GAMBARAN HISTOLOGI GINJAL TIKUS BETINA (Rattus rattus) YANG

DIINJEKSI VITAMIN C DOSIS TINGGI DALAM JANGKA WAKTU LAMA

TIM PENELITI :

1. NI WAYAN SUDATRI, S.Si., M.Si, 2. IRIANI SEYAWATI, S.Si.,M.Si. 1. NI WAYAN SUDATRI, S.Si., M.Si, 2. IRIANI SEYAWATI, S.Si.,M.Si.

3. NI MADE SUARTINI, S.Si.,M.Si. 4. DWI ARIANI YULIHASTUTI, S.Si.,M.Si.

PROGRAM STUDI / JURUSAN BIOLOGI

FAKULTAS MIPA

UNIVERSITAS UDAYANA

TAHUN 2015

Latar Belakang- Kesehatan adalah aset paling berharga bagi kita.

-Salah satu vitamin yang dibutuhkan untuk menjaga kesehatan tubuh adalah

vitamin C.

- Fungsi vitamin C; meningkatkan sistem imunitas (daya tahan)

Tubuh, mempercepat proses penyembuhan serta membuat kulit lebih

segar dan cerah .

- Saat ini untuk mendapatkan kulit cerah dan bersih dengan cara injeksi- Saat ini untuk mendapatkan kulit cerah dan bersih dengan cara injeksi

vitamin C sudah banyak ditawarkan baik oleh dokter kulit maupun oleh

praktisi-praktisi kecantikan.

- Sekali injeksi vitamin C dosis yang diberikan sekitar 1000–4000 mg sedangkan

dosis vitamin C yang disarankan untuk menjaga kesehatan sekitar 50- 75

mg/hari

HATIOrgan detoksifikasi

Untuk mengetahui adanya kerusakan hati dilakukan uji kadar

Serum glutamate oxalloacetate transaminase (SGOT) dan Serum

glutamate pyruvate transaminase (SGPT) Enzim-enzim ini

biasanya terkandung dalam sel-sel hati. Jika hati terluka, sel-sel

hati menumpahkan enzim-enzim kedalamhati menumpahkan enzim-enzim kedalam

darah, menaikan tingkat-tingkat enzim dalam darah dan

menandai kerusakan hati.(Ashoka Babu et al., 2012).

GINJALFungsi , yaitu menyaring dan mengeluarkan racun maupun kelebihan

mineral dari dalam tubuh melalui urin.

Jika fungsi ginjal terganggu akibat peradangan atau karena penyakit batu

ginjal maka dengan sendirinya tubuh akan mengalami keracunan.

Selain itu, indikasi adanya kerusakan atau penurunan fungsi ginjal bisa Selain itu, indikasi adanya kerusakan atau penurunan fungsi ginjal bisa

dilihat dari kadar kreatinin plasma yang meningkat. Hal ini sebagai akibat

ketidakmampuan ginjal mengeluarkan kreatinin ke dalam urin dan dalam

jumlah besar kreatinin masuk kembali

ke dalam darah hingga kadarnya dalam plasma meningkat di atas batas

normal (Soesanti dan Darmawan, 2009).

1.2.1. Tujuan umum :

Mengetahui efek samping dari injeksi vitamin C dosis tinggi dalam jangka waktu

yang lama terhadap kesehatan .

1.2.2 Tujuan khusus

1. Untuk mengetahui kadar kolagen kulit dan tulang tikus betina yang diinjeksidengan vitamin C dosis tinggi.

2. Untuk mengetahui gambaran histologis hati tikus betina yang diinjeksi dengan

vitamin C dosis tinggi.

3. Untuk mengetahui kadar SGPT dan SGOT plasma darah sebagai indikator kerja3. Untuk mengetahui kadar SGPT dan SGOT plasma darah sebagai indikator kerja

hati tikus betina yang diinjeksi dengan vitamin C dosis tinggi.

4. Untuk mengetahui gambaran histologis ginjal tikus betina yang diinjeksi

dengan vitamin C dosis tinggi.

5. Untuk mengetahui kadar kreatinin plasma darah sebagai indikator fungsi ginjaltikus betina yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi.

6. Untuk mengetahui kemampuan reproduksi tikus betina yang diinjeksi vitamin C

dosis tinggi

Bahan penelitian

Bahan utama yang digunakan dalam penelitian ini adalah vitamin C

dosis tinggi (4000 mg/sekali injeksi) untuk manusia.

Hewan model yang digunakan adalah tikus betina dewasa usia 3-4

bulan dengan bobot badan antara 150-200 gram.

Dosis yang digunakan dikonversikan dari dosis yang digunakan pada

manusia ke tikus. Faktor konversi dari tikus ke manusia adalah 0.14

Berat badan wanita dewasa yang diinjeksi diperkirakan kurang lebih 70 Berat badan wanita dewasa yang diinjeksi diperkirakan kurang lebih 70

kg, sehingga dosis vitamin C yang diberikan pada tikus adalah 0.14 x

0.02 x 4000 = 11,2 mg/sekali suntik/ ekor

Tahun sebelumnya

(2014-2015)

Tahun 2016-2017

Tikus betina

Tikus jantan

Hati:

-Histologi hati

-- Kadar SGOT

- KadarSGPT

Ginjal:

Tikus jantan

Kualitas sperma

Histologi Testis

Testosteron

Tahun I

Testis

darahPenurunan kualiatas

Tulang:

Sediaan Histologi

Tulang

Ginjal:

-Kadar kreatinin

-Histologi ginjal

Kemampuan Reproduksi :

- Panjang Siklus estrus

-Kadar Estrogen,Progesteron

-Perkembangan embrio

- Jumlah anak

Tahun II

Imunohistokimia

testis

Analisis darah

perifer

Kadar MDA

Penurunan kualiatas

Sistem reproduksi jantan

Pemeliharaan hewan, aklimatisasi, berat badan awal

Persiapan kandang, vitamin C, zat-zat Kimia

Injeksi vitamin C dosis tinggi sesuai lama perlakuan

Berat badan akhir, pembedahan, plasma darah,

organ hati, ginjal, kulit, tulang

TAHUN I

Tulang :

Histologis tulang

Pengamatan

Analisis Data

Ginjal :

Sediaan histologi ginjal

Penentuan Kreatin

Hati:

Sediaan histologi hati

Penentuan kadar:

- SGOT

- SGPT

Histologis tulang ?

Histologis hati?

Kadar SGOT, SGPT plasma?

Histologis ginjal ?

Kadar kreatin plasma ?

Pemeliharaan hewan, aklimatisasi, berat badan awal

Persiapan kandang, zat-zat Kimia

Perlakuan injeksi vitamin C dosis tinggi

Berat badan akhir, pembedahan, plasma darah,

Panjang siklus estrus

Perkawinan, kemampuan reproduksi

ada/tidaknya aborsiTAHUN 2

Berat badan akhir, pembedahan, plasma darah,

organ Ovarium

Kadar Estrogen,Progesteron

Perkembangan embrio

Jumlah anak

Pengamatan

Analisis Data

Proses pembuatan blok parafin dan preparat histologi

1. Fiksasi ; BNF 10 %

2. Dehidrasi di dalam larutan etanol bertingkat 70%, 80%, 95%,

dan alkohol absolut

3. Penjernihan (clearing) dengan larutan xilol tiga pemindahan,

masing-masing tahap

berlangsung selama 60 menit pada suhu kamar.

4. Infiltrasi parafin dengan memasakkan jaringan pada parafin4. Infiltrasi parafin dengan memasakkan jaringan pada parafin

cair (suhu 60ºC) tiga

kali pemindahan masing-masing selama 45 menit.

5. Embeding/jaringan dibenamkan di dalam cetakan berisi

parafin cair, kemudian

didinginkan dalam suhu kamar sehingga menjadi blok parafin.

6. Blok parafin disayat setebal 5μm dengan menggunakan

rotary microtome.

7. Kemudian sayatan diletakkan dipermukaan air hangat

dengan suhu 45ºc dan ditempelkan pada gelas obyek yang

telah dilapisi gelatin. Preparat dikeringkan dengan cara

diletakkan secara vertikal, kemudian diletakkan pada pada

objeck glass.

Pewarnaan Hematoksilin Eosin (HE)

Potongan jaringan dalam parafin yang akan diwarnai dengan hematoxilin-eosin

diatur dalam rak untuk pewarnaan, kemudian diinkubasi pada suhu 60ºC selama 45

menit, setelah itu diletakkan pada suhu ruangan sampai dingin.

Selanjutnya dilakukan deparafinisasi melalui tahap-tahap pelarutan parafin dalam xilol

sebanyak 3 kali, kemudian dilanjutkan dengan proses rehidrasi dalam alkohol

bertingkat 100%, 95%, dan 80%, 70%m masing-masing tahap berlangsungselama 5

menit, kemudian dimasukkan dalam akuades selama 10 celup atau sampai alkohol

larut.

Proses selanjutnya adalah pewarnaan dalam hematoksilin dengan merendam slide

dengan larutan hematoxilin selama 5 menit kemudian dicuci pada pada air mengalir

selama 5 menit, dan dilanjutkan dengan pewarnaan menggunakan eosin selama 3

menit,

Setelah diwarnai dalam eosin, slide dimasukkan dalam larutan alkohol bertingkat dari

70%, 80%, 90%, sampai 100% masing-masing selama 10 celup., kemudian dilanjutkan

dengan proses clearing menggunakan xilol sebanyak dua kali masing-masing selama 2

menit, setelah itu preparat ditutup dengan kaca penutup dengan media balsam

kanada. Dan preparat siap untuk diamati.

Analisis Data

Data yang didapatkan dianalisis secara statistika

dengan menggunakan software SPSS dan bila

terdapat pengaruh nyata atau sangat nyata akan

dilanjutkan dengan uji Duncan pada taraf α 0.05 dan

α 0.01.Dan bila data tidak terdistribusi secara normal α 0.01.Dan bila data tidak terdistribusi secara normal

maka diuji dengan Test Kruskal Wallis dan dilanjutkan

dengan uji Mann Whitney.

HASIL PENELITIAN

Kelaian Histologi ginjal yang ditemukan dalam penelitian ini adalah : Edema Glomelurus, Penyempitan kapsula bowman, Kongesti glomelurus,

Endapan protein di tubulus, degenerasi di tubulus, Inti piknotik di tubulus,

Infiltrasi sel radang, Hemorragi.

Histologi ginjal dengan pewarnaan HE (pembesaran 100x insert 500X) A.Glomerulus normal B.Edema glomerulus C. Penyempitan glomerulus D. Hemorrage

Histologi ginjal dengan pewarnaan HE (pembesaran 400x) insert 300x)

A.Endapan protein di tubulus B. Inti piknotik C. Kongesti glomerulus

D.Infiltasi sel radang E. Degenerasi lemak di tubulus

Tabel 9. Uji ANOVA dan standar error Edema Glomelurus, Penyempitan kapsula

bowman, Kongesti glomelurus Histologi ginjal tikus betina (Mus musculus L.)

yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi dilanjutkan dengan uji Duncans

No Perlakuan Edema glomelurus Penyempitan

kapsula bowman

Kongesti

glomelurus (%)

Endapan protein

tubulus

1 K (Kontrol) 13.0 ± 3.0 a 12.0 ± 2.54 a 18.94 ± 4.06 a 6.0 ± 1.0 a

2 P1 (30 hari) 46.0 ± 6.52 b 59.48 ± 11.61 b 71.02 ± 12.65 b 14.8 ±2.74 b

3 P2 (50 hari) 60.0 ± 18.7 b 60.00 ± 18.70 b 70.00 ± 20.00 b 19.0 ± 2.91 b

4 P3 (70 hari) 60.0 ± 4.08 b 65.00 ± 11.30 b 72.66 ± 3.82 b 18.0 ±1.57 b

5 P4 (90 hari) 64,3 ± 21.06 b 68.33 ± 6.43 b 70.00 ± 20.0 b 70.00 ± 20.0 b

Tabel 10. Uji ANOVA dan standar error degenerasi di tubulus, inti piknotik di tubulus, infiltrasi sel

radang, dan hemorragi ginjal tikus betina (Mus musculus L.) yang diinjeksi vitamin C

dosis tinggi dilanjutkan dengan uji Duncans

No Perlakuan Degenerasi tubulus Inti piknotik

tubulus

Infiltrasi sel

radang(%)

Hemorragi (%)

1 K (Kontrol) 7.0 ± 1.22 a 9.0 ± 1.87 a 6.0 ± 1.0 a 6.0 ± 2.46 a

2 P1 (30 hari) 4470 ± 3.88 b 41.98 ± 4.90 b 8.66 ± 0.97 a 16.0 ±3.67 a b

3 P2 (50 hari) 47.0 ± 3.0 b 49.00 ± 4.0 b c 11.0 ± 4.19 a 14.0 ± 2.91 b

4 P3 (70 hari) 56.0 ± 6.96 b c 57.00 ± 4.89 c 17.0 ±1.22 b 19.0 ±2.91 b

5 P4 (90 hari) 66.0 ± 8.57 c 52.0 ± 6.44 b c 10.6 ± 2.0 a 20.0 ± 4.18 b

KESIMPULAN

TerjadiTerjadiTerjadiTerjadi peningkatanpeningkatanpeningkatanpeningkatan kelainankelainankelainankelainan histologihistologihistologihistologi ginjalginjalginjalginjal padapadapadapada tikustikustikustikus

betinabetinabetinabetina yang yang yang yang yangyangyangyang diinjeksidiinjeksidiinjeksidiinjeksi vitamin C vitamin C vitamin C vitamin C dosisdosisdosisdosis tinggitinggitinggitinggi dalamdalamdalamdalam

waktuwaktuwaktuwaktu yang lama.yang lama.yang lama.yang lama.waktuwaktuwaktuwaktu yang lama.yang lama.yang lama.yang lama.

Ucapan Terima kasih

• Penulis mengucapkan banyak terima kepada Lembaga

Penelitian dan Pengabdian kepada Masyarakat Universitas

Udayana dan Dikti atas dana yang diberikan melalalui dana

Desentralisasi Hibah Bersaing tahun anggaran 2014.