناجتة عن رباعي كلوريد الكربون هو فوق أكسدة الليبيداتعي كلوريد الكربون يتحول إىل، جذر حر، عن طريق املسار امليكروزومي، الذي من خالله حتفز سلسلة من أن ربا

األكسدة الذاتية على مستوى الليبيدات البنائية للميكروزومات و امليثاكوندري، مما يؤدي إىل تراكم الذهون و تنخر CCL3 الـون يتحول يف امليكروزومات إىل جذر، أن رباعي كلوريد الكربم1966 عام Slaterافترض أيضا . خلوي

° و تراكم الدهون " االنتشار"الذي يشرع يف عملية فوق أكسدة الليبيدات، و يرى أنه يتسبب يف التنخر عن طريق عملية

)".متركزي(املوضعي "عن طريق املسار

اس بسالمة األغشية و عن طريق تشكيل من املهم أن نشري إىل أن فوق أكسدة الليبيدات تؤدي إىل أضرار عن طريق املس، أخريا تؤدي إىل عملية تنخر و تلف الكبد بشكل GSHروابط قوية للوسائط النشطة مع اجلزيئات البيولوجية املهمة مثل

.عاميقاس تأثري مضادات األكسدة على اإلجهاد التأكسدي من خالل إجراء بعض املؤشرات احليوية، مبا يف ذلك األنشطة

thiobarbituric املختزل، و كذا مستويات محض الـGSHوCAT، SOD ، GSH-Pxية لكل من الـ األنزمي.(TBARs) مقياس غري مباشر عن إنتاج اجلذور احلرة)Maritim et al., 2003; Johansen et al., 2005;

Valko et al., 2007.(

تعمل يف اجلزائر بعض النباتات الطبية و مستحضراهتا تس. تلعب األدوية العشبية دورا كبريا يف عالج اضطرابات الكبد حيث ).Ould El Hadj et al., 2003; Maiza et al., 1993 (لعالج أمراض الكبد يف إطار النظم التقليدية للطب

من النباتات املستعملة يف الطب الشعيب إذ Matricaria pubescens الـو Centaurea incana تعترب كل من الـ ,.Aclinou et al( إىل العائلة املركبة، فتعد األوىل من النباتات الربية، تستعمل جذورها ألمراض الكبد حسب تنتميان

، يف حني تستعمل الثانية يف االلتهابات الداخلية و اخلارجية، احلكة يف اجلسم، تطهر األعضاء الداخلية للمرأة بعد )1982 . الكبدالوالدة، تفيد يف تساقط الشعر و كذا أمراض

و الـCentaurea incana (CI) الـ نبايت اهلدف الرئيسي من هذه الدراسة هو تقييم النشاط الواقي للكبد من طرف

Matricaria pubescens (MP) و ذلك للتأكد من إمكانية االستعمال الشعيب هلذه النباتات ضد اضطرابات الكبد .د للسمية الكبدية احلادة احملرضة برابع كلوريد الكربون عن طريق املعاملة قمنا يف الدراسة احلالية، بإجراء النشاط املضا

.M. pubescens و الـC. incana الـاملسبقة باملستخلصات امليثانولية لكل من

102

املواد و الطرق الكواشف و املواد الكيميائية املستعملة

butylated) ، العامل الكيميائي املضاد لألكسدة DPPH (diphenyl-1-picrylhydrazyl-'2,2)جذر الـمت شراء

hydroxytoluene) BHTمحض اللينولييك، الـ ،β-كاروتني و .Tween 40الروتني و الكرستني و محض الغاليك ، ، رباعي كلوريد الكربون Trichloroacetic ، محض Thiobarbituricمحض .(H2O2)بريوكسيد اهليدروجني

)CCL4( من شركةSigma.

)in vitro(الدراسة اجملراة خمربيا

:حتديد النشاط اآلسر للجذور احلرة-diphényl-2-1,1(يرتكز نشاط املستخلصات اآلسر للجذور احلرة على القدرة اآلسرة للجذر احلر املستقر

picrylhydrazyl (DPPH)( بطريقة ،)Cuendet et al., 1997; Burits & Bucar , 2000 .(شاط يتم قياس الن عن طريق القدرة على منح ذرة Matricaria pubescens و الـ Centaurea incana اآلسر ملستحلصي الـ

ميكروليتر من 50حتدث التجربة عن طريق إستعمال . املستقر املستعملDPPH هيدروجني أو القدرة على أسر جذر الـ و يتم حضن املزيج يف درجة %0.004لتركيز ذو اDPPH مل من احمللول امليثانويل للـ5كل عينة مضافة اىل

يتم حساب الفعل اآلسر . نانوميتر517 دقيقة و يتم حتديد اإلمتصاصية الضوئية لكل حملول عند 30م ملدة °25حرارةيتم . لكل عينة باملقارنة مع الفعل اآلسر لكل من الكرستسن و الروتني و محض اجلاليك مع إعادة كل إختبار ثالث مرات

: باستعمال املعادلة التاليةDPPH القدرة على أسر جذر الـحساب . متثل اإلمتصاصية الضوئية للشاهدAcont: أين

Atest متثل اإلمتصاصية الضوئية يف وجود عينة املستخلص . مل املثبط / املغ بتركيز املستخلص بIC50 تعرف قيمة الـ. IC50 يتم التعبري عن النشاط املضاد لألكسدة بواسطة الـ

. املتشكلDPPH من حذر الـ% 50لـ

:محض اللينولييك/ كاروتني- β اختبار الـمحض اللينولييك بواسطة / كاروتني- βيتم حتديد النشاط املضاد لألكسدة للمستخلصات باستعمال نظام منودجي للـ

مل من 1 مغ منه يف 0.5 كاروتني بإذابة β- ـ يتم حتضري املزيج املكون من حملول ال).Aslan et al., 2006(طريقة مغ من الـ200 ميكروليتر من محض اللينولييك و 25م، يتم إضافة °40بعد تبخري الكلوروفورم حتت . الكلوروفورمTween 40 . 2500نضع . مل باملاء املقطر املشبع باألكسجني مع الرج القوي100يتم إكمال حجم املزيج الناتج اىل

2 ميكروليتر من العينات احملضرة يف امليثانول بتركيز 350ر من اخلليط التفاعلي يف أنابيب إختبار و نضيف له ميكروليتبعد فترة ). BHT(يكرر نفس العمل مع الشاهد املوجب . ساعة48حتضن األنابيب يف درجة حرارة مثلى ملدة . مل/مغ

يتم مقارنة القدرة املضادة لألكسدة للمستخلصات مع الـ نانومتر و490احلضن، يتم قياساإلمتصاصية الضوئية عند BHTيف نفس التركيز .

103

:حتديد حمتوى الفينوالت الكلية و الفالفونويدات Matricaria و الـ Centaurea incana مت حتديد احملتوى الفينويل للمستخلص امليثانويل لكل من الـ

pubescens باستعمال طريقة أزرق بروسي )Prussian bleau ( من طرفPrice وButler )1977( مع بعض ، مل من املستخلص 0.1مت ختفيف . باستعمال محض اجلاليك كمركب مرجعي) Graham) 1992التغريات من طرف

، مث ) نFeCl3 )0.002 مل من الـ1بعد دقيقة واحدة، يتم اضافة . مل من املاء املقطر مع الرج القوي3امليثانويل يف و %85 محض الفوسفوريك ،%1الصمغ العريب ( مل من احمللول املثبت 5مت بعد ذلك إضافة . دقيقة15زيج ملدة يترك امل

نانومتر يف جهاز التحليل الطيفي باملغايرة 700يتم قراءة اإلمتصاصية الضوئية عند ). ح:ح: ح3: 1:1املاء املقطر بنسبة و Centaurea incana ولية الكلية للمستخلص امليثانويل لكل من الـمت حتديد تركيز املركبات الفين. مع املاء املقطر

. بعدد امليليغرامات املوافقة حلمض اجلاليك لكل غ من وزن املستخلص اجلافMatricaria pubescens الـ

Matricaria و الـ Centaurea incana مت حتديد حمتوى الفالفونويدات يف املستخلص امليثانويل لكل من الـpubescens من طرف )Boharun et al., 1996(مل 1مت مزج . باستعمال الكرستني و الروتني كمركبات مرجعية

نانوميتر 430، مت قراءة اإلمتصاصية الضوئية عند )%2( مل من كلورور األلومنيوم 1من املستخلص امليثانويل املخفف مع Centaurea دات املوجودة يف املستخلص امليثانويل لكل من الـيتم حتديد التركيز الكلي للفالفونوي. دقائق10بعد

incana و الـ Matricaria pubescens بعدد امليليغرامات املكافئة للكرستني و الروتني لكل غرام من وزن .املستخلص اجلاف لكل نبتة

: على احليوناتالدراسة اجملراة

حيوانات التجارب- 110 تتراوح أوزاهنا بني )wistar albino rats(ية ذكور بالغة للجرذان البيضاء استخدمت يف هذه الدراسة التجريب

و قد مت تربيتها يف أقفاص من . غ30-25 تتراوح أوزاهنا بني (albino mices) غ، و ذكور بالغة للفئران البيضاء130و قد كانت درجة حرارة املكان . اء و امل مع وفرة الغـذاء) ستة إىل مثانية حيوانات يف كل قفص( البالستيك و احلديد

. م°25املخصص لتربية احليوانات مثلى يف حدود معاملة احليوانات

على مسية ) Centaurea incanaو Matricaria pubescens (من أجل دراسة التأثري الواقي للمستخلصني النباتيني :كان العمل كمايليرباعي كلوريد الكربون، أجريت الدراسة على نوعني من احليوانات ف

: على اجلرذان البيضاءالدراسة اجملراة

بزيت Iحقنت اجملموعة . جرذان يف كل جمموعة7و 5مت توزيع احليوانات على ستة جماميع خمتلفة، تراوح عددها بني ق البطن إلصابة كبدية حادة عن طريق احلقن يف صفاIIمت تعريض اجملموعة . الزيتون فقط و اعتربت جمموعة الشاهد

أعطيت . كغ من وزن جسم اجلرذ/ مل3 املذاب يف حجم مساوي من زيت الزيتون جبرعة CCL4جبرعة واحدة من الـ املستخلص IVأعطيت اجملموعة . كغ/ غ م500 وحده جبرعة C. incana لـ املستخلص امليثانويل لIIIاجملموعة كغ من وزن / مل3 جبرعة CCL4 يف صفاق البطن بالـكغ مث حقنت / غ م500 جبرعة C. incana لـلامليثانويل

104

أعطيت . كغ/ غ م800 وحده جبرعة M. pubescensلـلاملستخلص امليثانويل V أعطيت اجملموعة. جسم اجلرذ CCL4بالـكغ مث حقنت يف صفاق البطن / غ م800 جبرعة M. pubescensلـل املستخلص امليثانويل VIاجملموعة

ساعة بعد عملية حقن 24 أسابيع من املعاملة، مت قتل كل احليوانات 4بعد . جسم اجلرذكغ من وزن/ مل3جبرعة .م°20-، مت أخذ الدم منها، مث حفظ املصل يف CCL4الـ

: على الفئران البيضاءراةالدراسة اجمل

زيت الزيتون لوحده Iأعطيت اجملموعة . جماميع و كان عددها مثانية فئران يف كل جمموعة5مت تقسيم احليوانات إىل إلصابة كبدية حادة عن طريق احلقن يف صفاق البطن جبرعة واحدة من IIمت تعريض اجملموعة . واعتربت جمموعة الشاهد

IIIأعطيت اجملموعة . كغ من وزن جسم الفأر/ مل3 املذاب يف حجم مساوي من زيت الزيتون جبرعة CCL4الـكغ / مل3 جبرعة CCL4بالـكغ مث حقنت يف صفاق البطن / غ م100 رعةجب C. incana لـلاملستخلص امليثانويل كغ مث حقنها يف / غ م200 جبرعة M. pubescensلـل املستخلص امليثانويل IVأعطيت اجملموعة . من وزن جسم الفأر

0.33 مادة الكرسيتني جبرعة Vأعطيت اجملموعة . كغ من وزن جسم الفأر/ مل3 جبرعة CCL4بالـصفاق البطن .كغ من وزن جسم الفأر و أخذت كجزيئة مرجعية/ مل3كغ مث حقنت يف صفاق البطن بالـ جبرعة /مع

AST, ALT مصلتقدير مستويات ، كمقياسني كميني لإلصابة الكبدية الناجتة )AsT( و األسبارثات أمينو ثرانسفرياز )AlT(يعترب األالنني أمينو ثرانسفرياز

من نوع ) Autoanalyser( يف املصل باستخدام احمللل الذايت AsT وAlTنشطة مت قياس أ. CCL4الـعن )Architedt c system(.

TBARsتقدير املواد الكلية للـهنية النامجة الد، الناتج النهائي من املادة )Malonyldialdehyde) MDA ، مؤشر عن TBARsالـمتثل مستويات

و يعرب عنها )TBARs( للجزيئات النشطة thiobarbituricالـريق محض مت تقييمها عن ط. عن اإلجهاد التأكسدي .م1979 و مرافيقوه عام Okhawaغ من وزن النسيج و مت حتديدها بواسطة طريقة /بالنانومول

thiobarbituricيضاف له احمللول املائي حلمض الـ) ح/ و%10( من النسيج املتجانس مل500باختصار، يأخذ . دقيقة15م ملدة °95و يوضع يف محام مائي ) مل 20 % ،0.5 (trichloroaciticالـو محض ) مل1 ، 0.67%(

ة ـــــتفصل طبق. بيوثانول و خيلط بقوة-n مل من الـ4يربد املعلق يف درجة حرارة املخرب، بعد التربيد، يضاف n- يأخذ السائل الطايف ذو اللون الوردي و تقرأ . ة دقيق15دقيقة ملدة / دورة 3000 بيوثانول بعملية الطرد املركزي عند

تقارن النتائج . MDAالـ نانومتر لتقدير كمية 530الكثافة الضوئية بواسطة جهاز الـمطياف الضوئي على طول موجة .، و يعرب عن النتائج بالنانومول يف كل غرام من وزن النسيج)Malonyldialdehyde) MDAللـمع املنحىن املعياري

ية الكاتالزنشاط

ميكروليتر من القطفة الطافية املتجانسة 50مت إضافة . (Clairborne, 1985)مت قياس نشاط الكاتالز من خالل طريقة احملضر يف منظم الفوسفاط ) ميلي مولH2O2 ) 19 من الكواتز، يبدأ التفاعل مباشرة بعد إضافة الـcuvetteللعينة إىل

105

)50mM , PH 7.0 .(دل حتلل الـمت قياس مع H2O2 120 نانومتر خالل 240 بواسطة جهاز املطياف الضوئي يف .دقيقة/ غ من وزن النسيج /ثانية، مت التعبري عن نشاط الكاتالز بالـ ميلي مول

قياس وزن اجلسم يف مت قياس وزن جسم اجلرذان. رنة مع اجملموعة الشاهدةا باملقCCL4للـمت قياس وزن جسم اجلرذان بعد إعطائهم

. و مقارنة التغريات احلاصلة يف الوزن يف كل جمموعةCCL4الـاجملموعات قبل وبعد إعطاء

التحليل اإلحصائي و لقد مت مقارنتها SEM) ± (means اخلطأ املعياري املتوسطي ±باملتوسطات (Data) مت إيضاح كل املعطيات

باستعمال اختبار . One way analysis of variance[ (ANOVA)) أنوفا([باستعمال طريق واحد لتحليل التباين 0.05 أقل أو يساوي Pيظهر الفرق مستوى . Tukey- Kramer ( test)ر كراما-املقارنة املتعدد عن طريق توكاي .على أهنا ذات داللة إحصائية

و املناقشةالنتائج

يعرف على . )Oyaizu, 1986(اد لألكسدة ككاشف لتقييم النشاط اآلسر للجذر احلر املضDPPH يستعمل عادة الـ عبارة عن جذر حر مستقر، ميكنه أن يستقبل إلكترون أو جذر اهليدروجني ليصبح جزيئة أكثر استقرارا DPPH أن الـ

)Soares et al., 1997( .يتم حتديد القدرة اإلرجاعية جلذر الـ DPPH عن طريق اإلخنفاض يف اإلمتصاصية الضوئية تستعمل كل من الكرستني و الروتني و محض اجلاليك كجزيئات . ر احملرضة بواسطة مضادات األكسدة نانومت517عند

يكون ترتيب الفعل . املستقر اىل ذو اللون األصفرDPPH تكون املستخلصات قادرة على إرجاع جذر الـ. مرجعية و كذا Matricaria pubescens و الـ Centaurea incana اآلسر لكل من املستخلصني امليثانوليني للـ

الروتني < ) مل/ مغCentaurea incana ) 0.369 : على النحو التايلDPPH اجلزيئات املرجعية مع جذر الـ 0.058(محض اجلاليك < )مل/مغ0.162( Matricaria pubescens< ) مل/ مغ0.34(الكرستني < )مل/ مغ0.361( ).28شكل (لجذور احلرة من طرف املستخلصات امليثانولية كشفت املعطيات التجريبية عن الفعل اآلسر ل).مل/مغ

محض اللينولييك بقياس تثبيط املركبات العضوية / ـ كاروتنيβ يتم حتديد القدرة املضادة لألكسدة عن طريق معايرة الـ، و )Tepe et al., 2005 Tepe et al., 2005(و كذا جذور اهليدروبريوكسيد النامجة عن أكسدة محض اللينولييك

,.Mata et al(قد إستخدم هذا الفحص حملاكاة أكسدة مكونات الليبيدات الغشائية اخللوية يف وجود مضادات األكسدة

Matricaria و الـ Centaurea incana تكون النتائج املتحصل عليها إنطالقا من مستخلصي الـ. )2007pubescens ذين املستخلصني تثبيط عايل لفوق أكسدة ، إذ تظهر عينات ه29 و الشكل 8 موضحة يف اجلدول

يف %)BHT )96.04 مل أعلى من نسبة الـ/ مغ2على الترتيب يف تركيز % 100.25و % 97.05الليبيدات بنسبة .نفس التركيز

اعلة تشري املنهجية املتعلقة هبذه الدراسة اىل أن الفينوالت النباتية تشكل واحدة من اجملموعات الرئيسية للمركبات املتف

و لذلك فاجلدير بالذكر هو حتديد احملتوى الكلي هلذه املركبات يف . كمضادات أكسدة أولية أو جذور حرة طرفية

106

باعتبار أن الفالفونويدات واحدة من أهم املركبات األكثر تنوعا على نطاق وسع ، فإهنا تعترب من . النباتات حتت الدراسةمتلك هذه املركبات جمال واسع من األنشطة ). Agrawal, 1989 Agrawal, 1989 (أهم املركبات الفينولية الطبيعية

.الكيميائية و البيولوجية مبا يف ذلك اخلصائص اآلسرة للجذور احلرة موضح يف Matricaria pubescens و الـ Centaurea incana يكون احملتوى الفينويل الكلي املوجود يف الـ

حيتوي Matricaria pubescens و الـ Centaurea incana من الـ) غ1(حيث مت الكشف على أن . 7اجلدولتعرف املركبات الفينولية بقدرهتا املضادة . مغ من الفينوالت املكافئة حلمض اجلاليك على الترتيب53.27 و 27.11على

رهتا اآلسرة إذ تعد الفينوالت مركبات نباتية جد هامة بسبب قد). Shahidi & Wanasundara, 1992(لألكسدة تساهم مباشرة املركبات . )Hatano et al., 1989 Hatano et al., 1989(الحتوائها على جمموعات اهليدروكسيل

تعترب قدرة هذه املركبات . الفينولية يف التأثري املضاد لألكسدة فهي تنتشر بشكل واسع يف املنتجات النباتية الثانوية متعددات الفينول ذات وظائف عديدة بالتفاعل كعوامل مرجعية، و تعد. كمضادات أكسدة واضحة بشكل جيد

).Rice-Evans et al., 1996(مضادات أكسدة معطية للهيدروجني و كآسرات لألكسجني األحادي

Matricaria pubescens و الـ Centaurea incana يكون احملتوى الكلي للفالفونويدات املوجود يف الـ Matricaria pubescens و الـ Centaurea incana من الـ) غ1( الكشف على أن مت. 7موضح يف اجلدول

مغ من 43.44 و 24.46 مغ من الفالفونويدات املكافئة للكرستني على الترتيب و كذا 20.00 و 11.7حيتوي على .الفالفونويدات املكافئة للروتني على الترتيب

ل التأثري الواقي اخللوي و الكبدي للفالفونويدات، ال سيما فيما يتعلق كان هناك اهتمام كبري يف السنوات األخرية حوتكون الفالفونويدات املعطية لإللكترونات معروفة جيدا خبصائصها املضادة لألكسدة . بنمط تأثريها كمضادات لألكسدة

يتم حتديد ).in vitro ()Bors et al. 1995; Castelluccio et al., 1995, Rice-Evans et al., 1996(خمربيا ثنائي هيدروكسي كاثيكول على احللقة ـ ، 4، 3القدرة اإلرجاعية للفالفونويدات بنيويا، بواسطة منودج اهلدركسلة،

. على احللقة -4الرابطة الثنائية املتزاوجة مع الوظيفة

,.Castelluccio et al(ة الليبيدات بينت العديد من الدراسات فعالية الفالفونويدات املضادة لألكسدة يف تثبيط أكسد1995, Salah al., 1995; Hirano et al., 2000.( باإلضافة اىل ذلك، فإن قدرهتا على التفاعل كمضادات

Brown et al., 1998; Morel et al., 1998 Brown et(ألكسدة يف املخرب يستند على قدرهتا املخلبية للمعادن al., 1998; Morel et al., 1998( و كذا على أسر األكسجني األحادي )Tournaire et al., 1993

Tournaire et al., 1993.( و لكن، على الرغم من أن الفالفونويدات تتفاعل بسرعة مع األنواع األكسيجينية النشطة .يف األنظمة الكيميائية ، فإن تفاعلها حيويا يعتمد على النمودج البيولوجي للخاليا و األنسجة

ى الرغم من أن جمموعة املعطيات املوضحة لفعل الفالفونويدات أهنا مضادات أكسدة أو على أهنا معدالت للوظائف علالربوتينية على نطاق واسع، فإن القليل فقط يعرف عن قدرهتا املضادة لألكسدة و كذا النشاط احليوي ملشتقات

عند الثدييات اىل أن معظم م1960-1950 منذ وقد أشارت الدراسات. الفالفونويدات على املستوى اخللوي Schoeter et(الفالفونويدات تكون متزاوجة و تستقلب بشكل رئيسي يف الكبد أو هتدم عن طريق ميكروفلورا الكولون

al., 2002.(

107

Matricaria pubescens و الـ Centaurea incana بصفة عامة، أظهرت املستخلصات امليثانولية لكل من الـ

محض اللينولييك باملقارنة مع اجلزيئات املرجعية / ـ كاروتنيβ و الـDPPH اط عايل مضاد لألكسدة، جذر الـنشقد يكون التأثري املضاد لألكسدة للمستخلصني امليثانوليني لكل . BHT مثل الكرستني و الروتني و محض اجلاليك و الـ

و بالتايل، فإن . راجعا اىل املكونات الفينوليةMatricaria pubescens و الـ Centaurea incana من الـ و الـ Centaurea incana بواسطة املستخلصني امليثانوليني لكل من الـDPPH النشاط اآلسر جلذر الـ

Matricaria pubescensيتفاوت تركيز بريوكسيد . يكون مرتبط بشكل أساسي مبجموعات اهليدروكسيل الفينوليةء وفقا للمركبات الفينولية ، و بالتايل فإن هذه األخرية املتواجدة يف املستخلص عبارة عن ماحنات جيدة اهليدروجني يف املا

باعتبار أهنا ماحنات جيدة ).H2O) Ruch et al., 1984 اىلH2O2 لإللكترونات، وعليه فإهنا تعجل بتحويل الـ .+Fe2 اىل+Fe3 لإللكترونات فإهنا تظهر القدرة اإلرجاعية على إختزال الـ

حتتويان على كمية كبرية من Matricaria pubescens و الـ Centaurea incana و عليه خنلص اىل أن الـبينت نتائج . الفينوالت و كذا الفالفونويدات، و هكذا ميكن أن تلعب دورا رئيسيا يف القدرة التثبيطية املضادة لألكسدة

ميكن استخدامهما كمصدر طبيعي Matricaria pubescens الـو Centaurea incana هذه الدراسة أن الـ .مضاد لألكسدة سهل الوصول إليه و كذا إمكانية استعماهلما يف املستحضرات الصيدالنية

CCL4على السمية الكبدية احملرضة بالـ Matricaria pubescensالـ و Centaurea incana تأثري الـ

احملرضة للسمية الكبدية، كثريا ما يستخدم ) xenobiotic(ضل املواد غري البيولوجية يعد رابع كلوريد الكربون من أفCCL3(يستقلب يف اجلسم إىل جذر ثالثي كلور امليثيل النشط جدا . كنموذج لدراسة الفعل الواقي للسمية الكبدية

°( ، ).Brant & Rumack, 1993(خللية أين يهاجم الفوسفوليبيدات الغشائية حمرضا بذلك فوق أكسدة الليبيدات و حتلل ا

الـ نبايتإن اهلدف من هذه الدراسة اليت قمنا هبا هو التحقق من القدرة املضادة للتأكسد و الفعل الواقي للكبد لكل من

Centaurea incanaو الـ Matricaria pubescens على اجلذور احلرة املتلفة للكبد و املسببة برباعي كلوريد .جلرذان والفئران البيضاءالكربون عند اول عن استقالب العقاقري و املواد الكيميائية السامة، كما يعد العضو الرئيسي بد جيدا بأنه العضو الرئيسي املسؤيعرف الك

.(Bessel et al., 2001; Larrey, 2000; Lee, 2003)املستهدف تقريبا جبميع املواد الكيميائية السامةيؤدي . الصيدالنية و الكيميائية بتسببها يف األعطاب الكبدية، مثل رباعي كلوريد الكربونتعرف العديد من اجلزيئات

التعرض إىل جرعة مفرطة من هذه املادة املسممة للكبد إىل حتريض عطب كبدي حاد يتميز خبلل يف الوظيفة الكبدية، ;Basu, 2003; Higuchi & Gores, 2003; Kaplowitz, 2002)، تنقرز أو تنخر اخلاليا الكبدية)تلف(احنالل

Nelson, 1990).

أظهرت نتائجنا أن إعطاء رباعي كلوريد الكربون للجرذان و الفئران البيضاء يسبب أضرار كبدية حادة، تظهر من خالل Ko et al., 2006; Jeon et al., 2002; Oh et)دــاخنفاض وزن اجلسم و ارتفاع معنوي يف الوزن النسيب للكب

al., 2002).

108

.(Stacey et al., 1993)حتتوي اخلاليا الكبدية على العديد من اإلنزميات اليت حترر يف الدم يف حالة تضرر أغشية اخلاليا مؤشرات جد حساسة AlT و AsTبسبب تراكيزها املرتفعة و حتررها من سيثوبالزم اخللية الكبدية، تعترب إنزميات

وقد بني العديد من الباحثني ارتفاع اإلنزميات املصلية للثرونزأميناز بعد إعطاء خلوي على مستوى الكبد، -للخلل الكبدو .جرع سامة من رباعي كلوريد الكربون للجرذان و الفئران

يف صفاق البطن تسمم كبدي حاد عند اجلرذان، و دليل ذلك االرتفاع CCL4الـتسبب إعطاء جرعة واحدة من تكون األفعال الواقية عند املعاملة . CCL4الـ بعد حقن AsTالـ و AlTالـل من املعنوي لنشاط اإلنزميات املصلية لك

AsTالـعلى ارتفاع إنزميات كل من Matricaria pubescens و الـCentaurea incana الـاملسبقة بواسطة . على الترتيب)33 و 32( موضحة يف الشكلCCL4الـ يف املصل احملرضة بواسطة AlTالـو

باملقارنة CCL4بالـ يف مصل اجملموعة املسممة AsTالـ و AlTالـفاع كبري يف نشاطية إنزميات كل من يالحظ ارتوقى بصفة Matricaria pubescens و الـCentaurea incana الـغري أن املعاملة املسبقة ب. مع اجملموعة الشاهدة

و عليه فإن املعاملة CCL4.موعة املعاملة بالـ يف مصل اجملAsTالـ و AlTالـمعنوية من ارتفاع نشاط إنزميات كل من كغ / مع800 جبرعة Matricaria pubescenالـكغ و / مع500 جبرعة CCentaurea incana الـاملسبقةب

.AsTالـ و AlTالـحالت جزئيا دون ارتفاع مستويات

ي لفوق أكسدة الليبيدات، عند ، ناتج هنائMDAالـ، يالحظ زيادة تركيز )42، 41، 40( األشكال كما هو موضح يف كما هو احلال بالنسبة لنشاط اإلنزميات . أضعاف باملقارنة مع اجلرذان الشاهدة 2.7 بنسبة CCL4 اجلرذان املعاملة بالـ

Matricaria pubescens و الـCentaurea incana الـ ، فإن املعاملة املسبقة بAsTالـ و AlTاملصلية للـ مع اجملموعة ة باملقارنMDAالـذان و أسبوع عند الفئران أدت إىل اخنفاض جد مهم يف معدالت أسابيع عند اجلر4ملدة

ساعة، ازداد نشاط الكاتالز عند اجلرذان و الفئران املعاملة 24باإلضافة إىل ذلك، خالل . CCL4بالـاملعاملة . باملقارنة مع مستويات اجملموعة الشاهدةCCL4بالـ

تفسر . اجلرذان املعاملة برباعي كلوريد الكربونعندAlT و AsTة جد معنوية يف نشاط إنزميات أظهرت نتائجنا زياد .خلوي-الزيادة يف نشاط هذه اإلنزميات يف املصل حبدوث خلل كبدو

حدوث خلل كوليسثاتيكي (Alkalin Phosphatase (ALP)) يعكس ارتفاع إنزميات الفوسفاثاز القلوي املصلي

(Cholestatic) الكبديمأكثر من تضرر البارونشي (Zimmerman, 1978) . يتواجد هذا اإلنزمي عادة على مستوى .يتواجد أيضا على مستوى العظام، خاليا األمعاء و الكلى. ظهارية القنوات الصفراوية

الكربون املصلي، غري مرتفع بشكل معنوي عند اجملموعة املسممة برباعي كلوريدALPالـيف دراستنا وجد أن مستوى -املؤشر الكبدو(AlT و AsTميكن تفسري هذه النتائج مبقارنتها مع نتائج انزميات . باملقارنة مع اجملموعات األخرى

على أنه حدث خلل أصاب الربونشيم الكبدي و هذا ما يثبت حدوث الضرر الكبدي احلاد و ليس ) خلوي .ريد الكربونالكوليسثاتيكي الناتج عن إعطاء جرعة واحدة من رباعي كلو

حتدث آلية إفراز اجلليسريدات . بواسطة رباعي كلوريد الكربون(TG)يثبط إفراز اخللية الكبدية للجليسريدات الثالثية

Very Low Density)الثالثية بشكل كبري داخل اخللية و تنتهي بإخراجها يف شكل بروتينات ليبيدية منخفضة الكثافة

109

Lipoproteins) VLDLذه العمليات بالكمال البنيوي و الوظيفي للعناصر املشكلة للهيكل ، ترتبط ه .(Brattin et al., 1985 )العظمي

يف . (Smuckler et al., 1962 )يثبط أيضا بسرعة ختليق اخللية الكبدية للربوتينات بواسطة رباعي كلوريد الكربونيف النهاية، ختضع الليزوزومات، . ية يف خطرهذه احلالة يدخل الكمال البنيوي و الوظيفي للشبكة األنذوبالزم

.(Brattin et al., 1985 )امليثاكوندري، و الغشاء البالزمي ألضرار غري عكسيةيف دراستنا، وجد اخنفاض جد معنوي و معنوي يف إفراز اجلليسريدات الثالثية و ختليق الربوتني على الترتيب من طرف

.برباعي كلوريد الكربون باملقارنة مع اجملموعات األخرىاخللية الكبدية يف اجملموعة املعاملة

إليه الباحثون عند احلاجة إلثبات تشكل اجلذور الذي يلجألتعترب فوق أكسدة الليبيدات يف أغلب األحيان املقياس األو & Holley(رةاحلرة يف اخللية املتضررة، وتعترب ذات أمهية خاصة باألضرار التفاعلية الناجتة عن تشكل اجلذور احل

Cheeseman, 1993(و ذلك بسبب وقوعها يف أغشية اخلاليا ،(Pater et al., 1992) أين تبدأ العملية التحليلية ،و مالحظة فوق أكسدة الليبيدات و التنخر الكبدي الذي وجد أنه حيدث (Stacey et al., 1993)الذاتية بصفة طبيعية

. (Maellaro et al., 1990; Mohamed et al., 1999)كنتيجة هنائية نالحظ من خالل MDA. عن طريق حتديد تراكيز الـCCL4بالـقمنا هنا بتحليل درجة اإلجهاد التأكسدي احملرض

يسبب أضرار كبدية حادة عند اجلرذان و الفئران، يكون ذلك موضحا من خالل اإلرتفاع CCL4بالـالنتائج، أن املعاملة عند CCL4الـة إىل ذلك لوحظ زيادة إنزميات الكاثالز املضادة األكسدة عن طريق إضاف. MDAالـاملعنوي لكميات . اجلرذان و الفئران

من أجل استراتيجيات عالجية للعطب الكبدي و األمراض، علينا التسليم بأنه من املهم العثور على مركبات مضادة

و . CCL4حلر ثالثي كلور امليثيل املتولد من طرف الـ لألكسدة قادرة على توقيف األضرار الكبدية الناجتة عن اجلذر اهلما القدرة على احلماية ضد Matricaria pubescens و الـCentaurea incana الـ قد لوحظ أن كل من

.األمراض اليت تسببها اجلذور احلرة، ألهنما متلكان نشاط جذري آسر

و Centaurea incana الـمليثانوليني لكل من من خالل دراستنا، الحظنا أن املعاملة باملستخلصني ا عند اجلرذان و CCL4بالـ تأثري فعال يف الوقاية من اإلجهاد ألتأكسدي احملرض له Matricaria pubescensالـ

Centaurea الـ ، إضافة إىل ذلك ميكن MDAالـو يظهر ذلك جليا من خالل االخنفاض امللحوظ يف كمية . الفئران

incanaو الـ Matricaria pubescens من حتسني الضرر الكبدي احلاد إىل درجات عالية، يظهر ذلك من خالل ).AsT, AlT(االختزال الواضح ملستويات إنزميات الثرونزأميناز

ميلكان تأثري واقي كبري Matricaria pubescens و الـCentaurea incana الـ أثبتت دراستنا أن كخالصة،

هذينقد تكون لآلليات الكامنة للوقاية الكبدية الناجتة عن .CCL4الـاد احملرض بواسطة على العطب الكبدي احلاملستخلصني امليثانوليني صلة بكل من اخلصائص اجلذرية املخلبية و الفعل غري املباشر كمنظمات لألنظمة املضادة

110

عديد من الدراسات ينبغي أن تتطرق هلما يف لألكسدة، أين ميكن استعماهلا يف احلاالت العالجية اإلكلينيكية، لكن ال .املستقبل

111

Introduction : Reactive oxygen species (ROS) encompass a variety of diverse chemical species,

including both free radicals (containing highly reactive unpaired electrons), such as

superoxide (O2°-) and hydroxyl radicals (OH°), and other molecular species, such as

hydrogen peroxide (H2O2). Accordingly, some of these species, such as O2°- and OH°, are

extremely unstable, whereas others, like hydrogen peroxide, are freely diffusible and

relatively long-lived. (Landmesser & Drexler, 2006). These ROS have a causal

relationship with oxidative stress. They are produced during normal intracellular

metabolism, e.g mitochondrial metabolism, and the action of P450 cytochromes and

superoxide oxidase. Oxidative stress is the inappropriate exposure to ROS and results from

the imbalance between prooxidants and antioxidants leading to cell damage and tissue

injury. ROS generation is increased in many pathological situations, including heart

disease, diabetes, liver injury, cancer, aging etc. (Giordano, 2005 ; Rolo & Palmeira.,

2006 ; Jaeschke, 2000 ; Bokov et al., 2004).

Recent studies indicated that oxidative stress might be a pivotal originating in the

pathogenesis of the liver diseases including drug-induced hepatic damage, alcohol hepatitis

and viral hepatitis or ischemic liver injury (Albano, 2002 ; Amin & Hamza., 2005 ;

Jaeschke et al., 2002).

Over production of free radicals are toxic to hepatocytes and initiate reactive oxygen

species mediated cascade causing hepatocyte death, leading to acute hepatic damage

(Gutteridge, 1993 ; Pessayre, 1995 ; Sies, 1991).

Maintaining the balance between ROS and antioxidants especially superoxide dismutase

(SOD), catalase (CAT), glutathione peroxidase (GPX), glutathione (GSH), vitamin A, C

and E, flavonoids and polyphenols is there fore crucial, and could serve as a major

mechanism in preventing damage by oxidative stress, this balance has been suggested to

play an important role in drug toxicity, such as carbon tetrachloride (CCL4).

CCL4 is a classically known compound that causes hepatotoxicity by an acute exposer

(Recknagel, 1967 ; Recknagel et al., 1989) and it induces cirrhosis after chronic exposer

(Rubin & Poper,1967). It prometly reacts to the organs mainly the liver through its

chemical reactivity properties to the surrounding molecules basically (Gastro & Diaz-

113

Gomez, 1972 ; Diaz-Gomez et al., 1973). Through covalent binding of the compound to the

microsomal lipids and membrane protins and through lipids peroxidation (Comporti et al.,

1965 ; Ghozal & Recknagel, 1965 ; Recknagel, 1967).

Hove (1948) first proposed that CCL4 was a “Prooxidant”. Oberling & Rouiller (1956)

demonstrated early pathological involvement of the endoplasmic reticulum and suggested

that CCL4 is activated by a microsomal process. Bulter (1961) shawed that CCL4 was

metabolized to chloroform invivo in the absent of molecular oxygen. Recknagel &

Ghoshal (1966) suggested that primary biochemical lesion involved in CCL4 toxicity is

lipid peroxidatin. Following Bulter (1961), they consider that CCL4 is converted, by a

microsomal process, in to free radicals, wich then catalyse chains of autoxidation in the

structural lipid of microsomes and mitochondria, resulting in fatty accumulation and

cellular necrosis. Slater (1966) has also postulated that CCL4 is converted in to

microsomes to CCL3° radicals that initite lipid peroxidation, which, he considers, may

promote necrosis by a “diffusion,” process and fat accumulation by a “ localized” process.

It is important to point out that lipid peroxidation my produce injury by compromising the

integrity of membranes and by covalent binding of reactive intermediates to important

biological molecules like GSH; finally the process leads to necrosis and liver damage in

general. The effects of antioxidants on oxidative stress are mainly measured through

certain observable biomarkers, including the enzymatic activities of catalase, SOD, GSH-

Px, and GSH-reductase, as well as thiobarbituric acid reactants (TBARS) levels, an

indirect measurement of free-radical production (Maritim et al., 2003; Johansen et al.,

2005; Valko et al., 2007).

Herbal drugs play a major role in the treatment of hepatic disorders. In Algeria, a number

of medicinal plants and their formulations are used to cure hepatic disorders in traditional

systems of medicine (Ould El Hadj et al., 2003; Maiza et al., 1993).

Centaurea incana and Matricaria pubescens are used in traditional medicine, plant of

family compositea. The first is a wild plant. The rhizomes are ethnomedicinally useful in

the treatment of hepatic diseases ( Aclinou et al., 1982). But the second is used in the case

of intern and extern inflammations,

114

The main objective of the study was to evaluate the hepatoprotective activity of Centaurea

incana and Matricaria pubescens to verify tribal or folk claims in using this herb against

liver disorders. In the present investigation, the antihepatotoxic activity of Centaurea

incana and Matricaria pubescens Methanolic extract was conducted in acute liver injury

model against carbon tetrachloride in preventive treatments.

Materials and methods Reagents and chemicals products The DPPH radical (2,2'-diphenyl-1-picrylhydrazyl) from Sigma Chemical, the antioxydant

agent BHT (butylated hydroxytoluene), linoleic acid, β- carotene and tween 40, rutin,

quercetin et gallic acid, hydrogene peroxyde (H2O2), thiobarbituric acid and trichloroacitic

acid, Carbon tetrachloride.

Study carry out in vitro:

Determination of free radical scavenging sctivity

The free radical scavenging activity of the extracts, based on the scavenging activity of the

stable 1,1-diphenyl-2- picrylhydrazyl (DPPH) free radical, was determined by the method

described by (Cuendet et al., 1997; Burits and Bucar, 2000). The free radical scavenging

activity of the Centaurea incana and Matricaria pubescens extract was measured in terms of

hydrogen donating or radical scavenging ability using the stable radical DPPH. The assay was

carried out with aliquots of 50µL of each sample added to 5 mL of a methanol solution of 2.2-

diphenyl-1-picryl-hydrazyl(DPPH) 0.004% and the mixture was incubated at a temperature of

25°C for 30 min and the absorbance of each solution was determined at 517 nm. The

scavenging effect of the radical of each sample was calculated and compared with the

scavenging effect of quercetine, rutin and gallic acid. All the tests were conducted in triplicate.

The capability to scavenge the DPPH radical was calculated using the following equation:

Where Acont is the absorbance of the control reaction and Atest is the absorbance in the presence

of the sample of the extracts. The antioxidant activity of the extract was expressed as IC50. The

IC50 value was defined as the concentration (in mg/ml) of extracts that inhibits the formation of

DPPH radicals by 50%.

115

β-carotene/linoleic acid assay

The antioxidant activity of the extracts was evaluated using a β -carotene/linoleate model

system. by (Aslan et al., 2006) method. A stock solution of β- carotene-linoleic acid mixture

was prepared as follows: A solution of β- carotene was prepared by dissolving 0.5 mg of β-

carotene in 1 mL of chloroform. After chloroform was rotary evaporated at 40 °C under

vacuum, 25 µl of linoleic acid, 200 mg of Tween 40 were added. The volume of the resulting

mixture was completed up to 100 mL with distilled water saturated with oxygen was added

with vigorous shaking. 2500 µl of this reaction mixture was dispersed to test tubes and 350 µl

portions of the extracts prepared in methanol at 2 mg/ml concentrations were added and the

emulsion system was incubated for up to 48 h at room temperature. The same procedure was

repeated with the positive controls, (BHT). After this incubation period, absorbance of the

mixtures was measured at 490 nm. Antioxidative capacities of the extracts were compared with

BHT at the same concentration.

Determination of total phenolic content and flavonoids:

Total soluble phenolics in the methanol extracts of Centaurea incana and Matricaria

pubescens were determined with Prussian bleau according to the method of Price and

Butler (1977), with slight modifications of Graham (1992), using gallic acid as a standard

compound. 0.1 ml of methanol extract was diluted with 3 ml of distilled water and the

content mixed thoroughly. 1 min later , 1 ml of Fecl3 (0.002 N) was added and the mixture

was allowed to stand for 15 min. 5 ml of stabilisant solution ( 1% gomme Arabic, 85%

phosphoric acid and distilled water; 1:1:3 V:V:V). The absorbance of the solution was

read at 700 nm in spectrophotometer with reagent blank. The concentration of total

phenolic compounds in the methanol extracts of Centaurea incana and Matricaria

pubescens was determined as µg of gallic acid equivalent / weight dry plant.

The flavonoids content in the methanol extracts of Centaurea incana and Matricaria

pubescens was determined by ( Boharun et al., 1996) method using quercetin and rutin as a

reference compound. One millilitre of methanol extract was mixed with 1 ml aluminium

trichloride Alcl3 (2%). The absorbance at 430 nm was read after 10 min. The concentration

of total flavonoid compounds in the methanol extracts of Centaurea incana and Matricaria

pubescens was determined as mg of quercetin and rutin equivalent / weight dry plant.

116

Experimental animals Adult male albino rats weighing 110–130 g and mice weighing 25-30 g were used in the

experimental present study. The animals were bred in plastic and metallic cages (six to

eight animals in each cage) with fed food and water ad libitum. The room housing of

temperature, average of 25°c.

Animal treatment For study of preventive effect of extract methanolic of CI and MP on CCL4 –induced

hepatotoxicity, our study carry out on two models of animals as follows:

Study carry out on rats: The animals were randomly divided into six different groups comprising 5 to 7 animals

each. Group I served as controls and received an injection of vehicle (olive oil) alone;

Acute liver injury in rats was induced by a single intraperitoneal injection with CCl4

dissolved in an equal volume of olive oil at a dose of 3 mL/kg body weight, group II,

which is well documented to induce hepatotoxicity. Group III was administered

Methanolic extract of CI at a dose of 500 mg/kg alone. In group IV was administered

Methanolic extract of CI at a dose of 500 mg/kg and was injected by CCl4 i.p , at a dose

of 3ml/kg body weight. Group V was administered Methanolic extract of MP at a dose of

800 mg/kg alone. In group VI was administered Methanolic extract of MP at a dose of

800 mg/kg and was injected by CCl4 i.p , at a dose of 3ml/kg body weight. After 4 weeks

of treatment, All of the animals were sacrificed 24 h after administration of CCl4, and

blood was collected, serum separated and stored at −20 ◦C.

Study sell out on mice: The animals were randomly divided into five different groups comprising 8 animals each.

Group I served as controls and received an injection of vehicle (olive oil) alone; Acute

liver injury in rats was induced by a single intraperitoneal injection with CCl4 dissolved in

an equal volume of olive oil at a dose of 3 mL/kg body weight, group II. Group III was

administered Methanolic extract of CI at a dose of 100 mg/kg and was injected by CCl4

i.p , at a dose of 3ml/kg body weight. In group IV was administered Methanolic extract of

MPat a dose of 200 mg/kg and was injected by CCl4 i.p , at a dose of 3ml/kg body weight.

Group V was administrated 0.33 mg/kg of quercetin as reference molecule.

Estimation of serum AST, ALT, level Alanine amino transferase (ALT) and aspartate amino transferase (AST). As a quantitative

measure of liver injury by CCl4. The activities of ALT and AST in the serum were

measured by using Auto analyzer (Architedt c system).

117

Estimation of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) The TBARS level, an index of malonyldialdehyde (MDA), the last product of lipid

breakdown caused by oxidative stress, was evaluated by the thiobarbituric acid reactive

substances method (TBARS) and was expressed as nmol/g wet tissue production was

determined by the method of Ohkawa et al. (1979).

Briefly, an aliquot of 500ml of tissue homogenates (10%, w/v) was mixed thoroughly with

aqueous solution of thiobarbituric acid ( 0.67% , 1ml ) and trichloroacitic acid ( 20% , 0.5

ml ) and heated at 95 ◦C for 15 min in a water bath. The suspension was then cooled to

room temperature. After cooling, 4 ml n- butanol were added and mixed vigorously. The n-

butanol layer was separated by centrifugation at 3000 r/min for 15 min. the absorbance of

the pink coloured supernatant was taken for spectrophotometry measurement at 530 nm for

MDA assay. The result was compared to a standard curve of malondialdehyde (MDA) and

results are expressed as nanomoles MDA per gram wet weight of tissue.

Catalase activity Catalase (CAT) activity was measured by the method of (Clairborne, 1985). An aliquot of

homogenate supernatants (50µl) was added to a quartz cuvette and the reaction was started

by the addition of freshly prepared H2O2 (19mM) in phosphate buffer (50mM, pH 7.0).

The rate of H2O2 decomposition was measured spectrophotometrically at 240 nm during

120 s. The activity of CAT was expressed as mmol H2O2/g wet tissue/min.

Body weight measurement The body weight of the rats after CCl4 administration was measured and compared with

that of the control animals.We measured the body weight of the rats in the groups before

and after CCl4 administration and compared the changes in weight in each group.

Statistical analysis Results are expressed as Means ± SEM and all statistical comparisons were carried out by

means of one-way ANOVA test followed by Tukey-Kramer multiple comparisons test.

The difference showing a P level of 0.05 or lower was considered to be statistically

significant.

118

Results and discussion

DPPH is usually used as a reagent to evaluate free radical scavenging activity of

antioxidants (Oyaizu, 1986). DPPH is a stable free radical and accepts an electron or hydrogen

radical to become a stable diamagnetic molecule (Soares et al., 1997). The reduction

capability of DPPH radical is determined by the decrease in absorbance at 517 nm induced by

antioxidants. Quercetin, rutin and gallic acid are the reagents used as standards. The extracts

are able to reduce the stable radical DPPH to the yellow-coloured diphenylpicrylhydrazine.

The scavenging effect of methanol extracts of Centaurea incana and Matricaria pubescens

and standards with the DPPH radical is in the following order: Centaurea incana (0.369

mg/ml)> rutin (0.361 mg/ml)> quercetin (0.34 mg/ml)> Matricaria pubescens (0.162

mg/ml) > gallic acid (0.058 mg/ml). The experimental data of these species reveal that these

extracts have the effect of scavenging free radical. From Fig. 28.

In the β-carotene/linoleic acid assay the antioxidant capacity is determined by measuring the

inhibition of the organic compounds and the conjugated diene hydroperoxides arising from

linoleic acid oxidation (Tepe et al., 2005). This assay has been used to simulate the oxidation

of the membrane lipid components in the presence of antioxidants inside the cell (Mata et al.,

2007). The results obtained from extracts of Centaurea incana and Matricaria pubescens are

presented in Table 8 and Fig.29. Samples of Centaurea incana and Matricaria pubescens

shows high inhibition of peroxidation 97.05 % and 100.25 % respectively in a concentration of

2 mg/mL, higher than BHT (96.04 %) in the same concentrations.

The systematic literature collection, pertaining to this investigation indicates that the plant

phenolics constitute one of the major groups of compounds acting as primary antioxidants

or free radical terminators. Therefore, it is worthwhile to determine their total amount in

the plants chosen for the study. Flavonoids as one of the most diverse and widespread

group of natural compounds, are likely to be the most important natural phenolics

(Agrawal, 1989). These compounds possess a broad spectrum of chemical and biological

activities including radical scavenging properties.

The total amount of phenolic content present in Centaurea incana and Matricaria pubescens

was shown in table 7. In the Centaurea incana and Matricaria pubescens (1g), 27.11 and

53.27 mg gallic acid equivalent of phenols respectively was detected. Phenolic compounds are

known as powerful chain breaking antioxidants (Shahidi & Wanasundara, 1992). Phenols are

119

very important plant constituents because of their scavenging ability due to their hydroxyl

groups (Hatano et al., 1989). The phenolic compounds may contribute directly to

antioxidative action. Phenolic compounds are one of the most widely distributed plant

secondary products. The ability of these compounds to act as antioxidants has been well

established. Polyphenols are multifunctional by acting as reducing agents, hydrogen donating

antioxidants and singlet oxygen quenchers (Rice-Evans et al., 1996).

The total flavonoid contents present in Centaurea incana and Matricaria pubescens was

shown in table 7. In the Centaurea incana and Matricaria pubescens (1g), 11.70 and 20.00

mg quercetin and 24.46 and 43.44 mg rutin quivalent of flavonoids / weight dry plant

respectively was detected.

There has been considerable interest in recent years in the cytoprotective and

hepatoprotective effects of flavonoids, especially in the context of their modes of action as

antioxidants. The electron-donating properties of flavonoids are well defined to explain

their antioxidant properties in vitro (Bors et al. 1995; Castelluccio et al., 1995; Rice-Evans

et al., 1996). Structurally important features defining the reduction potential of flavonoids

are the hydroxylation pattern, a 3′,4′-dihydroxy catechol structure in the B-ring, the

planarity of the molecule and the presence of 2,3-unsaturation in conjugation with a 4-oxo

function in the C-ring. Many studies have described the antioxidant efficacy of flavonoids

in inhibiting the lipid peroxidation (Castelluccio et al., 1995; Salah et al., 1995; Hirano et

al., 2000). In addition, their ability to act as antioxidants in vitro is based on metal-

chelating capacity (Brown et al ., 1998; Morel et al., 1998) and on the quenching of

singlet oxygen (Tournaire et al., 1993). However, although flavonoids react rapidly with

ROS/RNS in chemical systems in vitro, their reactions in vivo will be dependent on the

form that is bioavailable to cells and tissues. Although the pool of data demonstrating the

in vitro effects of flavonoids as antioxidants or modulators of protein functions is extensive,

only little is known about the antioxidant potential and bioactivity of in vivo flavonoid

metabolites. This is surprising since early investigations in the 1950–1960s in mammals

already indicated that most of the flavonoids are conjugated and metabolized mainly in the

liver or degraded by the colonic microflora ( Schoeter et al., 2002).

In general, the methanol extracts of Centaurea incana and Matricaria pubescens showed

strong antioxidant activity, DPPH radical and β-carotene/linoleate when compared to

standards such as quercetin, rutin, gallic acid and BHT. The antioxidative effect of

120

Centaurea incana and Matricaria pubescens extracts is may be due to the phenolic

components. Thus, the DPPH radical scavenging activity of Centaurea incana and

Matricaria pubescens extracts may be mostly related to their phenolic hydroxyl group. The

concentration of hydrogen peroxide in water may vary according to the phenolic

compounds. Since phenolic compounds present in the extract are good electron donors,

they may accelerate the conversion of H2O2–H2O (Ruch et al., 1984). As the good electron

donors, they show reductive capability on reducing Fe3+ to Fe2+ .

Thus, the Centaurea incana and Matricaria pubescens found to contain a

noticeable amount of total phenols and flavonoids and can play a major role in exhibiting

antioxidant potential. The results of this study indicated that Centaurea incana and

Matricaria pubescens can be used as easily accessible source of natural antioxidants and as

a possible utilisation in pharmaceutical industry. .

Effects of Centaurea incana and Matricaria pubescens on CCl4-induced hepatotoxicity The single intraperitoneal injection with CCl4 caused severe hepatotoxicity in rats, as

evidenced by the significant elevation of serum AST and ALT activities after the

administration of CCl4. The protective effects of pre-treatment with Centaurea incana and

Matricaria pubescens on the CCl4-induced elevation of serum AST and ALT activities are

presented in Fig. (32, 33). The activities of serum AST and ALT in the CCl4 group were

much higher than those in the control group. However, pre-treatment with Centaurea

incana and Matricaria pubescens significantly prevented the elevation of serum AST and

ALT activities induced by CCl4 treatment. So the pre-treatment with Centaurea incana at a

dose of 500 mg/kg and Matricaria pubescens at a dose of 800 mg/kg partially prevented

the elevation of AST and ALT levels.

As shown in Fig. (40, 41, 42), the concentration of MDA, an end product of lipid

peroxidation, in the rats treated with CCl4 was increased 2.7-fold when compared with the

vehicle control rats. Consistent with the serum AST and ALT activities, pre-treatment with

Centaurea incana and Matricaria pubescens for 4 weeks to the rats and 1 week to the mice

resulted in a significant decrease in the concentration of hepatic MDA when compared

with the CCl4 group. In addition, at 24 h, catalase Activity was increased in the rats treated

with CCl4 when compared to control levels.

121

Carbon tetrachloride is the best characterized system of xenobiotic-induced hepatotoxicity

and is frequently employed as a model to study antihepatotoxic. It is metabolized in the

body to a highly reactive trichloromethyl radical (CCl3°) which attacks membrane

phospholipid stimulating lipid peroxidation and cell lysis .

The aim of the present study was to investigate the potential antioxidant and

hepatoprotective effects of CI and MP on the free radical damage of liver caused by carbon

tetrachloride in rats and mice.

Liver is well known to be the major organ responsible for the metabolism of drug and toxic

chemicals, and there fore is the primary target organ for nearly all the toxic chemicals

(Bessel et al., 2001; Larrey, 2000; Lee, 2003).

Various pharmacological or chemical substances are known to cause hepatic injuries, such

as CCL4. Excessive dose exposure to these hepatotoxins may induce acute liver injury

characterized by abnormality of hepatic function, and degeneration, necrosis or apoptosis

of hepatocytes (Basu, 2003; Higuchi & Gores, 2003; Kaplowitz, 2002; Nelson, 1990).

Our results showed that CCL4 administration caused sever acute liver damage in rats and

mice, demonstrated by decreased of body weight and significant elevation of relative liver

weight (Ko et al., 2006; Jeon et al., 2002; Oh et al., 2002).

Hepatocytes contain many enzymes that may be released in to the blood if the cell

membranes are damages (Stacey et al., 1993). Because of their high concentrations and

ease liberation from the hepatocyte cytoplasm, AlT and AsT are very sensitive indicators

of hepatocellular lesions within the liver. Several researchers reported the elevation in

serum transaminases following administration of toxic doses of CCL4 in rats and mice.

Our results showed that a significant increase in the activities of AlT and AsT in CCL4

treated rats. The increase in the activities of these enzymes in plasma suggests enhanced

hepatocellular damage by CCL4.

Elevated serum ALP has been classified to reflect cholestatic injury more selectively than

parenchymal injury (Zimmerman, 1978), as ALP is usually found in bile duct epithelium.

ALP is also present in bane, intestinal and kidney cells.

In the present investigation, serum ALP levels was found to be not significantly elevation

in CCL4 induced group as copared to the other groups.

122

Hepatocyte secretion of triglycerides (TG) is rapidly inhibited by CCL4. the TG secretory

mechanism involves intracellular traffic and ultimate exocytosis of very low density of

lipoproteins (VLDL), processes that depend on structural and functional integrity of

components of the cytoskeleton (Brattin et al., 1985). Hepatocyte protein synthesis is also

rapidly depressed by CCL4 (Smuckler et al., 1962). In this case, structural and functional

integrity of the endoplasmic reticulum is compromised. Eventually lysosome, the

mitochondria and the plasma membrane sustain irreversible injury (Brattin et al., 1985).

In our study, hepatocyte secretion of TG and protein synthesis were found tobe

significantly decrease in CCL4 induced group as compared to the other groups.

Lipid peroxidation is often the first parameter to which researchers’ turn when they wish to

prove the involvement of free radicals in cell damage. It is of particular significance as a

damaging reaction consequent to free radicals production (Holley & Cheeseman, 1993),

due to its occurrence in cell membranes (Pater et al., 1992) , the autocatalytic nature of the

process once initiated (Stacey et al., 1993) and the observation that hepatic lipid

peroxidation and necrosis were found to occur in ultimate consequence (Maellaro et al.,

1990; Mohamed et al., 1999).

Here we examined the degree of oxidative stress induced by CCL4 by determination of

MDA concentration. The results showed that CCL4 administration caused sever acute liver

damage in rats and mice, demonstrated by significant elevated of MDA contents. More

over, antioxidant enzyme catalase activities was increased by CCL4 in mice and rats.

For the therapeutic strategies of liver injury and disease, we postulate that it is important to

find antioxidant compounds which are able to bloke liver injuries through trichloromethyl

free radical generated by CCL4. There fore, we strongly speculated that Centaurea incana

and Matricaria pubescens can protect against diseases which are caused by free radicals,

because it has a radical scavenging activity.

In our study, we indicated for the first time that Centaurea incana and Matricaria

pubescens treatment have a potent protective effect aganst oxidative stress induced by

CCL4 in rats and mice, as revealed by remarkable decrease in MDA contenent, additionally,

methanolic extract of Centaurea incana and Matricaria pubescens could ameliorate acute

liver damage to a high degree, as demonstrated by reduction of serum AsT, AlT levels.

123

In conclusion, our investigation provided convincing data that Centaurea incana and

Matricaria pubescens have an impressive hepatoprotective effects on acute liver injuries

induced by CCL4. The mechanisms underlying hepatoprotection of the methanolic extract

of Centaurea incana and Matricaria pubescens may be related to both its radical

scavenging properties and indicate effects as a regulator of antioxidative systems, which

might be considered to be therapeutic in clinical situations, but more studies should be

carried out in the future.

124

Introduction Les espèces réactives de l'oxygène (ERO) englobent une variété d'espèces

chimiques diverses, y compris les radicaux libres (contenant des électrons non appariés très

réactif), comme l’anion superoxyde (O2 °-) et les radicaux hydroxyles (OH °), et d'autres

espèces moléculaires, tels que l'hydrogène peroxyde (H2O2). En conséquence, certaines de

ces espèces, comme O2 °- et OH °, sont extrêmement instables, alors que d'autres, comme

le H2O2, sont librement diffusables et relativement ont une longue durée de vie.

(Landmesser & Drexler, 2006). Ces ERO ont une relation de causalité avec le stress

oxydatif. Ils sont produits au cours du métabolisme intracellulaire normale, par exemple le

métabolisme mitochondrial, sous l'action des cytochromes P450 et la superoxyde oxydase.

Le stress oxydatif issue de l'exposition inappropriée aux radicaux libres et le résultat d’un

déséquilibre entre les antioxydants et les prooxidants conduisant à des lésions cellulaires et

tissulaires. La génération des ERO est augmentée dans de nombreuses situations

pathologiques, y compris les maladies cardiaques, le diabète, les lésions hépatiques, le

cancer, vieillissement, etc. (Giordano, 2005 ; Rolo & Palmeira., 2006 ; Jaeschke, 2000 ;

Bokov et al., 2004).

Des études récentes ont montré que le stress oxydatif pourrait être un pivot originaire de la

pathogenèse des maladies hépatiques y compris les médicaments induites des dommages

hépatiques, une hépatite d'alcool et les hépatites virales ou de lésions du foie ischémique

(Albano, 2002 ; Amin & Hamza., 2005 ; Jaeschke et al., 2002).

La surproduction de radicaux libres est toxique pour les hépatocytes. Elle est responsable

à l’initiation d’une cascade intermediaire des espèces réactives de l'oxygène causant la

mort des hépatocytes, conduisant à une dégradation hépatique aiguë (Gutteridge, 1993 ;

Pessayre, 1995 ; Sies, 1991).

Le maintenir de l'équilibre entre les ERO et les antioxydants, en particulier la superoxyde

dismutase (SOD), catalase (CAT), glutathion peroxydase (GPX), glutathion (GSH),

vitamine A, C et E, les flavonoïdes et les polyphénols est-il donc cruciale, et pourrait servir

comme mécanisme majeur dans la prévention des dommages provoqués par le stress

oxydatif, cet équilibre a été suggéré de jouer un rôle important dans la toxicité des

médicaments, tels que le tétrachlorure de carbone (CCL4).

CCL4 est un composé classiquement connu comme agent hépatotoxique après exposition

aiguë (Recknagel, 1967 ; Recknagel et al., 1989) et il induit une cirrhose après exposition

126

chronique (Rubin & Poper,1967). Il réagit aux différents organes principalement le foie

grâce à ses propriétés chimiques réactives aux molécules fondamentalement environnantes

(Gastro & Diaz-Gomez, 1972 ; Diaz-Gomez et al., 1973), par des liaisons covalentes du

composé à des lipides microsomiques et les protéines membranaires et par la peroxydation

lipidique (Comporti et al., 1965 ; Ghozal & Recknagel, 1965 ; Recknagel, 1967).

Hove (1948) le premier qui a proposé que le CCL4 était un "pro-oxydant». Oberling &

Rouiller (1956) ont démontré une implication pathologique précoce du réticulum

endoplasmique et ont suggéré que le CCL4 est activé par un processus microsomique.

Bulter (1961) a montré que le CCL4 a été métabolisé au chloroforme in vivo en absence

d’oxygène. Recknagel et Ghoshal (1966) suggère que la primaire lésion biochimique

contribue à la toxicité du CCL4 est la peroxidation lipidique. À la suite de Bulter (1961),

ils considèrent que le CCL4 est converti, par un processus microsomales, aux radicaux

libres, qui catalysent des chaînes d'auto-oxydation des lipides microsomiques structurelle

et mitochondriale, entraînant une accumulation de gras et de la nécrose cellulaire. Slater

(1966) a également postulé que le CCL4 est converti dans les microsomes au radical CCL3°

où l’initiation de la peroxydation lipidique a lieu. Il estime, que la nécrose promouvoir par

le processus de "diffusion," et l'accumulation des graisses par le processus de " localisés".

Il est important de souligner que la peroxydation lipidique peut produire des dommages en

compromettant l'intégrité des membranes et par l'intermédiaire réactifs des liaisons

covalentes aux molécules biologiques importantes comme GSH, enfin le processus mène à

la nécrose et les lésions hépatiques en général.

Les effets des antioxydants sur le stress oxydatif sont essentiellement mesurée à travers

certains biomarqueurs observables, y compris les activités enzymatiques de la catalase,

SOD, GSH-Px, et GSH-réductase, ainsi que les niveaux des réactifs d'acide

thiobarbiturique (TBARS), une mesure indirecte de la production des radicaux libre

(Maritim et al., 2003, Johansen et al., 2005; Valko et al., 2007).

Les médicaments à base de plantes jouent un rôle majeur dans le traitement des troubles

hépatiques. En Algérie, un certain nombre de plantes médicinales et leurs formulations

sont utilisées pour soigner les troubles hépatiques dans les systèmes traditionnels de la

médecine (Ould El Hadj et al., 2003; Maiza et al., 1993).

127

Centaurea incana et Matricaria pubescens sont des plantes utilisées dans la médecine

traditionnelle, elles appartiennent à la famille des compositea. La première est une plante

sauvage, leur rhizomes sont utilisés dans le traitement des maladies hépatiques (Aclinou et

al., 1982). Alors que la 2 ème est utilisée dans le cas des inflammations internes et

externes,

L'objectif principal de cet étude était d'évaluer l'activité hépatoprotectrice de la Centaurea

incana et de la Matricaria pubescens pour confèrmer la possibilité d’utiliser ces plantes

médicinales dans les revendications populaires contre les troubles du foie. Dans la présente

enquête, l'activité antihepatotoxique des extraits méthanoliques de la Centaurea incana

et de la Matricaria pubescens a été menée dans le modèle de lésions hépatiques aiguës

provoqué par le tétrachlorure de carbone dans les traitements préventifs.

Matériels et méthodes Réactifs et produits chimiques Le radical DPPH (2,2'-diphenyl-1-picrylhydrazyl) de la société de Sigma, l’agent chimique

antioxydant BHT (butylated hydroxytoluene), acide linoleique, β- carotene et tween 40,

rutine, quercétine et l’acide gallique, l’hydrogène peroxyde (H2O2), l’acide

thiobarbiturique et l’acide trichloroacitique et le Tétrachlorure de carbone.

Etude effectuée in vitro :

Détermination de l'effet scavenger des radicaux

libres

l'effet scavenger des radicaux libres des extraits, fondée sur l'effet scavenger de 1,1-

diphényl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical libre stable, a été déterminée selon la méthode

décrite par (Cuendet et al., 1997; Burits et Bucar , 2000). l'effet scavenger des radicaux

libres des extraits methanoliques de la Centaurea incana et de la Matricaria pubescens a

été mesurée en termes de donner l'hydrogène ou la capacité scavenger en utilisant le

radical DPPH stable. L'essai a été effectué avec des aliquotes de 50µL de chaque

échantillon ajoutés à 5 ml d'une solution méthanolique de 2,2-diphényl-1-picryl-hydrazyl

(DPPH) 0,004% et le mélange a été incubé à une température de 25 ° C pendant 30 min et

l'absorbance de chaque solution a été déterminée à 517 nm. L'effet scavenger du radical de

chaque échantillon a été calculé et comparé avec l'effet scavenger de la quercétine, la

rutine et l'acide gallique. Tous les tests ont été réalisés en triple. La capacité de

récupération du radical DPPH a été calculée selon l'équation suivante:

128

Lorsque Acont est l'absorbance de la réaction de contrôle et Atest est l'absorbance en

présence de l'échantillon des extraits. L'activité antioxydante de l'extrait a été exprimée en

IC50. La valeur IC50 a été définie comme la concentration (en mg / ml) d'extraits qui inhibe

la formation de 50% des radicaux DPPH.

β-carotène/ acide linoleique :

L'activité antioxydante des extraits a été évalué à l'aide d'un système modèle β -

carotene/linoleate. par la méthode de (Aslan et al., 2006). Le mélange d’une solution stock

de β-carotène/acide linoléique a été établi comme suit: Une solution de β-carotène a été

préparée en dissolvant 0,5 mg de β-carotène dans 1 ml de chloroforme. Après

l’évaporation rotatifs du chloroforme à 40 ° C sous vide, 25 µl d'acide linoléique, 200 mg

de Tween 40 ont été ajoutés. Le volume du mélange résultant a été achevé jusqu'à 100 mL

d'eau distillée saturée en oxygène avec une forte agitation. 2500 microlitres de ce mélange

réactionnel a été dispersée à des tubes à essai et des portions de 350 microlitres des

extraits préparés dans le méthanol à 2 mg / ml, ont été ajoutées et le système d'émulsion a

été incubées pendant 48 h à température ambiante. La même procédure a été répétée avec

les contrôles positifs, (BHT). Après cette période d'incubation, l'absorbance des mélanges a

été mesurée à 490 nm. La capacité antioxidative des extraits ont été comparés avec le

BHT à la même concentration.

Détermination du contenu total des phénols et des flavonoides :

Les composés phénoliques Total solubles dans l'extrait méthanolique de la Centaurea

incana et de la Matricaria pubescens ont été déterminées par la Bleau prussienne selon la

méthode du Price et Butler (1977), avec des modifications légères de Graham (1992),

utilisant de l'acide gallique comme composé du standard. 0,1 ml d'extrait méthanolique a

été dilué avec 3 ml d'eau distillée et le contenu mélangé à fond. 1 min plus tard, 1 ml de

FeCl3 (0,002 N) a été ajouté et le mélange est laissé au repos pendant 15 min. 5 ml de la

solution stabilisante (1% gomme arabe, 85% d'acide phosphorique et d'eau distillée; 1:1:3

V: V: V). L'absorbance de la solution a été lue à 700 nm dans le spectrophotomètre avec

blanc de réactif. La concentration en composés phénoliques des extraits méthanoliques de

la Centaurea incana et de la Matricaria pubescens a été déterminée en mg équivalent de l’

acide gallique / plante en poids sec.

129

La teneur en flavonoïdes dans les extraits méthanoliques de la Centaurea incana et de la

Matricaria pubescens a été déterminée par la méthode (Boharun et al., 1996) utilisant la

quercétine et rutine comme des composés de référence. 1 millilitre d'extrait méthanolique a

été mélangé avec 1 ml trichlorure d'aluminium AlCl3 (2%). L'absorbance à 430 nm a été

lue après 10 min. La concentration en composés flavonoïdes dans les extraits

méthanoliques de la Centaurea incana et de la Matricaria pubescens a été déterminée en

mg de quercétine et de rutine équivalent / plante en poids sec.

Animaux d’expérimentation Notre étude a été réalisée sur des rats wistar albinos mâles pesant 110-130 g et sur des

souris wistar albinos mâles dont le poids est compris entre 25-30 g. les animaux sont

élevés dans des cages en plastiques et en métal (de six à huit animaux par cage) avec accès

libre à la nourriture et à l’eau. L’animalerie est maintenue à une température ambiante

d’environ 25° c.

Traitements des animaux Pour l’étude de l’effet préventif des extraits méthanoliques de CI et MP sur la toxicité de

tétrachlorure de carbone, notre étude a été effectuée sur deux types d’animaux comme

suit :

Etude effectuée sur les rats Les animaux ont été répartis en six groupes différents comprenant de 5 à 7 animaux chacun.

Groupe I ont servi de témoins et a reçu une injection du véhicule (huile d'olive) seuls,

l'atteinte hépatique aiguë chez le rat a été induite par une injection intrapéritonéale unique

avec CCl4 dissous dans un volume égal d'huile d'olive à la dose de 3 mL / kg de poids

corporel, qui est bien documenté pour provoquer une hépatotoxicité, groupe II. Groupe III

a été administré l’extrait méthanolique de CI à une dose de 500 mg / kg seul. Groupe IV a

été administré l’extrait méthanolique de CI à une dose de 500 mg / kg suivit par une

injection ip par le CCl4, à une dose de 3ml/kg poids corporel. Groupe V a été administré

l’extrait méthanolique de MP à une dose de 800 mg / kg seul. Groupe VI a été administré

l’extrait méthanolique de MP à une dose de 800 mg / kg suivit par une injection ip par le

CCl4, à une dose de 3ml/kg poids corporel. Après 4 semaines de traitement, tous les

animaux ont été sacrifiés 24 h après l'administration de CCl4, et le sang a été recueillis, le

sérum triés et conservés à -20 °c.

130

Etude réalisée sur les souris Les animaux ont été divisés en cinq groupes comprenant 8 animaux chacun. Groupe I ont

servi de témoins et a reçu une injection du véhicule (huile d'olive) seuls, l'atteinte

hépatique aiguë chez le rat a été induite par une injection intrapéritonéale unique avec CCl4

dissous dans un volume égal d'huile d'olive à la dose de 3 mL / kg de poids corporel,

groupe II. Groupe III a été administré l’extrait méthanolique de CI à une dose de 100 mg /

kg suivit par une injection ip par le CCl4, à une dose de 3ml/kg poids corporel. Groupe IV

a été administré l’extrait méthanolique de MP à une dose de 200 mg / kg suivit par une

injection ip par le CCl4, à une dose de 3ml/kg poids corporel. Groupe V a été administré la

molécule de la quercétine à une dose de 0.33 mg/kg suivit par une injection ip par le CCl4,

à une dose de 3ml/kg poids corporel et prend comme molécule de référence.

Estimation des taux sérique de ALT, AST Alanine amino transférase (ALT) et aspartate amino-transférase (AST) sont considérés

Comme mesure quantitative de l'atteinte hépatique provoqué par le CCl4. les activités de

l’ALT et AST dans le sérum ont été mesurées en utilisant l'analyseur automatique

(Architedt c Système).

Estimation des substances réactives d’acides thiobarbiturique (TBARS)

Les niveaux TBARS, representent un indice de malonyldialdehyde (MDA), le dernier

produit de décomposition des lipides causés par le stress oxydatif, a été évaluée par la

méthode de l'acide thiobarbiturique des substances réactives (TBARS) et a été exprimée

en nmol / g de poids de tissue et a été déterminé par le méthode de Ohkawa et al. (1979).

Brièvement, une aliquote de 500ml d'homogénats de tissus (10%, p / v) a été bien mélangé

avec une solution aqueuse d'acide thiobarbiturique ( 0.67% , 1ml ) et d'acide

trichloroacitique ( 20% , 0.5 ml) et chauffée à 95°c pendant 15 min dans un bain de l’eau .

La suspension est ensuite refroidie à température ambiante. Après refroidissement, 4 ml n-

butanol ont été ajoutés et mélangés vigoureusement. La couche de n-butanol a été séparé

par centrifugation à 3000 tr / min pendant 15 min. l'absorbance du surnageant de couleur

rose a été prise pour la mesure de la spectrophotométrie à 530 nm pour le dosage de MDA.

Le résultat a été comparé à une courbe standard de malondialdéhyde (MDA) et les résultats

sont exprimés en nanomoles MDA par gramme de poids frais de tissu.

131

L’activité de la catalase L’activité de la catalase (CAT) a été mesurée par la méthode de (Clairborne, 1985). Une

partie aliquote de surnageants homogénat (50µl) a été ajouté à une cuvette de quartz et la

réaction a été lancé par l'ajout de H2O2 fraîchement préparés (19mm) dans un tampon

phosphate (50 mM, pH 7,0). Le taux de décomposition de H2O2 a été mesuré par

spectrophotométrie à 240 nm pendant 120 s. L'activité de la CAT a été exprimée en H2O2

mmol / g de poids de tissu / min.

Poids corporel Après l'administration de CCl4, le poids corporel des rats a été mesuré et comparé au

groupe témoin. Le poids corporel des rats a été mesuré dans les groupes avant et après

l’administration de CCl4 et comparé le temps de changements de poids dans chaque groupe.

Analyse statistique Les résultats sont exprimés en moyenne ± SE M et toutes les comparaisons statistiques ont

été réalisées au moyen d'un test ANOVA suivie par Tukey-Kramer comparaisons multiples

essais. La différence présentant un niveau P de 0,05 ou inférieure a été considérée comme

statistiquement significative.

Résultats et discussion : Le DPPH est habituellement utilisé comme un réactif pour évaluer l'activité antioxydante

de l’effect scavenger des radicaux libres (Oyaizu, 1986). Le DPPH est un radical libre

stable, capable d’accepte un électron ou une radicale d’hydrogène pour devenir une

molécule diamagnétique stable (Soares et al., 1997). La capacité de réduction du radical

DPPH est déterminée par la diminution de l'absorbance à 517 nm induite par les

antioxydants. La Quercétine, la rutine et l'acide gallique sont des composés utilisés comme

standards. Les extraits sont capables de réduire le radical DPPH stable au

diphenylpicrylhydrazine de couleur jaune. l’effect scavenger des extraits méthanoliques de

la Centaurea incana et de la Matricaria pubescens et les normes avec le radical DPPH est

dans l'ordre suivant: Centaurea incana (0,369 mg / ml)< rutine (0,361 mg / ml)<

quercétine (0,34 mg / ml)< Matricaria pubescens (0,162 mg / ml)< L'acide gallique (0,058

mg / ml). Les données expérimentales de ces espèces révèlent que ces extraits ont un effet

scavenger des radicaux libres (Fig. 28).

132

Dans le dosage de β-carotene / acide linoleique, la capacité antioxydante est déterminée en

mesurant l'inhibition des composés organiques et le diène conjugué hydroperoxydes issus

de l'oxydation de l'acide linoléique (Tepe et al., 2005). Ce test a été utilisé pour simuler

l'oxydation des composants des lipides membranaires dans la présence d'antioxydants dans

la cellule (Mata et al., 2007). Les résultats obtenus à partir d’extraits méthanoliques de la

Centaurea incana et de la Matricaria pubescens sont présentés au tableau 8 et Fig.29. Des

échantillons d’extraits méthanoliques de la Centaurea incana et de la Matricaria

pubescens montre l'inhibition de la peroxydation lipidique élevé 97,05% et 100,25%,

respectivement, en une concentration de 2 mg / mL, soit plus que le BHT (96,04%) dans

les mêmes concentrations.

La collecte systématique de la littérature, se rapportant à cette enquête indiquent que les

composés phénoliques végétaux constituent l'un des principaux groupes de composés

agissant comme antioxydants primaires ou radicale libre terminateurs. Par conséquent, il

est utile pour déterminer leur teneur total dans les plantes choisies pour l'étude. Les

Flavonoïdes sont susceptibles d'être des composés phénoliques naturels les plus importants,

comme l'un des groupes les plus diversifié et large des composés naturels (Agrawal, 1989).

Ces composés possèdent un large éventail d'activités chimiques et biologiques, notamment

les propriétés radicales scavenger.

La teneur totale du contenu phénolique présentée dans la Centaurea incana et la

Matricaria pubescens a été montré dans le tableau 7. Dans (1g), de la Centaurea incana et

de la Matricaria pubescens, 27.11 et 53.27 mg de phénols équivalent d’acide gallique,

respectivement, a été détectée. Les composés phénoliques sont connus en tant que

puissante chaîne de rupture antioxydants (Shahidi & Wanasundara, 1992). Les phénols

sont des composés très importants de la plante en raison de leur effef scavenger à cause de

leurs groupes hydroxyles (Hatano et al., 1989). Les composés phénoliques sont contribués

directement à une action antioxydante. sont l'une des produits secondaires les plus

largement distribués dans les plantes. La capacité de ces composés à agir comme des

antioxydants a été bien établi. Les polyphénols sont multifonctionnels en agissant comme

agents réducteurs, des antioxydants donneurs d'hydrogène et des Quenchers de l’oxygène

singulet (Rice-Evans et al., 1996).

133

La teneur totale en flavonoïdes présents dans la Centaurea incana et la Matricaria

pubescens a été montré dans le tableau 7. Dans (1g), de la Centaurea incana et de la

Matricaria pubescens, 11,70 et 20,00 mg de flavonoïdes quivalent de quercétine et 24,46

et 43,44 mg de flavonoïdes quivalent de rutine / poids sec de la plante, respectivement, a

été détectée.

Il ya eu un intérêt considérable ces dernières années dans les effets cytoprotecteurs et

hépatoprotecteurs des flavonoïdes, en particulier dans le contexte de leurs modes d'action

comme antioxydants. Les propriétés des flavonoïdes comme des donneurs d'électrons

sont bien définie pour expliquer leurs propriétés antioxydantes in vitro (Bors et al. 1995;

Castelluccio et al., 1995, Rice-Evans et al., 1996). le potentiel de réduction important des

flavonoïdes est déterminé Structurellement par le modèle d’hydroxylation, 3 ', 4'-

dihydroxy catéchol dans la structure de l'anneau -B, la planéité de la molécule et la

présence de la liaison C2-C3 insaturée en conjugaison avec la fonction 4-oxo dans le

l'anneau –C.

De nombreuses études ont décrit l'efficacité antioxydante des flavonoïdes dans l'inhibition

de la peroxydation lipidique (Castelluccio et al., 1995, Salah al., 1995; Hirano et al.,

2000). En outre, leur capacité à agir comme des antioxydants in vitro est basée sur la

capacité chélateur du métal (Brown et al., 1998; Morel et al., 1998) et sur l'extinction de

l'oxygène singulet (Tournaire et al., 1993). Toutefois, bien que les flavonoïdes réagissent

rapidement avec les ROS dans les systèmes chimiques in vitro, leurs réactions, in vivo,

seront tributaires de la forme qui est biodisponible pour les cellules et les tissus.

Bien que les données démontrant les effets in vitro de flavonoïdes comme des antioxydants

ou des modulateurs des fonctions protéiques sont considérables, peu des informations sont

connu sur le potentiel antioxydant et la bioactivité des métabolites en flavonoïdes in vivo.

Ceci est surprenant puisque les enquêtes dans les années 1950 au début des années 1960

chez les mammifères déjà indiqué que la plupart des flavonoïdes sont conjugués et

métabolisé principalement dans le foie ou dégradés par la flore colique (Schoeter et al.,

2002).

En général, l’extrait méthanolique de la Centaurea incana et de la Matricaria pubescens a

montré une forte activité antioxydante, le radical DPPH et β-carotene/linoleate par rapport

à des standards tels que la quercétine, la rutine, l'acide gallique et le BHT. L'effet

134

antioxydant de la Centaurea incana et de la Matricaria pubescens est dû aux composants

phénoliques. Ainsi, l’effet scavenger des extraits méthanoliques de la Centaurea incana et

de la Matricaria pubescens du radical DPPH sera essentiellement lié à leurs groupes

hydroxyles phénoliques. La concentration de peroxyde d'hydrogène dans l'eau varient

selon les composés phénoliques. Étant donné que les composés phénoliques présents dans

l'extrait sont des donneurs bien d'électrons, ils accélèrent la conversion de H2O2 en H2O

(Ruch et al., 1984).

En tant que des bonnes donneurs d'électrons, elles montrent la capacité réductrice sur la

réduction de Fe3+ en Fe2+ . Ainsi, la Centaurea incana et la Matricaria pubescens contient

une quantité notable de phénols et des flavonoïdes et peut jouer un rôle majeur dans

l'inhibition antioxydant potentiel. Les resultats de cette étude ont indiqué que la Centaurea

incana et la Matricaria pubescens peuvent être utilisés comme source naturelle des

antioxydants facilement accessible et en tant que possible d'utiliser dans l'industrie

pharmaceutique.

L’effet de la Centaurea incana et la Matricaria pubescens sur la toxicité hépatique induite par le CCL4 L'injection intrapéritonéale unique avec le CCl4 causé une hépatotoxicité grave chez le rat,

comme en témoigne l'élévation significative des activités sériques des AST et ALT après

l'administration de CCl4. Les effets protecteurs d'un prétraitement avec Centaurea incana

et la Matricaria pubescens sur l'élévation des activités sériques de AST et ALT induite par

le CCl4 sont présentées dans la figure (32, 33). On remarque que Les activités sériques des

AST et ALT dans le groupe de CCl4 sont beaucoup plus élevées que ceux du groupe

témoin. Toutefois, le prétraitement avec Centaurea incana et la Matricaria pubescens

empêche considérablement l'élévation des activités sériques des AST et ALT induite par

le traitement de CCl4. En conséquent un prétraitement avec Centaurea incana à une dose

de 500 mg / kg et la Matricaria pubescens à une dose de 800 mg/kg empêche

partiellement l'élévation des AST et ALT.

Comme indiqué dans la Fig. (40, 41, 42), la concentration de MDA, un produit final de la

péroxydation lipidique, chez les rats traités avec le CCl4 a augmenté de 2,7 fois en

comparaison avec les rats témoins. Compatible avec les activités sériques des AST et

ALT, un prétraitement avec Centaurea incana et la Matricaria pubescens pendant 4

semaines chez les rats et une semaine chez les souris a permis une diminution importante

135

de la concentration de MDA en comparaison avec le groupe de CCl4. En outre, à 24 h,

L'activité de la catalase

est augmentée chez les rats traités avec le CCl4 par rapport au groupe témoin.

le tétrachlorure de carbone est le mieux xénobiotique caractérisé par l’induction de

l'hépatotoxicité. Il est fréquemment employé en tant que modèle pour étudier l’effet

antihepatotoxique. Il est métabolisé dans l'organisme à un radical trichlorométhyl

hautement réactif (CCl3°) qui attaque la membrane phospholipidique stimulant la

peroxydation lipidique et la lyse cellulaire (Brent et Rumack, 1993).

L'objectif de la présente étude était d'étudier les potentiels antioxydants et les effets

hépatoprotecteurs de Centaurea incana et la Matricaria pubescens sur les dégâts des

radicaux libres sur le foie provoqués par le tétrachlorure de carbone chez les rats et les

souris.

Le foie est bien connu pour être l'organe principal responsable du métabolisme des

médicaments et des produits chimiques toxiques, il est donc le principal organe cible pour

presque tous les produits chimiques toxiques (Bessel et al., 2001; Larrey, 2000; Lee, 2003).

Diverses substances pharmacologiques ou chimiques sont connus comme cause des lésions

hépatiques, tels que le CCl4. l’exposition à une dose excessive à ces hépatotoxines

provoque une atteinte hépatique aiguë caractérisée par une anomalie de la fonction

hépatique, et une dégénérescence, une nécrose ou une apoptose des hépatocytes (Basu,

2003; Higuchi & Gores, 2003; Kaplowitz, 2002; Nelson, 1990).

Nos résultats ont montré que l'administration de CCL4 chez les rats et les souris provoque

des dommages hépatiques aiguës, a démontré par une diminution du poids corporel et

l'élévation significative du poids relatif du foie (Ko et al., 2006; Jeon et al., 2002; Oh et al.,

2002).

L’hépatocytes contiennent de nombreuses enzymes qui sortiront dans le sang dans le cas

où les membranes cellulaires sont endommagées (Stacey et al., 1993). En raison de leur

concentration élevée dans le cytoplasme des hépatocytes, ALT et AST sont des indicateurs

très sensibles des lésions hépato-cellulaire dans le foie. Plusieurs chercheurs ont signalé

l'élévation des transaminases dans le sérum après administration de doses toxiques de

CCL4 chez les rats et les souris.

137

Nos résultats ont montré une augmentation significative de l'activité de l'ALT et AST chez

les rats traités par le CCL4. L'augmentation de l'activité de ces enzymes dans le plasma

suggère un renforcement des lésions hépatocellulaires induit par le CCl4.

Le sérum élevé de la PAL a été classé plus sélectivement pour refléter les dommages

cholestatiques q’une atteinte parenchymateuse (Zimmerman, 1978). Elle se trouve

généralement dans l'épithélium des voies biliaires. Il est également présent dans les

cellules intestinales et rénales. Dans la présente enquête, les concentrations sériques de

l’ALP a été jugée non significative élévation dans le groupe induite par le CCL4 par

rapport aux autres groupes.

La sécrétion hépatocytaire des triglycérides (TG) est rapidement inhibée par le CCl4. le

mécanisme de la sécrétion des TG implique un trafic intracellulaire et exocytose ultime de

la densité très faible de taux de lipoprotéines, les processus qui dépendent de l'intégrité

structurale et fonctionnelle des composants du cytosquelette (Brattin et al., 1985). La

synthèse hépatocytaire des protéines est aussi rapidement déprimé par le CCl4 (Smuckler et

al., 1962). Dans ce cas, l'intégrité structurelle et fonctionnelle du réticulum endoplasmique

est compromise. Finalement, les lysosomes, les mitochondries et la membrane plasmique

subir des lésions irréversibles (Brattin et al., 1985).

Dans notre étude, on a été trouvé que la sécrétion hépatocytaire des TG et la synthèse

protéique diminuer de manière significative dans le groupe induite par le CCL4 par rapport

aux autres groupes.

La peroxydation lipidique est souvent le premier paramètre quand ils les chercheurs

veulent prouver l'implication des radicaux libres dans les dommages cellulaires. C’est une

importance particulière comme une réaction en conséquence dommageable à la production

de radicaux libres (Holley & Cheeseman, 1993), en raison de sa présence dans les

membranes des cellules (Pater et al., 1992), où le processus autocatalytique naturel est

lancé (Stacey et al., 1993), et le constat que la peroxydation lipidique hépatique et la

nécrose ont été trouvés à se produire en conséquence ultime(Maellaro et al., 1990;

Mohamed et al., 1999).

Ici, on a examiné le degré du stress oxydatif induit par le CCL4 par la détermination de la

concentration du MDA. Les résultats on été montré que l’administration du CCL4

provoque des dommages hépatiques aigue sévère chez les rats et les souris, démontré par

138

l’élévation significative du contenu du MDA. On outre, l’activité de la catalase est

augmentée par le CCL4 chez les souris et les rats.

Pour des stratégies thérapeutiques des lésions hépatiques et des maladies, nous postulons

qu'il est important de trouver des composés antioxydants qui sont capables de bloquer les

lésions hépatiques issues par le radical trichlorométhyl générés par le CCl4. nous avons

fortement spéculé que la Centaurea incana et la Matricaria pubescens peuvent protéger

contre les maladies qui sont causées par les radicaux libres, parce qu'il a une activité de

piégeage radical.

Dans notre étude, on a remarqué que le traitement par les extraits methanoliques de la

Centaurea incana et la Matricaria pubescens a un potentiel effet protecteur contre le stress

oxydatif induit par le CCL4 chez les rats et les souris, ce traduit par une diminution

remarquable au niveau du MDA, on outre, les extraits methanoliques de la Centaurea

incana et la Matricaria pubescens peuvent améliorer les dommages hépatiques aigue à

haut degré, démontré par la réduction des niveaux des transaminases sériques des AsT et

AlT.

En conclusion, notre étude a été démontrée que la Centaurea incana et la Matricaria

pubescens ont un grand effet hépatoprotecteur sur les dommages hépatiques aigues induit

par le CCL4. Les mécanismes sous-jacents hepatoprotecteurs de l'extrait méthanolique de

la Centaurea incana et de la Matricaria pubescens être liée à ses propriétés et les effets de

balayage radicale indicat comme un régulateur des systèmes anti-oxydants, où on peut les

utiliser dan la thérapeutique des situations cliniques, mais d'autres études devraient être

menées à l'avenir.

139

وضيفة كبدية غير عادية الحادالتعرض

أضرار كبدية حادة و مزمنة التقدم في العمر الفوسفثاز القلوي الكحولاألمراض الكبدية الناتجة عن األلدهيدات

جذر األلكوكسيل تخريب الميثابوليزم الخلوي ئية تخرب النفاذية الغشا األحماض األمينية بقايا األحماض األمينية مبنجات مسكنات التقنيات التحليلية المظاهر التشريحية و الفسيولوجية للكبد

أنيون السوبيرأكسيد مضادة للتأكسد األنظمة الدفاعية المضادة لألكسدة موت خلوي مبرمج صمغ عربي منتجات عطرية الذرات تحلل ذاتي طبيعي

Abnormality of hepatic function

Acute exposure

hepatic injury and chronic Acute Aging

Alcalin Phosphatase

Alcohol hepatitis

Aldehydes

Alkoxyle radical Alterred cell metabolism

Altered permeability of membrane

Aminic acide

Amino acide residues

Anaesthetics

Analgesic

Analytical techniques

Anatomical and physiological aspects

of the liver

Anion superoxyde

Antioxidant

Antioxidant defence systems

Apoptosis

Arabic gomme

Aromatic products

Atoms

Autocatalytic natur

141

إرجاع–التوازن أكسدة

غشاء قاعدي

جزيئة بيولوجية

األنسجة البيولوجية

التحويل الحيوي

الدم

وزن الجسم

المخ

سرطان

رباعي كلوريد الكربون

لخليةا

الضرر الخلوي المركبات الخلوية الدفاع الخلوي الجهاز العصبي المركزي تنقرز الفص المركزي كلوروفورم تشمع الكبد

المتزاوجات المترابطة الميكروزومية المجموعة الشاهدة

P450 السيثوكروم إنزيمات

الهيكل الخلوي

إنزيمات االنهيار نزع مجموعة أمين كشف الجذور الحرة

العوامل الغذائية

Balance Rodox

Basement membrane

Biological molecule

Biological tissue

Biotransformation

Blood

Body weight

Brain

Cancer Carbon tetrachloride

Cell

Cell damage Cellular components Cellular defence Central nervous system activity Centrilobular necrosis

Chloroform Cirrhose Conjugated dienes microsomal Control group Cytochrome P450 enzymes Cytoskeleton

Depression enzymes

Desamination Detection of free radicals

Dietary factors

142

نزع مجموعة الهيدروآسيل معامل التخفيف األكسجين األحادي مباشرتسمم خلوي مباشرة ثوكسينات كبدية الصفراوية ةخلل في تخليق العصار العقاقير و المواد المحرضة للعطب

الكبدي أيض العقاقير التنفسي الجهازباضطرا

مشتقات أيضية الكثروفيلية تدفق الكثروني النواتج النهائية الجزيئات داخلية المنشأ أنذوبالزمية شبكة

طاقة األكسدة االنزيميةمضادات التثبيط اإلنزيمي األنشطة اإلنزيمية

حالالت الكريات الحمراء الجزيئات خارجية المنشأ

الحيوان التجارب على

تجريبية دراسات

التشحم الكبدي

أنثى

تليف النسيج

الفالفونويدات

جذور حرة

Dihydroxylation

Dilution factor

Dioxygène singulet

Direct cytotoxicity

Direct hepatotoxicants Disturbance of biliary production

Drug- induced liver injury

Drug metabolism

Dysfonction respiratory

Electrophilic metabolites Electron flux

End products Endogenous molecules Endoplasmic reticulum Energy Enzymatic antioxidants Enzymatic deactivation

Enzyme activities

Erythrocyte lysates Exogenous molecules Experimental animals

Experimental studies Fatty liver

Female Fibrous tissue

Flavonoids

Free radicals 143

أنبوبة معدية

معوي-األنبوب المعدو

خفض الجلوثاثيون

الجلوثاثيون بيروكسيداز إنزيمات

القلب

السرطان الكبدي

عطب كبدي

التجدد الكبدي

التشحم الكبدي

خلوية-أضرار كبدو

تمزق خلوي كبدي

خاليا كبدية

موت الخلية الكبدية

إفراز الخلية الكبدية

النشاط المضاد للسمية الكبدية

عامل مسمم للكبد

المتجانس الخالط الكهربائي

مانح للهيدروجين

بيروكسيد الهيدروجين

جذور الهيدروبيروكسيد

إدخال مجموعة الهيدروكسيل أو الهدركسلة

جذر الهيدروكسيل

ارتفاع السكري

األكسيجينارتفاع ضغط

فرط النمو

االبوكلوريث

الكريات الدموية الحمراء البشرية

عدم التوازن مناعية

Gastric tube

Gastro-intestinal tract

Glutathion depletion

Glutathion peroxidases

Heart

Hepatic cancer

Hepatic injury

Hepatic regeneration

Hepatic steatosis

Hepatocellular injury

hepatocellular lesions

Hepatocytes

hepatocyte death

Hepatocyte secretion

Hepatoprotective Activity

Hepatotoxicant agent

Homogeneiseur

Hydrogen donors Hydrogen peroxide

Hydroperoxide radical

Hydroxylation

Hydroxyle radical

Hyperbaric oxygen

Hyperglycemia

Hypertrophy Hypochlorite

Human erythrocytes

Imbalance

Immunological144

األمراض االلتهابية

مرحلة البداية

صفاق البطن حقن في

أضرار غير عكسية

التلف الكلوي

فوق أكسدة الليبيدات الميكروزومية

الكبد

المؤشرات اإلنزيمية الكبدية

الجزيئات منخفضة الوزن الجزيئي الجزيئات الخلوية الكبيرة

الخاليا البالعة ذآر ذكور الجرذان البيضاء البالغة المعادن المرتبطة بالبروتينات

المعدنيةاأليونات

المستخلص الميثانولي

متللة

فئران ميثاكوندريا

آلية التأثير االخاليا القاتلة طبيعي

تنقرز

إنحالل الخاليا العصبية

Inflammatory diseases

Initiation step

Intraperitoneal injection

Irreversible injury

kidney damage

Lipid peroxidation microsomal Liver

Liver marker enzymes

Low molecular weight substances

Macromolecular cell Macrophages

Male

Mal wistar albino rats

Metal-binding proteins

Metal ions

Methanolic extract Methylation Mices Mitochondria Mode of action

Naturel killer cell

Necrosis

Neurodegeneration Nucleic acid

145

العضيات

مذيب عضوي

عطب تأكسدي

الفسفرة التأكسدية

اإلجهاد التأكسدي

ذر أكسيد النيثريكج

أكسدة الليبيدات الغشائية

أكسدة البروتينات اإلنتاج المفرط

الضرر البرانشيمي

حاالت مرضية

البيروكسينيثريث

جذر البيروكسيل

عملية البلعمة صيدالنيةتحضيرات

جزيئات صيدالنية

األحماض الفينولية

حمض الفوسفوريك

التأثير السام الحلقات المتعددة العطرية الهيدروكربونية

متعددات الفينوالت

متعددات السكاكر

األحماض الذهنية المتعددة غير المشبعة

لية دراسة حا الفعل الواقي

العضو الرئيسي المستهدف

المسارات المرضية

األنواع المولدة لألكسدة مرحلة االنتشار

Organelles

Organic solvant

Oxidative injury

Oxidative phosphorylation Oxidative stress

Oxide nitric radical

Oxidized membrane lipids

Oxidized proteins Over production

Parenchymal injury

pathological situations

Peroxinitrite

peroxyle radical

Phagocytosi

pharmaceutical preparations

pharmacological substances

Phenolic acides

Phosphoric acid

poisonous effect

polycyclic aromatic hydrocarbons

Polyphenols Polysaccharids

Polyunsaturated faty acides (PUFAs)

present investigation

Preventive effect

primary target organ

Process pathology

Prooxidants

146

التقاط الجذور

جرذان

)النشطة( أنواع األكسجين الفعالة

المستقبالت

الوزن النسبي للكبد

االلتهاب التنفسي

اآلسرالنشاط

أيضية الثانويةمنتجات

السيلينيوم

كوليسثيرول مصلي

اختبارات المصل األنزيمية

ارتفاع معنوي

خاليا جيبيه جهاز التحليل الطيفي

منحنى العيارية

الخطأ المعياري المتوسطي

إنزيم السوبيرأوكسيد ديسموثاز

التدخين

مرحلة النهاية

اإلستراتيجيات العالجية

المجموعات الكبريتية

كيماويات سامة

رسل ثانوية سامة

عملية االستنساخ

األيونات المعدنية اإلنتقالية

ثيلجذر ثالثي كلور المي

الجليسريدات الثالثية

Radical scavenging

Rats

Reactive oxygen species ( ROS)

Receptors

Relative liver weight

Respiratory burst Scavenger activity

Secondary metabolites

Selenium Serum cholesterol

Serum enzymatic tests

Significant elevation

Sinusoids Spectrophotometer

Standard curve

Standard error of the mean Superoxide dismutase SOD

Tabac Termination step Therapeutic strategies Thiol groups

Toxic chemicals

Toxic secondary messenger Transcription

Transition metal ions Trichloromethyl free

radical

Triglycerides

147

رسل ثانوية سامة

عملية االستنساخ

األيونات المعدنية اإلنتقالية

جذر ثالثي كلور الميثيل

الجليسريدات الثالثية

لكترون غير مرتبطإ

اإلشعاعات فوق البنفسجية

ليبوبروتينات جد منخفضة الكثافة

األمراض الكبدية الناتجة عن الفيروسات

سائل متبخر

الفيثامينية مضادات األكسدة

مؤشرات جد حساسة

وزن النسيج

)غير بيولوجية ( مواد غير إحيائية

Toxic secondary messenger

Transcription

Transition metal ions

Trichloromethyl free radical

Triglycerides

Unpaired electron UV-radiation

Very low density of lipoproteins

Very sensitive indicators Viral hepatitis

Volatile liquid

Vitaminic antioxidants

Weight tissue Xenobiotics

148

:المراجع

braham, P., Wilfred, G., Cathrine, S.P., 1999. Oxidative damage to the lipids and proteins of the lungs, testis and kidney of rats during carbon tetrachloride intoxication. Clinica Chimica Acta 289, 177–179.

Aclinou.P., Boukerb.A., Bouquant.J., Massiot.G .et Le Men-Olivier.L. ( 1982).

Plantes des Aures : Constituants des Racines de Centaurea incana. Plantes medecinales et phytothérapie. pp.303-309.

Adenot, M. (2000). Initiation à la chimie médicinale: les voies de la découverte des medicaments. Ellipses. Pp.77.

Agrawal, P. K. (1989). Carbon-13 NMR of flavonoids. New York: Elsevier. Akbar S, Fries DS, Malone MH. (1995). Effect of various pretreatments on the

hypothermic activity of repin in naïve rats. J Ethnopharmacol;49:91–9. Albert, M.G., Rousselot, D.B., Abedinzadeh, Z et Gore, D. (2003). Espèces

réactives de l’oxygène : Comment l’oxygène peut-il devenir toxique ?. Mécanisme Biochimique. 91-96.

Al-Easa, H.S., Kamel, A., Rızık, A.F. (1992). Flavonoids from Centaurea sinaica. Fitoterapia 63, 468–469.

Ali, Y.E., Omar, A.A., Sarg, T.M., Slatkin, D.J. (1987). Chemical constituents of Centaurea pallescens. Planta Medica 53, 503–504.

Allen, S. (2002). The liver: Anatomy, physiology, disease and treatment. Al-omar, M.A., Beedham,C. and Alsarra, I.A. (2004). Pathological roles of

reactive oxygen species and their defence mechanisms. Review Article. Saudi Pharmaceutical Journal.12.1-18.

Amacher, D.E.(2002). A toxicologist’s guide to biomarkers of hepatic response. Human. Exp.Toxicol. 21: 253-262.

Anders, M.W. (1988). Bioactivation mechanisms and hepatocellular damage. In: The Liver: Biology and Pathobiology (2nd edition). ed. Arias, I.M., Jakoby, W.J., Popper, H., Schachter, D. and Shafritz, D. pp. 389-400, New York: Raven Press.

Anton,R. (1999). Plantes thérapeutiques tradition, pratique officinale, science

et thérapeutique. 3ème éd .P25.

150

Aslan A., Güllüce M., Sökmen M., Adigüzel A., Sahin F. and Özkan H. (2006). Antioxidant and antimicrobial properties of lichens Cladonia foliacea, Dermatocarpon miniatum, Everinia divaricata, Everinia prunastri and Neofuscella pulla. Pharm. Biol. 44, 247-252.

Avallone. R., Zanoli. P., Puia. G., Kleinschnitz. M., Schreier. P and Baraldi. M (2000). Pharmacological profile of apigenin, a flavonoid isolated from Matricaria chamomilla. Biochem Pharmacol 59:1387–1394

Aust, S.D. and Svingen, B.A. (1985). Free radical in Biological systems. Acad. Press. London. 1-28.

adouard, C.D. (2006). Les lésions des acides nucléiques :détection par CLHP-SM/SM dans les milieux biologiques humains et intérêt comme biomarqueurs du stress oxydant et de l’inflammation. UNIVERSITE JOSEPH FOURIER-GRENOBLE. Thèse de Doctorat. Spé . Biotechnologie, Santé, Management. Pp. 228.

Bahcecioglu, I.H., Ustundag, B., Ozercan, I., Ercel, E., Baydas, G., Akdere, T., Demir, A., 1999. Protective effect of Ginkgo biloba extract on CCI4-induced liver damage. Hepatology Research 15, 215–224.

Bahorun, T. (2003). Substances Naturelles Activities : La flore Mouricienne, une source d’approvisionnement potentielle. 1-11.

Balazs, T., Airth, J.M. and Grice, H.C. (1962). The use of serum glutamic pyruvic transaminase test for the evaluation of hepatic necrotropic compounds in rats. Canad. J. Biochem. Physiol., 40: 1-6.

Barrero, A.F., Herrador, M., Arteaga, M., Cabrera, P., Rodriguez-Garcia, E., Garcia- Moreno, I.M., Gravalos, D.G.(1997). Cytotoxic activity of flavonoids from Carthamus arborescens. Ononis natrix ssp. ramosissima and Centaurea malacitana. Fitoterapia 68, 281–283.

Bastos, M.M.S.M., Kijjoa, A., Pinto, M.M.M. (1994). Constituents of Centaurea

ornate ssp. ornata. Fitoterapia 65, 191.

Basu, S. (2003). Carbon tetrachloride-induced lipid peroxidation: eicosanoid formation and their regulation by antioxidant nutrients. Toxicology, 189 : 113-/127.

Baynes, J. and Thorpe, S.R. (2000). Oxidative stress in diabetes In: Antioxidants in diabetes management ed. Packer.L., Rosen.P., Tritschler.H.J., King.G.L and Assi.A, global net work of molecular& cell biology. 77-91. Bellomo, G. and Orrenius, S. (1985). Altered thiol and calcium homeostasis in oxidative hapatocellular injury. Hepatology, 5: 876-882.

151

Bidet.O ., Gaignault.J.C ., Girard.P . and Tritin.F.(1987). Inflamation.Allergie douleur et acide arachidonique :du jurdin des héspérides à la caxade de l’acide arachidonique :les flavonoides .l’actualité chilique.P89-97.

Bierl, C., Forgione, M. and Lascalzo, J. (2006). The antioxidant hypothesis. In : Antioxidants cardiovascular disease. ed. Bourassa. M.G and Tardif.J.C. pp 87-101. Springer Science+ Business Media, Inc.

Blair, I.A., Lawson, J.A., Ischiropoulos., H. and Fitzgerald, G.A. (2006). Biomarkers of oxidant stress in vivo: Oxidative modifications of lipids, proteins and DNA. In : Antioxidants cardiovascular disease. ed. Bourassa. M.G and Tardif.J.C. pp 131-165. Springer Science+ Business Media, Inc.

Bors. W., Michel C and Schikora S. (1995). Interaction of flavonoids with

ascorbate and determination of their univalent redox potentials: a pulse radiolysis study. Free Radic. Biol. Med. 19. 1 pp. 45–52.

Bouharun, T., Gressier, B., Trotin, F., Brunet, C., Dine, T., Vasseur, J., Gazin,

J.C., Pinkas, M., Luyckx, M. and Gasin, M. (1996). Oxygen species scavenging activity of phenolic extracts from Hawthorn fresh plant organs and pharmaceutical preparation. Arezneim-Forsh/ Drug Res. 1-6.

Bourassa, M.G. and Tardif, T.C. (2006). Synthetic antioxidants and atherosclerosis. In : Antioxidants cardiovascular disease. ed. Bourassa. M.G and Tardif.J.C. pp 254-278.. Springer Science+ Business Media, Inc.

Brown. E., Khodr. H., Hider R.C and C. Rice-Evans. (1998). Structural

dependence of flavonoid interactions with Cu2+ ions: implications for their antioxidant properties. Biochem. J. 330 Pt 3. pp. 1173–1178.

Brattin, W.J., Glende, E.A. and Recknagel, R.O. (1985). Pathological Mechanisms in Carbon Tetrachloride Hepatotoxicity. Journal of free radicals in biology & Medicine, pp. 27-38. Pergamon Press Ltd.

Brent, J.A. and Rumack, B.H. (1993). Mechanisms. Role of free radicals in toxic hepatic injury. I. Free radical biochemistry. Clinical Toxicology 31, 139_/171. Bridges, J.W.., Benford, D.J. and Hubbard, S.A. (1983). Mechanisms of toxic injury. Ann. N.Y. Acad. Sci., 407: 42-63. Brind, A.M. (2002). Drug that Damage the Liver. 21-23. The Medicine Publishing Company Ltd.

Bronner, W.E., Beecher, G.R.(1995). Extraction and measurement of prominent flavonoids inorange and grapefruit juice concentrates. Journal of Chromatography A. 705: 247-256.

Brown, J. E., Kho dr, H., Hider, R.C and Rice-Evans, C. (1998). Structural

dependence of flavonoid interactions with Cu2+ ions: implications for their antioxidant properties. Biochem. J. 330 :1173-1178.

152

Bruneton, J. (1999). Pharmacognosie, Phytochimie, Plantes médicinales, (3ème

éd.). Paris: Editions médicales internationnales, éditions Tec & Doc Lavoisier, 1120p. Bülent. Y. K. G., Demirci. B. İ ., Başer. K.H.C and Çelik S. (2007).

Antimicrobial activity of the essential oil of Centaurea aladagensis. Fitoterapia 78 253–254.

Burists, M., Bucar, F. (2000). Antioxidant activity of Nigella sativa essential oil. Phytother Res. 14: 323-328.

Bus, J.S. and Gibson, J.E. (1984). Paraquat: model for oxidant- initiated toxicity. Perspect., 55: 37-46.

adenas, E. (2000). Mechanisms of oxygen activation and Reactive Oxygen Species Detoxification.In: Oxidative Stress and Antioxidant Defenses in Biology. ed . Ahmad. S. pp.1-61, CHAPMAN& HALL: An International Thomson Publishing Company.

Cadenas, E. (2004). Mitochondrial free radical production and cell signalling. Mol. Aspects. Med. 25: 17-26.

Cadenas, E. and Davis, K.J. (2000). Mitochondrial free radical generation, oxidative stress, and aging. Free. Radic. Biol. 29: 222-230.

Castelluccio. C., Paganga. G., Melikian. N., Bolwell. G.P., Pridham. J.,

Sampson. J et al. (1995). Antioxidant potential of intermediates in phenylpropanoid metabolism in higher plants. FEBS Lett. 368 .1 pp. 188–192.

Castro, G.D., Diaz Gomez, M.I., Castro, J.A. (1997). DNA bases attack by reactive metabolites produced during carbon tetrachloride biotransformation and promotion of liver microsomal lipid peroxidation. Research Communications in Molecular Pathology and Pharmacology 95, 253–258.

Cattley, R.C. and Popp, J.A. (2002). Liver. Handbook of Toxicologic Pathology, Academic press. 2; 187-225.

Cawthorne, M.A., Bunyan, J., Sennitt, M.V. and Green, G.(1970). Vitamin E and hepatotoxic agents. Vitamin E, synthetic antioxidants and carbon tetrachloride toxicity in the rat. Br. J. Nutr.24 : 357-384.

Cerf, M., Couturier, D., Doumith, R., Gouffler, E., Halaby, G., Hautecouverture, M., Letonturier, Ph., Luton, J.P., Messing, B., Turpin, G. (1978). Physiologie: physiologie endocrinienne et métabolique, physiologie digestive. Tome 1. 299-348. J.b.baillière.

153

Chen, Y., Miles, A.M. and Grisham, M.B. (2000). Pathophysiology and reactive oxygen metabolites. Oxidative Stress and Antioxidant Defenses in Biology. ed . Ahmad. S. pp.62-95, CHAPMAN& HALL: An International Thomson Publishing Company.

Chen, Y.C., Shen, S.C., Lee, W. R., Hou, W. C., Yang, L. L and Lee,

T.J.F.( 2001). Inhibition of nitric oxide synthase inhibitors and lipopolysaccharide induced inducible NOS and cyclooxygenase-2 gene expressions by rutin, quercetin, and quercetin pentaacetate in RAW 264.7 macrophages. J. Cell. Biochem., 82(4): 537-548.

Cheeseman, K.H. (1989). Methods of measuring lipid peroxidation in biological systems: an overview. In: Free radical, Lipoproteins and membrane lipids. Ed . Crastes De Paulet, A., Doust-Blazy, L. and Paoletti, R. pp. 407-421, New York Plenum Press.

Chi, Y.S., Jong, H.G., Son, K.H., Chang, H.W., Kang, S.S and Kim, H.P.

(2001).Effects of naturally occurring prenylated flavonoids on enzymes metabolizing arachidonic acid: Cyclooxygenases and lipoxygenases. Biochem. Pharmacol. , 62(9) : 1185-1191.

Christofides.Th., Karaliotas.Ch.Con., Sgourakis.G and Karalitas.Con.ch.

(2006). Elements of biliary tract and liver physiology. In: Liver and biliary tract surgery: Embryological anatomy to 3D- imaging and transplant innovations. ed. Karaliotas. C., Broelsch.C and Habib.N.pp 61-67. Springer wienNewYork.

Chucla, M.T., Lamela, M., Gato, A., Cadavid, I.(1988). Centaurea

corcubionensis: a study of its hypoglycemic activity in rats. Planta Medica, 107–109.

Clairborne, A. (1985). Catalase activity. In: CRC Handbook of methods for oxygen radical research. Ed. Greenwald. R.A. CRC Press. Boca. Raton. 283-284.

Compbell, L. (2006). Functional anatomy and blood supply. Anaesthesia and intensive care medicine 7:2 ,49-51.

Cook, N.C., Samman, S. (1996). Flavonoids: Chemistry, metabolism, cardioprotective effects, and dietary sources, J Nutr Biochem 7: 66–76.

Cos, P., Ying, L., Calomme, M., Hu, J.P., Cimanga, K., Van-Poel, B., Pieters,

L., Vlietinck, A.J and Vanden Berghe, D. (1998).Structure-activity relationship and classification of flavonoids as inhibitors of xanthine oxidase and superoxide scavengers. J. Nat. Prod. 61: 71-76.

Cotelle, N. (2001). Role of flavonoids in oxidative stress. Curr. Top. Med. Chem., 1(6), 569-590.

Court, F.G., Laws, P., Morrisson, C.P., Teague, B.D., Metcalfe, M.S., Wemy,

S.A., Holden, S.S., Dennison, A.R., Maddern, G.J. (2004). Subtotal hepatoctomy : A porcine model for the study of liver regeneration. Journal of surgical research 116; 181-186.

154

Crozier, A., Jensen, E., Lean, M.E.J., McDonald, M.S. (1997). Quantitative analysis of flavonoids by reversed-phase high-performance liquid chromatography J. Chromatography A. 761: 315-321.

Cuendet, M., Hostettmann, K., Potterat, O.(1997). Iridoid glucosides with free radical scavenging propreties from fograea blumei. Helvetica Chimica Acta. 80: 1486-1491.

Cyprus, T. and Pratico, D. (2006). Antioxidant and chronic vascular disease: In : Antioxidants cardiovascular disease. ed. Bourassa. M.G and Tardif.J.C. pp , 226-253. Springer Science+ Business Media, Inc.

ahlin, D.C., Miwa, G.T., Lu, A.Y. and Nelson, S.D. (1984). N-acetyl-p-benzoquinoneimine: a cytochrome P450 mediated oxidation product of acetaminophen. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 81:1327-1331.

Dai, Y., Cederbaum, A.I.(1995). Inactivation and degradation of human cytochrome P4502E1 by CCl4 in a transfected HepG2 cell line. J. Pharmacol. Exp. Ther. 275, 1614_/1622.

Dalley, A.F., Moore, K.L. (2006). Embryological and surgical anatomy of the intrahepatic and extrahepatic biliary tree. In: Liver and biliary tract surgery: Embryological anatomy to 3D- imaging and transplant innovations. ed. Karaliotas. C., Broelsch.C and Habib.N.pp 3-16. Springer wienNewYork.

Danni, O., Chiarpotto, E., Arogne. M., Biasis, F., Comoglio, A., Belliardo, F.,

Dianzani, M.U. and Poli, G. (1991). Lipid peroxidation and carbon tetrachloride and 1,2- dibromoethane in isolated rat hepatocytes. Toxicol. Appl. Pharmacol. 110: 216-222.

Dapkevicius, A., Venskutonis, R. Van Beek, T.A. and Linssen, P.H. (1998).

Antioxidant activity of extracts obtained by different isolation procedures from some aromatic herbs grown in Lithuania. J Food Agr Sci. 77: 140-146.

Delattre, J., Beaudeux, J.-L., Bonnefort-Rousselot, D. (2005). Radicaux libres et stress oxydant. Aspect biologiques et pathologiques. Tec & Doc Lavoisier: Londres - Paris - New York.

Delorgeril, M. and Salen, P.(2006). Antioxidant nutrients and antioxidant nutrient- rich foods against coronary heart disease. In : Antioxidants cardiovascular disease. ed. Bourassa. M.G and Tardif.J.C. pp 195-225. Springer Science+ Business Media, Inc. Diallo, B., Fiegel. C., Joyeux. M., Roland. A., Fleurentin. J., Vanhaelen. F.R. and Vanhaelen, M. (1990). Hepatoprotective effects of Cochlospermum Tinctorium Rhizomes: Identification of same active constituents. Ethnopharmacology. 351-355.

155

Di Carlo, G., Mascolo, N., Izzo, A.A., Capasso, F. (1999). Flavonoids: old and new aspects of a class of natural therapeutic drugs. Life Sci., 65(4), 337-353.

Dikalov, S. and Harisson, D.G. (2006). Pharmacological compounds with antioxidant activity. In : Antioxidants cardiovascular disease. ed. Bourassa. M.G and Tardif.J.C. pp 166-194. Springer Science+ Business Media, Inc.

Durand, G., Polidori, A. et Pucci, B. (2003). La vectorisation de pièges à radicaux libres : Nouvelle stratégie thérapeutique. Molécule et matériaux d’intérêt médical. 26-29.

Ducharme, A., Rouleau, J.L. and White, M. (2006). Use of antioxidants in patients with congestive heart failure. In : Antioxidants cardiovascular disease. ed. Bourassa. M.G and Tardif.J.C. pp 451-476. Springer Science+ Business Media, Inc.

Dwivedi, S., Sharma, R. , Sharma, A. , Zimniak, P., Ceci,J. D.,. Awasthi, Y. C

and Boor P J. (2005). The course of CCl4 induced hepatotoxicity is altered in mGSTA4-4 null (−/−) mice. Toxicology 218 (2006) 58–66.

ngelmann, M.D., Hutcheson, R and Cheng, I.F. (2005). Stability of Ferric Complexes with 3- Hydroxyflavone (Flavonol), 5,7-Dihydroxyflavone (Chrysin), and 3',4'-Dihydroxyflavone. J. Agric. Food Chem. 53(8): 2953-2960.

Erben-Russ, M., Bors, W., Saran, M.(1987). Reactions of linoleic acid peroxyl radicals with phenolic antioxydants: a pulse radiolysis study. Int. J. Radiat. Biol. 52, 393-412.

arber, J.L. (1982). Calcium and the mechanisms of liver necrosis. In: Progress in Liver Diseases ( volume VII). Ed. Popper, H. and Schaffner, F. pp. 347-360, New York: Grune and Stratton.

Farrag, N.M., Abd El Aziz, E.M., El-Domiaty, M.M., El Shafea, A.M.(1993). Phytochemical investigation of Centaurea araneosa growing in Egypt. Zagrep Journal of Pharmaceutical Sciences 2, 29–45.

Ferrali, M., Signorini, C., Caciotti, B., Sugherini, L., Ciccoli, L and Giachetti,

D. (1997).Protection against oxidative damage of erythrocyte membrane by the flavonoid quercetin and its relation to iron chelating activity. FEBS Lett. 416(2): 123-129.

Farrell, G.C. (1994). Biochemical mechanisms. In: Drug- Induced Liver Disease. ed. Farrell, G.C. pp. 23-60, London: Churchill Livingstone.

156

Favier, A. (2003). Le stress oxidant: Intérêt conceptuel et expérimental dans la compréhension des mécanismes des maladies et potentiel thérapeutique. Mécanisme Biochimique. 108-115.

Felton, G.W. (2000). Oxidative stress of Vertebrates and Invertebrates. In: Oxidative Stress and Antioxidant Defenses in Biology. ed . Ahmad. S. pp.356-434, CHAPMAN& HALL: An International Thomson Publishing Company.

Fidler. P., Loprinzi. C.L., O’Fallon. J.R., Leitch. J.M., Lee. J.K., Hayes. D.L., Novotny. P., Clemens-Schutjer. D., Bartel. J and Michalak. J.C. (1996) Prospective evaluation of a chamomile mouthwash for prevention of 5-FU-induced oral mucositis. Cancer 77:522–525.

Fiorucci.S. (2006). Activités biologiques de composés de la famille des

flavonoïdes :Approches par des méthodes de chimie quantique et de dynamique moléculaire.P212.

Forni, L.G., Packer, J.E. Slater, T.F. and Willson, R.L. (1983). Reaction of the trichlomethyl and halothane- derived peroxy radicals with unsaturated fatty acids:a Pulse radiolysis study, Chem. Biol. Interact.45: 171-177.

Frankel, E.N. (1998). Hydroperoxide formation in lipid oxidation. Dundee The

Oily Press. 23-41.

Fridovich, I. (1989). Superoxide dismutase an adaptation to a paramagnetic gas. J.Biol.Chem. 264: 7761-776

andillet, A. (2004). Evaluation de la cinétique de régénération hépatique et de l’efficacité de transplantation d’hépatocytes dans différents modèles murins d’insuffisance hépatique. Th. Sciences du vivant. Strasbourg I.17-33.

Gaskill, G.L., Miller, L.M., Mattoon, J.S., Hoffman, W.E., Burton, S.A.,

Gelens, H.C.J., Ihle, S.L., Miller, J.B., Shaw, D.H. and Cribb, A.E. (2005). Liver histopathology and liver and serum alanine aminotransferase and alkaline phosphatase activities in epileptic dogs receiving Phenobarbital. Vet. Pathol. 42: 147-160.

Gavrilov, L. and Tatarinov, V. (1988). Anatomie.

Gebhardt, R. (1992). Metabolic zonation of the liver: regulation and implications

for liver function. Pharmacol. Ther. 53:275-354.

Giordano OS, Pestchanker MJ, Guerreiro E, Saad JR, Enriz RD, Rodriguez AM.(1992). Structure-activity relationship in the gastric cytoprotective effect of several sesquiterpene lactones. J Med Chem;35:2452–8.

157

Gonzalez, F.J. (2004). Role of cytochromes p450 in chemical toxicity and oxidative stress: studies with. Cyp2E1. Mut. Res. 569; 101-110.

Gopal. N and Sengottuvelu. S. (2008). Hepatoprotective activity of Clerodendrum

inerme against CCL4 induced hepatic injury in rats. Fitoterapia. 79. 24–26. Graham, H.D. (1992). Modified Prussian blue assay for total polyphenols. J Agric

Food Chem. 40: 801-805.

Guemouri, L., Yues, A. and Herbert, B. (1991). Biological variability of SOD, CAT and GPx in blood. Clin. Chem. 37: 932-937.

Guengerich, F.P., Wu, Z.L. and Bartleson, C.J. (2005). Function of human

cytochrome P450s: Characterization of the orphans. Biochemical and Biophysical Research Communications 338 ; 465–469.

Guignard.J.L ., Cosson.L ., Henry.M.(1985). Alirégé de phytochimie. MASSON.P.138-154.

aihong, C., Junwei, D., Yang, X., Yanwei. H. and Yifeng, T. (2004). The Sensitive determination of flavonoids by electrochemiluminescence. National Natural Science Foundation, 6: 1-4.

Halliwell, B. and Gutteridge, TMC (1989). Free radicals in Biology and medicine. Clarendon Press. Oxford.

Halliwell, B. and Gutteridge, J.M.C. (1984). Oxygen toxicity, oxygen radicals, transition metals and disease. REVIEW ARTICLE. Biochem. J. 219 : 1-14.

Halliwell, B. (2000). Oxidative stress markers in human disease: Application to diabetes and to evaluation of the effect of antioxidant In: Antioxidants in diabetes management ed. Packer.L., Rosen.P., Tritschler.H.J., King.G.L and Assi.A. global net work of molecular& cell biology.33-52.

Hanasaki, Y.,Ogawa, S. and Fukui, S. (1994).The correlation between active

oxygens scavenging and antioxidative effects of flavonoids. Free Radic. Biol. Med. 16: 845-850.

Harborne.J.B. (1988).The flavonoids : recent advences,i »plant pigments »,Goodwin T W ed,academic press londres,P299-313.

Harris, S.R and Thorgeirsson, U.P. (1997). Flavone acetic acid stimulates nitric

oxide and peroxynitrite production in subcutaneous mouse tumors. Biochem. Biophys. Res. Commun., 235(3): 509-514.

158

Hatano T.,Ogawa N.,Kira R.,Yasuhara T.,Okuda T. (1989). Tannins of cornaceous plants. I. Cornusiins A, B and C, dimeric monomeric and trimeric hydrolyzable tannins from Cornus officinalis, and orientation of valoneoyl group in related tannins. Chem Pharm Bull (Tokyo). 37: 2083-90.

Haton, C. (2005). Effets des rayonnements ionisants sur la structure et la fonction de la cellule épithéliale intestinale. Université Paris VI, Pierre et Marie Curie. Thèse de Doctorat. Spé. Physiol& physiopathol. Pp. 168.

Hayase and Kato.M. (1989). Antioxidant compounds of sweet potatoes. J.nutri-

Sci vitamininol.30.P37-46. Hickox, W.H. and Denton, J.E. (2000). Public Health Goals for chemicals in

Drinking Water: Carbon Tetrachloride. California Public Health Goal. 2-32. Hirano. R., Osakabe. N., Iwamoto. T., Matsumoto. A., Natsume. M., Takizawa.

T et al. (2000). Antioxidant effects of polyphenols in chocolate on low density lipoprotein both in vitro and in vivo. J. Nutr. Sci. Vitaminol. 46. pp. 199–204.

Hoffman, W.E., Everds, N., Pignatell, M. and Slater, P.F. (1994). Automated and semiautomated analysis of rat alkaline phosphatase isoenzymes. Toxicol. Pathol. 22: 633-638.

Hollman, P.C.H., Hertog, M.G.L., Katan, M.B.(1996). Analysis and health effects of flavonoids. Food Chem. 57: 43-46.

Holly, A.E. and Cheeseman, K.H. (1993). Mesuring free radical reactions in vivo. Br. Med. Bull. 49: 494-505. Holt, M.P. and Ju, C. (2006). Mechanisms of Drug-Induced Liver Injury. The AAPS Journal, 8: E48-E54.

Horn, F., Lindenmeier, G., Grillhosl, C., Moc, I., Breghold, S., Schnider, N., Munster, B. (2003). Biochimie humaine. Paris: Médecine- Sciences Flammarion. 512-535.

Hostettmann.K. (2000). Tout savoir sur le pouvoir des plantes. Sources de médicaments.

essup, W., Rankin, S.M., De Whalley, C.V., Hoult, J.R., Scott, J., Leake, D.S.(1990). Alpha-tocopherol consumption during low-density-lipoprotein oxidation. Biochem. J. 265(2), 399-405.

Johansen, J.S., Harris, A.K., Rychly, D.J., Ergul, A., (2005). Oxidative stress and the use of antioxidants in diabetes: linking basic science to clinical practice. Cardiovas. Diabetol. 4, 5.

159

Jovanovic, S.V., Steenken, S., Tosic, M., Marjanovic, B., Simic, M.G. (1994). Flavonoids as antioxydants. J. Am. Chem. Soc. 116, 4846-4851.

alyanaraman, B. (2000). Free radical mechanism of oxidative modification of Law Density Lipoprotein ( or the Rancidity of body fat). In: Oxidative Stress and Antioxidant Defenses in Biology. ed . Ahmad. S. pp.96-116, CHAPMAN& HALL: An International Thomson Publishing Company.

Kaij-A-Kamb, M., Amoros, M., Girre, L.(1992). Chemical and biological

activity of the genus Centaurea. Pharmaceutica Acta Helvetica 67, 178–188.

Kamanzi, K., Raynaud, J., Voirin, B.(1983). The C-glycosyl flavonoids from flowers of Centaurea malitensis. Plantés Medicinal et Phytotherapié 17, 47–51

Kamina, P. and Marino, V. (1998). Anatomie. Introduction à la clinique :

Abdomen ; appareil digestif et rein. Tome 2. (1re édition). 7 ; 24-38. Maloine.

Kebieche.M., Lakroum.Z., Lahouel.M., Bouayed.J., Meraihi.Z and Soulimani.R. (2008). Evaluation of epirubicin-induced acute oxidative stress toxicity in rat liver cells and mitochondria, and the prevention of toxicity through quercetin administration. Experimental and Toxicologic Pathology.1-7.

Kehrer, J.L. (1993). Free radicals as mediateurs of tissue injury and Disease. Critical Reviews in Toxicology, 23: 21-48.

Kekis.P and Kekis.B. (2006). Surgical anatomy of the liver. In: Liver and biliary

tract surgery: Embryological anatomy to 3D- imaging and transplant innovations. ed. Karaliotas. C., Broelsch.C and Habib.N.pp 17-33. Springer wienNewYork.

Kinnula, V.L. and Crapo, J.D. (2003). Superoxide dismutase in the lung and human lung diseases. Am.J.Respir.Crit.Care. Med. 167: 1600-1619.

Klauning, J.E. and Kamendulis, L.M. (2004). The role of oxidative stress in

carcinogenesis. Annu. Rev.Pharmacol. Toxicol. 44: 239-267.

Koolman, J., Röhm, KH. (1994). Atlas de Poche de Biochimie. Paris: Médecine- Sciences Flammarion. 426 p.

Kovacic, P., Sacman, A., Wu-Weis, M., 2002. Nephrotoxins: widespread role of oxidative stress and electron transfer. Current Medicinal Chemistry 9, 823–847.

Kulkarni, A.P. and Byczkowski, J.Z. (1994). Hepatotoxicity. In: Introduction to Biochemical Toxicology (2nd edition). ed. Hodgson, E. and Levi, P.E.pp. 459-490, Connecticut: Appleton and Lange.

160

Kunsch, C. and Chen, X. (2006). Reactive oxygen species as mediators of signal transduction in cardiovascular diseases. In : Antioxidants cardiovascular disease. ed. Bourassa. M.G and Tardif.J.C. pp 103-130. Springer Science+ Business Media, Inc.

airon, D. (2004). Biodisponibilité et effets biologiques des antioxidants de nature polyphenolique. Association mediterranéinne de phytothérapie et plantes médicinales. 1-7.

Landmessen, U. and Drexler, H. (2006). General concepts about oxidative stress. . In : Antioxidants cardiovascular disease. ed. Bourassa. M.G and Tardif.J.C. pp 2-15. Springer Science+ Business Media, Inc.

Leake, D.S.(1998). Effects of flavonoids on the oxidation of low-density

lipoproteins. In Flavonoids in health and disease, Rice-Evans, C. A.; Packer, L., Eds. Marcel Dekker: New York; pp 253-276.

Lee KH, Ibuka T, Wu RY, Geissman TA.(1977). Structure–antimicrobial activity

relationship among the sesquiterpene lactones and related compounds. Phytochemistry 1977;16:1177. Leonhardt, W. (2000). Concentrations of antioxidative vitamins in plasma and Low-Density Lipoprotein of diabetic patients. In: Antioxidants in diabetes management ed. Packer.L., Rosen.P., Tritschler.H.J., King.G.L and Assi.A global net work of molecular& cell biology. 65-75.

Lhninger, A.L. (1989). Principes de biochimie. Paris: Médecine- Sciences Flammarion. 691-997. Lionel, S. and Beale, M.B. (1856). On the anatomy of the liver: On same points in the anatomy of the liver of man and vertebrate animals. Lane Medical Library Stanford. MDCCCLVI. London.

Lu, F.C. (1996). Toxicology of the liver. In: Basic Toxicology. Fundamentals Target Organs and Risk Assessment (3rd edition). ed. Lu, F.C.pp.177-188, Washington D.C.: Taylor and Francis.

achlin, L.J. and Bendich, A. (1987). Free radical tissue damage: protective role of antioxidant nutrients. FASEBJ 1: 441-445.

Maiza.K., Brac de la Perrière.A. and Hammiche.V. (1993). Saharian traditional pharmacopoeia (Septentrional Sahara).pp. 169-171.

161

Marfak.A.(2003). Radiolyse Gamma des flavonoides.Etude de leur réactivité avec les radicaux issus des alcools : Formation de depsides.P220.

Maritim, A., Dene, B.A., Sanders, R.A., Watkins, J.B., (2003). Effects of

pycnogenol treatment on oxidative stress in streptozotocin-induced diabetic rats. J. Biochem. Mol. Toxicol. 17 : 193–199.

Marouf.A. (2000). Dictionnaire de botanique,les phanérogames. MASSON xiences. DUNOD .paris.P66-82.

Martin, P. and Friedman, L.S. (1998). Assessment of liver function and diagnostic studies. In: Handbook of Liver Disease. ed. Friedman, L.S., Keeffe, E.B. and Maddrey, W.C. pp. 1-14, London: Churchill Livingstone.

Mata. A. T., Proença. C.,. Ferreira. A. R, Serralheiro. M. L. M., Nogueira. J.

M. F., Araújo M. E. M. (2007). Food Chemistry. 103 778.

Meyer, D. and Harvey, J.W. (2004). Hepatobiliary and skeletal muscle enzymes and liver function tests. In: Veterinary laboratory Medicine, Interpretation and Diagnosis. Ed. Meyer, D. and Harvey, J.W. W.B.Saundress.Co. St.Louis.Mo. pp. 169-192.

Mico, B.A. and Pohl, L.R. (1983). Reactive oxygenation of carbon tetrachloride:

Trichloromethyl peroxy radical as a possible intermediate in the conversion of carbon tetrachloride to electrophilic chlorine, Arch. Biochem. Biophys. 225: 596-609.

Milane, H. (2004). La quercétine et ses dérivés: molécules à caractère prooxydant ou capteurs de radicaux libres; études et applications thérapeutiques. UNIVERSITE LOUIS PASTEUR STRASBOURG I. pp. 268.

Miller, A.L. (1996). Antioxidant Flavonoids : Structure, function and clinical usage. Alt. Med. Rev. 2 : 103-111.

Monshouwer, M. and Hoebe, K.H.N. (2003). Hepatic (dys-) function during inflammation. Toxicology. 17; 681-686.

Morel I, Cillard P, Cillard J. (1998). Flavonoid-metal interactions in biological

systems. In: Rice-Evans C, Packer L, editors. Flavonoids in health and disease, vol. I. New York: Marcel Dekker,. p. 163–77.

Moridani, M.Y., Pourahmad, J., Bui, H., Siraki, A and O'Brien, P.J. (2003).Dietary flavonoid iron complexes as cytoprotective superoxide radical scavengers. Free Radical Biol. Med. 34(2): 243- 253.

Morris, C.J., Earl, J.R., Trenam, C.W and Blake, D.R. (1995). Reactive oxygen

species and iron--adangerous partnership in inflammation. Int. J. Biochem. Cell Biol. 27: 109-122.

Muriel, P. and Mourelle, M. (1990). Prevention by sylimarin of membrane

alterations in acute CCl4 liver damage. Journal of Applied Toxicology 10, 275_/279.

162

Muriel, P. (1997). Peroxidation of lipids and liver damage. In: Antioxidants, Oxidants, and Free radicals. Ed. Baskin, S.I., Salem, H, Taylor and Francis, Washington, DC, p. 237.

Morel, Y. and Barouk, R. (1998). Influence du stress oxydant sur la régulation des gènes. Médecine/ Sciences. 14 : 713-721.

Morris, S.M. and Albright, J.T (1981). Superoxide dismutase, Catalase, and Glutathion peroxidase in the swim bladder of the physoclistous fish, opsanus Tau (L). Cell tissue Res. 220: 739-752.

Murray, M. (1994). Role of the liver in drug metabolism. In: Drug-Induced Liver Disease. Ed. Farrell, G.C. pp.3-21, London: Churchill Livingstone.

agata, H., Takekoshi, S., Takagi, T., Honma, T. And Watanabe, K. (1998). Antioxidative action of flavonoids, quercetin and catechin, mediated by the activation of glutathione peroxidase. Tokai. J. Exp. Clin. Med. 24: 1-11.

Nakahira. K., Takahashi. T., Shimizu. H., Maeshima. K., Uehara. K., Fujii. H.,

Nakatsuka.H., Yokoyama. M., Akagi. R., Morita. K. (2003). Protective role of heme oxygenase-1 induction in carbon tetrachloride-induced hepatotoxicity. Biochemical Pharmacology. 66. 1091–1105.

Nawroth, P.P., Borcea, V., Bierhaus, A., Joswing, M. and Schiekofer, S. (2000). Oxidative stress, NF-kB activation, and late. Diabetic complications. In: Antioxidants in diabetes management ed. Packer.L., Rosen.P., Tritschler.H.J., King.G.L and Assi.A, global net work of molecular& cell biology. 185-204.

hta.Y. and Sahashi. D. (2002). L-tryptophan administration promotes the reversion of pre-established chronic liver injury in rats treated with carbon tetrachloride. Journal of Nutritional Biochemistry. 13. 550–559.

Okhawa, H., Ohishi, N. and Yagi, K. (1979). Assay for lipid peroxides in animal

tissues by thiobarbituric acid reaction. Add. Biochem. 95: 351-358. Orallo, F., Lamela, M., Camina, M., Uriatre, E., Calleja, M. (1998). Preliminary

study of the potential vasodilator effects on rat aorta of centaurein and centaureidin, two flavonoids from Centaurea corcubionensis. Planta Medica 64, 116–119.

163

Orrenius, S., McCabe, M.J. and Nicotera, P. (1992). Ca2+-dependent mechanisms of cytotoxicity and programmed cell death. Toxicol. Lett. 64: 357-364.

Ould El Hadj. M.D., Hadj-Mahammed.M . and Zabeirou.H. (2003). Place of

the spontaneous plants samples in the traditional pharmacopoeia of the area of Ouargla (Septentrional east Sahara). pp. 47-51.

Oyaizu, M. (1986). Studies on product of browning reaction prepared from glucose

amine. Japanese Journal of Nutrition, 44, 307–315.

acker, L. (2000). Oxidative stress and antioxidants: The antioxidant net work, α-lipoic acid, and diabetes. In: Antioxidants in diabetes management ed. Packer.L., Rosen.P., Tritschler.H.J., King.G.L and Assi.A, global net work of molecular& cell biology. 1-15.

Packer, J.E., Slater, T.F. and Willson, R.L. (1978). Reactions of carbon tetrachloride- related peroxy free radical (CCL3OO°) with amino acids. Pulse radiolysis evidence. Life Sci. 23: 356-362.

Packer, J.E., Slater, T.F. and Wilson, R.A. (1979). Direct observation of a free radical interaction between vitamin E and vitamin C . Nature. 278: 737-738.

Padhy. B.M., Srivastava. A and Kumar V.L. (2007). Calotropis procera latex

affords protection against carbon tetrachloride induced hepatotoxicity in rats. Journal of Ethnopharmacology .113. 498–502.

Parker, T.R., Howd, R. and Robles, H. (2005). Carbon Tetrachloride. Published by Elsevier Inc. 426-428.

Packer, L. and Cadenas, E. (2006). Series introduction of molecular intervention in life style- related disease. In: carotenoids in health and disease ed. Krinsky.N., Mayne.S.T and Sies.H. Marcel Dekker. NewYork.Inc.

Palazzetti, S. (2005). Sport- Stress- Nutrition : Ce que doit savoir le biologiste. In : Cahier de formation, Biologie médicale : Sport et Biologie. ed. Bermon, S. Bioforma. Formation Continue des biologistes. 87-128.

Parola, M., Leonarduzzi, G., Biasi, F., Albaro, E., Biocca, M.E., Poli, G. and Dianzani, M.U. (1992). Vitamin E dietary supplementation protect against carbon tetrachloride- induced chronic liver damage and cirrhosis. Hepathology, 16: 1014-1021.

164

Pereira. R. P., Fachinetto.R ., Prestes.A.P., Puntel.R.L., Silva.G.N.S., Heinzmann.B.M., Boschetti.T.K., Athayde.M.L., Bu¨rger.M.E., Morel.A.F., Vera Maria Morsch.V.M and Rocha.J.B.T. (2008).Antioxidant Effects of Different Extracts from Melissa officinalis, Matricaria recutita and Cymbopogon citrates. Springer Science+Business Media, LLC.

Peterson, J., Dwyer, J. (1998). Flavonoids: dietary occurrence and biochemical activity. Nutr. Res., 18(12), 1995-2018.

Pincemail, J., Lecomte, J., Collart, E., Castiaux, J.P. and Defraigne, J.O. (2003). Stress oxydant, antioxydants et exercice physique. MEDECINE INTERNE. Vaisseaux, Coeur, Poumons . 8. 1-3.

Pincemail, J. and Defraigne, J.O. (2004). Les antioxidants: un vast réseau de defence pour lutter contre les effets toxiques de l’oxygène. Symposium « Antioxidants et alimentation ». pp. 1-2.

Pietta, P.G.( 2000). Flavonoids as antioxidants. J. Nat. Prod., 63(7), 1035-1042.

Plaa, G.L. and Hewitt, W.R. (1982). Detection and evaluation of chemically induced liver injury. In: Principles and Methods of Toxicology. Ed Hayes, A.W. pp. 407-445, New York: Raven Press. Plaa, G.L. and Priestly, B.G. (1976). Interhepatic cholestasis induced by drugs and chemicals. Pharmacol. Rev., 28: 207-273. Plaa, G.L. and Hewitt, W.R. (1982). Detection and evaluation of chemically induced liver injury. In: Principles and Methods of Toxicology. ed. Hayes, A.W. pp. 407-445, New York: Raven Press.

Polonovski, M., Boulanger, P., Macheboeuf, M., Roche, J. (1971). Biochimie médicale. Paris Masson Et Cie, EDITEURS.439-463.

Poyer, J. L., Floyd, R. A., McCay, P. B., Janzen, E. G., and Davis, E. R..(1978).Biochim. Biophys. Acta 539, 402.

Price, M.L. and Butler, L.G. (1977). Rapid visual estimation and

spectrophotometric determination of the tannin content of sorghum grain. J Agric Food Chem. 25: 1269-1273.

Prosovskii M. A and Oleshko.G.I. (1986). PHENOLIC COMPOUNDS OF

Mat~car~a discoidea. Plenum Publishing Corporation pp. 671.

165

aja.S ., Nazeer Ahamed. K.F.H., Kumar.V., Mukherjee. K ., Bandyopadhyay. A and Mukherjee. P. K. (2007). Antioxidant effect of Cytisus scoparius against carbon tetrachloride treated liver injury in rats. Journal of Ethnopharmacology. 109. 41–47.

Ramaiah, S.K. (2007). A toxicologist guide to the diagnostic interpretation of

hepatic biochemical parameters. Food and chemical toxicology. 45: 1551-1557.

Recknagel, R.O. (1967). Carbon tetrachloride hepatotoxicity. Pharmacol. Rev. 19, 145-/208.

Recknagel RO, Lombardi B, Schotz MC. (1960). A new insight into pathogenesis of carbon tetrachloride fat infiltration. Proc Soc Exp Biol Med 104:608–610.

Recknagel, R. O., Glende, E. A., Jr., Ugazio, G., Koch, R. R., and Srinivasan, S., Isr. J. (1974).Med. sci. 10, 301.

Reed, D.J. (1994). Mechanisms of chemically induced cell injury and cellular protection mechanisms. In: Introduction to Biochemical Toxicology (2nd edition). ed. Hodgson, E. and Levi, P.E.pp.265-295, Connecticut: Appleton and Lange.

Rice-Evans, C.A., Miller, N.J and Pagana, G. (1996). Structure antioxidant

activity relationships of flavonoids phenolic acids. Free Radical Biology and Medicine. 20 (7): 933-956

Richter.G.(1993). Métabolisme des végétaux ; physiologie et biochimie.PRESSES. polytechniques et universitaires Romandes.P :328-339.

Robles, M.; Aregullin, M.; West, J.; Rodriguez, E. (1995). Planta Med. ,61, 199. Rodriguez, E.; Towers, G. H. N.; Mitchell, J. C. (1976). Phytochemistry, 15,

1573. Rösen, P ., Du, X. and Sui, G.Z. (2000). Oxidative stress in diabetes: Whay doses

hyperglycemia induced the formation of reactive oxygen species?. In: Antioxidants in diabetes management ed. Packer.L., Rosen.P., Tritschler.H.J., King.G.L and Assi.A, global net work of molecular& cell biology. 17-31.

Ruch, R. J., Chung, S. U., & Klaunig, J. E. (1984). Spin trapping of superoxide

and hydroxyl radicals. Methods in Enzymology, 105, 198–209.

166

adik, C.D., Sies, H and Schewe, T. (2003). Inhibition of 15-lipoxygenases by flavonoids: structure-activity relations and mode of action. Biochem. Pharmacol. , 65(5): 773-781.

Salah. N., Miller. N.J., Paganga. G., Tijburg. L., Bolwell. G.P and Rice-Evans.

C. (1995). Polyphenolic flavanols as scavengers of aqueous phase radicals and as chain-breaking antioxidants. Arch. Biochem. Biophys. 322. 2 pp. 339–346.

Sawyer, D.B. and Colucci, W.S. (2006). Oxidative stress in heart failure. In : Antioxidants cardiovascular disease. ed. Bourassa. M.G and Tardif.J.C. pp 437-450. Springer Science+ Business Media, Inc.

Schiano, T.D. and Black, M. (1998). Drug- induced and toxic liver diseases. In: Handbook of Liver Disease. ed. Friedman, L.S., Keeffe, E.B. and Maddrey, W.C. pp. 103-123, London: Churchill Livingstone.

Schiffrin, E.L. and Touyz, R.m. (2006). Oxidative stress in hypertension. In : Antioxidants cardiovascular disease. ed. Bourassa. M.G and Tardif.J.C. pp 363-379. Springer Science+ Business Media, Inc.

Schroetera. H., Boydb. C., Spencera. J. P. E., Williamsa. R. J., Cadenasb E and Rice-Evans C. (2002). MAPK signaling in neurodegeneration: influences of flavonoids and of nitric oxide. 23. 861-880.

Serafini, M., Maianin, G. and Ferro-luzzi. (1998). Alcohol free and wine enhances plasma ontioxidant capacity in humans. J. Nutr. 128: 1003-1007.

Seymen, O., Seven, A., Candan, G., Yigit, G., Hatemi, S. and Hatmi, H. (1997). The effect of iron supplementation on GSH-Px, and SOD activities of erythrocytes in L- thyroxine administration. Acta. Med. Okayama. 51(3): 129-133.

Shahidi F and Wanasundara PK. (1992). Phenolic antioxidants. Crit Rev Food

Sci Nutr. 23.67-103.

Sherlock, S. and Dooley, J. (2002). Diseases of the liver and biliary system.. Blackwell Science. 11ed. 1-17.

Singal P.K., Petkau A. and Gerrard J.M. (1988). Free Radicals in health and

disease. Mol. Cell. Biochem. 121-122. Sipes, I.G., Krishna, G., Gillette, J.R.(1977). Bioactivation of carbon

tetrachloride, chloroform and bromotrichloromethane: role of cytochrome P-450. Life Sci. 20, 1541_/1548.

Smukler, E.A., Iseri, O.A. and Benditt, E.P. (1962). An intracellular defect in protein synthesis induced dy carbon tetrachloride. J.Exp.Med. 116: 55-72.

167

Soares, J. R., Dins, T. C. P., Cunha, A. P and Ameida, L. M. (1997).

Antioxidant activity of some extracts of Thymus zygis. Free Radical Research, 26, 469–478.

Soucek, P. (1999). Cytochrome p450 destruction by quinines: Comparaison of effects in rat and human liver microsomes. Chemico. Biolog. 121; 223-236.

Stacey, N.H., Haschek, W.M. and Winder, C. (1993). Systemic toxicology. In: Occupational Toxicology. Ed. Stacey, N.H. pp. 37-76, London: Taylor and Francis Ltd.

Story, D.L., Gee, s.J., Tyson, C.A. and Gould, D.H. (1983). Response of isolated hepatocytes to organic and inorganic cytotoxins. J. Toxicol.Environ. Health, 11: 483-501.

Stoyanovsky, D., Cederbaum, A.I. (1999). Metabolism of carbon tetrachloride to trichloromethyl radical: An ESR and HPLCEC study. Chemical Research in Toxicology 12, 730–736.

Sundari, P.N., Wilfred, G., Ramakrishna, B. (1997). Does oxidative protein damage play a role in the pathogenesis of carbon tetrachloride-induced liver injury in the rat? Biochimica et Biophysica Acta 1362, 169–176.

Susanna, R. (2004). Histology of the liver, Gallbladder, and Pancreas. 1-9.

aniguchi, M., Takeuchi, T., Nakatsuka, R., Watanabe, T. and Sato, K. (2004).Molecular process in acute liver injury and regeneration induced by carbon tetrachloride. Life Sciences, 75 : 1539–1549.

Tepe. K., Daferera. D., Sokmen. A.., Sokmen. M and Polissiou. M. (2005) .

Food Chemistry. 90 333. Terao, J. (1999). Dietary flavonoids as antioxidants in vivo: Conjugated

metaboliques of (-) –epicatechin and quercetin participate in antioxidante defence in blood plasma. J. Med. Invest. 46: 156-168.

Terao, J. and Piskula, M.K. (1999). Flavonoids and membrane lipid peroxidation inhibition. Nutrition, 15: 790-791.

Timbrell, J.A. (1995). Drugs as toxic substances. In: Introduction to toxicology (2nd edition). ed. Timbrell, J.A. pp. 61-72, London: Taylor and Francis.

Tortoriello, P., Advani, S.V., Riebow, J. and Bidlak, W.R. (1990). Microsomal Metabolism of Carbon Tetrachloride: Participation of Pyridine Nucleotide Synergism. Biochemical Medical and Metabolic Biology, 4: 18-28.

168

Tournaire. C., Croux. S., Maurette. M.T., Beck. I., Hocquaux. M., Braun. A.M et al. (1993). Antioxidant activity of flavonoids: efficiency of singlet oxygen (1 delta g) quenching. J. Photochem. Photobiol. B 19 3 pp. 205–215.

Tribble, D.L., Aw, T.Y. and Jones, D.P. (1987). The pathophysiological significance of lipid peroxidation in oxidative cell injury. Hepatology, 7: 377-387.

Tsui, W.M. S. (2003). Drug-associated changes in the liver. Minisymposium: Iatrogenicpathology. Current Diagnostic Pathology, 9:96-104.

alko, M., Leibfritz, D., Moncol, J., Cronin, M.T.D., Mazur, M., Telser, J., (2007). Free radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease. Int. J. Biochem. Cell Biol. 39: 44–84.

Valnet.J. (1976). Aromathérapie : Traitement des maladies par les essences des plantes. 8 éd.paris.P15.

Van Acker, S.A.B.E., van den Berg, D.J., Tromp, M.N.J.L., Griffioen, D.H.,

van Bennekom, W.P., van der Vijgh and W.J.F. ; Bast, A. (1996). Structural aspect of antioxidant activity of flavonoids. Free Rad. Biol. Med. 20: 331-342.

Van Kuijk, F.G.J.M., Sevanian, A., Handelman, G.J. and Dratz, E.A. (1987). A

new rol of phospholipase A2: Protection of membranes for lipid peroxidation. Trends. Biochem. Sci. 12 : 31-34.

Vazquez, F.M., Suarez, M.A., Perez, A. (1997). Medicinal plants used in the

Barros Area, Badajoz Province (Spain). Journal of Ethnopharmacology 55, 81–85. Vazquez, F.M., Suarez, M.A., Perez, A. (1997). Medicinal plants used in the Barros Area, Badajoz Province (Spain). Journal of Ethnopharmacology 55, 81–85.

eber, L.W., Boll, M. and Stampfl, A. (2003) Hepatotoxicity and mechanism of action of haloalkanes: Carbon tetrachloride as a toxicological model. 33(2) : 105–136.

Wei, H.X., Gao,W.Y., Tian, Y.K., Guan, Y.K., Huang, M.H., Cheng, D.L.

(1997). Neweudesmane sesquiterpene and thiophene derivatives from the roots of Rhaponticum uniflorum. Die Pharmazie 52, 245–247.

169

Wei, Y.H. and Lee, H.C. (2002). Oxidative Stress, Mitochondrial DNA Mutation, and Impairment of Antioxidant Enzymes in Aging. MINIREVIEW. Exp Biol Med 227 : 671–682.

Wen.T., Guan. L., Zhang. Y.L and Zhao. J.Y. (2006). Dynamic changes of heme

oxygenase-1 and carbon monoxide production in acute liver injury induced by carbon tetrachloride in rats. Toxicology.228. 51–57.

Wigfull, J. and Bellamy, M. (2000). Physiology and pharmacology of liver ( Part 1). 101-104.

William, D.P. (2006). Toxicophores: Investigations in drug safety. Toxicology 226 .1–11.

Wills.P.J and Asha. V.V. (2006). Protective effect of Lygodium flexuosum (L.)

Sw. extract against carbon tetrachloride-induced acute liver injury in rats. Journal of Ethnopharmacology .108 .320–326.

Wright, S., Keele, C.A. and Neil, E. (1980). Physiologie appliquée a la médicine. Médecine- Sciences Flammarion.2ème (� dition).494-500.

Wu. Y., Li. L., Wen. T. and Li. Y. Q. (2007). Protective effects of echinacoside

on carbon tetrachloride-induced hepatotoxicity in rats. Toxicology .232. 50–56

aworsky, K., Somwar, R. and Klip, A. (2000). Interrelationship between oxidative stress and insulin resistance. In: Antioxidants in diabetes management ed. Packer.L., Rosen.P., Tritschler.H.J., King.G.L and Assi.A, global net work of molecular& cell biology. 275-302.

Yesilada. E., Gürbüz. I., Bedir. E., Tatli.I and Khan. I.A.(2004). Isolation of

antiulcerogenic sesquiterpene lactones from Centaurea solstitialis ssp. solstitialis through bioassay-guided fractionation procedures in rats. Journal of Ethnopharmacology 95, 213–219.

Young, J., Nielsen, S., Haraldsdottir, J., Deneshvar, b., Lauridsens, S., Knuthsen, P., Crozier, A., Sandstrom, B. and Dragsted, L. (1999). Effect of fruit juice intake on urinary. Quercetin excretion and biomarkers of antioxidative status. Ain. J. Clin. Nutr. 69: 87-94.

Young, A.J., Phillip, D.M. and Lawe, G.M. (2004). Carotenoid antioxidant activity. In: carotenoids in health and disease ed. Krinsky.N., Mayne.S.T and Sies.H.pp. 105-126. Marcel Dekker. NewYork.Inc.

Young.S. Y., Tai-Hwan. A., Jong-Chan. L., Chang-Jong. M., Sung-Ho. K.,

Woojin. J., Seung-Chun. P., Hyoung-Chin. K., Jong-Choon. K. (2008). Protective

170

effects of Pycnogenol_ on carbon tetrachloride-induced hepatotoxicity in Sprague–Dawley rats. Food and Chemical Toxicology 46 . 380–387.

Yu, C. Wang, F., Jin, C., Wu, X., Chan, W. and McKeehan, W.L. (2002). Increased Carbon Tetrachloride-Induced Liver Injury and Fibrosis in FGFR4-Deficient Mice. American Journal of Pathology, 161:2003-2010.

Yuan, J. and Yankner, B.A. (2000). Apoptosis in the nervous system. Nature.

407 : 802-809.

aiter.L., Bouheroum.M., Benayache.S., Benayache.F.,Leo´n.F.,Brouard.I., Quintana.J ., Este´vez.F and Bermejo.J. (2007). Sesquiterpene lactones and other constituents from Matricaria chamomilla L. Biochemical Systematics and Ecology. 35. 533-538.

Zanger, R.C., Davydov. D.R. and Verma. S. (2004). Mechanisms that regulate production of reactive oxygen species by cytochrome P450. Toxicol. Appl. Pharmacol. 199 : 316-331. Zimmerman, H.J. (1976). Experimental hepatotoxicity. In: Handbook of Experimental Pharmacology. Ed. Born, G.V.R., Eichler, O., Farah, A., Herkin, H. and Welch, A.O. pp. 1-120, Berlin: Springer Verlag. Zimmerman, H.J. (1978). General considerations. In: Hepatotoxicity, the Adverse effects of Drug and Other Chemicals on the Liver. Ed. Zimmerman, H.J. pp. 3-164, New York: Appleton-Century-Croft.

:المراجع بالعربية

الدار العربية للنشر . النباتات العطرية و منتجاتها الزراعية و الدوائية.)1992(. ن.أبو زید، ش

. و التوزيع

.موفم للنشر. الجزء األول. شاب الطبية الفضائل المروية في األع).1996 (.ع.ق. حليمي، ع

171

ملخص

تنتج مختلف . يعتبر الكبد العضو المستهدف من قبل العديد من المواد الكيميائية

داخل (ROS)المسارات، خالل األنشطة الخلوية العادية األنواع األآسيجينية النشطة

(_O2°) ، أنيون السوبير أوآسيد (H2O2)األآثر انتشارا هي بيروآسيد الهيدروجين . الخلية

يمكن للبروتينات و الليبيدات أن تتخرب، عندما تتواجد هذه . (°OH)و جذر الهيدروآسيل

يحرض حقن رباعي آلوريد . DNA مع adductsالمرآبات بتالاآيز آافية و يمكن تشكيل

ية الحادة في صفاق البطن على النمودج الحيواني األضرار الكبد(CCL4)الكربون

في هذه . آمشتق نشط داخل الخلية الكبدية (CCL°3)بوساطة جذر ثالثي آلور الميثيل

الدراسة تم تحليل المسار الخلوي في هذا النمط من العطب الكبدي عن طريق الفحص

من الوظيفي للكبد و عن طريق النشاط المضاد لألآسدة للمستخلصين الميثانوليين لكل

Centaurea incanaو Matricaria pubescens . دلت النتائج التي تحصلنا عليها على أن اعطاء

CCL4 غير أن اضافة المستخلصين . آغ مسؤول عن السمية الكبدية/ مل3 بجرعة

الميثانوليين أدى الى الغاء هذه السمية على األنسجة، عن طريق انخفاض معدالت

ت الدفاعية المضادة لألآسدة عن ، و تقوية القدرا(TGO,TGP)الثرونزأميناز المصلية

السيثوزولي، مما يؤآد التأثير الواقي للمستخلصين MDAطريق انخفاض معدل الـ

.CCL4الميثانوليين على سمية

رباعي آلوريد الكربون، السمية الكبدية، الواقي، المستخلصين :الكلمات المفاتيح

لية، صفاق البطن، الخلية الكبدية، الميثانوليين، المضادة لألآسدة، الثرونزأميناز المص

. األنواع األآسيجينية النشطة

المستخلصين الميتانوليين لنبتتيسد و إمكانية وقایةالنشاط المضاد للتأآ

على السمية الكبدیة Centaurea incanaو الـ Matricaria pubescens الـ

SUMMARY

The Liver is a target organ for the many chemical products. During normal cellular

activities, various processes inside of cells produce reactive oxygen species (ROS). Some

of the most common ROS are hydrogen peroxide (H2O2), superoxide ion (O2°-), and

hydroxide radical (OH°). These compounds, when present in a high enough concentration,

can damage cellular proteins and lipids or form DNA adducts. Injection of carbon

tetrachloride (CCl4) intraperitoneally into model animals induces acute liver injury

mediated by trichloromethyl radical (CCL3°) as reactive metabolites in hepatocytes. In this

study, the cellular process in this type of liver injury was analyzed from the aspect of liver

function and the antioxidant activity of methabolic extracts of Centaurea incana and

Matricaria pubescens. The results that we are obtained shows that the Carbon tetrachloride

on dose 3 ml/kg is responsible of hepatotoxicity. On the contrary, their association to

methabolic extracts cancels their toxics effects on the tissues, by the decrease of serum

transaminases levels (TGO, TGP), and reinfence the antioxidants capacities of defence by

decrease the cytosolic MDA, this will prove the preventive effect of methabolic extracts on

the toxicity of the CCL4.

Key-words: Carbon tetrachloride, hepatotoxicity, MDA, preventive, methabolic extracts,

antioxidants, serum transaminases, intraperitoneally, hepatocytes, reactive oxygen species.

Antioxidant activity and preventive possibility of Matricaria pubescens and Centaurea incana on hepatic toxicity

RESUME

Le foie est l’organe cible pour plusieurs produits chimiques. Pendant les activités

cellulaires normales, diffères processus produits les Espèces Réactives de l’Oxygène

(ERO) à l’intérieure de la cellule. Les ERO les plus communes sont le peroxyde

d’hydrogène (H2O2), l’anion superoxyde (O2°-), et le radical hydroxyde (OH°). Quand,

ces composants présents en concentrations suffisantes, les protéines cellulaires et les

lipides peuvent endommager ou peut former des adduits avec l’ADN. L’injection de

tétrachlorure de carbone (CCL4) par voie intrapéritoniale sur le model animal induit les

dommages aigues du foie par l’intermédiaire de radical trichloromethyl (CCL3°) comme

métabolite actif dans l’hépatocyte. Dans cette étude, le processus cellulaire dans ce type

des malades de foie est analysé par l’ exploration de la fonction hépatique et par l’activité

antioxydante des extraits méthanoliques de la Centaurea incana et de la Matricaria pubescens. Les résultats que nous avons obtenus ont montré que le CCL4 à la dose de 3

ml/kg est responsable de la toxicité hépatique. Par contre, leur association aux extraits

méthanoliques annule leurs effets toxiques sur les tissues, par la diminution des

Transaminases sériques ( TGO, TGP), et renforcent les capacités de défense antioxydants

par la diminution de l’MDA cytosolique, ceci prouve l’effet préventif des extraits

méthanoliques sur la toxicité de CCL4.

Mots clefs : tétrachlorure de carbone, toxicité hépatique, MDA, préventif, extraits

méthanoliques, antioxidants, Transaminases sériques, intrapéritoniale, hépatocyte, Espèces

Réactives de l’Oxygène.

L’activité antioxydante et la possibilité de la prévention par la Matricaria pubescens et la Centaurea incana sur la toxicité hépatique

:تاريخ املناقشة بوبلوطة : اللقب حورية: االسم

النشاط املضاد للتأكسد و إمكانية وقاية املستخلصني امليتانوليني لنبتيت : العنوان

على السمية الكبدية Centaurea incanaو الـ Matricaria pubescensلـ ا

يف البيولوجيا اخللوية واجلزيئيةمذكرة ماجستري املوضوع:

امللخصنتج خمتلف املسارات، خالل األنشطة اخللوية العادية ت. د الكيميائيةيعترب الكبد العضو املستهدف من قبل العديد من املوا

، أنيون السوبري أوكسيد (H2O2)األكثر انتشارا هي بريوكسيد اهليدروجني . داخل اخللية(ROS)األنواع األكسيجينية النشطة

(O2°_) و جذر اهليدروكسيل(OH°) . كيز كافية و راتتواجد هذه املركبات بتميكن للربوتينات و الليبيدات أن تتخرب، عندما

يف صفاق البطن على النمودج احليواين (CCL4)حيرض حقن رباعي كلوريد الكربون . DNA مع adductsميكن تشكيل

CCL3)األضرار الكبدية احلادة بوساطة جذر ثالثي كلور امليثيليف هذه الدراسة مت حتليل . كمشتق نشط داخل اخللية الكبدية (°

ر اخللوي يف هذا النمط من العطب الكبدي عن طريق الفحص الوظيفي للكبد و عن طريق النشاط املضاد لألكسدة املسا

ت النتائج اليت حتصلنا دل. Matricaria pubescens الـ و Centaurea incana الـ للمستخلصني امليثانوليني لكل من

غري أن إضافة املستخلصني امليثانوليني أدى إىل . السمية الكبديةكغ مسئول عن/ مل3 جبرعة CCL4 الـعليها على أن اعطاء

، و تقوية القدرات الدفاعية (TGO,TGP) معدالت الثرونزأميناز املصلية خفضإلغاء هذه السمية على األنسجة، عن طريق

ةـــني امليثانوليني على مسي السيثوزويل، مما يؤكد التأثري الواقي للمستخلصMDA معدل الـ خفضاملضادة لألكسدة عن طريق

.CCL4 الـ

الواقي، املستخلصني امليثانوليني، املضادة لألكسدة، الثرونزأميناز التأثري رباعي كلوريد الكربون، السمية الكبدية،: الكلمات املفاتيح . املصلية، صفاق البطن، اخللية الكبدية، األنواع األكسيجينية النشطة

: أمام اللجنة قسنطينة -جامعة منتوري رئيسا أستاذة حماضرة عبيديل نصرية.د

أستاذة حماضرة خليفي توهامي كرماجني فاطمة .د

مقررا

قسنطينة-جامعة منتوري

سطيف -جامعة فرحات عباس ممتحنا أستاذ حماضر بغياين عبد الرمحان.د

قسنطينة-جامعة منتوري ممتحنا أستاذ حماضر بولبدة ناجي.د