Avaliação externa de Qualidade de carga viral de HCV.
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Avaliação externa de Qualidade de carga viral de HCV.
Diana Mariani
2016
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A Rede Nacional de Laboratórios para Quantificação da Carga Viral do HCV
possui atualmente 56 laboratórios distribuídos pelo País.
A AEQ de carga viral do HCV tem como objetivo avaliar e certificar o
desempenho dos laboratórios participantes da Rede voltado para a melhoria
continuada.
A partir dos resultados obtidos, será possível a implementação de ações
corretivas, seja elas em relação ao equipamento ou treinamento da equipe
responsável.
Para maior estabilidade e biossegurança dos painéis, foi desenvolvido uma
linhagem celular que produz VLPs ( Virus-Like particles)
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Definição de VLP
(D. Jordan, 2012)
Vírus Influenza Partícula sintética de
Influenza semelhante
ao vírus (VLP)
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Organização genômica do HCV
Genoma de RNA de 9,6kb, polaridade positiva
Scheel TKH & Rice CM,2013
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Seleção de células Huh-7 expressando as
proteínas estruturais do HCV.
pEFJFHc-NS2
Transfecção FuGene
Células HuH-7 (hepatocarcinoma humano)
Seleção com antibiótico
Zeocina 0,2mg/mL
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Eletroporação 10µg
Células HuH-7 c-NS2(hepatocarcinoma humano)
Seleção com antibiótico
Zeocina 0,2mg/mL +
0,375 mg/mL G418
Seleção de células Huh-7 c-NS2 para empacotar o
JFH1 em VLPs.
Digestão com XbaI 37°C/ON
Precipitação e quantificação
Transcrição in vitro utilizando o kit
RiboMAX (Promega)
Purificação por Trizol
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Produção das partículas HCV like.
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Produção das partículas HCV like.
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Elaboração da AEQ.
As concentrações das amostras pertencentes a AEQ são determinadas a
partir da quantificação prévia do estoque Viral obtido.
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Elaboração da AEQ.
AEQ HCV 01 (vol 1.0ml)
Pool Código da Amostra Resultado
1
1 Não Detectável
2 5 x104 (4,7 log)
3 5 x104
4 104 (4 log)
5 2 x 103(3,3 log)
6 Não Detectável
2
7 Não Detectável
8 2 x 103
9 104
10 Não Detectável
11 104
12 2 x 103
13 5 x104
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Diluente: Plasma Negativo
desfibrinado.
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AEQ03_CV_HCV Tubo 01
2016 Temperatura de transporte 4°C Temperatura de armazenamento
-70°C
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Concentrado viral
Plasma
desfibrinado
1mL
1mL
1mL
1mL
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Transporte da AEQ.
O transporte ocorre em uma caixa de biossegurança com gelo reciclável
(4ºC), seguindo as recomendações de transporte e armazenamento da Nota
Técnica 189/2010 DST/AIDS/HV/SVS/MS e deverá chegar ao laboratório em
até 48 horas.
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Objetivos:
Avaliar a variação das médias individuais das amostras A, B e C de cada
laboratório com relação à média geral dos laboratórios participantes.
Avaliar a variação das diferenças de carga viral entre as médias
individuais das amostras A, B e C com relação à média geral das
diferenças obtidas por todos os laboratórios participantes.
Avaliar o grau de reprodutibilidade (desvio padrão das médias
individuais) da quantificação da carga viral das amostras A, B e C testadas
em cada triplicata.
Avaliar a contaminação de reações através das quatro amostras
negativas para HCV.
Avaliação da AEQ de carga viral de HCV
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Tabela 2 - Sistema de pontuação de acordo com os parâmetros analisados na AEQ02-CV-HCV
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Tabela 1 - Caracterização das amostras da CVAEQ02-HCV
Montagem dos Painéis.
Amostra Numeração dos
tubos
Carga viral (UI/mL) Carga viral (Log-UI/mL)
A Tubos 1, 8, 12 50.000 4,70
B Tubos 2, 10, 11 5.000 3,70
C Tubos 3, 6, 9, 13 2.500 3,40
D Tubos 4, 5, 7 Negativo -----
[IMK-C1]Rever toda a tabela.
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Resultados do AEQ02-CV-HCV
-18,00
-16,00
-14,00
-12,00
-10,00
-8,00
-6,00
-4,00
-2,00
0,00
2,00
4,00
6,00
8,00
10,00
12,00
14,00
16,00
18,00
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50 52 54 56
Ind
ice
de
De
svio
Pad
rão
(SD
I) d
a am
ost
ra A
Código do Laboratório
Media da Amostra A
Media
Am
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Resultados do AEQ02-CV-HCV
-3,00
-2,00
-1,00
0,00
1,00
2,00
3,00
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50 52 54 56
Ind
ice
de
De
svio
Pad
rão
(SD
I) d
a am
ost
ra B
Código do Laboratório
Media da Amostra B
Media
Bm
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Resultados do AEQ02-CV-HCV
-6,00
-5,00
-4,00
-3,00
-2,00
-1,00
0,00
1,00
2,00
3,00
4,00
5,00
6,00
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50 52 54 56
Ind
ice
de
De
svio
Pad
rão
(SD
I) d
a am
ost
ra C
Código do Laboratório
Media da Amostra C
Media
Cm
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Resultados do AEQ02-CV-HCV
-29,00-27,00-25,00-23,00-21,00-19,00-17,00-15,00-13,00-11,00
-9,00-7,00-5,00-3,00-1,001,003,005,007,009,00
11,0013,0015,0017,0019,0021,0023,0025,0027,0029,00
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50 52 54 56
Ind
ice
de
De
svio
Pad
rão
(SD
I) d
a d
ife
ren
ca A
-B
Código do Laboratório
Media da Diferenca A-B
Media
AmBm
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Resultados do AEQ02-CV-HCV
-9,00
-8,00
-7,00
-6,00
-5,00
-4,00
-3,00
-2,00
-1,00
0,00
1,00
2,00
3,00
4,00
5,00
6,00
7,00
8,00
9,00
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50 52 54 56
Ind
ice
de
De
svio
Pad
rão
(SD
I) d
a d
ife
ren
ca B
-C
Código do Laboratório
Media da Diferenca B-C
Media
BmCm
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Resultados do AEQ02-CV-HCV
0,00
0,20
0,40
0,60
0,80
1,00
1,20
1,40
1,601,802,002,20
2,40
1 3 5 7 9 1113151719212325272931333537394143454749515355
Log
Código do laboratório
Desvio padrão amostra A (Asd)
0,000,200,400,600,801,001,201,401,601,802,002,202,40
1 3 5 7 9 1113151719212325272931333537394143454749515355
Log
Código do laboratório
Desvio padrão amostra C (Csd)
0,00
0,05
0,10
0,15
0,20
0,25
0,30
0,35
1 3 5 7 9 1113151719212325272931333537394143454749515355
Log
Código do laboratório
Desvio padrão amostra B (Bsd)
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Resultados do AEQ02-CV-HCV
Laboratórios Participantes do Programa N=56 Resultado Pontuação
No de Laboratórios %
No de Laboratórios Participantes da AEQ02-CV-HCV 51 91
No de Laboratórios que obtiveram Pontuação Máxima 7 13,7
N° de Laboratórios que obtiveram 70 a 99% da Pontuação Máxima 36 70,6
No de Laboratórios com Pontuação inferior a 70% da Pontuação Máxima 4 7,8
No de Laboratórios com Contaminação 3 5,9
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Dos 56 laboratórios participantes apenas 5 não reportaram os resultados.
Um laboratório teve a AEQ entregue no setor errado.
Um laboratório teve problemas no envio de dados pelo Qualilab.
Um laboratório teve problema na calibração.
Um laboratório não possuía kit no período correspondente a AEQ.
12 laboratórios tiveram problemas de ERRO com o processamento das
amostras, sendo os mais frequentes 3118 (coágulos) e erro 4457 (erro no
controle interno).
Resultados do AEQ02-CV-HCV
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Obrigado!
Dr. AmilcarTanuri
Drª. Diana Mariani
Drª. Luciana S. Pessoa
Dr. Orlando C. Ferreira Jr
Drª. Ana Flavia N. Pires
Equipe CLAB
Drª. Maria Luiza Bazzo