BIOQUIMICA INFORME 1

7/26/2019 BIOQUIMICA INFORME 1

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UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESINAL DE MEDICINA HUMANA

1._ INTRODUCCION:

La Espectrofotometra es una de las tcnicas

experimentales ms utilizadas para la deteccin especcade molculas. Se caracteriza por su precisin, sensibilidad y

su aplicabilidad a molculas de distinta naturaleza(contaminantes, biomolculas, etc y estado de a!re!acin(slido, l"uido, !as. Los fundamentos fsico#"umicos de la

espectrofotometra son relati$amente sencillos.

La mayora de los problemas analticos reales comienzancon una comple%a mezcla a partir de la cual es necesario

aislar, identicar y cuanticar uno o ms componentes delamisma. Se pueden plantear las si!uientes cuestiones& una,de carcter cualitati$o ('de "u componente se

trata, y otra de carcter cuantitati$o ('cunto )ay de esecomponente.*ara ello, se puede utilizar el mtodo

instrumental de anlisis, como es la espectrofotometrapara medir la absorcin de radiacin ultra$ioleta y $isible"ue interact+a con la materia (tomos y molculas, la

misma es considerada una tcnica cuali y cuantitati$abasndose en la medicin del color o de la lon!itud de onda

de una radiacin e intensidad de la misma. Se )ar unadescripcin del mtodo espectrofotomtrico para dar allector una idea del empleo del mismo y su utilidad en los

ensayos de sustancias.

BIOQUIMICA Y NUTRICION


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2.- OBJETIVOS:

onocer el funcionamiento del espectrofotmetro.

onocer la diferencia entre un fotocolormetro y unespectrofotmetro.

-racar el espectro de luz.

nda!ar la relacin matemtica entre la absorbancia y

tramitacin.



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3.- Marco Terico:

La espectrofotometra se reere a la medida de cantidadesrelati$as de luz absorbida por una muestra, en funcin de lalon!itud de onda.

ada componente de la solucin tiene su patrn deabsorcin de luz caracterstico comparando la lon!itud deonda y la intensidad del mximo de absorcin de luz de unamuestra $ersus soluciones estndar, es posible determinarla identidad y la concentracin de componente disueltos enla muestra (solucin inc!nita.

Los mtodos espectrofotomtricos se basan en la medidade la radiacin electroma!ntica emitida o absorbida por lamateria/ los mtodos de emisin utilizan la radiacin

emitida cuando un analito es excitado por ener!a trmica,elctrica o radiante/ los mtodos de absorcin estnbasados en la disminucin de la potencia de la radiacinelectroma!ntica como consecuencia de la absorcin "uese produce en su interaccin con el anlisis. Si se aplicaener!a a un tomo, esta puede ser absorbida y un electrnexterno puede ser promo$ido a una con!uracin conocidacomo estado excitado/ dado "ue ese estado es inestable, elatomo retornara inmediatamente al estado fundamental,

emitiendo ener!a.La absorcin de las radiaciones ultra$ioletas, $isibles einfrarro%as depende de la estructura de las molculas, y escaracterstica para cada sustancia "umica.

*or lo tanto se dice "ue la espectrofotometra esfundamental en el estudio de sustancias desconocidas.uando la luz atra$iesa una sustancia, parte de la ener!aes absorbida. El color de las sustancias se debe a "ue estasabsorben ciertas lon!itudes de onda de luz blanca "ue

incide sobre ellas y solo de%an pasan a nuestros o%osa"uellas lon!itudes de onda no absorbidas.



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Ley e Bo!r"!er-La#$er%- Beer:

0our!uer, Lambert y 0eer, a tra$s de sus obser$aciones

establecieron relaciones dela $ariacin de la intensidad deluz transmitida por una muestra con el espesor de ella ocon la concentracin de la sustancia, para materialestransl+cidos. Estas relaciones se conocen como la ley de

0our!uer#Lambert#0eer o ley !eneral dela espectrofotometra "ue permite )allar la concentracin

de una especie "umica a partir de la medida delaintensidad de luz absorbida por la muestra.

Esta ley se puede expresar en trminos de potencia de luz ode intensidad de luz, asumiendo luz monocromtica, como&

t1 23 42#e bc

5onde&

t, es la intensidad de la luz transmitida por la muestra.

2, es la intensidad de la luz "ue incide sobre la muestra y

"ue pro$iene de la fuente.e, es el coeciente de absorti$idad molar en unidades de 6#7. cm#

b , es la lon!itud de la trayectoria del )az de luz a tra$s dela muestra o el espesor de la celda en cm o lo "ue seconoce como paso ptico.



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&.- 'rocei#ie(%o e)*eri#e(%a+

4.# *reparar la si!uiente batera de tubos&T!$o I T!$o II T!$o III T!$o IV T!$o ,

Bicro#a%oe *o%aio

2.8 ml 4 ml 4.7 ml 4.9 ml ::::::.

"!ae%i+aa

;.< ml ; ml 8.= ml 8.9ml ; ml

Co(ce(%raci( /#"

0

::::

::::..

::::..

:::::

::::::..

M!e%ra , ::::

::::..

::::..

:::::.

4 ml

Solucin stoc>& 0icromato de *otasio 82 m!?. alcular la

concentracin en m!? de bicromato de @ en cada uno delos tubos Standard (###A. Leer las absorbancia de los

cuatro tubos a 792 nm de lon!itud de onda ( en elespectrofotmetro contra el B


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7. na $ez obtenida la cur$a de calibracin, medir laabsorbancia de la muestra problema (*roblema F.

G. Cbtener el factor de calibracin (Hc promedio con las

soluciones standard y sus Dbsorbancia utilizadas paraconstruir las cur$as de calibracin a%ustadas.

9. alcular la concentracin de la muestra problema por lossi!uientes mtodos&

D.# -rcamente extrapolando su absorbancia en la cur$ade calibracin.

0.# sando Hactor de alibracin, multiplicando su

absorbancia por el factor de calibracin del standard.

9.# 5esarrollo experimental



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.- Co(c+!io(e :

Se )a lle!ado a la conclusin de "ue la espectrofotometra

es un mtodo analtico indirecto por"ue se basa en lamedicin de la absorbancia o transmitancia de lasradiaciones/ es de !ran utilidad en la actualidad para la

identicacin de un analito en una muestra problema.

La espectrofotometra es el mtodo ms usado, debido a"ue es sencillo, especco y sensible.

.- C!e%io(ario



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1.- E)*+i4!e e+ #eca(i#o e5!(cio(a#ie(%o e !( e*ec%ro5%o#e%ro

n e*ec%ro5o%#e%roes un instrumento usado enel anlisis "umico"ue sir$e para medir, en funcin dela lon!itud de onda, la relacin entre $alores de una mismama!nitud fotomtrica relati$os a dos )aces de radiacionesyla concentracino reacciones "umicas "ue se miden enuna muestra. Iambin es utilizado en los laboratorios de"umica parala cuanticacinde sustanciasy microor!anismos.

Bay $arios tipos de espectrofotmetros, puede ser deabsorcin atmica o espectrofotmetro de masa y $isuales.

Este instrumento tiene la capacidad de proyectar un )azde luz monocromticaa tra$s de una muestra y medir lacantidad de luz "ue es absorbida por dic)a muestra. Esto lepermite al operador realizar dos funciones&

4.5ar informacin sobre la naturaleza de la sustancia en

la muestra


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6!e(%e e +!7

La fuente de luz "ue ilumina la muestra debe cumplir con

las si!uientes condiciones& estabilidad, direccionabilidad,distribucin de ener!a espectral continua y lar!a $ida. Lasfuentes empleadas son& lmpara de Jolframio(tambin

llamado tun!steno, lmpara de arcode xenny lmparade deuterio"ue es utilizada en los laboratorios atmicos.

Mo(ocro#aor

El monocromador asla las radiaciones de lon!itud de

ondadeseada "ue inciden o se reKe%an desde el con%unto,

se usa para obtener luz monocromtica.

Est constituido por las rendi%as de entrada ysalida, colimadoresy el elemento de dispersin. El

colimador se ubica entre la rendi%a de entrada y salida. Esun lente"ue lle$a el )az de luz "ue entra con una

determinada lon!itud de onda)acia un prismael cualsepara todas las lon!itudes de onda de ese )az y lalon!itud deseada se diri!e )acia otra lente "ue direcciona

ese )az )acia la rendi%a de salida.

Co#*ar%i#ie(%o e M!e%ra

Es donde tiene lu!ar la interaccin, .E.6 conla materia(debe producirse donde no )aya absorcin ni

dispersin de las lon!itudes de onda. Es importantedestacar, "ue durante este proceso, se aplica la ley de

Lambert#0eeren su mxima expresin, con base en sus

http://es.wikipedia.org/wiki/Wolframiohttp://es.wikipedia.org/wiki/Wolframiohttp://es.wikipedia.org/wiki/L%C3%A1mpara_de_arcohttp://es.wikipedia.org/wiki/Xen%C3%B3nhttp://es.wikipedia.org/wiki/Deuteriohttp://es.wikipedia.org/wiki/Longitud_de_ondahttp://es.wikipedia.org/wiki/Longitud_de_ondahttp://es.wikipedia.org/wiki/Colimadorhttp://es.wikipedia.org/wiki/Lentehttp://es.wikipedia.org/wiki/Longitud_de_ondahttp://es.wikipedia.org/wiki/Prisma_(%C3%B3ptica)http://es.wikipedia.org/wiki/Materiahttp://es.wikipedia.org/wiki/Ley_de_Lambert-Beerhttp://es.wikipedia.org/wiki/Ley_de_Lambert-Beerhttp://es.wikipedia.org/wiki/Wolframiohttp://es.wikipedia.org/wiki/Wolframiohttp://es.wikipedia.org/wiki/L%C3%A1mpara_de_arcohttp://es.wikipedia.org/wiki/Xen%C3%B3nhttp://es.wikipedia.org/wiki/Deuteriohttp://es.wikipedia.org/wiki/Longitud_de_ondahttp://es.wikipedia.org/wiki/Longitud_de_ondahttp://es.wikipedia.org/wiki/Colimadorhttp://es.wikipedia.org/wiki/Lentehttp://es.wikipedia.org/wiki/Longitud_de_ondahttp://es.wikipedia.org/wiki/Prisma_(%C3%B3ptica)http://es.wikipedia.org/wiki/Materiahttp://es.wikipedia.org/wiki/Ley_de_Lambert-Beerhttp://es.wikipedia.org/wiki/Ley_de_Lambert-Beer


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leyes de absorcin, en lo "ue concierne al paso de lamolcula de fundamental#excitado.

De%ec%or

El detector, es "uien detecta una radiacin ya su $ez lode%a en e$idencia, para posterior estudio. Bay de dos tipos&

a Los "ue responden a fotones/

b Los "ue responden al calor.

6o%oe%ec%ore

En los instrumentos modernos se encuentra una serie de4M fotodetectorespara percibir la seNal en forma

simultnea en 4M lon!itudes de onda, cubriendo el espectro$isible. Esto reduce el tiempo de medida, y minimiza las

partes m$iles del e"uipo.

http://es.wikipedia.org/wiki/Estado_excitadohttp://es.wikipedia.org/wiki/Radiaci%C3%B3nhttp://es.wikipedia.org/wiki/Fotonhttp://es.wikipedia.org/wiki/Calorhttp://es.wikipedia.org/wiki/Fotodetectorhttp://es.wikipedia.org/wiki/Espectro_visiblehttp://es.wikipedia.org/wiki/Espectro_visiblehttp://es.wikipedia.org/wiki/Estado_excitadohttp://es.wikipedia.org/wiki/Radiaci%C3%B3nhttp://es.wikipedia.org/wiki/Fotonhttp://es.wikipedia.org/wiki/Calorhttp://es.wikipedia.org/wiki/Fotodetectorhttp://es.wikipedia.org/wiki/Espectro_visiblehttp://es.wikipedia.org/wiki/Espectro_visible


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2.- 89!e

i5ere(cia e)i%e( !(

5o%oco+or#e%ro y !(e*ec%ro5o%#e%ro;

Los espectrofotmetros son espectrmetros "ue permitenmedir la relacin entre la ener!a radiante de dos rayos, locual es necesario para medir la absorbancia. Los

fotocolormetros emplean ltro para seleccionar las

lon!itudes de onda en combinacin con un transductor deradiacin adecuado, a diferencia de los espectrofotmetrosen los "ue la lon!itud de onda se puede modicarcontinuamente, por lo "ue es posible re!istrar espectros de

absorcin.Ctra diferencia radica en "ue la mayora de los modelos de

espectrofotmetros pueden cubrir la re!in A1$isible y a$eces la infrarro%a cercana, mientras los foto colormetros

se emplean ms com+nmente en la re!in $isible.



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3.- %a(%o e(

e+ ra("o ?ii$+e co#o (o ?ii$+e co( !re*ec%i?a +o("i%!e e o(a

&.- 89!e reacio #a%e#@%ica#e(%ee)i%e e(%re a$or$a(cia y

%ra(#i%a(cia;El lo!aritmo&

Dbs 3 #lo! I 3 #lo! (t1o

donde Dbs es absorbancia, I es transmitancia, es

intensidad transmitida (la intensidad de la luz lue!o deatra$esar la muestra y o es intensidad incidente (la

intensidad de luz antes de atra$esar la muestra.



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A.- Co(%r!ya !(a c!r?a eca+i$arcio( co( +o i"!ie(%e?a+ore:

S%a(ar 1

S%a(ar 2

S%a(ar 3

S%a(ar&

E%@(ar A

Co(ce(%racio(

9m!1d

42m!1d

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