AVIJARNA KLAMIDIOZA KOD DIVLJIH PATKI (Anas · PDF filekombinaciji sa drugim infekcijama kao...
Transcript of AVIJARNA KLAMIDIOZA KOD DIVLJIH PATKI (Anas · PDF filekombinaciji sa drugim infekcijama kao...
Šatrović E. i sar.: Avijarna klamidioza kod divljih patki (Anas platyrhynchos) u Bosni i Hercegov…
Veterinaria 59 (1-4), 21-28, Sarajevo 2010. 21
AVIJARNA KLAMIDIOZA KOD DIVLJIH PATKI (Anas platyrhynchos) U
BOSNI I HERCEGOVINI
AVIAN CHLAMYDIOSIS IN WILD DUCKS (Anas platyrhynchos) IN
BOSNIA AND HERZEGOVINA
Šatrović E., Rešidbegović Emina, Hadţiomerović Z., Krkalić Lejla, Goletić
T., Kavazović Aida, Dţaja P., Vegara M.3
Abstract – Between 2007 and 2008, we carried out a non-selective research of
avian chlamydiosis in the ducks in the area with extensive population of birds where
hunting is highly developed. Of note is this was the first time avian chlamydiosis was
diagnosed in the wild ducks in BiH.
The samples were provided through the hunting associations during the ducks-
hunting season.
3 Dr. sc. Šatrović Edin, DVM, docent, Katedra za sudsko i upravno veterinarstvo,
Veterinarski fakultet Univerziteta u Sarajevu, Bosna i Hercegovina ( [email protected] );
dr.sc. Rešidbegović Emina, DVM, redovni profesor, Katedra za uzgoj, proizvodnju i zdravstvenu
zaštitu u peradarstvu, Veterinarski fakultet Sarajevo, dr.sc. Hadţiomerović Zijah, DVM, redovni
profesor, Katedra za sudsko i upravno veterinarstvo, Veterinarski fakultet Sarajevo; dr.sc. Krkalić
lejla, DVM, volonter na Katedri za sudsko i upravno veterinarstvo, Veterinarski fakultet Sarajevo,
Goletić Teufik, DVM, docent, Katedra za uzgoj, proizvodnju i zdravstvenu zaštitu u peradarstvu,
Veterinarski fakultet Sarajevo; dr. sc. Aida Kavazović, DVM, docent, Katedra za hranu i ishranu
domaćih ţivotinja, Veterinarski fakulteta Sarajevo, dr.sc. Petar Dţaja DVM, redovni profesor,
Zavod za upravno i sudsko veterinarstvo, Veterinarski fakultet Zagreb, Republika Hrvatska; dr.sc.
Vegara Mensur, vanredni profesor, Univerzitet nauka o ţivotu, Oslo, Norveška.
Šatrović Edin, DVM, PhD, Assistant Professor, Department of State and Forensic
Veterinary Medicine; Veterinary Faculty Sarajevo, Bosnia and Herzegovina
([email protected]); Rešidbegović Emina, DVM, PhD, Professor, Department of Poultry
Breeding, Production and Health Care, Veterinary Faculty Sarajevo; Hadţiomerović Zijah, DVM,
PhD, Professor, Department of State and Forensic Veterinary Medicine; Veterinary Faculty
Sarajevo; Krkalić Lejla, DVM, volunteer at Department od state and forensic veterinary medicine,
Veterinary Faculty Sarajevo, Goletić Teufik, DVM, PhD, Assistant Professor, Department of
Poultry Breeding, Production and Health Care, Veterinary Faculty Sarajevo; Aida Kavazović,
DVM, PhD, Assistant Professor, Department of Feed & Nutrition of Domestic Animals, Veterinary
Faculty Sarajevo; Dţaja Petar, DVM, PhD, Professor, Department of State and Forensic Veterinary
Medicine; Veterinary Faculty Zagreb, Croatia; Vegara Mensur, PhD, Professor, University of Life
Science, Oslo, Norway.
Šatrović E. i sar.: Avijarna klamidioza kod divljih patki (Anas platyrhynchos) u Bosni i Hercegov…
22
We examined a total of 59 samples of cloacal and oropharingeal swabs of the
wild ducks by the following diagnostic methods: bacteriological, ELISA test for the
detection of antigen, EIA test, and rRT-PCR test.
To avoid false-positive results, we first did bacteriological examination followed
by testing cloacal samples by ELISA and EIA tests. Samples positive by ELISA and EIA
tests were then sent to the reference laboratory in the Friedrich Loeffler Institute in Jena
(Germany) for the rRT-PCR detection of Cp. psittaci.
Of the total of 59 cloacal swabs examined by ELISA (IDEIA) and EIA (CW)
method for the detection of antigen, seven (11.9%) tested positive. Of the total of seven
samples that tested positive by ELISA (IDEIA) and EIA methods, two (28.6%) were
positive by rRT-PCR method.
The aim was to investigate the presence of avian chlamydiosis in the ducks in
Bosnia and Herzegovina.
Key words: avian chlamydiosis, ducks
Kratak sadrţaj - U periodu od 2007. do 2008. godine radili smo neselektivno
istraţivanje prisustva avijarne klamidioze kod patki i to u podruĉju gdje je ova populacija
ptica brojna i gdje je shodno s tim, razvijena i lovna aktivnost. Bitna je ĉinjenica da je
prvi puta raĊena dijagnostika avijarne klamidioze kod ove vrste ptica u BiH.
Materijal smo obezbijedili putem lovaĉkih udruţenja tokom sezone lova na ovu
vrstu ptica.
Ukupno smo pretraţili 59 uzoraka kloakalnih i faringealnih briseva divljih patki
i pri tome koristili sljedeće metode pretrage: bakteriološka pretraga uzoraka, ELISA test
za dokaz antigena, EIA test, rRT-PCR metoda.
Da bismo izbjegli laţno-pozitivne rezultate, prvo smo uradili bakteriološku
pretragu, a potom testirali kloakalne uzorke ELISA i EIA testovima za dokaz antigena.
Pozitivne uzorke smo poslali u referentnu laboratoriju na Institut Friedrich Loeffler u Jeni
(Njemĉka) na rRT-PCR postupak za dokazivanje Cp. psittaci.
Od ukupno pretraţenih 59 kloakalnih uzoraka briseva ELISA (IDEIA) i EIA
(CW) testovima za dokaz antigena, sedam (11,9%) bilo je pozitivno. Od ukupno
pretraţenih sedam uzoraka divljih patki koji su bili ELISA (IDEIA) i EIA testovima
pozitivni, dva (28,6%) bilo je pozitivno rRT-PCR metodom.
Cilj rada je istraţiti prisustvo avijarne klamidioze kod patki u Bosni i
Hercegovini.
Kljuĉne rijeĉi: avijarna klamidioza, patke
Šatrović E. i sar.: Avijarna klamidioza kod divljih patki (Anas platyrhynchos) u Bosni i Hercegov…
Veterinaria 59 (1-4), 21-28, Sarajevo 2010. 23
Uvod
Prema navodu Schachtera (11), klamidioza je oboljenje koje je prvi put opisano
1874. godine od strane Juergensena, dok je Ritter 1879. spoznao da se radi o zoonozi. Od
klamidioze obolijevaju brojne vrste ptica te domaći i divlji sisari.
Povećano zanimanje za klamidijalnim infekcijama poĉelo je nakon izbijanja
epizootije 1929. do 1930. godine u Velikoj Britaniji i susjednim drţavama kada je
oboljelo preko 1000, ljudi od ĉega 300 sa smrtnim ishodom (5, 16).
Osim divljih ptica, vaţni rezervoari i prenosioci avijarne klamidioze su i domaća
perad. Veće enzootije u intenzivnom uzgoju peradi zabiljeţene su kod ćurki i patki u
Evropi: Ĉeškoj, Slovaĉkoj, Danskoj, Velikoj Britaniji (2), Njemaĉkoj i MaĊarskoj (5).
Poznato je devet serotipova Cp. psittaci kao i to da su svi prenosivi na ljude
(20).
Prema Kaleti i Tadayu (6), Cp. psittaci dokazana je kod 469 razliĉitih vrsta
ptica, od ĉega je najveća prevalenca kod sljedećih vrsta:
galebovi (Laridae) 28%;
pingvini (Alcidae) 26%;
vodene ptice (Sphenisciformes) 25%;
patke (Anseriformes) 21%.
Klamidioza kod patki, golubova i nekih psitacinih vrsta ĉesto se javlja u
kombinaciji sa drugim infekcijama kao što je salmoneloza, kada je mortalitet visok, a
klamidije se izluĉuju u velikom broju (1).
Zabiljeţen je veći broj infekcija patki u Evropi (4). Serotipizacijom izoliranih
sojeva ustanovljeno je da su svi pripadali serotipu C (14).
Ruppaner i sar. (9) testirali su veću populaciju divljih ptica kada su, izmeĊu
ostalih, kod patki ustanovili 88% serološki pozitivnih uzoraka.
Klamidioza kod ekstenzivnog uzgoja patki je, uglavnom, teško i ĉesto fatalno
oboljenje naroĉito mlaĊih jedinki. Kod njih dolazi do pojave tremora, nekoordinisanih
pokreta i kaheksije. Ptice su anorektiĉne sa zelenkastovodenim prolivom. Ĉesto je
prisutan serozni ili purulentni iscjedak iz oĉiju i nosnica, što uzrokuje zaprljanost perja
glave sa eksudatom. Napredovanjem bolesti patke postaju iscrpljene i ugibaju u
konvulzijama (12).
Morbiditet se kreće od 10-80%, a mortalitet do 30%, ovisno o starosti i prisustvu
infekcija salmonelama (1).
Zabiljeţene su i brojne infekcija patki u Evropi i Australiji gdje su kliniĉki znaci
bili slabo izraţeni ili ih nije bilo uopće (7, 4). Kliniĉki znaci kao i uginića dovode se u
vezu sa stresnim situacijama kao i istovremenim infekcijama drugim patogenima.
Kliniĉki znaci klamidioze ptica su nespecifiĉni te je diferencijalno dijagnostiĉki
potrebno iskljuĉiti avijarnu influencu, aspergilozu, koleru peradi i infekciju Mycoplasma
gallisepticum (1, 18).
Šatrović E. i sar.: Avijarna klamidioza kod divljih patki (Anas platyrhynchos) u Bosni i Hercegov…
24
Cilj rada je da istraţimo prisustvo avijarne klamidioze kod patki u Bosni i
Hercegovini, obzirom da ne postoje epizootiološki podaci o ovom oboljenju kod ove
vrste ptica.
Materijal i metode
Istraţivanja avijarne klamidioze kod patki u Bosni i Hercegovini raĊena su u
periodu 2007. i 2008. godine i to na podruĉju Posavine i Istoĉne Bosne. Materijal je
obezbijeĊen uz pomoć lovaĉkih društava tokom sezone lova. Ukupno smo pretraţili 59
kloakalnih i faringealnih uzoraka briseva.
Svi uzeti uzorci kloakalnih i faringealnih briseva uronjeni su u saharozno-
fosfatni pufer (2SP) i pohranjeni na -20 0C do pretrage.
Uzorci su najprije podvrgnuti bakteriološkoj pretrazi na uzroĉnike iz roda
Salmonella spp. i Streptococcus spp., uobiĉajenim bakteriološkim postupcima, a radi
izbjegavanja unakrsne reakcije obzirom da klamidijalni LPS antigen dijeli neke epitope
sa drugim gram-negativnim bakterijama koji mogu izazvati unakrsnu reakciju
rezultirajući u velikom broju laţno-pozitivnim rezultatima (19).
Od dijagnostiĉkih postupaka koristili smo testove za dokaz antigena – Enzimsko
imunološki test Clearview (EIA - CW ) i Enzime Lynked Immunosorbent Assay - ELISA
(IDEIA) kao i molekularno-biološke pretrage – Real Time Polymearse Chain Reaction -
rRT-PCR.
Clearview (Clearview Chlamydia test, Unipath Limited, England) je
komercijalni test, namijenjen za direktno dokazivanje C. trachomatis kod ljudi.
Upotrebljiv je i za direktni dokaz LPS antigena klamidija kod ptica (15). Test smo
koristili kao brz, osjetljiv, orijentacijski i specifiĉan dijagnostiĉki postupak za dokaz LPS
antigena klamidija u uzorcima kloakalnih briseva ptica.
Komercijalnim ELISA-IDEIATM PCE Chlamydia kompletom proizvoĊaĉa
DAKO Ltd., United Kingdom radili smo test na prisustvo antigena u uzorcima kloakalnih
briseva ptica. Ovaj test se takoĊer koristi za otkrivanje antigena kod humanih infekcija.
Obzirom da je namijenjen za otkrivanje LPS antigena, podesan je i za otkrivanje svih
vrsta klamidija, pa se test moţe koristiti i kod ptica, mada mu ponekad nedostaje
senzitivnost (3).
Iz kloakalnih briseva ptica, kod kojih smo ustanovili prisustvo klamidija ELISA
i EIA metodom, izolirali smo genomsku DNK. Za ovaj postupak koristili smo QIAamp®
DNA Mini Kit (Qiagen). Postupak je izveden prema uputstvu proizvoĊaĉa.
Detekcija Cp. psittaci rRT-PCR metodom izvršena je u OIE Reference
Laboratory for Chlamydioses, Friedrich – Loeffler – Institut (Federal Research Institute
for Animal Health, Jena, Germany), a u okviru SEE-ERA.NET Project-a (20).
Ova laboratorijska tehnika zasnovana je na PCR reakciji koja se koristi za
amplifikaciju i istovremenu kvantifikaciju ciljne DNK molekule. Ovom metodom se
Šatrović E. i sar.: Avijarna klamidioza kod divljih patki (Anas platyrhynchos) u Bosni i Hercegov…
Veterinaria 59 (1-4), 21-28, Sarajevo 2010. 25
istovremeno omogućava kako detekcija tako i kvantifikacija specifiĉne DNK sekvence u
uzorku.
Naĉin izvoĊenja rRT-PCR postupka opisan je od strane Pantcheva i sar. (8).
Rezultati
Bakteriološkom pretragom 59 kloakalnih i faringealnih uzoraka briseva divljih
patki nije utvrĊeno prisustvo uzroĉnika iz roda Salmonella spp. i Streptococcus spp.
Od ukupno pretraţenih 59 kloakalnih uzoraka briseva ELISA (IDEIA) i EIA
(CW) testovima za dokaz antigena, sedam (11,9%) bilo je pozitivno (graf. 1).
Od ukupno pretraţenih sedam uzoraka divljih patki koji su bili ELISA (IDEIA) i
EIA testovima pozitivni, dva (28,6%) bilo je pozitivno rRT-PCR metodom (dijagr.1 i 2).
Dijagram 1: Amplifikacijski dijagram analize ompA gena za Cp. psittaci uzorka br. 5 (divlja patka).
Diagram 1: Amplification diagram of analysis of ompA genes of Cp. psittaci in Sample no. 5 (wild
duck).
Dijagram 2: Amplifikacijski dijagram analize ompA gena za Cp. psittaci uzorka br. 16 (divlja patka).
Diagram 2: Amplification diagram of analysis of ompA genes of Cp. psittaci in Sample no. 16 (wild
duck).
Diskusija
Šatrović E. i sar.: Avijarna klamidioza kod divljih patki (Anas platyrhynchos) u Bosni i Hercegov…
26
Poseban znaĉaj u lancu prenošenja avijarne klamidioze imaju divlje ptice.
Poznato je da se izolirani uzroĉnici oboljenja ne smatraju patogenim za domaćina, ali
mogu biti visokopatogeni za druge vrste ptica, ţivotinja, ali i za ljude. Uzroĉnik kod
divljih ptica izaziva trajne infekcije sa periodiĉnim emisijama uzroĉnika u spoljnu
sredinu, ĉime se omogućava širenje istog i na druge vrste ţivotinja i ljude.
Istraţivanja smo provodili u onim podruĉjima Bosne i Hercegovine gdje je veća
koncentracija ispitivanih ptica kao što su vodeni tokovi kao mjesta naseljavanja, prije
svega divljih patki. Uz takav izbor, uzeli smo u obzir i zastupljenost lovnih aktivnosti na
tom podruĉju, kako bi ukazali na opasnost inficiranja ljudi.
Enzimsko-imunološkim dijagnostiĉkim postupcima za dokazivanje antigena iz
roda Chlamydophila (ELISA i CW testovima) koji se koriste za dokaz LPS klamidijalnog
antigena i njihova podudarnost u rezultatima nesumnjivo ukazuje na prisustvo
klamidijalnog uzroĉnika u ispitivanim uzorcima kloakalnih briseva. Uzimajući u obzir da
je LPS antigen zajedniĉki za sve vrste klamidija, ovim testovima nije moguće
determinisati o kojoj vrsti klamidija se radi.
Real-time PCR je dokazana, efikasna dijagnostiĉka tehnika za brzu, specifiĉnu i
senzitivnu dijagnostiku klamidijalnih infekcija (10).
Senzitivnost i specifiĉnost ove metode direktno su ovisne o proceduri pripreme
uzorka, ekstrakciji DNK i njenog eventualnog transporta te korištenog PCR testa (8).
Senzitivnost korištenog rRT-PCR metoda (8) uvećana je odabirom relativno
kratke sekvence (76 bp) ompA gena Cp. psittaci dok je efikasnost testa ispitana
korištenjem desetorostrukih razrjeĊenja interne kontrole.
U našim ispitivanjima pod pozitivnim rezultatima podrazumijevali smo jasan i
adekvatan amplifikacijski signal od 34 ciklusa amplifikacije. Ovakvo opredjeljenje
rezultat je utvrĊenog inicijalnog broja DNK u uzorku dobijenog na osnovu poznatog
inicijalnog broja DNK molekula interne kontrole, te njenih odgovarajućih razrjeĊenja.
Za ispitivanje rRT-PCR metodom korišteni su uzorci koji su prethodno bili
pozitivni ELISA (IDEIA) i CW testovima. Od sedam uzoraka divljih patki, dva (28,6%)
su bila pozitivna.
Kada su u pitanju divlje ptice i ptice koje su prisutne u urbanim sredinama,
neophodan je redovni monitoring svake godine s ciljem praćenja epizootiološke situacije
i poduzimanja mjera s ciljem sprjeĉavanja širenja infekcije na druge vrste ţivotinja,
komercijalnu perad i posebno na ljude.
Zakljuĉci
Prvi put na podruĉju Bosne i Hercegovine dokazali smo prisustvo uzroĉnika iz
roda Chlamydophila kod divljih patki (Anas platyrhynchos).
Od ukupno 59 pretraţenih kloakalnih briseva patki, ELISA i EIA testovima,
dokazali smo prisustvo patogena kod sedam (11,9%), dok rRT-PCR metodom
od ukupno pretraţenih pet uzoraka, dva (28,6%) su bila pozitivna respektivno.
Šatrović E. i sar.: Avijarna klamidioza kod divljih patki (Anas platyrhynchos) u Bosni i Hercegov…
Veterinaria 59 (1-4), 21-28, Sarajevo 2010. 27
Obzirom da divlje ptice predstavljaju znaĉajne rezervoare i prenosioce Cp.
psittaci, neizostavno je provoditi uzgoj komercijalne peradi u strogo
kontroliranim uvjetima ĉime se sprjeĉava ili minimizira kontakt sa divljim
pticama.
Jedini model u prevenciji pojave klamidioze kod ljudi, kada su u pitanju
divlje/lovne ptice, jeste edukacija ljubitelja lova o avijarnoj klamidiozi kao
veoma opasnoj zoonozi, kao i stalni nadzor nad divljim/lovnim pticama.
LITERATURA
1. Andersen AA and Vanrompay D. Avian Chlamydiosis. OIE Rev. Sci. Tech.
2000; 19 (2): 396-404.
2. Andrews BE, Major R and Palmer SR. Ornithosis in poultry workeres. Lancet 1.
1981; (8221): 632-634.
3. Arizmendi F, Grimes JE. Comparison of the Gimenez staining method and
antigen detection ELISA with culture for detecting chlamydiae in birds. Journal
of Diagnostic Investigation. 1995; 7:400-401.
4. Bennedsen JN, Filskov A. An outbreak of psittacosis among employees at a
poultry abbatoir. Proceedings of the Fourth Meeting of the European Society for
Chlamydia Research: Helsinki, Finland. 2000; 315.
5. Eugster AK. Chlamydiosis.In: Handbook series in zoonoses. Boca Raton: crc
Press. 1980; vol. 2: 357-431.
6. Kaleta EF, Taday MA. Avian host range of Chlamydiophila spp. based on
isolation, antigen detection and serology. Avian Pathol. 2003; 32(5), 435-462.
7. Newman CP, Palmer SR, Kirby FD, Caul EO. A prolonged outbreak of
ornithosis in duck processors. Epidemiology and Infections. 1992; 108:203-210.
8. Pantchev A, Sting R, Bauerfeind R, Tyczka J, Sache K. New real-time PCR test
for species-specific detection of Chlamydophila psittaci and Chlamydophila
abortus from tissue samples. The Veterinary Journal. 2008;
doi:10.1016/j.tvjl.2008.02.025.
9. Rupanner R, Behymer DE, Delong WJ et al. Enzyme immunoassay of
chlamydia in birds. Avian Dis. 1984; 28: 608-15.
10. Sache K, Longbottom D et all. Recent progress in research on animal
chlamydioses – A summary of COST Action 855 (2003-2008). Proceeding of
the 6th Meeting of the European Society for Chlamydia Research. 2008.
11. Schachter J. Chlamydial infections – past, present, future. J Am Vet Med Assoc.
1989; 195, 1501-1506.
12. Strauss J. Microbiologic and epidemiologic aspects of duck ornithosis in
Czechoslovakia. Am J Ophtalmol. 1967; 63:1246-1259.
13. Šatrović E. Epizootiološka slika klamidioze ćurki i lovnih ptica u Bosni i
Hercegovini. Doktorska disertacija. Sarajevo, Veterinarski fakultet. 2009.
Šatrović E. i sar.: Avijarna klamidioza kod divljih patki (Anas platyrhynchos) u Bosni i Hercegov…
28
14. Vanrompay D, Ducatelle R, Haesebrouck F, Hendricks W. Primary
pathogenicity of an European isolate of Chlamydia psittaci from turkey poults.
Vet Microbiol. 1993; 38:103-113.
15. Vazquez-Cisneros C.; Wilsmore, A. J.; Bollo, E. Experimental infections of
pregnant sows with ovine Chlamydia psittaci strains. Veterinary Microbiology.
1994; 42: 4, 383-387.
16. Wills JM. Chlamydia zoonoses. J Small Anim Pract 1986; 27(10): 717-31.
17. ---: OIE. Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals. OIE
2004.
18. ---: OIE. Chlamydiosis (Avian). Paris: Office International des Epizooties 2005.
19. ---: OIE. Compendium of Measures to Control Chlamydiophila psittaci Infection
Among Humans (Psittacosis) and Pet Birds (Avian Chlamydiosis). 2008.
20. ---: SEE-ERA.NET Pilot Joint Call – Ref. No. 06-10000031/10035.
Uredništvo rukopis primilo 23.09.2010.