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Uno de los problemas principales a los cuales la industria farmacéutica se enfrenta en la actualidad, involucra

demostrar el cumplimiento con los están-dares ambientales en sus áreas de trabajo, principalmente en áreas consideradas como Áreas Limpias. Por los controles requeridos para este nivel y su compromiso con la ela-boración de medicamentos con la calidad microbiológica requerida, por este motivo es crítico e indiscutible que cualquier em-presa, en este rubro, siga las normas de las Buenas Prácticas de Fabricación [BPF] (en nuestra industria la cual se dedica a la ob-tención de productos Biotecnológicos esta-mos regidos fundamentalmente por las nor-mas ISO, y por diferentes guías regulatorias como son: Centro Estatal de Calidad de los Medicamentos (CECMED), Food and Drug Administration (FDA), Organización Mundial de la Salud (OMS), International Conference on Harmonization (ICH) y la European Medi-cines Agency (EMEA).

La validación es una parte esencial de las Buenas Prácticas de Fabricación. Hay dos principales fuentes de referencia en la

documentación de la OMS en relación con la validación. En primer lugar, el texto de BPF de la OMS que cubre la validación en la Parte Uno, Sección 5 recalca que la va-lidación debe conducirse de conformidad con protocolos predefinidos. Deben prepa-rarse y almacenarse informes escritos que resuman los resultados y las conclusiones registradas. Los procesos y procedimientos deben establecerse sobre la base de un es-tudio de validación. Debe realizarse una re-validación periódica para asegurar que los procesos y los procedimientos sigan siendo capaces de lograr los resultados concebi-dos. Especial atención debe prestarse a la validación del proceso, los ensayos y los procedimientos de limpieza.

Siempre que se habla de un proceso de validación, referido por las Guías de BPF o los diferentes artículos publicados, se indica la planificación de la revalidación, en todos los casos solo es mencionado, y como se conoce no existe una receta, cada labora-torio y/o institución rige sus bases, o me-canismos; ejemplo de estas guías donde se indica que se debe realizar revalidación

pudiéramos mencionar, algunas como:• Guide to Cleaning Validation in API

plant. Cleaning Validation in Activepharmaceutical Ingredient manufactu-ringplants.September1999APIC,don-deensuacápite6.PolíticadeValidaciondelimpieza,mencionaquedebeexistirla política de revalidación, así comotambiénenelacápite,referidoal infor-me final de la validación plantea “Anyrecommendations based on the resultsorrelevantinformationobtainedduringthe study including revalidation practi-cesifaplicable”.

• Anexo15totheEUGuidetoGoodMa-nufacturingPractice

• Cualificación y validación Revalidación45.Lasinstalaciones,sistemas,equiposyprocesos,incluidalalimpieza,seeva-luarán periódicamente para confirmarque siguen siendo válidos. Cuando nose hayan producido cambios significa-tivos respecto al estado validado, estanecesidadderevalidaciónsecubriráconunarevisiónquedemuestrequelasins-talaciones,sistemas,equiposyprocesos

Tener un plan de validación de limpieza para los procedimientos de limpieza de la planta es una de las actividades que nos agre-ga valor, pues nos da seguridad sobre los productos que estamos elaborando,

Lic. Biunayki Reyes Díaz1*, Ing Caridad A Gasmuri González1, MSc Gudelia Pérez2, MSc Ania Díaz Ferrer2, Lic Yadira Mora López2, Téc. Noelia Baltrell Mena1, Tec Suanai Brown Valdés1, Tec Amaury Hierrezuelo Malber-ty1, Tec Mirelys Cespedes Pérez1, Tec Dayanna Ramos Pérez1, Ing. Lazaro Sánchez González1, Tec Caridad E Isla1, Téc Dorelis Ortiz1, Téc Olga L Gonzalez1, y Lic. Luciano Francisco Hernández3. 1Departamento Control de Procesos. Grupo Control Mi-crobiológico, 2Dirección Aseguramiento de la Calidad. 3Dirección de Producción. Centro de Ingeniería Genéti-ca y Biotecnología P.O. Box 6162, Habana 10600, Cuba

Áreas Limpias, control e higienización después de un cambio

Tabla 1. Concentración de partículas en el aire permitidas para cada grado de clasificación de las áreas.

Tabla 2. Clasificación de aire de áreas limpias y niveles de acción recomendados para la calidad microbiológica. “Guía de Normas de Correcta Fabricación de Medicamentos de Uso Humano y Veterinario Anexo I Fabricación de medicamentos estériles. Agencia

española de medicamentos y productos sanitarios, 2009”.

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cumplenlasexigenciasobligatorias.• Health Products and Food Branch Ins-

pectorate Guidance Document Cle-aningValidationGuidelinesDateissued:2000-05-01 Date of implementation:2000-05-01

• 7.0 Documentation A cleaning valida-tion protocol should describe the pro-cedure used to validate the cleaningprocess.Itshouldincludeinadditiontootherinformation….acceptancecriteriawith rationalesandconditions for reva-lidation.La revalidación está fraccionada en dos

categorías:1. La revalidación después de algún cam-

bio.2. La revalidación periódica.

En la categoría anterior, los cambios ca-racterísticos que requieren revalidación incluyen cambios en una materia prima o el material de envase, los cambios en los parámetros del proceso, los cambios en el equipo, incluidas reparaciones mayores y los cambios en los locales

Los cambios en un proceso de limpieza validado, y los cambios en un proceso de fabricación o equipos que pueden afectar a un proceso de limpieza validado, deben hacerse de conformidad con los procedi-mientos aprobados para el control de cam-bio. Este cambio puede dar lugar a pruebas adicionales para demostrar que los proce-sos de limpieza permanecen en un estado de control.

Aunque es un requerimiento regulatorio designado formalmente y bien reconocido, la validación de la limpieza continúa siendo un problema para muchos fabricantes e ins-pectores. Puede ser una exigencia compleja, ya que requiere de una comprensión profun-da del proceso, materiales, y los productos químicos involucrados en la limpieza.

Para un mejor entendimiento de estos procesos damos a conocer algunas consi-deraciones importantes para llevar a cabo una tarea como la de reevaluar el proceso de limpieza e higienización de una área lim-pia, después de producido algún cambio.

Primero refrescaremos algunos términos importantes: Validación de limpieza: prueba documenta-da de que un procedimiento de limpieza consistentemente reducirá los residuos de ingredientes farmacéuticos activos (IFA), los agentes de limpieza (AdL) y sa-nitización, las endotoxinas bacterianas y la carga microbiana en las superficies de los equipos, que tienen contacto directo con

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el producto, a niveles aceptables para el procesamiento de medicamentos.ReValidación: Repetición de la validación de limpieza para garantizar que los cam-bios introducidos de conformidad con los procedimientos de control de cambios no afectan negativamente el procedimiento de limpieza.contRol de cambios: Procedimiento escrito que describe la(s) acción(es) a tomar si se propone un cambio de instalaciones, ma-teriales, sistemas, equipos y/o procesos usados en la fabricación, envasado o en-sayo de un producto farmacéutico o que puede afectar la operación del sistema de gestión de la calidad o de apoyo. Su obje-tivo es determinar las acciones necesarias para garantizar y documentar que el siste-ma se mantiene en un estado validado.limpieza: Se define como el grado de acep-tación de sustancias, partículas y microor-ganismos no deseables cuyo efecto sea adverso al producto o proceso.Higienización: Proceso que se realiza en las áreas limpias clasificadas con vistas a re-ducir la contaminación microbiológica a un nivel permisible según los resultados histó-ricos del control o a un nivel de referencia según los establecidos.ÁRea limpia: Área que cuenta con un control definido del ambiente respecto a la con-taminación microbiana o por partículas, con instalaciones construidas y usadas de tal manera que se reduzca la introducción, generación y retención de contaminantes dentro del área.plan de monitoReo: Este debe establecerse por medio de una Evaluación del Riesgo y con base en el tipo de instalación, las posi-bles causas de contaminación y el impacto de la contaminación en el producto o pro-ceso, que se lleva a cabo en el cuarto.

Clasificación de salas limpias y dispositivos de aire limpioLas salas limpias y los dispositivos de aire limpio deben clasificarse según la norma

EN ISO 14644-1. La clasificación debe diferenciarse claramente de la monitori-zación ambiental del proceso en funciona-miento. En la tabla 1 se muestra la máxima concentración de partículas en el aire per-mitidas para cada grado.Para clasificar las zonas en grado A debe tomarse en cada punto de muestreo un volumen mínimo de muestra de 1 m3. Para el grado A, la clasificación de partículas del aire es la ISO 4.8 que indica un límite de tamaño de partícula ≥ 5,0 μm. Para el grado B (en reposo), la clasificación de partículas del aire es la ISO 5 para los dos tamaños de partículas considerados; Para el grado C (en reposo y en funcionamiento), la clasifi-cación de partículas del aire es la ISO 7 y la ISO 8, respectivamente. Para el grado D (en reposo), la clasificación de partículas del aire es la ISO 8. La norma EN/ISO 14644-1 describe la metodología a seguir a la hora de clasificar, la cual define el número míni-mo de puntos de muestreo y el tamaño de la muestra, basados en el límite de clase para el mayor tamaño de partícula tomada en consideración y en el método de evalua-ción de los datos recogidos.

Es impráctico y caro establecer un míni-mo de puntos a monitorear basado exclu-sivamente en el área del cuarto en m2. Este método trabaja para la certificación, sin embargo deben establecerse lineamien-tos independientemente del proceso y con base en la Evaluación del Riesgo siendo ex-tremadamente importante para determinar qué y donde monitorear.

El enfoque del programa de pruebas es monitorear el desempeño de una ins-talación, con el propósito de identificar cambios significativos en la eficiencia. Este

proceso asegurará que los cambios pueden evaluarse, antes de que se conviertan en una fuente de contaminación importante, que afecte la calidad, productividad y ren-dimiento.

Las designaciones ISO 14644-1 propor-cionan los valores uniformes de concen-tración de partículas para áreas limpias en múltiples industrias. Una concentración de partículas ISO 5 es igual a una Clase 100 y aproximadamente igual a un Grado A de la Unión Europea.

Límites recomendados para la monitori-zación microbiológica de las zonas limpias “en Operación” y en descanso”. Según “European Medicines Agency”

Cuando se realicen operaciones asépti-cas, la monitorización debe ser frecuente utilizando métodos como placas de sedi-mentación, muestreo volumétrico del aire y de superficies (por ejemplo, hisopos y placas de contacto). Los métodos de mues-treo utilizados “en funcionamiento” no de-ben interferir en la protección de la zona. Los resultados de la monitorización deben estudiarse al revisar la documentación del lote para la liberación del producto termi-nado. Las superficies y el personal deben supervisarse tras las operaciones críticas. También es necesario realizar una monito-rización microbiológica adicional distinta a la de producción como, por ejemplo, tras la validación de sistemas, limpieza y desin-fección.

Revalidaciones / Control de Cambios • Los protocolos deben establecer cuan-

do se necesitará realizar la revalidación del sistema o de un proceso.

• La revalidación está vinculada al control de procesos y el control de cambios

“el desafío es manteneR el pRoceso Validado”

Los cambios son inevitables y siempre aca-barán por aparecer. Se deben identificar las fuentes y mantener procedimientos ade-

Tabla 3. Tabla de Ejemplo de operaciones para preparación aséptica

Tabla 4.

La vaLidación es una parte esenciaL de Las Buenas prácticas de FaBricación

cuados para su control. La complejidad de los procesos y la exigencia de mantenerse al día para ser competitivo se traducen en una mayor necesidad de cambios.

Existe un procedimiento escrito para des-cribir las acciones que se deben realizar si se propone un cambio en el entorno (o la insta-lación) de fabricación, el método de limpieza e higienización, o cualquier otro que pueda afectar a la calidad del producto.

Si los cambios puede que influyan en la calidad del producto se solicitarán, do-cumentarán y aceptarán formalmente. Se evaluará y se hará un análisis de riesgos de los posibles efectos que sobre el producto originaría un cambio de instalaciones, sis-temas o equipos. Deberá determinarse la necesidad de una nueva revalidación, y el alcance de la misma.

Los procedimientos de limpieza e higie-nización, se evaluarán periódicamente para confirmar que siguen siendo válidos cada 2 años. Cuando no se hayan producido cambios significativos respecto al estado validado, esta necesidad de revalidación

se cubrirá con una revisión estadística his-tórica que demuestre que los procesos de limpieza cumplieron en el período analiza-do las exigencias y criterios de aceptación pre-establecidos.

Calificación en Proceso En este punto el procedimiento puede ser realizado teniendo en cuenta el Pro-tocolo de la Validación de limpieza e hi-gienización, que anterior al cambio ya fue aprobado por Aseguramiento de Calidad, solamente se reajustaron los puntos a muestrear pues al ampliar el área y aumen-tar por ejemplo la cantidad de paredes, puertas, mesas de trabajo y otros materia-les que anteriormente no existían, la selec-

ción de los puntos a ser muestreados debe ser reajustada, con la inclusión de nuevos puntos.

El Diseño experimental para realizar el procedimiento pudiera ser de la siguiente forma:

Inicialmente, antes de la limpieza, se rea-liza un muestreo por placa de contacto de cada uno de los puntos definidos en la Hoja de Datos diseñada para la recogida de es-tos (ver Tabla 4).

Para la realización de la validación y reva-lidación de higienización y limpieza de las áreas el diseño sería: 1. La limpieza será supervisada por el Jefe

de la planta a ser validada. 2. La frecuencia de limpieza será la habi-

tual acorde al Programa de Higieniza-ción y Limpieza y los Procedimientos y el muestreo de las superficies de las áreas y del equipamiento será de 3 veces, te-niendo en cuenta que hasta el momento es lo generalmente se utiliza para definir el proceso validado, al menos en cuanto limpieza se refiere:

La vaLidación de La Limpieza continúa siendo un proBLema para muchos FaBricantes e inspectores

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• Muestrear antes de la limpieza e hi-gienización

• Muestrear 1 hora después de la lim-pieza e higienización

• Muestrear 8 y 10 horas después de la limpieza e higienización para demos-trar la conservación de la limpieza en el tiempo. Se considerará adecuada la conservación de la limpieza si para todos los puntos se cumple el crite-rio de aceptación una vez transcurrida las 24 horas, coincidiendo con la hora cero del día siguiente de realizada la limpieza e higienización

3. Se tomará la correspondiente muestra de la solución desinfectante a preparar según lo establecido en el procedimien-to de preparación de soluciones

4. Se realizará este monitoreo por 3 días consecutivos quedando de la siguiente forma El criterio de aceptación es el cumpli-

miento, en todos los puntos, del criterio establecido para superficies en correspon-dencia con la clasificación del área (Clase A, < 3 UFC/25cm2, Clase B, < 5 UFC/25cm2 y Clase C, < 25 UFC/25 cm2). Para la superfi-cie exterior de las cortinas de flujos lamina-res de techo; así como de las cabinas, los límites estarán en correspondencia con el área que rodee a las mismas.

¿Qué método es el utilizado para el mo-nitoreo de las superficies?

Control Microbiológico de Superficies El control microbiológico de superficie nos proporciona información sobre la cantidad de microorganismos presentes sobre una superficie, la cual puede ser un equipo, mesa, ropa, manos del personal, etc.

Esta evaluación generalmente se hace utilizando: Placas de contacto (RODAC)

Las placas de contacto o RODAC (Re-plicate Organism Direct Agar Contact) son placas de 55-60 mm de diámetro llenas con medio de cultivo hasta obtener una superfi-cie convexa. Estas placas pueden prepara-se en el laboratorio o adquirirse comercial-mente, en nuestra industria contamos con un grupo de trabajo que están altamente especializados en la preparación de las placas, recientemente publicamos nuestro trabajo en LifeScienceLab correspondiente al #006 Sept-Oct “Evaluación de la produc-tividad de dos medios de cultivo para el muestreo ambiental microbiológico”

¿Cómo Procesar los Datos Obtenidos? El resultado de los Controles Microbioló-

gicos se expresa en Unidades formadoras de Colonias (UFC), esta medida no es apta para Gráficos de Controles convenciona-les, ya que en general la presencia de mi-croorganismos no es un fenómeno lineal, si no que es muy dependiente de la natu-raleza del Microorganismo, de la presencia de ellos y de su capacidad de crecimien-to. Cuando observamos los resultados de control ambiental gran cantidad de estos resultados son igual a “0” ufc, con algunos valores intercalados de 1 y de vez en cuan-do algún valor anormalmente alto (150) (en la siguiente tabla ponemos un ejemplo de esto valores), por lo tanto calcular me-dia y desviación estándar típica con tales conjuntos de valores carece de significado físico real.

Todo esto nos hace que su estadística sea un poco difícil, pero no imposible. Uno de los métodos que usamos más frecuente son los No paramétricos con comparación de múltiples variables, mediante el paquete estadístico STATGRAPHICS Centurión ver-sión XV.

Empleando Pruebas de Wruskal-Wallis y Friedman las cuales son una alternativa para el análisis estándar de varianzas que compara medianas de grupo en lugar de medias; esta prueba es mucho menos sen-

sible a la presencia de puntos lejanos que lo que es una ANOVA de una vía y debe usarse cada vez que la suposición de nor-malidad dentro de las muestras no sea ra-zonable.

Según escribió Flickinger en “Pharma-ceutical Formulation and Quality” (1996); “La Validación de Limpieza suena lo sufi-cientemente simple, pero lo es engañosa-mente. Porque si la cantidad de enorme trabajo que es requerida para validar los procedimientos de limpieza, no es realiza-da correctamente y con adecuada planifica-ción y justificación científica, los resultados finales pudieran ser menos de lo que es pretendido. Y esto se convierte en tiempo y dinero perdido”. El resultado final es que lo van a tener que repetir todo de nuevo.

Conclusión Tener un plan de validación de limpieza para los procedimientos de limpieza de la planta es una de las actividades que nos agrega valor, pues nos da seguridad sobre los productos que estamos elaborando, debemos seguir la secuencia correcta de las actividades, que cada paso que damos nos agregue valor.

La validación de limpieza provee el signi-ficado de probar que los niveles de conta-minación han sido reducidos por debajo de los límites de aceptación establecidos.

El programa de validación de limpieza debería contener un programa de monito-reo racional para mantener el estado vali-dado.

La buena preparación y una apropiada implementación de las herramientas de la validación de limpieza (matrices y tablas) es un factor determinante para el éxito del programa de validación de limpieza.

Bibliografía

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2. Annexes to EU GMP Guide to Good Manufacturing Practice for Medicinal Products. Pharmaceutical Inspection Convention. Pharmaceutical Inspection Co-operation Scheme. PE 009-6 (Annexes), 5 April 2007.

3. WHO Expert Committee on Specifications for Pharmaceutical Preparations. Fortieth Report. Geneva, World Health Organization, 2006, Annex 2 (WHO Technical Report Series, No. 937).

4. International Clean room Standards, ISO 14644. Geneva, International Organization for Standardization.

5. PROYECTO de Norma Oficial Mexicana PROY-NOM-059-SSA1-2004 (modifica a la NOM-059-SSA1-1993, publicada el 31 de julio de 1998).

6. ISPE Pharmaceutical Engineering Guides for New and Renovated Facilities. Vol. 3 Sterile Manufacturing Facilities, 1st Ed. January 1999.

7. Flickinger B. “Charting a Course for Cleaning Validation”. The Best of Pharmaceutical Formulation and Quality (1996): www.pharmaquality.com/ validatn.html.

8. QassureNews. Boletín No33- marzo-abril 2007

Tabla 5. Ejemplo de un área Clase C muestreado por placa de contacto, para evaluar higienización del área, trabajo publicado en FarmaEspaña Industrial mayo-junio, 2009.

Tabla 6.

Los procedimientos de Limpieza e higienización, se evaLuarán periódicamente para conFirmar que siguen siendo váLidos cada 2 años

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