BİLİMSEL Taksan Tipi Diterpenoitlerin Elde Edilmesinde ve...
Transcript of BİLİMSEL Taksan Tipi Diterpenoitlerin Elde Edilmesinde ve...
FABAD J. Pharm. Sci., 25, 121-137, 2000
BİLİMSEL TARAMALAR/ SCIENTIFIC REWIEVS
Taksan Tipi Diterpenoitlerin Elde Edilmesinde ve Analizlerinde Kullanılan Yöntemler
Nurgün ERDEMOGLU*", Bilge ŞENER*
Taksan Tipi Diterpenoitlerin Elde Edilmesinde ve Analizlerinde Kullanılan Yöntemler
Özet: Önemli bir antikanser ilaç olan taksan sınıfı diterpenoit taksa!, ilk kez 1971 yılında Taxııs brevifolia Nutt. 'nın kabuklarından izole edilmiştir. Birçok kanser tiplerine karşı
geniş bir klinik aktivite gösteren taksol, dünyayı geniş bir araştırnıaya teşvik etmiştir. Bu araştırmalar sonucu, değişik Taxus türlerinden birçok taksan tipi diterpenoit izole edilmiştir. Bu çalışmada Taxııs türlerindeki taksan tipi diterpenoitlerin elde edilme ve analizlerinde kullanılan yönteınler verilnıiştir. Anahtar kelimeler : Taxus türleri, taksol, taksoitler, di-
Received Revised Accepted
GİRİŞ
terpenoitler, antitünıör bileşikler 16.11.1999 15.02.2000 15.02.2000
Taksa! (1), ilk defa T. brevifolia'dan elde edilen1, antikanser etkisinden dolayı bugün özellikle meme, ovaryum ve küçük hücreli olmayan akciğer kanserinin tedavisinde kullanılan taksan yapısında
doğal bir bileşiktir2. Farklı etki mekanizması ile kanser kemoterapisinde önemli bir yere sahip olmuştur3.
Taksolün antikanser etkisinin belirlenmesinden sonra diğer Taxus türleri üzerinde de taksan tipi diterpenoitlerin elde edilmesi ve aktivitelerinin belirlenmesi yönünde çalışmalar yapılmışhr. Bugüne kadar Taxus türlerinden 250'den fazla taksan tipi diterpenoitin izole edildiği bildirilmiştir4-6. Taxus türlerinde bulunan taksan tipi diterpenoitler "Taksoitler"2,4 veya bazıları (örn. taksol) azot ihtiva et-
The Methods of Iso/ation and Analysis of the Taxane-Type Ditel]Jenoids
Summary : The taxane class diterpenoid taxol is an important anticancer drug first isolated from the bark of the Pacific Yew tree (Taxus brevifolia Nutt.) in 1971. lts broad spectrum anticancer activity in clinical trials has spurred a worldwide search. During these researches, nıany ıaxanetype diterpenoids have been isolated /rom different Taxus species. in this paper, the metlıods of isolation and analysis of taxane-type diterpenoids /rom Taxus species have be en reviewed. Keywords: Taxus sp., taxol, taxoids, diterpenoids, anti
tumor agents
!iği için "Taxus Alkaloitleri"7,S ismiyle de bilinmektedir. Taxus cinsinin ülkemizde yetişen tek türü olan T. baccata L.9 üzerinde yaphğımız çalışmalarda da bitkinin taksol yanında benzeri taksan tipi diterpenoitleri ihtiva ettiği tespit edilmiştir6,1D. Bu makalede Taxus türlerinde bulunan taksan tipi diterpenoitlerin elde edilmesinde ve analizlerinde kullanılan yöntemler verilmektedir.
KULLANILAN YÖNTEMLER
Taxus türlerinin değişik kısımlarından taksan tipi diterpenoitlerin elde edilmesinde genel yöntemlerden yararlanılmıştır5. T. baccata'dan yapısında azot ihtiva eden taksan tipi diterpenoitlerin elde edilmesi için son yıllarda yapılan bazı çalışmalarda asit-baz değişiminin kullanıldığı görülmektedir. Verilen yöntemlerde taksan tipi di-
* Gazi Üniversitesi, Eczacılık Fakültesi, Farmakognozi Anabilim Dalı, 06330 Etiler, Ankara 0 Yazışma Adresi
121
Erdemoglu, Şener
terpenoitler seyreltik % 0.5-2 HCl veya H 2S04 ile
sulu faza geçirilmektedir. Ardından nötral bi
leşiklerin uzaklaşhrılması amacıyla bir organik çö
zücüyle yapılan yıkama işleminden soma, alkali or
tamda organik çözücülerle yapılan tükehneler
sonucu ham taksan tipi diterpenoit karışımı elde
edilmektedir. Bu ham ekstre kolon kromatografisi
veya preparatif Yüksek Performanslı Sıvı Kro
matografisi (High Performance Liquid Chro
matography-HPLC) teknikleri kullanılarak bi
leşiklerine ayrılmaktadırll·B
Taksan tipi diterpenoitlerin elde edilmesi için etanol
veya metanol, bazan da diklorometan-metanol ka
rışımı kullanılmakta, birinci tükehneyi takiben ge
nellikle diklorometan ve su arasında, taksan tipinde
olmayan bileşiklerin uzaklaştırılması amacıyla ikinci
bir tüketme işlemi uygulanmaktadır. Bazı ça
lışmalarda yaprak ve kabukta bulunan mumlar ve
lipitleri uzaklaştırmak için petrol eteri veya hek
zanla bir ön temizleme işlemi yapılmıştrr14-21. Tak
san tipi diterpenoitlerin elde edilmesinde kullanılan
çözücüler Tablo l'de verilmiştir.
Tablo 1. Taksan Tipi Diterpenoitlerin Elde Edilmesinde Kullanılan Çözücüler
1. Tükehne 2. Tüketme Tür Bitki kısmı
Metanol
Metanol
Metanol
Metanol
Metanol
Metanol
Metanol
Metanol
Metanol
Metanol
Metanol
Metanol
Metanol
Metanol
Metanol
Metana!
Metanol
Metanol
Metanol
Metana!:
Diklorometan
Metanol:
Diklorometan
Etanol
Etanol
Etanol
Etanol
Etanol
Etanol
Etanol
Eter
122
Diklarometan:Su
Diklorometan:Su
Diklorometan:Su
Diklorometan:Su
Diklorometan:Su
Diklarometan:Su
Diklorometan:Su
Diklorometan:Su
Diklorometan:Su
Kloroform: Su
Kloroform:Su
Klaroform:Su
Kloroform:Su
Klaroforın:Su
Kloroform: Su
Toluen:Su
Hekzan
Diklorometan:Su
Petrol eteri
Klaroform:Su
Kloroform:Su
Diklorometan:Su
Diklorometan:Su
Taxussp.
Taxus sp.
Taxussp.
T. brevifolia
T. cuspidata
T. brevifolia
T. wallichiana
T. baccata
T. brevifolia
T. brevifolia
T. brevifolia
T. baccata
T. wallichiana
T. cuspidata
T. wallichiana
T. cuspidata
T. media
T. cuspidata
T. brevifolia
T. cuspidata
T. baccata
T. cuspi da ta
T. baccata
T. baccata
T. cuspidata
T. chinensis
T. baccata
T. chinensis
T. yunnanensis
Kabuk
Yaprak
Kabuk, yaprak
Kabuk
Kabuk, yaprak
Kabuk
Yaprak
Yaprak
Kabuk, yaprak
Kabuk
Yaprak
Kabuk
Kabuk
Gövde, tohum
Kök
Gövde
Yaprak, dal
Kabuk, yaprak
Kabuk
Yaprak, dal
Yaprak
Dal
Yaprak
Odun, kabuk
Gövde, yaprak
Kabuk
Kabuk, yaprak
Yaprak
Kök
Kaynak
22
23
24
1,25,26
27
28,29
30
31
32
33,34
35
36
37
38
39
40-42
43
44
45
21
46,47
48
49
6
50
51
52
53,54
55
FABAD J. Pharm. Sci., 25, 121-137, 2000
Taxus türlerinden taksolün elde edilmesi sırasında, yapı olarak kendisine çok benzeyen sefalomannin'den (2) ayırımı oldukça güçtür (taksa! ve sefalomannin'in yapısındaki tek farklılık 3'-Naçil grubundadır; taksa) benzoil grubu taşırken, sefalomannin'de tigloil grubu bulunmaktadır). Bu amaçla ilk yıllarda, silika jel kolon üzerinde diklorometan/ n-butanol çözücü sistemi ile daha az duyarlıkta gerçekleşen bir ayırım, ya da HPLC metodu kullanılmıştır26,28. Daha sonra KINGSTON ve arkadaşları sefalomannin'in yan zincirinde gerçekleştirdikleri selektif kimyasal değişikliklerle sefalomannin diol'lerini elde etmişler ve bu türevleri de flash kromatografi ile taksolden ayırmayı başarmışlardır56. Bu amaçla son yıllarda Yüksek Hızlı Karşı Akım Kromatografisi (High-Speed Counter Current Chromatography-HSCCC)57 ve Karşı Akım Kromatografisi (Counter Current Chromatographyccqss kullanılınıştır. Yine iki farklı araştırıcı
grubu, kimyasal reaksiyonlarla hazırladıkları sefalomannin türevlerini taksolden ayırmayı başarmışlardır59·60.
o Rl'lH
o
(r{o·
00 ô
""" #
f""'irco-1 R=v
o
2 R=
V ANDANA ve arkadaşları T brevifolia kabuklarından taksolün ayırımı için Süperkritik Sıvı Ekstraksiyonu (Supercritical Fluid Extraction-SFE) yöntemini uygulamışlardır. Ekstraksiyonda süperkritik çözücü olarak azot oksit ve yardımcı çözücü olarak etanol kullanılmıştır. Azot oksit orta kritik sıcaklığa (T ,=36.5°C) sahip olduğu için, taksolün ısıyla parçalanmasını en aza indirmesi ve ayrıca polar bir çözücü olarak etanolün son yıllarda taksolün sıvı ekstraksiyonunda çok kullanılınası, bu çalışmada azot oksit+etanol karışımının tercih edil-
mesine neden olmuştur. Elde edilen süperkritik ekstrede laksal miktarı ters faz kolon üzerinde gradient
elüsyonun uygulandığı bir HPLC sisteminde tayin edilıniştir61.
Bu yöntemlerle elde edilen ekstrelerdeki taksan tipi diterpenoitlerin birbirinden ayrılması için ço
ğunlukla silika jel'in adsorban olarak kullanıldığı kolon kromatografisinden veya ters faz preparatif HPLC sistemlerinden yararlanılmaktadır. Birkaç çalışmada bu amaçla Flash Kromatografisi62-64 ve
Düşük Basınçlı Sıvı Kromatografisi (Low-Pressure Liquid Chromatography-LPLC)'nden63 de fay
dalanıldığı görülınektedir. Elde edilen bileşiklerin saflaştırılınasmda preparatif İnce tabaka kro
matografisi (İTK) veya kristalizasyondan yararlanılmaktadır. Taksan tipi diterpenoitler metanol6,45,65-67, etanol68,69, dietileter66, aseton
dietileter7D, kloroform6 ya da n-hekzan-aseton6,1S,71
karışımlarından kristallendirme sonucu saf
laştırılınıştır.
Kolon Kromatografisi
Kolon kromatografisinde adsorban olarak genellikle silika jel kullanılınaktadır. Kullanılan çözücü sis
temleri Tablo 2'de verilıniştir.
İnce Tabaka Kromatografisi
Taksan tipi diterpenoitlerin teşhisinde kullanılan
bazı İTK adsorbanları ve çözücü sistemleri Tablo 3'de
verilmiştir.
Taksan tipi diterpenoitlerin ayırımında çift boyutlu
İTK tekniği de kullanılmıştır. Taksan tipi diterpenoitlerin nitril, difenil ve amino bağlı plaklarda ayırımı ve teşhisleri gerçekleştirilıniştirlOS.
Developmandan soma taksan tipi diterpenoitlere ait lekeler UV254 nm'de incelenmekte ve ardından çe
şitli reaktiflerle renklendirilmektedir. Bu amaçla genellikle seyreltik H2SO 4'in (% 3 veya % 10) metanoldeki çözeltilerilS,37,46,63,66,101,105, % 40 sülfürik
asit içinde % 1 potasyum kroma! çözeltisi106 veya anisaldehit çözeltisi [% 76 metana!, % 19 o-fosforik
123
Erdeınoğlu,Şener
Tablo 2. Kolon Kromatografisinde Kullanılan Çözücü Sistemleri
Adsorban Çözücü Sistemi Silika jel Kloroform, Metana!
Nötr Alumina
Kloroform, Aseton Kloroform, Etilasetat Kloroform, Asetonitril Kloroform, Etanol Diklorometan, Etilasetat Diklorometan, Metana! Hekzan, Etilasetat Hekzan, Aseton
Hekzan, n-Butanol Aseton, Diklorometan Petrol eteri, Diklorometan Petrol eteri, Aseton Petrol eteri, Kloroform Toluen, Aseton Toluen, Etilasetat, Metanol Hekzan, Etilasetat, Metanol Kloroform, n-Hekzan, Metana! Aseton, Metanol, Su Diklorometan, Metanol Etilasetat, Siklohekzan
Tablo 3. İnce Tabaka Kromatografisinde Kullanılan Çözücü Sistemleri
Adsorban Çözücü Sistemi
Silika jel Hekzan: Aseton (1 : 1) Hekzan : Aseton (7 : 3) Hekzan: Etilasetat (1 : 1) Hekzan : Etilasetat (3 : 7) Hekzan: Etilasetat (1 : 9) Kloroform : Metana! (95 : 5) Kloroform: Metana! (9 : 1), (8 : 2), (7: 3) Kloroform: Metana! (10: 1) Kloroform: Etanol (9: 1) Diklorometan : Metanol (95 : 5) Diklorometan : Metanol (10 : 1)
Kaynak 6,15,17-19 ,33-35,37,39,42, 48 ,50 ,54,68 ,71-84 38-41,55,85-89 33,73,75,90 87 13,91 62 14,20 ,65 ,92-96 12,18,33-35,56,71,72,87,94,97,98 6,14,16,23 ,34,35 ,38 ,40,41,62,64, 73. '7,99,100 14 14,20,34,81,101 51,102 53,54,76,92 15 103 42,104 78,104 86 45 36 67
Kaynak
105 6
105 25,81
81 6,68
6
106 90
105,107 66,101
Metana! : Aseton: Diklorometan (1 : 4: 15) 66,101
asit (% 85), % 5 p-anisaldehit (% 98)]6•108 kul- vanilin'in etanol içerisindeki çözeltileri püs-lanılmaktadır. Çözeltilerin plak üzerine püs- kürtüldükten sonra 105°C'de 10 dakika ısıhlmasıyla kürtüldükten soma plağın ll0°C'de 5 dakika ısı- 10-deasetilbakkatin III'ün gri renk aldığı bil-
hlmasıyla taksan tipi diterpenoitler, seyreltik dirilrniştir1D7 . asitlerle yeşilimsi-mavi6•66JOl,lOS anisaldehit çözeltisi ile taksol grimsi-kahverengi6,108, diğer t<l,k
sanlar ise yeşilden maviye ve kırmızıya kadar değişen renkler almaktadır6. Bir diğer çalışmada renklendirme için % 3 H2SO 4'in ve ardından % 1.5
124
Preparatif İnce Tabaka Kromatografisi
Adsorban olarak silika jel'in kullanıldığı çözücü sis
temleri aşağıda belirtilıniştir.
FABADJ. Pharm. Sci., 25, 121-137, 2000
Tablo 4. Preparatif İnce Tabaka kromatografisinde Kullanılan Çözücü Sistemleri
Çözücü Sistemi
Hekzan : Etilasetat (8 : 92)
Hekzan: Etil asetat (3: 5)
Hekzan: Etilasetat (1 : 1)
Hekzan : Aseton (7 : 3)
Hekzan: 2-Propanol (1: 1)
Kloroform: Metanol (19 : 1)
Kloroform : Metanol (95 : 5)
Kloroform : Metana! (10 : 0.5)
Kloroform: Metanol (97: 3), (9 : 1), (8 : 2)
Kloroform: Etilasetat (8 : 1)
Kloroform : Aseton (95 : 5)
Diklorometan: izo·Propanol (24: 1)
Diklorometan: izo-Propanol (49: 1)
Diklorometan : Metanol (95 : 5)
Toluen: Aseton (80: 20)
Toluen: Aseton (3: 1)
n- Hekzan: Kloroform: Metanol (5 : 4: 1)
Diğer Yöntemler
Taksan tipi diterpenoitlerin bitkinin çeşitli kı
sımlarında çok az miktarlarda bulunması nedeniyle
daha duyarlı metotlar gereklidir. Bu metotlar sadece
Taxus türlerinde değil, çeşitli Taxus hücre ve doku
kültürlerinde, biyolojik s1V1larda taksan tipi di
terpenoitlerin tespiti amacıyla da kullanılınaktadır.
Taksan tipi diterpenoitlerin teşhis ve tayininde kul
lanılınış olan ileri teknikler şunlardır:
Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi (High Per
formance Liquid Chromatography-HPLC)
Çeşitli Taxus bitki ekstrelerinden, doku veya hücre
kültürlerinden ve biyolojik sıvılardan taksan tipi di
terpenoitlerin ayırımı ve teşhisi için en çok kul
lanılan metottur. Ayrıca taksolün ve me
tabolitlerinin çeşitli biyolojik sıvılarda teşhisi113-115
ve ham taksolde taksol miktarının belirlenmesi116
amacıyla da çok kullanılmaktadır. Bu amaçla pek-
Kaynak
63
109
100
6
63
31,63
6,16,63
110
6
73
39
111
31
16,1 I'
18,37
82
86
çok sistem geliştirilmiştir. Genellikle fenil-, siyano
veya oktadesil- bağlı kolonlarda metanol-asetonitril
diklorometan-su çözücü karışımlarının gradient
veya izokratik elüsyorıla uygulandığı ters faz HPLC,
özellikle taksol, sefalomannin, bakkatin III ve 10-
deasetil türevinin ayırımında başarılı olmuştur. En
az bir aromatik veya sübstitüe olefinik kısmın bu
lunduğu bileşiklerin teşhisi, UV absorbsiyorılarına
dayanarak genellikle 227 nm'de ger-
kl tiril . . 117 li li çe eş mıştır . Be ·r · aralıkta dalga boylarının
tarandığı fotodiyot düzeni dedektörü (Photodiode
Array detector-DAD) ile uygun dalga boyları bu
lunarak hassas sonuçlar alınmıştır. Bazı analizlerde
diferansiyel refraktometrenin kullanıldığı da gö
rülmektedir13,9o,9ı. Taksan tipi diterpenoitlerin
HPLC ile analizinde kullanılan bazı sistemler daha
önceki çalışmamızda bildirilmiştirııs. Taksan tipi
diterpenoitlerin analizi için son geliştirilen HPLC
sistemleri şunlardır:
Analitik HPLC
125
Erdenıoğlu,Şener
Tablo 5. Analitik Amaçlı Kullanılan HPLC Sistemleri
Materyal Kolon Çözücü Sistemi Eliisyon Kaynak
T. baccata ZorbaxODS Asetonitril: Su Gradient lll
(Cıs)
T. baccata Zorbax SB-CN Asetonitril: Metanol Gradient 119
(CNbaltlı)
T baccata Lichrosorb® RPıs Asetonitril :Metan ol: Su İzokratik 16
ev. Stricta (38 : 42 : 20)
T. x media Rainin 80-Dl5-C5 Asetonitril:Metanol:Su İz.okra tik 43
Microsorb(fenil bağlı) (12: 55: 33)
T brevifolia ve PFP HPLC kolon Asetonitril:Sn Gradient 116
ham taksa! (Pentaflorofenil bağlı)
T. cuspi da ta Spheri-5 RP18 Su:Asetonitril: İzokratik 44
(Cıs bağlı) Tetrahidrofuran (55:35: 10)
Taxus kültürleri Curosil G Etilen glikol Gradient 120
Monometil eter : Su : Asetonitril
Taxus sp. Curosil B Asetonitril: Su (2 : 3) İzokratik 121
% 0.05 formik asit
Taxus haccata Techsphere Asetonitril:Su:Metanol: İzokratik 122
var. fastigiata (Fenil kolon) Tetrahidrofuran (37:63:20:2.5)
T. brevifo/ia Rainin Dynamax Metanol:Asetonitril: İzokratik 123
(Fenil kolon) Amonyum ası;tat (20:32:48) (nH 4.4)
T brevifolia Lichrosorb RP-18 Metana!: Su (65 : 37) İzokratik 32
T brevifolia Lichrosorb RP-18 Metana!: Su Gradient 124
Taxus sp. c" Metanol: Su (68 : 32) İzokratik 22
T. cusoi da ta Hvnersil (Fenil baltlı) Asetonitril:Metanol:Su Gradient 21
Taxus <tı. Fenil bai>lı kolon Asetonitril:Metanol:Su Gradient 23
Taxus sp. Fenil bağlı kolon Metanol:Asetonitril: İzokratik 24
Amonyum asetat (20:32:48) lnH 4.4) .
Tx media Hicksii Taxsil ,, .. Asetonitril:Metanol:Su Gradient 125
T.x media Ni=
Taksa/ ve Fluofıx® Asetonitril:42mM İzokratik 126
türevleri (Poliflorür bağlı) Amonyum asetat (40: 60) (pH 5.0)
T. baccata BioRad Bio-Sil Asetonitril:Metanol: Gradient 127
cıs HL 90-10 %1 Formik asit
Taxus sn. Nucleosil Cı 8 Asetonitril:Su lnH 2.5) Gradient . 128
Taxus sp. Hvnersil C-18 Asetonitril: Su Gradient 129
T. baccata Shandon Hypercarb 1,4-Dioksan: Su İzokratik 130
(Poröz grafıtize (46:54)
karbon kolon)
T. baccata Zorbax SB-Cs Asetonitril:Metanol:Su Gradient 131
Taxus sp. Taxil(Pentaflorofenil), A)Alkol:Tetrahldrofuran: Gradient 132
Supelcosil (Difenil) Metil-t-butil eter (A,BveC
ve Curosil G (50: 30: 20) kanşınu)
B)Alkol: Su (6:94)
ClAsetonitril (%100) -
126
FABADJ. Pharm. Sci., 25, 121-137, 2000
T baccata l) Nova-Pak® Cıs 1 ve 2 için izokratik 133 2 J Symmetry™ Cıs Asetonitril:Su:
Tetrahidrofuran (23 : 77 : 0.05)
T brevifolia Taxsil™ve Asetonitril: 10 mM İzokratik 134 (Kallus kültürü) Taxsoı™ Sodyum asetat
(47.5: 52.5) Taxus sp. Sherisorb Cıs Asetonitril: Metanol:Su İzokratik 135 (Kallus kültürü) (25 : 35 : 45) T. cuspidata Curosil G Asetonitril: Su iz okra tik 136 (Hücre süspansiyon (52.5 : 47.5) kültürleri)
T. brevifolia Econosphere C -18 Su:Asetonitril: izokratik 137 (Kail us kültürü) Tetrahidrofuran
(58 : 33 : 9) T. baccata Tessek- Praha SGX- Asetonitril: Metanol:Su Gradient 138 (Kallus kültürü) Phenvl (Fenil bağlı) T. brevifo/ia TaxsolF 12.5 mM Sodyum asetat: İzokratik 139 (Kallus kültürü) Asetonitril (52.5 : 47.5) T cuspidata Curosil G Asetonitril:Su İzokratik 140 (Süspansiyon (45: 55) kültürü) T. baccata Taxsil™ ve Asetonitril: 10 mM izokratik 141 (Hücre süspansiyon Taxsol™ Sod)'umasetat (47.5:52.5) kültürü) T. wal/ichiana Supelcosil C-18 Asetonitril:Metanol:Su. İz okra tik 142 (Hücre süspansiyon (30 : 40 : 30) kültürü) T cuspidata Fenil bağlı kolon Asetonitril:Metanol:Su Gradient 143 (Kallus kültürü) Taxus sp. Dynamax phenyl Metanol : 50 mM asetat İz okra tik 144 (Kallus kültürü) tamponu : Asetonitril
(20: 41 : 39) (oH 4.4) T xmedia Curosil B 1 OmM Amonyum İzokratik 145 (İn vitro kültür) asetat : Asetonitril
(55 : 45) (pH 4.0) T. baccata Separon-SGX-RP/S Asetonitril : 20 mM Gradient 146 (Kallus kültürü) Fosforik asit Taxus sp. Curosil G lOmM Asetat Gradient 147 (İn vitro kültür) tamponu:Asetonitril
lnH 4.0)
Biyolojik sm Octyl kolon Asetonitril:Metanol:Su İzokratik 148 (İnsan plazması) (4:1:5) (oH5.0) Biyolojik SIVI APEX Asetonitril:Metanol: iz okra tik 149 (İnsan idrarı) octyl kolon 0.02 M Amonyum asetat
(4: 1 : 5) (pH 5.0) Biyolojik sıvı APEX Asetonitril:Metanol: İzokratik 115 (Fare idrar, feçes octyl kolon 0.2 M Amonyum asetat plazma ve doku) (4: l: 5) lnH5.0) Biyolojik sıvı APEX Asetonitril: Metana!: iz okra tik 114 (İnsan plazması) octyl kolon 0.02 M Amonyum asetat
(4: l : 5) (pH 5.0)
127
Erdemoğlu, Şener
Biyolojik sıvı Curosil G % 45 Asetonitril içinde İzokratik 113
(İnsan plazması) :l mMAmonyum asetat tamnonu lnH 5.0)
Biyolojik sıvı ODS kolon Asetonitril:2mM İzokratik 150
(İnsan plazması) fosforik asit (45: 55)
Biyolojik sıvı Spherosil C18 Metana!:% 0.3 İzokratik 151
(İnsan plazması) Ortofosforik asit (67.5: 32.5)
Biyolojik sıvı M Bondapak Cıs Asctonitril:Su İzokratik 152
(Fare nlazması) (70:30)
Biyolojik sıvı Inertsil ODS-80A Amonyak:Metanol: İzokratik 153
(İnsan plazması) Tetrahidrofuran:Su (0.1 :60:2.5:37.5)(PH 6.0)
Preparatif HPLC Tablo 6. Yarıpreparatif Amaçlı Kullanılan HPLC Sistemleri
Materyal Kolon Çözücü Sistemi Elüsyon Kaynak
T baccata Lichrosorb® RP-18 Asetonitril:Metanol: Su İzokratik 105
(45:20:40)
7'. baccata Lichrosorb® RP-18 Asetonitril:Mctanol:Su İzokratik 16
ev. Stricta (45:20:40)
T baccata Watrers Deltapack Asetonitril;Su (3 : 1) İzokratik 65
c., T brevifolia Rainin Dynamax- Hekzan:izo-Propanol İz okra tik 28
,--....,ano® (2 : 1)
T. canadensis ODS-2 MAG 9(C,,J Asetonitril:Su (31 : 69) İzokratik 62
7: x media Hicksii Rainin Dynamax Metan ol: Asetonitril: İzokratik 154
Phenyl 50 ml\.1 Amonyum asetat (20:34:46)
Taxussp. Prep Nova-Pak® Heptan:izo-Propanol: İzokratik 133
HR Silica Trietilamin 190: 10:0. 1)
Preparatil HPLC Tablo 7. Preparatif Amaçlı Kullanılan HPLC Sistemleri
Materyal Kolon Çözücü Sistemi Elüsyon Kaynak
T. brevifolia Nova-Pak (Cıs) Meta.nol: Su (60 : 40) İzokratik 35
T. brevifolia Rainin Dynamax Asetonitril: Metan ol: Su Gradient 29 (CN baifü)
Taxus sp. Fenil bağlı kolon Asetonitril:Metanol:Su İz okra tik 23 144 : 10 : 46)
T_ baccata W aters Micromr.ısil K1oroforın:Etanol( 19 : 1) İzokratik 91 T. wallichiana Delta Pack C-18 Asetonitril:Metanol:Su İzokratik 14
(3 : 2 : 5) T. \.i-'allichiana W aters Micronnrasil Klorofornı:Etanol<95 : 5) İzokratik 70 T. vunnanensis Cosmosil 10 Cııı Metatıol:Su (3 : 1) İzokratik 55 T. vunnanensis Cosmosil 10 C 18 Metanol:Su (65 : 35) İzokratik 88 T. x media Hicksii Spherisocb Asetonitril: Su Gradient 155 T. floridana (Cııı ba"1 ı)
T. baccata Waters Prep-pak Asetonitril: Su İzokratik 65 Bondan.:ılc C 1 s (25 : 75)
T canadensis ZorbaxSW- Taksane Heptan:Etanol (50 : 50) İzolcratik 156 Alkyl Phenyl Heptan:Etanol (96 : 4) PentaflouroPhenvl Hentan:Etanol (93 : 7)
T. brevifolia LiChrosorb RP-8 Metanol:Su 170 : 30) İzokratik 25 1'. baccata Tessek-Praha Asetonitril:Metanol:Su Grad.ient 138 (Hücre kültürü) SGX-Phenyl
128
---FABAD J. Pharm. Sci., 25, 121-137, 2000
Süperkritik Sıvı Kromatografisi (Supercritical Fluid Chromatography-SFC)
Süperkritik Sıvı Kromatografisi (SFC), HPLC ve Gaz Kromatografisi (Gas Chromatography-GC)'ne göre daha gelişmiş bir metottur. UV ve alev-iyonizasyon gibi HPLC ve GC detektörlerinin her ikisinin kullanılabilmesi ve ayrıca ısıya dayanıksız bileşiklerin analizinin de mümkün olması avantajlarıdır. Bu nedenle hem kapiler hem de doldurulmuş kolonlar kullanılabilir. Farmasötik bileşiklerin analizlerinde SFC ile yapılan çalışmalar bulunınaktadır. Son yıllarda taksol ve benzeri bileşiklerinin analizi için de hızlı bir SFC metodu (LiChrospher diol kolon, mobil faz: 150 bar' da C02 + gradient elüsyonda metanol, fırın sıcaklığı: izotermal 30°C, basınç: 150 bar, akış hızı : 2.0 mi/ dak., dalga boyu: 227 nm) geliştirilmiştir. Bu metotla 35 dakikada taksol ve diğer taksan tipi diterpenoitlerin ayırımı sağlanmıştırl57.
Misel Elektrokinetik Kromatografi (Micellar Electrokinetic Chromatography-MEKC)
Bazı kolloidal çözeltilerde moleküllerin kimyasal olarak adsorbana bağlanması ile ayırımın gerçekleştirildiği MEKC daha iyi ayırım yapabilmeyi sağlayan yeni bir yöntemdir. Son yıllarda taksan tipi diterpenoitlerin kaplanmamış bir silika kapiler kolon üzerinde elektroforez tamponu olarak 25 mM tris-fosfat (pH 8.5), 50 mM sodyum dodesil sülfat ve % 25 asetonitril'in kullanıldığı MEKC ile ayırımı gerçekleştirilmiştir. Her iki metotla sağlanan ayırım karşılaştırıldığında; MEKC'nin taksan tipi diterpenoitlerin en iyi ayırımını veren izokratik HPLC sistemlerinden daha iyi olarak, tüm bileşikleri yüksek bir duyarlıkta ayırdığı tespit edilmiştir. Taksan tipi diterpenoitlerin MEKC ile minimum çözücü atığı ve 15 dakikadan daha az bir sürede ng miktarında örnekte analizi gerçekleştirilmiştirıss. Ayıu çalışmacılar tarafından taksan tipi diterpenoitlerin, Taxııs türlerinin kabuk ve yapraklarında MEKC ile ayırımları bildirilmiştirl59_ MEKC daha basit, daha hızlı, daha ekonomik ve herhangi bir özel kolon gerektirmeden mükemmel bir ayırım sağlaması nedeniyle HPLC metotuyla kıyaslanmaktadırlSS,159_
MEKC yönteminin bitki doku kültürlerinde, yansentez çalışmalarında ve biyolojik sıvılarda taksol ve metabolitlerinin tayininde kullanılabileceği de bildirilmiştirl59_
Yüksek Performanslı Sıvı KromatografisiElektrosprey Kütle Spektrometresi (High Performance Llquid Chromatography-Electrospray Mass Spectrometry-HPLC-MS).
Çeşitli Taxııs türlerinin bitki kısımları ve hücre kültürü ekstrelerinde taksan tipi diterpenoitlerin analizi için HPLC-ESMS yöntemi kullanılmıştır. ESMS son yıllarda steroitler, çeşitli ilaçlar ve metabolitleri gibi düşük molekül ağırlığına sahip polar bileşikler ile peptitler ve proteinler için mükemmel bir teknik olarak gösterilmiştir. HPLC ile ESMS'nin birleştiği bu metotla taksan tipi diterpenoitlerin hücre kültürü ekstrelerinde hem ayırımı hem de teşhisi hızlı ve duyarlı bir şekilde gerçekleştirilmiştirl60_
Enzim Bağlı İmmunolojik Test (Enzyme-Llnked Immunosorbent Assay- ELISA)
Taxııs türlerinin bitki ekstreleri ve doku kültürleri içindeki taksan tipi diterpenoitlerin hızlı, duyarlı ve spesifik olarak incelenmesi ve yarıkantitatif tayinleri yanında; antitümör aktivite için ümit verici veya taksolün yarısentezinde prekürsör olarak kullanılabilecek taksan tipi diterpenoitlerin araş
tırılması amacıyla bir enzim bağlı immunolojik test olarak geliştirilmiştir.
Son yıllarda T. baccata'nın biyoaktif bileşiklerinin araştırılması sırasında bu yöntem kullanılmıştır.
Anti-taksol antikorları 2'-süksinil taksol-sığır serum albumini (Bovine Serum Albumin-BSA) konjugatma karşı immünize edilmiş tavşanlardan elde edilmiştir. Her bir kromatografik fraksiyon ELISA ile test edilerek biyoaktif bileşikler elde edilmiştirl6.
Yine bir başka çalışmada Taxııs türleri ve doku kültürlerindeki 10-deasetil bakkatin III'ün tayini ve miktarı 7- veya 10-süksinil-10-deasetilbakkatin IIIBSA konjugatınm kullanıldığı ELISA testi ile incelenmiştirl07. Diğer bir araştırmada, T. baccata gövde kabukları irnmünojen olarak 10-süksinil-10-deasetilbakkatin l!I-BSA'mn kullanıldığı ELISA testi ile incelenmiş ve biyoaktif taksan tipi diterpenoitleri tespit edilmiştirl61 _
Enzim İmmunotestinin (Competitive lnhibition CIEIA)
Yarışmalı hıhibisyonu Enzyme hnmırnoassay-
Taxus türlerindeki ve insan plazmasındaki taksol ve
129
Erdemoğlu, Şener
diğer taksan tipi diterpenoitlerin tayini için bir po
liklonal antikorun kullanıldığı irrununoenzimatik
bir reaksiyon olan CIEIA yöntemi geliştirilmiştir.
Analizde 7-süksiniltaksol-deniz salyangozu he
mosiyanini konjugahna karşı tavşanlarda oluş
turulan poliklonal antikorlar kullanılmışhr. Bu test
ile taksol ve sefalomannin 0.3 ng/ml, bakkatin III ve
10-deasetilbakkatin III 1000 ng/ml kon
santrasyonlarda tayin edilebilmektedir. T. brevifolia
kabuklarının CIEIA analizi ile ham metanollü ekst
resinde % 0.018 ve bu ekstrenin diklorometan frak
siyonunda % 0.009 miktarında taksan tipi di
terpenoit bulunduğu belirlenmiştir. Yöntemin yük
sek duyarlılığı, kolay uygulanabilirliği, hızlı ve
spesifik olması nedeniyle taksol ve diğer !aksanların
biyolojik örneklerden rutin analizinde kul
lanılabileceği belirtilmiştir162. Bu yöntemde 7-
süksiniltaksol- ve 7-süksinilbakkatin IIl-deniz sal
yangozu hemosiyanini konjugatma karşı tavşan ye
rine immünize edilmiş farelerden elde edilen mo
noklonal antikorlar da kullanılarak T. brevifolia
ekstrelerinde taksol, bakkatin III ve total taksan tipi
diterpenoitler tayin edilmiştir163.
Bir başka çalışmada süksinil-10-deasetilbakkatin ll!
BSA konjugatına karşı immünize edilıniş ta
vuklardan elde edilen anti-10-deasetilbakkatin I!I
antikorlarının, bakkatin benzeri !aksanlarla spesifik
olarak etkileştiği CIEIA metodu ile belirlenmiştir.
Bu antikorlarla Taxus türlerinden yeni taksol pre
kürsörlerinin araşhrılabileceği de bildirilmiştir164.
Radyoimmunolojik Test {Radio!ınmunoAssay-RIA)
Bir fare monoklonal anti-taksol antikoru ve bir tav
şan poliklonal anti-taksol antiserumu kullanılarak
RIA tekniği ile Taxus bitki ekstreleri içindeki taksol
ve sefalomannin'in miktarları ölçülmüştür. Sonuçlar
HPLC ile karşılaşhrılmış ve benzer bulunmuştur.
Bu antikorlar kullanılarak taksan tipi di
terpenoitlerin, bitki ekstrelerinde veya diğer doğal
kaynaklarda tayin edilmesinin mümkün olabileceği
bildirilmiştir165.
Karşı Akım Kromatografisi (Counter Current Chro
rnatography-CCC)
Taksan tipi diterpenoitlerin ayırunı ıçın, modern
teknikler içerisinde yer alan bu teknikten de fay
dalanılmışhr. WANI ve WALL tarafından T. bre-
130
vifolia gövde kabuklarından taksolün ilk olarak izo
lasyonu sırasında birbirini takip eden bir dizi ece uygulanmışhrl66,167. Kaynaklara bakıldığında !ak
sanların ayırunı için High-Speed Counter Current
Chromatography (HSCCC) tekniğinin de kul
lanıldığı görülmektedir16,57,119,161.
SONUÇ
Taksan tipi diterpenoitlerin elde edilmesi sırasında
farklı ayırma ve saflaştırma metotlarından fay
dalanılmıştır. Bu amaçla etanol veya metanol'ün,
bazan da diklorometan-metanol karışunının kul
lanıldığı birinci tüketıneyi takiben, taksan tipinde ol
mayan bileşiklerin uzaklaştırılması amacıyla ge
nellikle diklorometan ve su arasında ikinci bir
tüketıne işlemi uygulanmışhr. Bu şekilde elde edi
len ekstrelerdeki taksan tipi diterpenoitlerin bir
birinden ayrılınası için, çoğunlukla silika jel'in ad
sorban olarak kullanıldığı kolon kromatografisinden
veya ters faz preparatif HPLC sistemlerinden ya
rarlanılımştır. Elde edilen bileşiklerin saf
laştırılmasında preparatif İTK veya kristalizasyon
teknikleri kullanılmışhr.
Taksan tipi diterpenoitlerin bitkinin çeşitli kı
sımlarında çok az miktarlarda bulunması nedeniyle
daha duyarlı metotlar (Yüksek Performanslı Sıvı
Kromatografisi, Süperkritik Sıvı Kromatografisi,
Misel Elektrokinetik Kromatografi, Yüksek Per
formanslı Sıvı Kromatografisi-Elektrosprey Kütle
Spektrometresi, ELISA Testi, Enzim İmmünotestinin
Yarışmalı İnhibisyonu, Radyoimmünolojik Test,
Karşı Akım Kromatografisi) gerekli olmuştur. Bu
metotlar günümüzde Taxus türlerinde, biyolojik sı
vılarda, çeşitli Taxus hücre ve doku kültürlerinde,
taksan tipi diterpenoitlerin tespiti amacıyla kul
lanılanılmaktadır.
KAYNAKLAR 1. Wani MC, Taylor HL, Wall ME, Coggon P, McPhail
AT. Plant Antiturnor Agents. VL The Isolation and
Structure of Taxol, A Novel Antileukemic and An
titumor Agent from Taxus brevifolia, ]. Am. Chem.
Soc., 93(9), 2325-2327, 1971.
2. Eisenhauer EA, Verrnorken JB. The Taxoids, Drugs,
55(1), 5-30, 1998.
3. Şener B, Küçükboyacı N. Taxus Türlerinin ve Tak
solün Biyolojik Aktiviteleri, J Inst. Sci. Tech., Gazi
Univ., 8, 56-68, 1995.
FABAD J. Pharm. Sci., 25, 121-137, 2000
4. Kingston DG!. Natura! Taxoids: Structure and Chernistry, in Suffness M. (ed.), Taxol: Science and Applications, CRC Press, Boca Raton, Florida, pp. 287-
316, 1995. 5. Şener B, Küçükboyacı N. Taxus Türlerinde Bulunan
Taksan Tipi Diterpenoitler, J Jnst. Sci. Tech., Gazi
Unlv., 7, 87-111, 1994. 6. Erdemoğlu, ·N. Türkiye'de Yetişen Taxus baccata L.
Bitkisinin Taksan Türevi Bileşikleri Üzerinde Araştırmalar, Doktora Tezi, Gazi Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Ankara 1999.
7. Lythgoe B. The Taxus Alkaloids, in Manske, RHF (ed.), The Alkaloids, Chemislry and Physiology, Acadernic Press, New York,Vol.10, pp.597-626, 1968.
8. Blechert S, Guenard D. Taxus Alkaloids, in Brossi A. (ed.L The Alkaloids, Academic Press, New York, Vol. 39, pp. 195-238, 1990.
9. Erdemoğlu N, Şener B. Taxus Cinsi ve Türkiye'deki Tek Türü: Taxus baccata L., Ot Sistematik Botanik Dergisi, 5(2), 5-14, 1998.
10. Şener B, Küçükboyacı N. High-Pressure Liquid Chromatographic Detennination of Taxol in Taxus baccala, GUEDE-J Fac. Pharm. Gazi, 11(1), 11-15, 1994.
11. jenniskens LHD, Van Rozendaal ELM, Van Beek TA. Identification of Six Taxine Alkaloids from Taxus baccaıa Needles,]. Nal. Prod., 59(2), 117-123, 1996.
12. Barboni L, Gariboldi P, Appendino G, Enrui R, Gabetta B, Bombardelli E.: New Taxanes from Taxus baccala, Liebigs. Ann., (2), 345-349, 1995.
13. Appendino G, Tagliapietra S, Özen HÇ, Gariboldi P, Gabetta B, Bombardelli E. Taxanes from the Seeds of Taxus baccala,f Nal. Prod., 56(4), 514-520, 1993.
14. Barboni L, Gariboldi P, Torregiani E, Appendino G, Gabetta B, Zini G, Bombardelli E. Taxanes from the Needles of Taxus wallichiana, Phytochemislry, 33(1), 145-150, 1993.
15. Guo Y, Diallo B, Jaziri M, Vanhaele-Fastre R, Vanhaelen M, Ottinger R. Two New Taxoids frorn the Stem Bark of Taxus baccala, J Nal. Prod., 58(12), 1906-1912, 1995.
16. Guv Y, Vanhaelen-Fastre R, Diallo B, Vanhaelen M, Jaziri M, Homes L Ottinger R. Immunoenzymatic Methods Applied to the Search for Bioactive Taxoids from Taxus baccala, J Nal. Prod., 58(7), 1015-1023, 1995.
17. Zhang ZP, Wiedenfeld H, Röder E. Taxanes from Taxus chinensis, Phylochemislry, 38(3), 667-670, 1995.
18. Chattopadhyay SK, Saha GC, Kulshreshtha M, Shar-
ma RP, Kumar S. Studies on the Himalayan Yew Taxus wallichiana: Part II, Indian ]. Chem. Seci. B: Org. Chem. Incl. Med. Chem., 35B(2), 175-177, 1996.
19. Chattopadhyay SK, Sharma RP, Appendino G, Gariboldi P. A Rearranged Taxane frorn the I:-:Iimalayan Yew, Taxus wallichiana, Phytochemistry, 39(4), 869-870, 1995.
20. Zhong S, Hua Z, Fan ). A New Taxane Diterpene from Taxus yunnanensis, J Nal. Prod., 59(6), 603-605, 1996.
21. Fettneto AG, Dicosmo F. Distribution and Amounts of Taxol in Different Shoot Parts of Taxus cuspidata, Planla Med., 58(5), 464-466, 1992.
22. Vidensek N, Lim P, Campbell A, Carlson C. Taxol Content in Bark, Wood, Root, Lea( Twig, and Seedling from Several Taxus Species, f. Nal. Prod., 53 (6), 1609-1610, 1990.
23. Witherup M, Look SA, Stasko MW, Ghiorzi Tj, Muschikk GM. Taxus sp. Needles Contain Amounts of Taxol Comparable to the Bark of Taxus brevifolia: Analysis and Jsolation, J Nal. Prod., 53(5), 1249-1255, 1990.
24. Wheeler NC, jech K, Masters S. Effects of Genetic, Epigenetic, and Environmental Factors on Taxol Content in Taxus brevifolia and Related Species, J Nat. Prod., 55(4), 432-440, 1992.
25. Huang CHO, Kingston DGJ, Magri NF, Samaranayake G. New Taxanes from Taxus brevifolia~
f. Nal. Prod., 49(4), 665-669, 1986. 26. Witherup KM, Look SA, Stasko MW, McCloud TG,
Jssaq HJ, Muschik GM. High Performance Liquid Chromatographic Separation of Taxol and Related Compounds from Taxus brevifolia, J Liq. Chromalog., 12(11), 2117-2132, 1989.
27. Auriola SOK, Lepisto A, Naaranlahti T, Lapinjoki SP. Determination of Taxol by High-Performance Liquid Chromatography-Thermospray Mass Spectrometry, f. Chromaıogr., 594 (1-2), 153-158, 1992.
28. Cardellina jH. HPLC Separation of Taxol and Cephalomannine, J Liq. Chromalogr., 14(4), 659-665, 1991.
29. Beutler JA, Chmumy GM, Look SA, Witherup KM. Taxinine M, A new Tetracyclic Taxane from Taxus brevifolia, J Nal. Prod., 54(3), 893-897, 1991.
30. Appendino G, Gariboldi P, Gabetta B, Pace R, Bombardelli E, Viterbo D. 14~-Hydroxy-10-
deacetylbaccatin III, A New Taxane from Himalayan Yew (Taxus wallichiana Zucc.), J Chem. Sac. Perkin Trans. 1, (21), 2925-2929, 1992.
31. Soto j, Fuentes M, Castedo L. Teixidol, An Abeo-
131
Erdemoğlu, Şener
Taxane from European Yew, Taxus baccata, Phytoc
hemistry, 43(1), 313-314, 1996. 32. Kelsey RG, Vance NC. Taxol and Cephalomannine
Concentrations in the Foliage and Bark of Shade
Grown and Sun-Exposed Taxus brevifolia Trees, ].
Nat. Prod., 55(7), 912-917, 1992. 33. Chu A, Zajicek), Davin LB, Lewis NG, Croteau RB.
Mixed Acetoxy-Bezoxy Taxane Esters from Taxus
brevifolia, Phytochemistry, 31(12), 4249-4252, 1992.
34. Chu A, Davin LB, Zajicek ), Lewis NG, Croteau R.
Intramolecular Acyl Migrations in Taxanes from Taxus brevifolia, Phytochemistry, 34(2), 473-476,
1993. 35. Chu A, Furlan M, Davin LB, Zajicek), Towers GHN,
Soucy-Breau CM, Rettig SJ, Croteau R, Lewis NG.
Phenylbutanoid and Taxane-Like Metabolites from Needles of Taxus brevifolia, Phytochemistry, 36(4),
975-985, 1994. 36. Breeden SW, }ardan AM, Lawrence NJ, McGown
AT. 2'-Deacetoxyaustrospicatine from the Stem Bark
of Taxus baccata, Planta Med., 62(1), 94-95, 1996.
37. Chattopadhyay SK, Saha GC, Kulshreshtha M, Sharma RP, Kumar S. Studies on the Himalayan Yew
Taxus wallichiana: Part IV- lsolation of Dihydrotaxol
and Dibenzoylated Taxoids, Indian]. Chem. Sect. B:
Org. Chem. Incl.Med.Chem., 35B, 754-756, 1996.
38. Wang X, Shigemori H, Kobayashi J. Taxezopidines
B-H, New Taxoids from Japanese Yew Taxus cus
pidata,J. Nat. Prod., 61, 474-479, 1998.
39. Chattopadhyay SK, Saha GC, Kulshreshtha M, Tripathi V, Sharma RP, Mehta VK. The Taxoids Cons
tituents of the Roots of Taxus wallichiana, Planta
Med.,64, 287-288, 1998. 40. Wang X, Shigemoi H, Kobayashi ). Taxuspines K, L,
and M, New Taxoids from Japanese Yew Taxus cus
pidata, Tetrahedron, 52(7), 2337-2342, 1996. 41. Shigemori H, Wang X, Yoshida N, Kobayashi ). Ta
xuspines X-Z, New Taxoids from Japanese Yew Taxus cuspidata, Chem. Pharm. Bull., 45(7), 1205-
1208, 1997. 42. Morita H, Gonda A, Wei L, Yamamura Y, Takeda K,
Itokawa H. Taxuspinananes A and B, New Taxoids
from Taxus cuspidata var. nana/]. Nat. Prod./ 60(4),
390-392, 1997. 43. Castor TP1 Tyler TA. Determination of Taxol in
Taxus media Needles in the Presence of Interfering
Components,J Liq. Chromatog., 16(3), 723-731, 1993.
44. Fang W, Wu Y, Zhou j, Chen W, Fang Q. Qualitative
and Quantitative Determination of Taxol and Re
lated Compounds in Taxus cuspidata Sieb. Et Zucc.,
132
Phytochem. Anal., 4(3), 115-119, 1993.
45. Araslanian RL, Bailey DT, Kent MC, Richheimer SL, Thornburg KR, Timmons DW, Zheng QY. Brevitaxin,
A New Diterpenolignan from the Bark of Taxus bre
vifolia,J Nat. Prod., 58(4), 583-585, 1995.
46. Das B, Rao SP, Srinivas KVNS, Yadav )S, Das R. A
Taxoid from Needles of Himalayan Taxus baccata/
Phytochemistry, 38(3), 671-674, 1995.
47. Das B, Rao SP, Srinivas KVNS, Kashinath A, Yadav
JS. Studies on Phytochemicals: Fart XIII-Variation in
the Taxoid Constituents in Two Collections of the
Needles of Himalayan Taxus baccata Linn., Indian].
Chem. Sect. B: Org. Chem. Incl. Med. Chem., 358(6),
624-626, 1996. 48. Kontla Y, Sasaki T, Sun X, Li X, Onda M, Takayanagi
H, Harigaya Y. Absolute Structure of 2'
Desacetoxyaustrospicatine Established by X-Ray
Analysis and Circular Dichroism Spectroscopy,
Chem. Pharrn. Bull., 42(12), 2621-2624, 1994.
49. Chauviere G, Guenard D1 Pascard C, Picot F, Potier
P, Prange T. Taxagifine: New Taxane Derivative from
Taxus baccata L. (Taxaceae), ]. Chem. Soc. Chem.
Commun., (9), 495-496, 1982. 50. Tong X, Fang W, Zhou ), He C, Chen W, Fang Q.
Three New Taxane Diterpenoids from Needles and
Stems of Taxus cuspidata, f. Nat. Prod., 58(2), 233-
238, 1995. 51. Liang ), Huang KS, Guantilaka AAL. A New 1,2-
Deoxytaxane Diterpenoid from Taxus chinensis/
Planta Med., 64, 187-188, 1998. 52. Sorochinskii BV, Prokhnevskii Al, Grodzinskii DM.
Method of Isolating Taxol from Taxus baccata, Khim.
Prir. Soedin., (5), 702-703, 1990. 53. Fang WS, Fang QC, Liang XT, Lu Y, Zheng Q. Ta
xachitrienes A and B, Two New Bicyclic Taxane Di
terpenoids from Taxus chinensis, Tetrahedron, 51
(31), 8483-8490, 1995. 54. Fang W, Fang QC, Liang XT. Bicylic Taxoids from
Needles of Taxus chinensis, Planta Med., 62(6), 567-
569, 1996. 55. Zhang H 1 Tadeda Y, Sun H. Taxanes from Taxus
yunnanensis, Phytochemistry, 39(5), 1147-1151, 1995.
56. Kingston DGI, Gunatilaka AAL, lvey CA. Modified
Taxols, 7. A Method for the Separation of taxol and
Cephalomannine, J. Nat. Prod., 55(2), 259-261, 1992.
57. Gu ), Tong X, Ding Y, Fang Q. Application of High
Speed Countercurrent Chromatography ta the Se
paration of Taxol and Cephalomannine, Fitoterapia/
65(2), 149-152, 1994. 58. Chiou F, Kan P, Chu !, Lee C. Separation of Taxol
FABADJ. Plıarm. Sci., 25, 121-137, 2000
and Cephalomannine by Countercurrent Chro
matography, f Liq. Chrom. & Rel. Technol., 20(1), 57-61, 1997.
59. Rimoldi JM, Molinero AA, Chordia MD, Gharpure
MM, Kingston DGI. An lmproved Method lor the Se
paration of Paclitaxel and Cephalomannine, f. Nat.
Prod., 59, 167-168, 1996.
60. Beckvermit )T, Anziano Dj, Murray CK. An Imp
roved Method for Separating Paclitaxel and Cep
halomannine Using Ozone and Girard Reagents, J Org. Chem., 61, 9038-9040, 1996.
61. Vandana V, Teja AS, Zalkow LH. Supercritical Ext
raction and HPLC Analysis of Taxol from Taxus bre
vifolia Using Nitrous Oxide and Nitrous
Oxide+Ethanol Mixtures, Fluid Phase Equilib., 116(1-
2), 162-169, 1996.
62. Zamir L, Balachandran S, Zheng YF, Nedea ME,
Caron G, Nikolakakis A. Acid Catalyzed Re
arrengement and Acyl Migration Studies on 9-Dihydro-13-acetylbaccatin IH, A Major Taxane from
Taxus canadensis, Telrahedron, 53(47), 15991-16008,
1997.
63. Doss RP, Carney JR, Shanks Jr. CH, Williamson RT,
Chamberlain JD. Two New Taxoids from European
Yew (Taxus baccata) that Act as Pyrethroid In
secticide Synergists with the Black Vine Weevil (Oti
orhynchus sulcatus), J Nat. Prod., 60(11), 1130-1133,
1997.
64. Zamir L, Nedea ME, Zhou Z, Belair S, Caron G, Sa
uriol F, Jacqmain E, Jean F, Garneau F, Mamer O.
Taxus canadensis Taxanes: Structures and Ste
reochernistry, Can.]. Chem., 73(5), 655-665, 1995.
65. Gabetta B, De Bellis P, Pace R, Appendino G, Bar
boni L, Torregiani E, Gariboldi P, Viterbo D. 10-
Deacetylbaccatin III Analogues from Taxus baccata,
f Nal. Prod., 58(10), 1508-1514, 1995.
66. Koppaka VR, Bhakuni RS, Hanuman JB, Davies R,
Johnson J. Taxanes from the Bark of Taxus brevifolia,
Phytochemislry, 41(3), 863-866, 1996.
67. Lian JY, Min Z, Mizuno M, Tanaka T, Linuına M.
Two Taxane Diterpenes from Taxus mairei, Phytoc
hemislry, 27(11), 3674-3675, 1988.
68. Zhang Z, Jia Z, Zhu Z, Cui Y, Cheng J, Wang Q. New Taxanes from Taxus chinensis, Planta Med., 56(3),
293-294, 1990.
69. Yeh M, Wang ), Liu L, Chen F. A New Taxane De
rivative from the Heartwood of Taxus mairei,
Phylochemislry, 27(5), 1534-1536, 1987.
70. Appendino G, Özen HÇ, Gariboldi P, Torregiani E,
Gabetta B, Nizzola R, Bombardelli E. New Oxetane-
type Taxanes from Taxus wallichiana Zucc., J Chem.
Sac. Perkin Trans. 1, (14), 1563-1566, 1993.
71. Balza F, Tachibana S, Barrios H, Towers GHN. Bre
vifoliol, A Taxane from Taxus brevifolia, Phytoc
hemislry, 30(5), 1613-1614, 1991.
72. Appendino G, Lusso P, Gariboldi P, Bombardelli E, Gabettta B. A 3,11-Cyclotaxane from Taxus baccata,
Phylochemislry, 31(12), 4259-4262, 1992.
73. Kobayashi J, Ogiwara A, Hosoyama H, Shigemori H,
Yoshida N, Sasaki T, Li Y, lwasaki S, Naito M, Tsu
ruo T. Taxuspines A~C, New Taxoids from Japanese
Yew Taxus cuspidata Inhibiting Drug Transport Ac
tivity of P-Glycoprotein in Multidrug-Resistant Cells,
Telrahedron, 50(25), 7401-7416, 1994.
74. Zhang S, Lee CT, Kashiwada Y, Chen K, Zhang D,
Lee K. Yunantaxusin A, A New 11 (15~1)-abeo
Taxane from Taxus yunnanensis, J Nat. Prod., 57
(11), 1580-1583, 1994.
75. Kobayashi ), Hosoyama H, Katsui T, Yoshida N, Shi
gemori H. Taxuspines N, O, and P, New Taxoids
from Japanese Yew Taxus cuspidata, Tetrahedron,
52(15), 5391-5396, 1996.
·76. Topçu G, Sultana N, Akhtar F, Rehman H, Hussain
T, Choudhary MI, Rahman A.-ur. Taxane Diterpenes
frorn Taxus baccala, Nal. Prnd. Lel., 4(2), 93-100, 1994.
77. Zhang Z, Jia Z. Taxanes from Taxus chinensis,
Phyıochemislry, 30(7), 2345-2346, 1991.
78. Morita H, Wei L, Gonda A, Takeya K, Itokawa H. A
Taxoid from Taxus cuspidata var. nana, Phyto
chemislry, 46(3), 583-586, 1997.
79. Chattopadhyay SK, Kulshreshtha M, Saha GC, Shar
ma RP, Jain SP, Kumar S. The Taxoid Constituents of
the Hearthwood of Taxus wallichiana, Planta Med., 62, 482, 1996.
80. Chattopadhyay SK, Sharma RP. A Taxane from the
Himalayan Yew, Taxus wallichiana, Phytochemistry, 39(4), 935-936, 1995.
81. Barboni L, Gariboldi P, Torregiani E, Appendino G,
Varese M, Gabetta B, Bombardelli E. Minor Taxoids
from Taxus wallichiana,]. Nal. Prod., 58(6), 934-939, 1995.
82. Chattopadhyay SK, Saha GC, Sharma RP, Kumar S,
Roy R. A Rearranged Taxane from the Himalayan
Yew Taxus wallichiana, Phytochemistry, 42(3), 787-788, 1996.
83 Zhang Z, Jia Z. Taxanes from Taxus yunnanensis/
Phyıochemislry, 29(11), 3673-3675, 1990.
84. Yue Q, Fang Q, Liang X, He C. Taxayuntin E and F:
Two Taxanes from leaves and Stems of Taxus yw1-
133
Erdemoğlu, Şener
nanensis, Phytochemistry, 39(4), 871-873, 1995.
85. Shen Y, Tai H, Chen C. New Taxane Diterpenoids
from !he Roots of Taxus mairei, J Nat. Prod., 59(2),
173-176, 1996.
86. Shen Y, Chen C. Taxanes from the Roots of Taxus mairei, Phytochemistry, 44(8), 1527-1533, 1996.
87. Kobayashi ), Inubushi A, Hosoyama H, Yoshida N,
Sasaki T, Shigemori H. Taxuspines E,...,H and J, New
Taxoids frorn the Japanese Yew Taxus cuspidata, Tetrahedron, 51(21), 5971-5978, 1995.
88. Zhang H, Sun H, Takeda Y. Four New Taxanes frorn
the Roots of Taxus yunnanensis, J Nal. Prod., 58(8),
1153-1159, 1995.
89. Hongjie Z, Qing M, Wei X, Ping Y, Handong S, Ta
keda Y. Intramolecular Transesterified Taxanes from
Taxus yunnanensis, Phytochemistry, 44(5), 911-915,
1997.
90. Appendino G, Cravotto G, Gariboldi P, Gabetta B,
Bombardelli E. The Chernistry and Occurrence of Ta
xane Derivatives. X. The Photochemistry of Taxine B, Gazz. Chim. ItaL, 124(1), 1-4, 1994.
91. Appendino G, Özen HÇ, Fenoglio !, Gariboldi P, Ga
betta B, Bornbardelli E. Pseudoalkaloid Taxanes from
Taxus baccata, Phytochemistry, 33(6), 1521-1523,
1993.
92. Yue Q, Fang Q, Liang X, He C, Jing L. Rearranged
Taxoids from Taxus yunnanensis, Planta Med? 61(4),
375-377, 1995.
93. Yue Q, Fang Q, Liang X. A Taxane-11,12-0xide from
Taxus yunnanensis, Phytochemistry, 43(3), 639-642,
1995.
94. Appendino G, Cravotto G, Enriu R, jakupovic ), Ga
riboldi P, Gabetla B, Bombardelli E. Rearranged Ta
xanes frorn Taxus baccata, Phytochemistry, 36(2),
407-411, 1994.
95. De Bellis P, Lovati M, Pace R, Peterlongo F, Zini GF.
Isolation of 7-Epi-cephalomannine from Taxus x
media ev. Hicksii Needles, Fitoterapia, 66(6), 521-
524, 1995.
96. Zhang ), Fang Q, Liang X, He C, Kong M, He W, )in
X. Taxoids frorn the Barks of Taxus wallichiana,
Phytochemistry, 40(3), 881-884, 1995.
97. Barboni L, Gariboldi P, Torregiani E, Appendino G,
Cravotto G, Bornbardelli E, Gabetta B, Viterbo D.
Chemistry and Occurrence of Taxane Derivatives.
Part 16. Rearrenged Taxoids from Taxus x media
Rehd. ev. Hicksü. X-Ray Molecular Structure of 9-0-
Benzoyl-9,10-dide-O-acetyl-11(15->1 )abeo-baccatin
VI., J Chem. Soc., Perkin Trans. 1, (21), 3233-3238,
1994.
134
98. Shrestha TB, Chetri SKK, Banskota AH, Manandhar
MD, Taylor WC 2-Deacetoxytaxinine B: A New Ta
xane from Taxus wallichiana, J Nal. Prod., 60(8), 820-
821, 1997.
99. Fuji K, Tanaka K, Li B. Novel Diterpenoids from
Taxus chinensis, J Nal. Prod., 56(9), 1520-1531, 1993.
100. Yoshizaki F, Fukuda M, Hisamichi S, Ishida T, in Y.
Structures of Taxane Diterpenoids from the Seeds of
Japanese yew, Taxus cuspidata, Chem. Pharm. Bull.,
36(6), 2098-2102, 1988.
101. Koppaka VR, juchum ). Taxanes !rom the Bark of
Taxus brevifolia, Phytochemistry, 47(7), 1315-1324,
1996.
102. Liang ), Huang KS, Guanatilaka AAL, Yang L. 2-
Deactoxytaxinine B: A Taxane Diterpenoid from
Taxus chinensis, Phytochemistry, 47(1), 69-72, 1998.
103. Barboni L, Gariboldi P, Torregiani E, Appendino G,
Gabetta B, Bombardelli E. Taxol Analogues from the
Roots of Taxus x media, Phytochemistry, 36(4), 987-
990, 1994.
104. Morita H, Gonda A, Wei L, Yamamura Y, Wa
kabayashi H, Takeya K, Itokawa H. Four New Ta
xoids from Taxus cuspidata var. nana, Planta Med.,
64, 183-186, 1998,.
105. Vanhaelen-Fastre R, Diallo B, Jaziri M, Faes M,
Homes J, Vanhaelen MH. High-Speed Co
untercurrent Chrornatography Separation of Taxol
and Related Diterpenoids frorn Taxus baccata, f. Liq.
Chromatogr., 15(4), 697-706, 1992.
106. McLaughlin JL, Miller RW, Powell RG, Smith )r. CR.
19-Hydroxybaccatin III, 10-Deacetylcephalomannine,
and 10-Deacetyltaxol: New Antiturnor Taxanes from
Taxus wallichiana,J Nal. Prod., 44, 312-319, 1981.
107. Guo Y, jaziri M, Diallo B, Vanhaelen-Fastre R, Zhiri
A, Vanhaelen M, Homes ), Bombardelli E. Im
munological Detection and Quantitation of 10-
deacetylbaccatin III in Taxus sp. Plant and Tissue
Cultures, BioL Chem. Hoppe-Seyler, 375(4), 281-287,
1994.
108. Stasko SA, Witherup KM, Ghiorzi T, McCloud TG,
Look S, Muschik GM, lssaq HJ. Multimodal Thin
Layer Chromatographic Separation of Taxol and Re
lated Compounds from Taxus brevifolia, J Liq. Chro
matog., 12(11), 2133-2138, 1989.
109. Liang ), Kingston DGL Two New Taxane Di
terpenoids from Taxus mairei, f. Nat. Prod., 56(4), 594-599, 1993.
110. Rojatkar SR, Sinha B, Sawaikar DD, Sonawane KB,
Panse GT, Ravindranathan T, Nagasampagi BA. Ta
xanes from the Needles of Taxus baccata, Indian J
FABAD J. Pharm. Sci., 25, 121-137, 2000
Chem. Seci. B: Org. Chem. Incl. Med. Chem., 35B(7),
752-753, 1996.
111. Soto J, Castedo L. Taxoids from European Yew,
Taxus baccala L., Phyıochemislry, 47(5), 817-819,
1998.
112. Choi M, Kwak S, Liu JR, Park Y, Lee M, An N. Taxol
and Related Compounds in Korean Native Yews
(Taxus cuspidala), Planla Med., 61(3), 264-266, 1995.
113. Song D, Au JLS. Jsocratic High-Performance Liquid
Chromatographic assay of Taxol in Biological Fluids
and Tissues Using Automated Column Switching, J. Chromalogr., B: Biomed. Appl., 663(2), 337-344, 1995.
114. Huizing MT, Sparreboom A, Rosing H, Tellingen
OV, Pinedo HM, Beijnen JEL Quantification of Pac
litaxel Metabolites in Humarı Plasma by High
Performance Liquid Chromatography, J Chro
malogr., B: Biomed. Appl., 674(2), 261-268, 1995.
115. Sparreboom A, Tellingen OV, Nooijen W, Beijnen JH.
Determination of Paclitaxel and Metabolites in
Mouse Plasma, Tissues, Urine and Faeces by Semi
Automated Reversed-Phase High-Perfonnance Li
quid Chromatography, f. Chromatogr., B: Biomed.
Appl., 664(2), 383-391, 1995.
116. Richheimer SL, Tinnermeier DM, Timmons DW.
High-Performance Liquid Chromatographic Assay
of Taxol, Anal. Chem., 64(20), 2323-2326, 1992.
117. Heinstein PF, Chang C. Taxol, Annu. Rev. Planı
Physiol. Planı Mal. Biol., 45, 663-674, 1994.
118. Küçükboyacı N. Türkiye'de Yetişen Taxus baccata L.
Bitkisinin Taksol Yönünden İncelenmesi, Yüksek
Lians Tezi, Gazi Üniv. Sağlık Bilimleri Enstitüsü, An
kara, 1993.
119. Gabetta B, Orsini P, Peterlongo F, Appendino G. Pac
litaxel Analogues from Taxus baccata, Phytoche
mislry, 47(7), 1325-1329, 1998.
120. Elsohly HN, Croom EM, Kopycki WJ, Joshi AS, El
sohly MA, McChesney JD. Concentrations of Taxol
and Related Taxanes in the Needles of Different
Taxus Cultivars, Phytochem. Ana]., 6(3), 149-156,
1995.
121. Kwak S, Choi M, Park Y, Yoo ), Liu ). Taxol Content
in the Needles of Taxus sp., Phylochemislry, 40(1),
29-32, 1995.
122. Griffin), Hook 1. Taxol Content of Irish Yews, Planla
Med., 62, 370-372, 1996.
123. Hake SH, Cooks RG, Chang C, Kelly RC, Qualls Sj,
Alvarado B, McGuire MT, Snader KM. De
termination of Taxanes in Taxus brevifolia Extracts
by Tandem Mass spectrometry and High
Performance Liquid Chromatography, J Nal. Prod.,
57(2), 277-286, 1994.
124. Vance NC, Kelsey RG, Sabin TE. Seasonal and Tissue
Variation in Taxane Concentrations of Taxus bre
vifolia, Phytochemistry, 36(5), 1241-1244, 1994.
125. Mattina MJI, Maceachern GJ. Extraction, Prufication
by Solid-Phase Extraction and High-Performance Li
quid chromatographic Analysis of Taxanes from Or
namental Taxus needles, f Chromalogr. A, 679(2),
269-275, 1994.
126. Aboul-Enein H, Serignese V. Liquid Chro
matographic Determination of Taxol and Related De
rivatives Using a New Polyfluorinated Reversed
Phase Column, Anal. Chim. Acla, 319(1-2), 187-190,
1996.
127. Verstraetn V, Keukeleire DD. Separation and Frac
tionation of Taxoids from the Needles of Taxus bac
cala, Phylolher. Res., lO(Sup. 1), 147-149, 1996.
128. Van Rozendaal ELM, Lelyveld G, Van Beek TA. A
Simplified Method for Determination of Taxanes in
Yew Needles by Reversed-Phase (C18) High Pressure
Liquid chromatography, Phyıochem. Anal., 8(6), 286-
293, 1997.
129. Ellis DD, Zeldin EL, Brodhagen M, Russin WA,
McCown BH. Taxol Production in Nodule Cultures
of Taxus, J Nal. Prod., 59(3), 246-250, 1996.
130. Nemeth-Kiss V, Forgacs E, Cserhati T, Schmidt G.
Determination of Taxol in Taxus Species Grown in
Hungary by High- Performance Liquid Chro
matography-Diode Array Detection Effect of Ve
getative Period, J Chromalogr. A, 750(1+2), 253-256,
1996.
131. Lauren DR, )ensen DJ, Douglas JA. Analysis of Taxol,
10-Deacetylbaccatin III and Related Compounds in
Taxus baccala, f Chromalogr. A, 712(2), 303-309,
1995.
132. Kopycki WJ, Elsohly HN, McChesney JD. HPLC De
termination of Taxol and .Related Compounds in
Taxus Planı Extracts, f Uq. Chromator., 17(12), 2569-
2591, 1994.
133. Adeline MT, Wang XP, Pouoal C, Ahond A, Potier P.
Evaluation of Taxoids from Taxus sp. Crude Extracts
by High Performance Liquid Chromatography, J Liq. Chrom. & Rel. Technoi., 20(19), 3135-3145, 1997.
134. Ketchum REB, Gibson DM. Rapid Isocratic Reversed
Phase HPLC of Taxanes on New Colwnns De
veloped Specifically far Taxol Analysis, f. Liq. Chro
malor., 16(12), 2519-2530, 1993.
135. Wu Y, Zhu W. High Performance Liquid Chro
matographic Determination of Taxol and Related Ta
xanes from Taxus Callus Cultures, f. Liq. Chrom. &
135
Erdemoğlu, Şener
Re!. Technol., 20(19), 3147-3154, 1997.
136. Ketchum REB, Gibson DM. A Novel Method of lso
lating Taxanes from Cell Suspension Cultures of
Yew (Taxus sp.), J Liq. Chromalor., 18(6), 1093-1111,
1995.
137. Heinstein P, Zhou ), Wang M, Liu Y, Chen X, Chen
D, Hoke SH, Cooks RG, Chang C. Taxol and Taxane
Formation in Plant Cell Culture, ]. Chem. Soc.1 Per
kin Trans. 1, (8), 845-851, 1996.
138. Vanek T, Vesela D, Mala), Poplipna R, Saman D, Ko
houtova J. Production of Taxanes by Taxus baccata
Planı Cells, Biolechnol. Lett., 18(5), 501-504, 1996.
139. Gibson DM, Ketchum REB, Vance NC, Christen AA
Initiation and Growth of Cell Lines of Taxus bre
vifolia (Pacific Yew), Planı Celi Rep., 12(9), 479-482,
1993.
140. Mirjalili N, Linden JC. Gas Phase Composition Ef
fects on Suspension Cultures of Taxus baccata1 Bi
olech1101. Bioeng., 48, 123-132, 1995.
141. Srinivasan V, Pestchanker L, Moser S, Hirasuna TJ,
Taticek RA, Shuler ML.: Taxol Production in Bi
oreactors: Kinetics of Biomass Accumulation, Nut
rient Uptake, and Taxol Production by Cell Sus
pensions of Taxus baccata, Biotechnol. Bioeng? 47,
666-676, 1995.
142. )ha S, Sanyal D, Ghosh B, )ha TB. lmproved Taxol
Yield in Cell Suspension Culture of Taxus wal
lichiana (Himalayan Yew), Planla Med., 64, 270-272,
1998.
143. Fett-Neto AG, Melanson SJ, Sakata K, Dicosrno F.
Improved Growth and Taxol Yield in Developing
Calli of Taxus cuspidata by Medium Composition
Modification, Bio/Technology, 11(6), 731-734, 1993.
144. Wickremesinhe ERM, Arteca RN. Taxus Callus Cul
tures: Initiation, Growth Optimization, Cha
racterization and Taxol Production, Plant Celi/ Tis
sue Organ Cult., 35(2), 181-193, 1993.
145. Hoffman AM, Voelker CCJ, Franzen AT, Shiotani
KS, Sandhu JS. Taxanes Exported from Taxus x
media Hicksii Cuttigs into Liquid Metli.um Over
Time, Phyıochemisıry, 43(1), 95-98, 1996.
146. Brukhin VB, Moleva IR, Filonova LH, Grakhov VP,
Blume YB, Bozhkov PV. Proliferative Activity of Cal
lus Cultures of Taxus baccata L. in Relation to An
ticancer Diterpenoid Taxol Biosynthesis, Biotechnol.
Lett., 18(11), 1309-1314, 1996.
147. Wickremesinhe ERM, Arteca RN. Roots of Hydro
ponically Grown Taxus Plants as a Source of Taxol
and Related Taxanes, Planı Sci., 101(2), 125-135, 1994.
148. Willey TA, Bekos EJ, Gaver RC, Duncan GF, Tay LK
136
High-Performance Liquid Chromatographic Procedure far the Quantitative Determination of Pac
litaxel (Taxol) in Human Plasma, ]. Chromaıogr., B:
Biomed. Appl., 621(2), 231-238, 1993.
149. Huizing MT, Rosing H, Koopman F, Keung ACF, Pi
nedo HM, Beijnen JH. High-Performance Liquid
Chromatographic Procedures for the Quantitative
Determination of Paclitaxel (Taxol) in Human Urine,
f. Chromalogr., B: Biomed. Appl., 664(2), 373-382,
1995.
150. Mase H, Hiraoka M, Suzuki A, Nakanomyo H. De
termination of New Anticancer Drug, Paclitaxel, in
Biological Fluids High Performance Liquid Chro
matography, Yakugaku Zasshi, 114(5), 351-355, 1994.
151. Vergniol JC, Bruno R, Montay G, Frydman A. De
tennination of Taxotere in Human Plasma by a Semi
Automated High-Performance Liquid Chro
matographic Method, f. Chromalogr., B: Biomed.
Appl., 582(1-2), 273-278, 1992.
152. Sharma A, Conway WD, Straubinger RJ\1. Reversed
Phase High-Performance Liquid Chromatographic
Determination of Taxol in Mouse Plasma, ]. Chro
malogr., B: Biomed. Appl., 655(2), 315-319, 1994.
153. Loos Wj, Verweij ), Nooter K, Stoter G, Sparreboom
A. Sensitive Determination of Docetaxel in Human
Plasma by Liquid-Liquid Extraction and Reversed
Phase High-Performance Liquid Chromatography,].
Chromaıogr., B:Biomed.Appl., 693(2), 437-441, 1997.
154. Chmumy GN, Paukstelis JV, Alvarado AB, McGuire
MT, Snader KM, Muschik GM, Hilton BD. NMR
Structure Determination and Intramolecular Trans
esterification of Four Diacetyl Taxinines which Co
Elute with Taxol Obtained from Taxus x media Hick
sii Needles, Phytochemislry, 34(2), 477c483, 1993.
155. Rao KV, Bhakuni RS, juchum ), Davies RM. A Large
Scale Process for Paclitaxel and Other Taxanes from
the Needles of Taxus x media Hicksii and Taxus flo
ridana Using Reverse Phase Column Chro
matograpy, f. Liq. Chrom. & Rel. Technol., 19(3), 427-
447, 1996.
156. Wu D, Lohse K, Greenblatt HC. Preparative Se
paration of Taxol in Normal- and Reversed-Phase
Operations,J Chromalogr. A, 702(1+2), 233-241, 1995.
157. Jagota NK, Nair JB, Frazer R, Klee M, Wang MZ. Su
percritical Fluid Chromatography of Paclitaxel, ].
Chromaıogr. A, 721(2), 315-322, 1996.
158. Chan KC, Muschik GM, Issaq HJ. Separation of Taxol
and Related Compounds by Micellar Electrokinetic
Chromatography, High Resolul. Chromalogr., 17(1),
51-52, 1994.
---FABADJ. Pharm. Sci., 25, 121-137, 2000
159. Chan KC, Alvarado AB, McGuire MT, Muschik GM,
lssaq Hj, Snader KM. High·Performance Liquid
Chromatography and Micellar Electrokinetic Chro·
matography of Taxol and Related Taxanes from Bark
and Needle Extracts of Taxus Species, ]. Chro
matogr., B: Biomed. Appl., 657(2), 301-306, 1994.
160. Ma W, Macdonald F, Nieder M, Shacleton CHL.
Analysis of Taxol and Related Diterpenoids from
Cell Cultures by Liquid Chromatography
Electrospray Mass spectrometry, ]. Chromatogr., B:
Biomed. Appl., 615(2), 273-280, 1993.
161. Guo Y, Diallo B, Jaziri M, Vanhaelen-Fastre R, Van
haelen M, Ottinger R. Immunological Detection and
Isolation of a New Taxoid from the Stem Bark of
Taxus baccata, J Nat. Prod., 59(2), 169-172, 1996.
162. Grothaus PG, Raybould TJG, Bignami GS, Lazo CB,
Brynes JB. An Enzyme Immunoassay for the De
termination of Taxol and Taxanes in Taxus sp. Tis
sues and Human Plasma, ]. Immunol. Methods, 158
(1), 5-15, 1993.
163. Grothaus PG, Bignami GS, O'Malley S, Harada KE,
Brynes JB, Waller DF, Raybould TJG, McGuire MT,
Alvarado B. Taxane-Spesific Monoclonal Antibodies:
Measurement of Taxol, Baccatin III, and Total Ta
xanes in Taxus brevifolia Extracts by Enzyme Im
munoassay,]. Nal. Prod., 58(7), 1003-1014, 1995.
164. Concetti A, Ripani E, Barboni L, Torregiani E, Bom
bardelli E, Gariboldi P, Venanzi FM. Im
munorecognition of Ring Skeleton of Taxanes by
Chicken Egg Yolk Antibodies, Biol. Chem. Hoppe
Seyler, 375(6), 419-423, 1994.
165. Leu j, jech KS, Wheeler NC, Chen B, Erlanger B. im·
munoassay of Taxol and Taxol-Like Compounds in
Plant Extracts, Life Sci., 53(12), 183-187, 1993.
166. Wall ME, Wani MC. Taxol, Alkaloids: Chem. Biol.
Perspect., 9, 1-21, 1995.
167. Wall ME, Wani MC. Paclitaxel; Frorn Discovery to
Clinic in Taxane Anticancer Agents: Basic Science
and Current Status, Georg GI, Chen TT, Ojima I,
Vyas DM (eds.), ACS Symp. Ser., 583, 18-30, 1995.
137