La biotina es una vitamina que actúa como coenzima de las carboxilasas, enzimas que forman enlaces C-C, utilizando carbono en forma de bicarbonato. Su estructura es relativamente sencilla,

La biotina es ubicua en los alimentos, y además es sintetizada por la flora intestinal, por lo que es difícil que se produzcan deficiencias. Sin embargo, la biotina puede pasar a convertirse en no disponible si se une a la avidina, una proteína presente en la clara de huevo. Esta proteína fija específicamente la biotina como una forma de defensa del huevo frente a los microrganismos, y lo hace con una constante de afinidad enorme, del orden de 10 15, M -1, una de las más grandes conocidas entre una proteína y un ligando.

la avidina es una glicoproteína de carácter básico (Pi =10,4) que se presenta en forma tetramérica, con cuatro subunidades idénticas de 128 aminoácidos cada una, unidas de forma no covalente. La estructura terciaria de cada subunidad está formada en su gran mayoría por hojas plegadas , con un pequeño tramo de hélice

La avidina, especialmente cuando está unida a la biotina, es muy resistente a la proteolisis por las enzimas del aparatodigestivo humano, de tal forma que have a la biotina ligada totalmente indisponible. La ingestión de grandes cantidades de clara de huevo crudo produce una carencia vitamínica.

Aunque la avidina es también bastante estable frente al calor, el calentamiento aplicado habitualmente en el cocinado del huevo la desnaturaliza, destruyendo su actividad secuestrante de biotina.

BIOQUIMICA DE LOS ALIMENTOS Miguel Calvohttp://milksci.unizar.es/bioquimica/temas/vitamins/biotina.html

17 Métodos Basados en la unión Ag-Ac 

R. González, R. Tarazona, M.D. Galiani, G, M. P. Espinosa   y J. Peña

Las técnicas anteriores así como las de inmunofluorescencia, radioinmunoanálisis e enzimoinmunoensayo pueden realizarse utilizando un sistema de ampliación de las señales empleando el complejo avidina-biotina. La biotina es una vitamina de bajo peso molecular, y la avidina es una glicoproteína, contenida en la clara del huevo. La biotina se une covalentemente al anticuerpo a través de un grupo amina, carboxilo sulfhidrilo o tiosil. Varias moléculas de biotina, pueden unirse a una de anticuerpo y dada la afinidad biotina-avidina resulta que, cada molécula proteica, se vería unida, a través de la biotina, con varias moléculas de avidina a su vez unidas al marcador correspondiente.

http://www.uco.es/grupos/inmunologia-molecular/inmunologia/tema17/etexto17.htm

Tema 3. Sistemas de marcaje inmunocitoquímico

Otro grupo de métodos inmunocitoquímicos de puente se basan en la gran afinidad existente entre la avidina y la biotina.y la estreptavidima y la biotina. La avidina es una glucoproteína de 67 kDa tetramérica que presenta en su superficie regiones hidrofóbicas a las que se une con gran afinidad la biotina. Las cadenas glucídicas de la avidina tienen una carga tal que las hace adhesivas con regiones cargadas del tejido aumentando el ruido de fondo. La

estreptavidina es una proteína de 60 kDa procedente de Streptomyces avidinii, tetramérica, con alta afinidad por la biotina. La biotina es una proteína soluble en agua (vitamina H) de peso molecular bajo (244 Da). Presenta un grupo carboxílico que permite su unión a los restos amino de las proteínas. La biotinilización es una reacción bioquímica que permite unir biotina a una gran variedad de moléculas como enzimas, lectinas, anticuerpo, ácidos nucleicos, etc... La pequeña medida de la proteína hace que la adición de biotina no modifique drásticamente las propiedades de la molécula. Los métodos inmunocitoquímicos que utilizan el complejo avidina-biotina o estreptavidina-biotina no difieren en su esquema metodológico general de los otros métodos inmunocitoquímicos. La característica principal es que el anticuerpo biotinilado puede ser utilizado como primario (método directo), secundario (método indirecto) y puede visualizarse mediante tres métodos diferentes :

con avidina (o estreptavidina) marcada con avidina actuando como puente para enzimas biotinilados

con el complejo avidina-biotina-peroxidasa o otro marcador (sistema ABC)

El método ABC es el más utilizado ya que tiene la máxima sensibilidad. Requiere la preparación 'in vitro' del complejo avidina-biotina-peroxidasa dejando al menos uno de los cuatro lugares de unión de la superficie de la avidina libre para que se una a las moléculas de avidina acomplejadas con el anticuerpo (primario o secundario). El complejo se añade después del anticuerpo biotinilado. Otra ventaja adicional del sistema ABC es su universalidad ya que la tercera capa es siempre la misma independientemente de la especie en que se haya obtenido el primario.

Material docente diseñado y elaborado por Manuel Reina. Última actualización : . Comentarios : mreina@ub.edu

http://www.ub.es/biocel/wbc/tecnicas/marcadores.htm

Técnicas y métodos de laboratorio clínico

 Autor José Manuel González de Buitrago PAG 259http://books.google.com.ec/books?id=4OQXmnBnjH8C&pg=PA259&lpg=PA259&dq=marcadores+radiactivos+en+sondas&source=web&ots=5I2O1jyrEv&sig=nxVWqJiuy_Oi-5sMBN50_HdM6Es&hl=es&sa=X&oi=book_result&resnum=4&ct=result#PPA259,M1

http://www.cin.edu.uy/virologia/curso/257,1,Diapositiva 1