BIO-QUIMICA LABORATÓRIO DE BIOQUÍMICA...
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LABORATÓRIO
DE
BIOQUÍMICA CLÍNICA
Professora Msc.
Melissa Kayser
BIO-QUIMICA
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Ramo do laboratório clínico no qual os métodos
químicos e bioquímicos são aplicados para pesquisa
de uma doença.
Compreendem mais de 1/3 de todas as investigações
laboratoriais de um hospital.
Analitos testados:
- sangue;
- urina;
- aspirado do suco gástrico;
- Líquor.
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PROCEDIMENTOS
PRÉ-ANALÍTICOS:
- POP da coleta;
- Orientações ao paciente;
- Obtenção da amostra;
- Tipos de amostra;
- Processamento da amostra;
- Armazenamento da amostra;
- Transporte da amostra.
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ANALÍTICOS:
- Equipamentos;
- Metodologia.
PÓS-ANALÍTICOS:
- Cálculos corretos;
- Linearidade do método;
- Valores dos controles;
- Resultados x quadro clínico paciente;
- Liberação do resultado.
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PUNÇÃO VENOSA
SORO:
- Parte líquida do sangue;
- Coletar sem anticoagulante;
- Centrifugar após a coagulação.
PLASMA:
- Parte líquida do sangue;
- Coletar com anticoagulante (usar uma gota de EDTA 6g/dL para 3 mL de sangue).
- Obtido após centrifugação.
- Para dosar glicose coletar com anticoagulante inibidor de glicólise (usar umagota de fluoreto de potássio - KF 12g/dL - para 3 mL de sangue).
SANGUE TOTAL:
- Hemoglobina glicada e hemograma (usar um gota de EDTA 10g/dL - ácidoetilenodiaminotretacético - para 5 mL de sangue).
TIPOS DE AMOSTRAS
PROCEDIMENTOS PRÉ-ANALÍTICOS BIO-QUIMICA
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BIO-QUIMICA
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Hemólise
BIO-QUIMICA
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ARMAZENAMENTO, CONSERVAÇÃO E TRANSPORTE
- Possibilitar a manutenção da integridade dos
elementos;
- Contribuir para estabilidade das substâncias
químicas;
- Tempo máximo 1hora até o laboratório;
- Refrigeração 2-8°C;
- Atividade enzimática na amostra é estável por 4
dias entre 2 a 8°C;
- Turbulência excessiva leva a hemólise;
- Evitar evaporação de amostras.
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PROCEDIMENTOS ANALÍTICOS
EQUIPAMENTOS:
- Centrífuga;
- Espectrofotômetro;
- Densitômetro para eletroforese;
- Deionizador;
- Banho-maria;
- Estufa para secagem.
BIO-QUIMICA
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CENTRIFUGAÇÃO:
- Após repouso de 20-30 minutos para coagulação;
- Centrifugação suave;
- Tempo determinado para o analito (3500rpm/10min);
- Retirar o coágulo rapidamente.
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• A espectrofotometria baseia-se na absorção da radiação
nos comprimentos de onda entre o ultravioleta e o
infravermelho;
•Quando luz passa através de uma amostra ou quando ela
é refletida de uma amostra, a quantidade de luz absorvida
é a diferença entre a radiação incidente (I0) e a radiação
transmitida (I). A quantidade de luz absorvida é expressa
tanto como transmitância ou absorbância.
BIO-QUIMICAESPECTROFOTÔMETRO
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= LAMBDA
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COMPONENTES BÁSICOS DA FOTOMETRIA
Fonte de energia elétrica
Fonte de energia radiante
Lâmpada de Tungstênio – UV próximo e visível
Lâmpada de Hidrogênio – região do UV
Monocromador
Porta Cubetas
Quadradas
Redondas
Detectores: E° radiante transmitida em E° elétrica
Circuito medidor: E° elétrica emitida e medido em A e/ou T
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BIO-QUIMICA
Isolar a faixa de comprimento
de onda requerida
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solução 10 g/l
IoIT1
solução 20 g/l
IT2Io
feixe de luz de
intensidade Io
1 cm
IoIT1
Io IT3
3 cm
feixe de luz de
intensidade Io
A absorção da
luz é tanto
maior quanto
mais
concentrada for
a solução por
ela atravessada
A absorção da
luz é tanto
maior quanto
maior for a
distância
percorrida pelo
feixe luminoso
através das
amostras
BIO-QUIMICA
(LEI DE LAMBERT)
(LEI DE BEER)
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Logo: Quando a E°radiante atravessa uma solução, aquantidade de E° transmitida com:
- espessura atravessada (LEI DE LAMBERT);
- da concentração ou intensidade da cor dasolução (LEI DE BEER);
“LEI DE LAMBERT-BEER”
BIO-QUIMICA
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Se a luz passa em uma solução onde não há absorção
nenhuma, a absorbância será zero e a transmitância será 100.
BIO-QUIMICA
%
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ESPECTRO VISÍVEL
Na faixa de leitura entre 400 – 700 nm
BIO-QUIMICA
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ESPECTRO UV
O espectro UV está dividido em 3 partes:
UVC (< 280nm), UVB (280–315nm), UVA (315–400nm).
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UVA – Luz Negra – 315:400 nm
Bronzeado;
Formação da catarata;
UVB – Região do eritema – 280:315nm
Região potencialmente carcinogênica;
Protetores solares;
UVC – Bactericida e Germicida - < 280 nm
Protegidos pela camada de ozônio;
Lâmpadas de vidro bloqueiam completamente esses raios.
BIO-QUIMICA
Eritema: Coloração avermelhada da pele ocasionada por vasodilatação capilar.
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PRINCÍPIO DA COR COMPLEMENTAR BIO-QUIMICA
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OU SEJA:
“Uma solução AZUL absorve o VERMELHO com maior
intensidade e portanto deve-se escolher a porção
vermelha para medida da solução azul”
OBJETIVO:
“Utilizar uma faixa no espectro na qual a E° radiante seja
absorvida ao máximo ou aproximadamente”
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BANHO MARIA
Aquecimento lento e uniforme sem exceder 100°C;
Acima de 100°C, o calor transferido à água é
transformado em energia cinética, formando vapor.
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Problemas analíticos:
Calibração equipamento;
Limpeza do instrumento;
Qualidade dos reagentes;
Controle de qualidade do equipamento;
Manutenção de peças do equipamento.
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LIMPEZA MATERIAL LABORATÓRIO
A vidraria e as ponteiras logo após o uso devem serimersas em solução de hipoclorito de sódio a 1% (24horas).
VIDRARIA- Deve ser imersa, logo após o hipoclorito, em uma soluçãode detergente neutro a 1,0%, por mínimo 1hora;
- Enxaguados exaustivamente com água de torneira elavados no mínimo 2 x com água destilada ou deionizada;
- Secar em estufa a 80°C.
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PONTEIRAS:
- Colocadas após o hipoclorito , submersas em frasco deboca larga contendo solução de detergente neutro a1,0% ou de NaOH a 1%;
- Agitar vigorosamente por cerca de 30 minutos eenxaguar exaustivamente com água de torneira e comágua destilada;
- Secar em estufa a 37°C.
CUBETAS:
- Lavadas após o uso com água deionizada.
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PROCEDIMENTOS PÓS - ANALÍTICOS
1. Cálculos corretos.
2. O resultado está dentro da linearidade do método?
3. Valores dos controles estão dentro dos limites
estabelecidos?
4. Valores de referência?
5. Comparar os resultados com o quadro clínico do
paciente, para confirmação de resultados fora da
faixa de referência.
6. Liberação do resultado para o clínico que requisitou o
exame.
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Classificação das
CAUSAS DE ERROS
nas dosagens bioquímicas
BIO-QUIMICA
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ENGANOS:
- Troca de rótulo;
- Troca de amostras durante o processamento;
- Troca de amostras ou reagentes durante a pipetagem;
- Leitura incorreta de instrumentos;
- Cálculos errados;
- Erro na transcrição de resultados.
ERROS INADMISSÍVEIS
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ERROS OCASIONAIS
ACIDENTAIS:
- Presença de substâncias interferentes na amostra;
- Tubos ou pipetas contaminadas;
- Diferentes técnicos.
BIO-QUIMICA
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REPETITIVOS:
- Técnicas de baixa precisão e exatidão;
- Reagentes deteriorados ou de má qualidade;
- Perda de precisão da vidraria e equipamentos;
- Curva ou fator de calibração errados.
ERROS SISTEMÁTICOS
BIO-QUIMICA
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Conceitos importantes em
Análises Clínicas
Diagnóstico Laboratorial: é o resultado de uma análise ouconjunto de análises que fornece subsídios ao clínico para oestabelecimento de um quadro patológico ou esclarecimento dedeterminadas suspeitas clínicas de um paciente. Deve sempre estarassociado ao diagnóstico clínico, servindo como auxílio,complemento ou confirmação.
Controle de qualidade: conjunto de normas e procedimentos quevisam garantir a confiabilidade dos resultados das análises.
Calibração: é o ato de aferir um aparelho ou instrumento para queo mesmo funcione com precisão e exatidão.
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Conceitos importantes em
Análises Clínicas
Exatidão: refere-se à proximidade de um
resultado analítico com o valor real.
Precisão: refere-se à reprodutividade de
resultados, ou a proximidade dos valores
obtidos entre si. Um método pode ser preciso e
não ser exato.
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Conceitos importantes em
Análises Clínicas
Especificidade: capacidade de um método de avaliarexclusivamente uma única substância.
Sensibilidade: capacidade de um método avaliarquantidades reduzidas de uma substância.
Valores de referências: é o conjunto de valores de umdeterminado parâmetro avaliado que reflete o intervaloobservado em determinada população consideradasaudável.
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Conceitos, outra visão
Sensibilidade:Uréia e creatinina são testes de pouca sensibilidade, porque só é
detectada quando 50% da função renal está comprometida.
Especificidade:Creatinina não é específico para função renal. Geralmente se analisa
mais de um analito.
Linearidade:Valor limite que pode expressar a quantidade de analito.
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Exercícios
1 – Cite e comente os cuidados que devem ser tomados nosprocedimentos que antecedem a análise do sangue?
2 – Por que as vidrarias devem ser lavadas com sabão neutro e águadeionizada? Que problemas teremos se não forem lavadascorretamente?
3 – Você centrifugou um sangue e observou que o soro estáhemolisado. Qual etapa do procedimento poderá ter ocasionado orompimento dos glóbulos vermelhos? Explique?
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MUITO OBRIGADA PELA ATENÇÃO!!!