Bioinformatics in the post-genomic age

6
Bioinformatics in the post-genomic age Patricia Jones * Hammond Suddards Edge, Trinity Court, 16 John Dalton Street, Manchester M60 8HS, UK Abstract The sequencing of several genomes, including the human genome, has provided a vast amount of information which must be exploited if new drugs are to be provided. Bioinformatics is essentially the science of taking this and other biological information and applying advanced IT techniques to it so as to identify protein targets and therefore suitable drug candidates. Databases, software and research and development tools are all being created with a view to ecient search and interrogation. The author, in emphasising the need for obtaining appropriate monopoly protection, highlights the problems associated with the patenting of computer program related patents and refers to database rights as an alternative form of protection. Ó 2001 Elsevier Science Ltd. All rights reserved. Keywords: Genome; Genomic information; Bioinformatics; Biological data; Information technology; Post-genomic; DNA; Proteins; Proteomics; Databases; Sequences; Patents; Technical contribution; Computer software; Data management; Data interaction; Data harvesting; Data mining; Database right; Single nucleotide polymorphisms; SNPs; Computational data GRID; Copyright 1. Introduction The human and over 50 other genomes 1 have now been decoded. However, this is only the beginning of the translation of genomic information into therapeutic bene®t. The Human Genome Project and other pro- jects have roughly sequenced the entire human DNA and mapped the location of some of the human genes on the chromosomes, although the function of many of these genes has not been identi®ed. Bizarrely, in the immediate future the genomes of other organisms such as those of micro-organisms which cause disease may be of greater importance to us. We are now entering the ``post- genomic'' age, which aims to exploit that genomic in- formation. The aim is to move from the DNA sequence of a gene, to the protein expressed by that gene and to knowledge of its function within an organism. Once the function of a protein is determined it potentially leads to a therapeutic bene®t, by knowing where it ®ts in the scheme of things. This is because most drugs act on proteins. Functional information on proteins leads to potential drug targets and possible therapies for treating not just hereditary disorders. Sequencing the human genome is only the beginning. This will dominate bio- medical research in the next 50 years. As background to this article, reference is made to a broad-ranging review of biotechnology patenting in Europe [1]; inter alia, that article covers the nature of gene sequencing and under what conditions gene sequences may be patentable. 2 2. So what is bioinformatics? There is no standard de®nition of bioinformatics. Broadly, it is a body of techniques which solve biologi- cal problems using methodology from computer science. It relates to the acquisition, archiving, deposition, cu- ration, retrieval, analysis, interpretation and displaying of biologically important data to answer biological problems such as, what a newly discovered gene does, what place it has in the complex mechanisms of life and can it be used to cure speci®c cancers, for example? As part of this, advanced information technology is applied World Patent Information 23 2001) 349±354 www.elsevier.com/locate/worpatin * Tel.: +44-161-830-5000; fax: +44-161-830-5001. E-mail address: [email protected] P. Jones). 1 There are about 100 or more other genomes in progress. 2 Article 5 of Directive 98/44/EC makes it clear that the human body is not patentable under any circumstances. However, elements of the human body, including genes, which have been isolated from the body or otherwise produced by a technical process, may be patentable provided that the invention meets the basic patentability criteria novelty, inventive step and industrial application). Such elements are not patentable if simply discovered. 0172-2190/01/$ - see front matter Ó 2001 Elsevier Science Ltd. All rights reserved. PII: S 0 1 7 2 - 2 1 9 0 0 1 ) 0 0 0 4 3 - 6

Transcript of Bioinformatics in the post-genomic age

������������ �� � ����� ���� ��

������ ��� � �

������� ������ ��� � ������ ����� �� ���� ������ �� �� ����� � ��� ���� ��

��������

�� � �� ���� �� � � ��� � ��� �� �������� � ����� � ��� � ��� ������ � � ��� ����� �� ���������� ���� ��� �

����� � �� � � ����� �� � � ������ �� ������������ �� �� ������ � �� � �� � ��� ��� ��� �� � ��������� ����������

��� �������� ����� � !� ����� � � � �� �� � �� ���� ��� �� ��� � ��� � � ��� ������ ���� ������ �� "����� ��

������ ��� � � ��� ��� � � ���� � ���� �� ��� � ��� � � � ��� � �� � � #� � � ��� ��� �� ���������

�� ������ �� ���������� � � � ��� �������� ��������� �������� ��� ���� ��������� � ����� �� ������ � ��� �

�� ���� �� ���� � ������� � �� � �� �� ��� � � �� � ������ ����� �� �� �� ����� ���� �� ��� ���� � $%%& '�� �� �

(� � )�� *�� ����� � � �� ��

� � ��! + ��� , + ���� ����������, ������������, ��������� ���, !��������� �������, ����� ����, "-*, ��� ���, ��� ����,

"����� �, ( �� � �, �� ��, � ����� ���������, .���� � ������ , "�� ����� � �, "�� �� �����, "�� ���� ����, "�� ������,

"����� ����, (���� ��� ��� �������������, (-��, .���������� ��� +/!", .�������

� ���� ������

�� ����� ��� �� � 0% �� � � ��� � & ��� ���� � � �� �� 1�� � �� ��� �� ���� � � ������� ��� ��������� �� � ���� ���������� ��� � ��� ��� � 2� �� 1���� + ��� ���3 ��� �� � ����3 � ��� ������� � �� � � � ��� ����� "-* ������� � � ������ �� ��� �� � ����� � � � �� � �������� �� ������� � ������ �� ���� �� � � � � � ��� �� � � �� ��2 �� ��4��� ��� �� � ��� ��� ���� � � ��� � �� �� � ��������� ��� �� ��� ���������������� ���� ��� ��� �� ��� � �� �� � �������� � ��� 5 �� ��� � ���� � 66����� ����77 �� � ���� ���� � ����� �� � ���� ������������ �� ��� �� � ��� ���� � "-* � �� � �� � � � � � � ��� �� ��� �� � �� �� � � ��� � ���� �� �� �� ������ ����� �� ��������� 8� � ������ �� � ��� �� �� � ���� � � �� ������ � ���� � � ��� �� � � 2� �� ������ �� � � 2� ��� �� � �� ������ ���� �� � ��� ��� ����� � ����� ���� 9������� ���������� �� ��� ��� � ��� ��� ���� ���� ��� � ��� ������� � ���� � ��� � ������ 3�� � � ����� ������ ��� ( �� ���� � �����

� ��� �� ���� � � �������� ���� ���� ������ ����� ���� � � ��� �� � � � 0% � ���� *� �� ������ ���� ���� � � � � � �� ��� � � ������������� � �� ��� ��� ������� �� ���� �� '���� :&;, �� � ����� ������ �� �� � ���� �� � � � �� ���� ��� ��� ���� �������� � � � �� � � ��� � �� ���� � $

� �� ���� �� ���������������

�� � �� �� ������� � 2����� �� ��������������������� � �� � ���� �� ����� � ���� ���� ���������� ����� �� ����� � �������� ���� ���� � �� � �! � �� � � � ���������� ��������� � �������� �������� � �� ���� ��������� �� ��� ���� ��� ������������ ����������� ������� ��� � ���� � �������������� �� ��� ��� ��� � � ��� ����� � � � � �� ����� ��� � ��� �� � ���� � � ������� �� ��� ����� � � �� � � �� �� �2 �� ��� ��� ����� < *���� �� ���� ����� � ���������� ������� �� ����� �

5���� �� � !��������� $= >$%%&? =@AB=0@

���� �� �� ����C��� C�������

� � ��D E@@�&F&�G=%�0%%%, ���D E@@�&F&�G=%�0%%&�

�"���� ��� ! �������3�� �H��������������� �� ���

>�� ��� �?�& �� � �� ���� &%% �� ��� �� � � ��� � �� ����� ���

$ *��� 0 �� "�� �� AGC@@C'. �� � � � �� �� � �����

���� �� �� �� ���� ��� � ��� ������� �� 1�� � �� � � �� ��

� ����� ����� �������� � � �� ���� ��� � � ����� � ���� �

���� �� �� ���� ����� � �� � ����� ��� ��� ��� � �� ����

������ � �� � ��� ���� � � � ���� �� ������� �� ���

>��� ��� ��� ��� � � ��� ��������� ���������?� (�� � � �� ��

�� �� ���� �� ������ ����� � ��

%&I$�$&A%C%&CJ � � ���� �� � � $%%& '�� �� � (� � )�� *�� ����� � � �� ��

�!!D ( % & I $ � $ & A % > % & ? % % % @ = � F

� � ����� � � ��� �� ��� ���� �� ������������� ������������ �� �� ���� ������� �� � � ���� ��� ����� ���� �� � ��� �� � ��������� �� ���������� ���� �� � ����� �������� ���� ��K � � �������� �� ! ������ ��� ���������� �� #� ��� ��� � ��� ���� � �� '�� �� � ��K � ����� � �� ���������� ��� � � ���� ��� ����� �������� � ����� � �� �� ��2 � � ���� �� ����� �� � � ��� �� �� ��� ��� �� �� ���������� ���� ��K � ����� �� ������� �� �� �� ���� �� ��� �������� � ����� ��������� ���� ��K � � �������� � ���������� ����� ������ � �� �� � ��� � � ��� ��

� �������������� �� ��� ������������ ���

������������ �� � � � � �� �� � ��� ������� ����� � �� � ����� ���� �� � 8� �� � � ��������� � ������ �� � ��� ������� � ���� �� ��� � � � ������� � ����� �� � ��� �� >�������� � �����? �� ��� � � �� ���� � ������ �� ���� ��� ��� ���� = ���� ���� ��� � � � ����������� �� ��������� ������� ���� �� �� ������� �� � ����� � �� � � ��� ��� �������� �� � ������� >� ���� ���� ������ � � "-* �� ���� ����� �� � ��� ��?� ��� ����� �� ��� ���� �� �� ����2 � �� � ��������� �� � ����� �� �� ���� � �� �� ������ � �������� ��� �������� � � � ��� ��� �� ����������� (�� �� � ��3���� � ��� ����� � �� � �� ������������ �� D

� � �� ����� �� � ��� ��7� ������ �� ���������� ����� � ��� ��� �� ���� ������,

� � �� ����� �� � ������ �� � ��� �� ��� �� ��� � � "-* � �� � �� �� � ��� �,

� �������� � ���� �������� ����� � ����� � ��� ��� � � � � ��� � �� ��K � � ��������� ��� � ��� �� ��������� � ��� ��7� ������,

� � �������� � � ���� ���������� � � � ��� 66� ����� � �� 77 ����� ���� ���� �� �� ����� ��� ���� ������������� >(-��?� @

!� ��� ���� ������������ �� � ��� �� � � ������ ������� � � ����� � ���� ��� ��������� ����������� �� ��� � � �� ���� �� ���� ���� ������ ��

� ��� ��������� ��� ��������������

���� �� � �� � �� � ������ �� ��� ��K � � �� � � � ��� �������� � ���� ���� �� ��� ������ � � ���� �� 9�� ����� � � '���� �� ����

��������� !���� >'�!? �������� � ��� ��� � �� � ������ �� $B= ������� ��� ��� ��� ������� ��� ��� $ ������� ��� � �� ����� � �� � ���������� ��� ������ � ��������� 0 ���� ������� �� � ��� ��������� ���� � ��� ��� ����� �� �� � ���������� ���� '���� �� �� � �� ���� ��� ���������� ���� � � ��� ���3 �� 8� � �� ���� ����� ������ � ������� � �� � '�! �������� �� � �� � ���������� ��� ������� ��������� ����������� �� � �� ���� �� � ������ ���� ��� ���� ������������� �������� � ���� �������� ������ �� ��� �� � � ������ � ����� ���� �� �� �� �� �� � ��� ���� �� ������ ������� ��K � � ���� �� ���� � ���� � � � � ���� � �� #� � ��� ����� �� ��� ��� ����� ����� � ������� � � ��� ��� �� ����� ������ � ��� � � ��� � � � � ���� ��� � � � ���� � �� ������ �� ��� ��� � �� � � ���� �� ��� �� � �� � �� ������� � ������ ��� ���� � ���� � � ������ �������� ��� � � ��� ��� � � ���� � ���� �� � ����� � ���� � ��� �� � ��� �� � ������ � ��� ���� � � � ������� � � � �� � � �� � ���� � ������ ���� �

!������ �� ��� "�� �� ��������������

#$�$ %����������

* � � �� �� ������������ �� ���� � ������ �*��� 0$>&? �� � '���� �� �� � .��� ���� >� '�.? ������ � �� 66'���� �� �� �� ����� � ���� ���� ��� ��� ����� ���� �� ��� ���� �� ������������������� ���� �� � � ��� ���� ������ �� ���� ��� � �77� *��� 0$>$? � � �� � ��� �� ��� �� ������� � � � � ��� ������ ���� ����� � ���� �������� ����� ��� ��� ����� � ����� �������� ������� �� ��� �� � ������ �� ����������� 1�� � ����� ������� �� ���� � � � � � ���� � �� �� �� � � � � � ����� �������� ��� �� � ������ ���� >*��� 0$>=??� * � �� � �� � ������� �� ��� ���� �� '���� �� � � 2 ��� ��� � ��� � � �������� � :$;�

5�� �� � � ������� � �� �� ���� < ���������� ��� ���� �� � �� � �� ���� � ������ ����� � 66 ����� ���������77�

#$&$ '��� � � � ������� �����(�����)

�� ��� ���� ��� �� � ����� ��������� �� �� �� � �� ����� ������ � ���� � � �� ��� ��� �� �� ������� � � � ���� � ��� � �� � ����� � ��� � � � ���� � �� ������� � ������ �� �

= ( ��� ��� �������� � � �� �� � ���� �@ ( ��� ��� �������� � � �� �� � ���� � 0 *� � " �� � &AAG�

=0% *$ ��� + '��� *�� �� %�,������� &- .&���/ -012-#0

'�8 �� ���� !� L��� :=;� � � ����� ����� ��*�� �� ����� � � ����� ��� � � � ���� ��� ��������� ��� ����� ���� � �� � ������� ��� �� � ����� �� �� ����� ����� � � �� 66� ���� ��� �� � ����� ��� �� ���� ��� �� �� ���� � ����� � � ����� �� � ������� >� ��� ���� � � � ��������� �� �� ������ ? ���� � � ���� � �� � ������ � � ���� � ������� �� ��� � � � �� � �� � ���������� �� � ������� ��� � ������� � � �� � �� � �� �� � ��� �� ��� ���� �� K ��� ��� �������77� �� ����� �� *�� �� � � �� � �� 66� � ������ �� � ��� �� ��� ���� ���� ����� � �� ���� �� ������ ��� ��� ������ �� ������� �� ��������� �� � ���� � ���� ��� ��� �� � � � ���� ��� �� ���� � ����� ��� �� ����� � ��� ��� ���� �� � ���� � ������� �� �� �� � ���3 � ��� � ������� �����(����� �� ��3 ����� � � 4� � �� �� ����� � � ����� � � � ��� ��5 �� �� 5�� � ��> ������� ��� �?77�

!� "�� -����� :@; � � ����� ����� �� *�� ������� � � � ���� � �� �������� ��� � ������� � �� ���� ������� � ��� ��������� �� ����� ��� ���������� ��� ������� ���� >��� ������ ���� � �������� ?� �� ���� ���� ����� � ���3 �� � ��� ������ � ���� � � ���� � ���� �� � ��� ���� 9�� ����� �� � 2���� ������� ����� � ���� � �� �� ���� � ��� ���� ������ � � �������� � ��� ����� ����� �� � �� �� �� � 66�� � � � �� � ��� ������ ���� � �� ��� ��� �� ������� � ��� ���� ��� ��� � ���� � ���3 �� � �� �� ���� � ������ ������� �� � �� � � ��������� � � �� �� �2 �� ����� �� ���� � �� �� � � � ��� ��������� ��� � ����� � ���� � � � �� � 6 �����7 ���� � %� ��� �� �� �� 6�(� � �� ( ��3 �� �� �� ��6� � ������� �, �� �������� �� �� ,������� �, ���� ��6� � �������� � �� �� 7 �� > ������� ��� �?77�

9�� ����� � � ������ ��� ���� ��� � 6 ������7 �� �K ��� ��� � ���� � ��� �� ��� �� ����� ����� �� ��

�� � �� �� � � � ���� � ������ ��� ���������� � ����� ����� ������ ��� � � ��� � � ���������� � � ����� �� (�� � :0;� �� � ����� ����� ��*�� �� � �� �� 66� ���� ������� ���� �� ����������� ����� � � ��� ������ �� � ����� ����� ������� �� � � ��� �� ����� �� 6������� �, ����6� � ������� > ������� ��� �?� �� � �� � � ������ ����� ����� ������ ����� � � ���� � ���� >� � �� ������? ����� ����� � � � ���� � ���>� � �� ������? ����� � ��� � ������� �� ������ ����� �77� (�� � ������ � � ���� � � 2������ ������ ���� ����� � � ������ ��� � ��� �� � ����� �� ������ ���� � �� � � � � � �� � �� ��� ���2� ����� �� �� ����� ����� �� 66� ���� � ������ �� � ���� � ��� � ��� �� � ���� � � ��� ��� >�� � �� ��� � � �? �� �� � � �� �� � �� ������������ �� ��� � �� ��� � ��� �� ����� � ��3��3���

� ������� ����� ����� �� ( ��� � ��� ( ,� 6�"������� ��� ��� > ������� ��� �?77� (� �� � � �� ����� ������ �� � ��� � ���� � ��� � ���� ��� �� � ��� � ����� ����� �������

�� MN �� � 8# ��� ������ � � ���� �� � '���� �� �� � 8# �� �������� ����� � � ���� ��������� � � � ����� � �������� ����� ����������� ���� �� ����� � ��� � � ������ �� � MN.����� 9�� ����� �� O ����� )���7� *��������:F;� 9�� )�� � � �� � � L��� ��� �� � �� ��� � ���� � ��� � � � �� ���� � � ��� � 66��� ����� ����� �� � ����� �� �� � ���� �� � � �� ���77� 8� � ����� � ������ �� � MN .���� �� + � � !�7� �� �� +�� �7� *�������� ��� 9�3���)��� �7� *�������� :IBA;�

#$-$ � ������� 7 �� � ������

5���� � ���� � ������ ����� �� � ���� ���� � �� � �������� � ��� � �� ���� � � �������� �� � ������ ������� �� �� ���� �� � �� � � �� ��� ����� ���� ����� � ������� �� *���� 0$>$? �� � '�. ��� ���� � ������ � ���� ���� ������ � � �� �&&I=CAI :&%; �� � � ������� ���!�O ��� ��2�� � �� ���� � !�O � ����� :&&;� �� ����� �� ���� �� �&&I=CAI � � � � ���� � ������������ ��� �� ������� ��� � �� ���� � ���� �� ������� ���� � ��� � � ���� � ������� �������� � �� � ���� � ����� � ����� �� � � � ��������� � �� � � ���� � ���� �� � ��� ��� ��� � ��� �� �� ��� �� >� ����� �� ��� � � � �� �� � �������� �������� ��� � �� �� ���� �� �� ���� ����� � � � ���� �?�

�� � ����� ����� �� *�� �� ��� ��P� � � ��*��� $I>&? �� �/!�( ���� ������ � �� 66�� ������� � �������� ��� ��� ��� ������ �� � � �������� ��� �� �� �� ��� 2 ��� �� �������� ������ � � ��� � �� ������ �� ��� ��� � � ��� �� ����� ����������� ���������77� 9��� ��� � ��� � �� � � ����� �� ���� � �������� � � � ���� �� � ����� �� ������� � ��� ���� ��� ���� ��� � 66 ������ ���� � �� K 77 ���� ���� � �� � �� ���� ����� ���� � ��� ��� ��� � ������ ������� K � �� � ���� � �������� ��� ����� � � ����� �� � ���� ��� ��� �� ���� � �� ���� �������� ����� ��� � ����� ���� �� �� ��� ��� �� �� � �������� �� ����� ���� 66� ���� � ����� �� � ,��� 7 �� � �3��� ,�� �� 8 ������>(� �� ��� � ? �, �� ��������� ��3 � (� �� ���"6�� 6����� 5� � ���� ���� � K � ��� � � ��"����� ������ � � �� � ��� �� �,� � �� ��3 �� ������� 6�(� �� �� ��� ���� ���� ������ ���� ����� K ��� � ����� � � �� ��� ����� ���� ��� ��������� � � � ���3 �� � �� � �� �77� ���� ���� � ����� K ��� � �����

*$ ��� + '��� *�� �� %�,������� &- .&���/ -012-#0 =0&

�� '�8 ���� ����� �� � � � ���� ������ �� � � ��� ���� ��� � ����� K ��� ���� ��� �� ����� ��� �� ��� ��� ��� � �� !� � ���������� ��� � �� � ����� � ��� ������� ������� ������ �� !� � � �� �� ��3 �� ����� ����� ��� ��� � � � � �� �� ��� ��� � �� !� � ��� ���������� � � � � ������� � � ����� ����� �� � ��� � �� ������ � ����� K �

!� ���� � � �� !�O � ������ �� ������� ��� �� � �� ������������ �� ��� !� � ������ ���� � � ��� ���� ��� � �� � ��� � �� K �� � � �� ������ � ���� ���� ��� ��� �������� � � ���� � ������� �� ������ � � �� ���� 8� ���� � �� � ��� � ���� ��� � � �� ���� � ����� �������� � � ����������� F ���� �� ��#�� � ���� �

#$0$ 9��� � ���� 6�� ��

�� � ��� ��� �� ���� �������� �� '���� ������� � ���� � � � ����� �� � ���� �� � ��� ��� �� ��� ������ ��� ������ �� � ��� ������ ��� ���� ��� ��� ����� ����� ������� ��� � ���������� �� � ���� �� ���� � ���� �� � ��� ������ � *��� � 0$>$? ��� 0$>=? �� � '�.�

#$#$ �� 6������ �� �� ���� � ����

!� � M(� � � �� �� ������ ������� �� � �� ������� �� ���� � �������� �� ����� �� � ����66�� ���77� !�� ��� 66������� ��� � � ��� �� ����� �� ���77 :&$; �� �� ���� � � ��� ���� ������ � ������ �� ��� ��� ��� ����� �� ��� �� ������� �� � ����� � ������ ��� ����� �� � ������� � �� �� � (� (� ��� � ����� :&=;� ������2�� � �� ������ ��� ����� �� � ��� ��� ������� �� ���� �� � � ����� � 66�� ���� ��� ��������� � ���77� 9�� ����� �� � ��� �� �� � .���66�� � ��������� � ��� ��� ������ �� � � ����� � �77� ���� ��� � � � � � �� ��� ����� ��� ���� �� ���� � ������� � ��� �� (� (� � �� � � � ���� ������ � � � ����� �� � ����

#$�$ �� ,���

.���� � ������ ��� ����� �� � ��� �� ����� ���� � � �� �� ������ �� ��������� �� � '�8 � � ��� � '�. � � ��� � � � � � � ����� � �������� �� � � ����� � ��� ����� ��� ����� � ����� ���� � ����� �� '���� �� .���

������� ��� 3�� ������� � � � ���� �� �� ������������ � �� � 66�� ������� �� .���� ��!��� � � �!�� �����77 :&@; ��� � .��������� �� �� � � 2������ �� ������� ����� *� � � ��������� �� � MN�� � 8# � MN ��� ��� � ��� � �� � �� ��������� �� ������ ������ �� � �� ���� �� � � � �� �� ����� ���������� �� �� � � � �� � ����� ��������� ��� ������ �� �� � � �� ����� � � �� � ��� � ��������� �� � �� � ������ �1�� � �� � ��� ��� � �� � � �� ��� �� ���� ���� � 'M ��� '�. �� � �������� � �� � � ����2 � �� � �� � ������ �� �� �� �� ��� �� � ����� ��������� :&0;�

!� � M(� � � ��� � � �� �������� �� 2����� �������� �� � ��� �� ��� ���� �� ���� �� � �� �� ��� �� ���������� ���� ��� � � � � �� ���� �� � M(��� ��� � ��� � �� � � ��� ����� �� � ����� ��� I

#$:$ *�� �� �� 6�����

����������� �� �� �� ��� ��� � � ���� �� � M(��� � � �� � ����� �� '���� � 9�� ����� � !�� ������ ����� !�� � �� � �� � � �� ����� � � ������� ������ G :&F;� *� ��� �� �� � ��� � ����� ���� �� �� � ���� � �� � �� ������ ��� ������������� ���� � ����� � ��� ��� � � � �� �������� ������ ��� �4�� ������� !�� ��� �� �� ��� � � ��� ���� ����� � ��� ��� � ����� � � �� � � �� � � � ������ ��� ��� � ���������� �������� ��� ���������� � ���� ����������:&I;� 8� � ��� � ������ � ���� �K � � �� �� ����������� ����� � � �� ������������ � ��� � �� ���� ��� � � ��� ��� � �� � � �� ������ ��� ������������ 9�� ����� � . � �� + ����� �K � � �������������� � ��� � >��� � ��� � � ������66� � ��� � ��� ���������� ��� ��� ��� ��� �� � � ��� ����� � � ����� � ��� 77? �� ��� �� ��� � �� � � �� � � � ��� ���� ���������� :&G;� ���� ������ � �� � � �� � . � ��7� ������ ���������� ���� ���� � ��� ������ �� ������� � �� � ��� ������ � � ����� � � ��� ����� � ��� � � � ��������� �� ���� �� �� � ������ ��� ���������� � �� �� � � ������ � >��� ����� � � � �� � �? �� � ���� �� ����� �� ��� ��� � �� ���� � ���� � �� #� � ��� K �� �� �� ��� ����������� �� ���� �� �� � ���� �� ��� � ��� ��� �� ��� �� ��� � ��� ������������

F � F%>$? �� � �� �� * &AII ���� ������ � ��� � ������� �

� � �� � �� � �� � � � ��� � ����� � �� �� ���� � � � ��

� ��� ���� ��� � � ������ � ��� �� � � �� ���� �� ������� ��

� ������� � �� ��� � ��� �� ������ ��� ����� �

��� ���� ��� K �� � MN�

I 9�� ����� � � ����� �� O ��� �� � !����� � � * $%%%

���� ��� ������ � ��� ���� ���� � � � ��� ���� �� � ���� � ��

����� ��� ���� ����� � ����� �� � ��� �� ��G !��������� ���� ���� )����� / ��� ��� +��� � >� 2�� �� MN

�� � ���� ��?�

=0$ *$ ��� + '��� *�� �� %�,������� &- .&���/ -012-#0

���� ��� �� � �� � ����� �� � � �� �� � �� � �� � ������������ ��� ��

9��� & � � �� �� �� ��� � �� � ��������������� ��� ���� ������ � � ������������ �� ��� ����������� � ���� �� � ���� � �� �� ��� � ������ � �� ���� �� � ��� ��� ������ � ������ � � ��� ��� ��� � ��� ��� ������ �� ��� ������������ ���� � � � � � ��� ��� � � ���� � ���� ��� ����� � � ��� ����� � �� ��� �� ������ ������� ���� ��� �������

5���� � �� ��� �� ���� � ��� ������ � � ��� � �� ��� �� � �� � �� ������������ ����� ������ ���� �� ��� ��� ����� � � � �� � �� �� � ����� � ��� ���� � ��� �� ���� �� ��� �� ��� � ����� � ��� � � � � ���� �� � � �� ���� � ����� � �� � ��� �� � �� � � ��� ��� ���������� ��� 2 �� �� ���� ����� ��� � ���� �� � � � ���� � 2 �� ��� ��� �� �� ���� � �� �� �� � ���� � ��� ���� �� � ���� � �������� �� ������� �� � � � � ����� �� � ��� �� ��� ����� ��� ��� �� ��� ��� �� ������� >��� ��� ��� ��� � � ������������ ���������? �� ����� ����� �� �� ������� � ���� ��� �� �� ���� ��� � ���� >���� ��� ��� ��� ��� � � ��?� �� � ������ ������� � � ��� ����� ��� ��� � �� ��� �� �� � �� ������ � ��� ������������� ���� ��� � � ��� �� ��� ��� � ������>��� � ����? ��� ��� ���� �������������

# $������� ������

"����� � �� �� ������� ����� � �� ������������� ��� �� � ���� ��� �� � ���� � � ���� ���� �� �� � ����� ���� �� � �� � �� � ���� � ������� O ������ �� �� ��������� ��� ���� ��� ��� � � � � � � � ����� ��� ������ � ��� �������� �� ���� ���� ���� � �� ������� �� � ���� �� ����� �� � ���������� ��� +/!"� A

�� � �� �� � ����� �� ��� ��� �������� ��������� � �� ������� � �� ���� �� � ��� ���� *������ �� � ��� ��� �� ��� � �� � ��� �� ��� ���

�� � �� ����� ������ � �� � ��� ��� �� � ��������� ��� ������������ � ����� �� � ���� �� �� �� ���� &% ���� ��� � � �� ��� � ����� �� ���� ��������� ��� ��� ���� �� ��� �� � � ������ ���� :&A;� !� ��� ���� �� � � � ��� �� ������ � � �� � �� �� ��� ������ � � ������ ����� � � 66�� �� ���� ����77 �� � ������ � � >���3 � ���� �� ���������? � ������ ���� � ��� � �� ���������� � � ���� � ���� �� I% � ��� ���� � ��� �� �� � ������ .������� ���� �� ������ ��� � ������ ���� � ��� ��� � ������ �� � � ��������� � ��

�� � �� ���� � � ���� ������ ����� && ���� ���� � � ������ �� � ��������� ��� �� � ��� � ���� �� ��������� � ������� �� �� � ���� � �� ���� � ������ ��� ��� �� ����� ���� � � ��� >���� �� � � ����? �� ��� � �� � ''*� &$ ���� ��������� ��� � M( �� � �� ��� �� ������ ������� ���� �� �� ���� ��� � � � � �� ������������ ������ � �� � � ��� �� � �� ������ � � ���� �� � � �3�� � ��� ��� �� ������ ������"����� ����� ���� �� ��� ���� � ���������� � �� � �� ��� �� �� ����� �� ������ � � ������ �� � ���� � ���� !� ���� � ��� � ��#�� ����������� � � � ��� �� � �� � �� � ������� � ���������� ����� � �� � ������ ��� � ������ ���� ������ � �� � ������ :&A;� �� ������� ����� �� � � � ������ ���C�� � ������������ � ���� �� � ��������� ��� �� � �� �� �� ������� � (���������� �� ����� � �������� �� ���C�� �������� �� ��� � .��� ��� ��� � � � � ��� � � :&A;� '������ � ��� � � ���� � �� �������� ����� � �� ��� �� � ��������� ��� �� � �� ���� � ������ � ���� � � ���� �� ��� � ��� �� ����� ����� / ���������� � ��� ��� ���� �� �� ����������� � � ����� ��� �� � ��������� ��� �� � �� �� �� � ������ �� � ���������� �� ��� ���� � ����� �� ����� �� �� � ����� �� ������������ !��������� � � � � � ��� ��� ��� ������ ���C��� ���������� �� ����������� ���� �� � �� �� ��� ������ �������� �� ���� ��P� ��� � ������ ��������� �� �� ������ �� ���� ��� ���������� 3��� � � ����� �� � �� �� � �� � �� � ������ �� �� � ��� �� 1�� � �� ��� ��P�� ���� �� 3������ ��� � ��#�� � � ���� :&A;�

�� ������ ���� ���� ��� &0 � ��� ���� � �� ��� �� ���� � �� �� ���� � �� ��� �� � ������

9��� &� 8� ��� � �� � ������������ ��� ���

A ( ��� ��� �������� � � �� �� ��� ���� �

&% � =* �� � .������� " ����� ��� �� �� * &AGG�&& !����� � �� � ��� �� � .������� ��� /���� �� "�����

/ �������� &AAI ���� ���� � �� '���� �� ������� � ��� .�����

"�� �� AFCAC'. �� &&� O��� &AAF �� � ) ��� ��� ��� ��

"����� ��&$ �� '���� �� '����� *� � ���� ������ � �� � ���������

����� �D *������ � ������ " ���� � 9������� 9��� � + ������

+� � ! ����� !� ����� !���� )� � �� ��� )�� ������� ��

- � ������� -������ �������� (����� (� � � ��� � MN�

*$ ��� + '��� *�� �� %�,������� &- .&���/ -012-#0 =0=

��� ���� � ��� �� ���� �� ���� � �� �� � �� ����� �� �� ���� � ������ ��� 2�� ��� �������� �� ������ !� � � �� ��������� ���� � � � ��� �� �� � ������ � ������ ���� �� ���� ���������� � ���� �� �� ������ � � ������ ���� �� � � ���������� � � ��� �� �� � ���� � ������ ����������� ��� � � � �� �� ��� ����

�� ��� � �� � ������ �� � � ���� ��� � �� ������� �� ��������� � ������� �� �� � ���� � �� �� �� � ������ ��� ����� � � ��� �� �������� ���� �� � � ���� ��� ���������� � ������ ��� � ���� ����� � �� � ���� ���� ������ ����������� �� � � ��� �� � � �� �� ��� � � � � ������� � ��� � �� � ������� �� � ��������������� � ��� ����� �� ������ ����� ������������ � � �� ��� �� ��� ��������� � � ��� ���� � ���� � ��� 3��� � ��� ��� � �� � � � ����� �� ��� � ������������ �������

! �� ������� � � ���� �� � �� �� 3�� � � ������ � ������ � ���� �� ������� �� � ����������� ���� ���� ���� ��� � ���� � ������������� � ���� �� >� 9��� &?� �� MN ��� �� ����� � ����� �� ������������ � � ���� ������� ��� ����� � ��� ���� �� � �� � / � ��� .�������

% ������&

������������ �� �� ������� ����� �� � ����� ���� �� ���� � � ��� �� ���� � ������ ���� �� �� ���� � ������ �� �� � ��� ��� ������� ����� � � ��� ��� ��� �� ��� ��� ���� � ������� ��� � ���� �� ����� ����� �� � ��� � ��� ����� � � � ��� � ���� ��� ����� .����� ����������� � ��� � �� � ������� �� �� � ����� � �� ��� � � �� �� � �� � �� � ������������ ��� ��"����� � �� �� ������ ��� � �� ������ �������� �� ������ � � � � ���� ��� ����� �� ��� � ��� �3�� �� !� ��� ���� � ��� �� � �� ������������� �� � ��� � �� ������� �� �� ������� �� ����� ���� �� � ����� � ��� � �����'�5��� ������ ��D � ���� ��� �� ��� ������ �������� ���� ������� � ���� ��� �� � � ��� ,������� D ��� ��B��� � ��� ���� � � �� �� � ��� � ���� ��� ��� �� ��� ����� � � � ��� ,�������D � ��� �� �� � �� �� ���� � � ��� � �� � �� �� �������� �� ����� � �� �� �� ���� �� �� ���������,

���6��������� ���� ;<%�D � ������ � ������� ����� �� ������ ��� ��� ������� ��� �� ��� � � �� � ��� � ����� ��� � �,�=>D � ���������� � ��� ���� �� ��� �� ������ ��K � � � ���� �������� ��� � ��� � ��� �� � �� � �� ���� ����� � � � � �� ,�86 ���D ���� ���� ��� ����� �� � �� �2 � � ��� � ��� �� �����,; � D � � �� � �� � �������� ��� �� "-*�� �� � ��� � ��� �� �����,; � ?� �� D � ���� � ��� ��� � �� � ��� � >� "-*? �� � � �� � ,; ��� D ��� �� �� ��� � ��� "-* �� �� ���������� � ����� � ����� �� ���� �� � � � �,; �����D � ��� �������� �� � ��� �������������� � � � � �� ,*�� ����D � ��� �������� �� � ��� �������������� � � � ��� � �� ��� �� ������ �� � �����2���� �� � �� � ����� � �� �� ����� � ��������,�=*@D ��K � � � �� � � ����� �� � "-* �� �� � ��� � ��K � � � �� � ����� � ������

'���������

:&; 5��� "� '���� �� �� �� ��� ��� ��������� ��� ����� B

���� �� � � ��� ���� � 5���� �� � !���������� $%%&,$=>@?D

==AB@G�

:$; � � ����� N� '���� �� �� �� ��� ������ � ���� � ���

����� �� ��� � ��� ������ 5���� �� � !���������� $%%&,$=>=?D

$0=BF=�

:=; L��� :&AGI; '���8�/� I@�

:@; "�� -����� '�8 " ����� �%F0CA=�

:0; (�� � '�8 " ����� �%IFACA$�

:F; O ����� )���7� *�������� :&AGA; /�. @F&�

:I; + � � !�7� �� � :&AGA; /�. &@I�

:G; +�� �7� *�������� :&AA&; /�. =%0�

:A; 9�3��� )��� �7� *�������� :&AAI; /�. F%G�

:&%; !�O '�8 " ����� �&&I=CAI� & ����� &AAG�

:&&; !�O '�8 " ����� �%A=0CA@� @ 9 ������� &AAA�

:&$; "������ � .�� ������ " ������ @@I M( =%= ��� $%F M( �Q

&A=�

:&=; (� (� ��� R ���� .� � (������ 9������� +���� !�

&@A 9�=" &=FG >9 � .�� &AAG?�

:&@; ���� ������ ����C���C�� ����S��� C �C������C�������C

���� ��� �����

:&0; ������ ������� C����C����������C�������������

:&F; ������� ����

:&I; M( 0AFFI&$�

:&G; ���� � ������

:&A; O�� ���� )���� �� ������ 1��� ����� ����� )� � 5������

1��� 8���������� )�� $%%&� &0& -�)�� $I&�

=0@ *$ ��� + '��� *�� �� %�,������� &- .&���/ -012-#0