BIOLOGIA CROMOSSOMOS DA CÉLULA EUCARIÓTICA · Melhor observados durante a divisão celular -...
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Cromossomosdas células eucarióticas
são longos fios constituídospor uma molécula de DNA
associada a diversas proteínas
Cromossomo DNA + Proteínas
Durante o período em quea célula não está se dividindo, os filamentos cromossômicos
encontram-se emaranhados no interior do núcleo, constituindo
a CROMATINA
CROMOSSOMOS
Melhor observados durante a divisão celular - condensados
- Uma única e enorme molécula de DNA linear com proteínas associadas
- Proteínas dobram e empacotam a fina fita de DNA
Regiões Cromossômicas
Permite que uma cópia de cada cromossomoduplicado seja puxado para cada célula-filhaquando a célula se divide
CINETOCORO complexo de proteínas queassegura a união dos cromossomos duplicadosàs fibras do fuso mitótico
Regiões Cromossômicas
Telômeros
Telômeros
São as regiões finais dos cromossomos
Contém sequências de nucleotídeos repetidas(TTAGGG) que permitem que as regiõesterminais dos cromossomos sejam replicadoscorretamente
Eucromatina / Heterocromatina
Estudos microscopia de luz nos anos 1930s distinguiram esses 2 tipos de cromatina no núcleo interfásico
Acreditava-se que os genes estivessem presentes na região eucromática(mas existem genes na região heterocromática também)
Diferentes padrões de eucromatina estão distribuídas ao longo dos cromossomos
Heterocromatina foi reconhecida por Heitz em 1928 centrômeros, telômeros e regiões reguladoras
Heterocromatina DNA com poucos genes, e os genes nessaregião estão “desligados”
Alto grau de compactação
Presença de DNA repetitivo – DNA satélite, Transposons
O Que é Bandeamento Cromossômico?
Bandeamento é uma variação ao longo do cromossomos de propriedades de colorações
Independente de qualquer variação estrutural óbvia
Por que é importante?
Pode revelar um certo grau de organização cromossômica
Identificar cromossomos e partes de cromossomos
Origem dos métodos de Bandeamento
1894 – Metzner observou corpos na região centromérica decromossomos de Salamandra, que provavelmente corresponderiamaos cinetocoros
Nos próximos 40 anos, mais pesquisadores observaram as mesmasregião em cromossomos de plantas e animais
1928 – Heitz – introduziu o conceito de cromatina: eucromatina eheterocromatina. As regiões visíveis depois da telófase
heterocromatina
Tipos de Bandeamento
Método Definição
C Métodos que demonstram regiões de heterocromatina. A banda C é a unidade da cromatina corada por esses métodos
Q Métodos que usam quinacrina para demonstrar bandas ao longo dos cromossomos
G Demonstra bandas ao longo do cromossomo usando mistura de corante Giemsa
R Reverso do método coloração por Giemsa. Revela padrões opostos de intensidade daqueles obtidos pela banda G
Coloração por Fluorocromos
Objetivo Caracterizar as regiões cromossômicas ricas emsequências A-T ou C-G
Pode ser feita após o bandeamento C caracterização dasregiões heterocromáticas
Fluorocromos mais utilizados: DAPI – 4’- 6-diamino-2-fenilindoleMM - MitramicinaCMA3 –Cromomicina A3
QuinacrinaHoechst 33258
Bandeamento Q
Flurocromo Quinacrina que intercala no diferencia regiões ricas em AT e CG Regiões mais fortes – ricas em AT
Bandeamento G• Método de bandamento mais utilizado• Coloração é permanente• Muito usado para citogenética clínica humana e também para estudos em
mamíferos
Incubação em tripsina em solução salina
Coloração por Giemsa
(Seabright, 1971)
Bandas G claras Bandas G escuras
DNA rico em GC DNA rico em AT
Replicação rápida Replicação lenta
Muitos genes Poucos genes
• Alguns animais e plantas não apresentam resultados positivos para bandamento G
Bandamento R
• Padrão complementar ao do bandamento G• Normalmente, regiões terminais estão geralmente coradas limites dos
cromossomos
Incubação em tampão fosfato 85 a 90°C
Coloração por Giemsa
Gosden, 1994; Barch et al., 1997; Sumner e Leith, 1999; Czepulkowski, 2001; Rooney, 2001.
Bandamento R
• Padrão complementar ao do bandamento G• Normalmente, regiões terminais estão geralmente coradas limites dos
cromossomos