Autoklaf Dan Teknik Sterilisasi
-
Upload
yulia-anggreni -
Category
Documents
-
view
258 -
download
2
Transcript of Autoklaf Dan Teknik Sterilisasi
-
7/31/2019 Autoklaf Dan Teknik Sterilisasi
1/27
AUTOKLAF DAN TEKNIKSTERILISASI
Jannah Sofi YantyJurusan Analis KesehatanPoliteknik Kesehatan Denpasar
-
7/31/2019 Autoklaf Dan Teknik Sterilisasi
2/27
STERILISASI
Sterilisasi
Usaha untukmembebaskan alat-alatatau bahan-bahan dari
segala macam kehidupan,
terutama mikroba.
-
7/31/2019 Autoklaf Dan Teknik Sterilisasi
3/27
TEKNIK STERILISASI
Sterilisasi Kimia Desinfektan
Fisik
Pemanasan
Mekanik Penyaringan
Penyinaran
-
7/31/2019 Autoklaf Dan Teknik Sterilisasi
4/27
STERILISASI DENGAN PENYARINGAN
Sterilisasi dengan penyaringan dilakukanuntuk mensterilisasi cairan yang mudah rusak
jika terkena panas atu mudah menguap
(volatile). Cairan yangdisterilisasi dilewatkan ke suatu
saringan (ditekan dengan gaya sentrifugasiatau pompa vakum) yang berpori dengan
diameter yang cukup kecil untuk menyaringbakteri. Virus tidak akan tersaring denganmetode ini.
-
7/31/2019 Autoklaf Dan Teknik Sterilisasi
5/27
STERILISASI DENGAN PENYARINGAN
Sterilisasi dengan penyaringan dapat dilakukan
dengan berbagai cara :
Non-disposable filtration apparatus
- Disedot dengan pompa vakum
- Volume 20-1000 ml
Disposable filter cup unit
- Disedot dengan pompa vakum- Volume 15-1000 ml
Disposable filtration unit dengan botolpenyimpan
- Disedot dengan pompa vakum
- Volume 15-1000 ml
Syringe filters
- Ditekan seperti jarum suntik
- Volume 1-20 ml
Spin filters
- Ditekan dengan gaya setrifugasi
- Volume kurang dari 1 ml
-
7/31/2019 Autoklaf Dan Teknik Sterilisasi
6/27
Cara kerja menggunakanNon-
disposable filtration apparatus
Sterilkan, membran penyaring(kertas saring) dan erlenmeyerpenampung.
Pasang atau rakit alat-alattersebut secara aseptis (sesuai
gambar), lalu isi corong denganlarutan yang akan disterilkan.
Hubungkan katup erlenmeyerdengan pompa vakumkemudian hidupkan pompa.
Setelah semua larutan melewati
membran filter dan tertampungdierlenmeyer, maka larutandapat dipindahkan kedalamgelas penampung lain yangsudah steril dan tutup dengankapas atau aluminium foil yangsteril.
-
7/31/2019 Autoklaf Dan Teknik Sterilisasi
7/27
-
7/31/2019 Autoklaf Dan Teknik Sterilisasi
8/27
TEKNIK STERILISASI
Sterilisasidengan
pemanasan
Pemijaran
Udara panas(kering)
Sterilisasidengan
pemanasan
Uap airpanas
Uap airkering
-
7/31/2019 Autoklaf Dan Teknik Sterilisasi
9/27
STERILISASI DENGAN PEMIJARAN
Cara ini terutamadipakai untuksterilisasi jarumplatina, ose dansebagainya.
Caranya adalahdengan membakaralat-alat tersebut diatas api lampuspiritus sampai pijar.
-
7/31/2019 Autoklaf Dan Teknik Sterilisasi
10/27
STERILISASI DENGAN UDARA PANAS
(KERING)
Untuk keperluan ini dipakai alat yang disebut hotair sterilizer (oven).
Alat sterilisasi ini dipakai untuk mensterilkan
alat-alat gelas seperti erlenmeyer, petridish,tabung reaksi dan alat-alat gelas yang lain.
Bahan-bahan seperti kapas, kain dan kertas jugadapat disterilkan dengan alat ini tetapi dalambatas-batas tertentu.
Pada umumnya temperatur yang digunakanpada sterilisasi secara kering adalah 170 180oselama paling sedikit 2jam.
-
7/31/2019 Autoklaf Dan Teknik Sterilisasi
11/27
STERILISASI DENGAN UDARA PANAS
(KERING)
Alat gelas yang disterilisasi dengan udara panastidak akan timbul kondensasi sehingga tidak adatetes air (embun) didalam alat gelas.
Bungkus alat-alat gelas dengan kertas payungatau aluminium foil
Atur pengatur suhu oven menjadi 1800C dan alatdisterilkan selama 2-3 jam.
Perlu diperhatikan bahwa lamanya sterilisasitergantung pada jumlah alat-alat yangdisterilkan dan ketahanan alat terhadap panas.
-
7/31/2019 Autoklaf Dan Teknik Sterilisasi
12/27
STERILISASI DENGAN UAP AIR
PANAS
Bahan-bahan yang mengandung cairan tidakdapat disterilkan dengan udara panas yangkering.
Bahan-bahan yang disterilkan dengan cara inipada umumnya medium yang tidak tahanterhadap panas yang tinggi.
Konsep ini mirip dengan mengukus. Bahanyang mengandung air lebih tepatmenggunakan metode ini supaya tidakterjadi dehidrasi.
-
7/31/2019 Autoklaf Dan Teknik Sterilisasi
13/27
CARA KERJA STERILISASI
DENGAN UAP AIR PANAS Bahan dimasukkan kedalam erlenmeyer atau botol dan ditutup
rapat dengan sumbat atau aluminium foil.
Erlenmeyer/botol lalu dimasukkan kedalam alat sterilisasi (alatstandar menggunakanArnold Steam Sterilizen atau dandang).
Nyalakan sumber panas dan tunggu hingga termometermenunjukkan suhu 1000C kemudian hitung waktu mundur hingga30 menit (uap panas yang terbentuk akan mematikan mikroba).
Setelah selesai alat sterilisasi dimatikan dan bahan yang sterildikeluarkan.
Setelah 24 jam, bahan tersebut di sterilkan lagi dengan cara yang
sama, selang waktu ini dimaksudkan untuk memberi kesempatanspora atau sel vegetatif yang belum mati untuk tumbuh sehinggamudah dibunuh.
-
7/31/2019 Autoklaf Dan Teknik Sterilisasi
14/27
STERILISASI DENGAN MENGGUNAKAN
UAP PANAS BERTEKANAN
Sterilisasi denganuap panas
bertekanan
AUTOCLAVE
-
7/31/2019 Autoklaf Dan Teknik Sterilisasi
15/27
AUTOKLAF (AUTOCLAVE)
Autoclave
Alat untuk mensterilkan berbagaimacam alat dan bahan yang
digunakan dalam mikrobiologimenggunakan uap air panas
bertekanan.
Tekanan yang digunakan padaumumnya 15 Psi atau sekitar 2 atm dan
dengan suhu 121o
C (250o
F). Jadi tekananyang bekerja ke seluruh permukaanbenda adalah 15 pon tiap inchi2 (15 Psi =
15pounds per square inch). Lamasterilisasi yang dilakukan biasanya 15
30 menit untuk 121oC.
-
7/31/2019 Autoklaf Dan Teknik Sterilisasi
16/27
DIAGRAM AUTOKLAF VERTIKAL
1. Tombol pengatur waktumundur (timer)
2. Katup pengeluaran uap
3. pengukur tekanan
4. kelep pengaman5. Tombol on-off
6. Termometer
7. Lempeng sumber panas
8. Aquades (dH2O)9. Sekrup pengaman
10. batas penambahan air
-
7/31/2019 Autoklaf Dan Teknik Sterilisasi
17/27
CARA PENGGUNAAN AUTOKLAF
1. Sebelum melakukan sterilisasi cek dahulu banyaknya air dalam autoklaf.Jika air kurang dari batas yang ditentukan, maka dapat ditambah airsampai batas tersebut. Gunakan air hasil destilasi, untuk menghindariterbentuknya kerak dan karat.
2. Masukkan peralatan dan bahan. Jika mensterilisasi botol beretutup ulir,maka tutup harus dikendorkan.
3. Tutup autoklaf dengan rapat lalu kencangkan baut pengaman agar tidakada uap yang keluar dari bibir autoklaf. Klep pengaman jangandikencangkan terlebih dahulu.
4. Nyalakan autoklaf, diatur timer dengan waktu minimal 15 menit padasuhu 121oC.
5. Tunggu samapai air mendidih sehingga uapnya memenuhikompartemen autoklaf dan terdesak keluar dari klep pengaman.
Kemudian klep pengaman ditutup (dikencangkan) dan tunggu sampaiselesai. Penghitungan waktu 15 dimulai sejak tekanan mencapai 2 atm.
6. Jika alarm tanda selesai berbunyi, maka tunggu tekanan dalamkompartemen turun hingga sama dengan tekanan udara di lingkungan(jarum pada preisure gauge menunjuk ke angka nol). Kemudian klep-klep pengaman dibuka dan keluarkan isi autoklaf dengan hati-hati.
-
7/31/2019 Autoklaf Dan Teknik Sterilisasi
18/27
-
7/31/2019 Autoklaf Dan Teknik Sterilisasi
19/27
-
7/31/2019 Autoklaf Dan Teknik Sterilisasi
20/27
-
7/31/2019 Autoklaf Dan Teknik Sterilisasi
21/27
-
7/31/2019 Autoklaf Dan Teknik Sterilisasi
22/27
PRINSIP CARA KERJA AUTOKLAF
Suhu dan tekanan tinggi yang diberikan kepada alat dan mediayang disterilisasi memberikan kekuatan yang lebih besar untukmembunuh sel dibanding dengan udara panas. Biasanya untukmesterilkan media digunakan suhu 1210C dan tekanan 15 lb/in2
(SI = 103,4 Kpa) selama 15 menit.
Alasan digunakan suhu 1210C atau 249,8 0F adalah karena airmendidih pada suhu tersebut jika digunakan tekanan 15 psi.
Untuk tekanan 0 psi pada ketinggian di permukaan laut (sealevel) air mendidih pada suhu 1000C, sedangkan untuk autoklafyang diletakkan di ketinggian sama, menggunakan tekanan 15psi maka air akan memdididh pada suhu 1210C.
Ingat kejadian ini hanya berlaku untuk sea level, jika
dilaboratorium terletak pada ketinggian tertentu, makapengaturan tekanan perlu disetting ulang. Misalnya autoklafdiletakkan pada ketinggian 2700 kaki dpl, maka tekanandinaikkan menjadi 20 psi supaya tercapai suhu 1210C untukmendidihkan air. Semua bentuk kehidupan akan mati jikadididihkan pada suhu 1210C dan tekanan 15 psiselama 15 menit.
-
7/31/2019 Autoklaf Dan Teknik Sterilisasi
23/27
PRINSIP CARA KERJA AUTOKLAF
Pada saat sumber panas dinyalakan, air dalamautoklaf lama kelamaan akan mendidih dan uap airyang terbentuk mendesak udara yang mengisiautoklaf.
Setelah semua udara dalam autoklaf diganti dengan
uap air, katup uap/udara ditutup sehingga tekananudara dalam autoklaf naik.
Pada saat tercapai tekanan dan suhu yang sesuai,maka proses sterilisasi dimulai dan timermulaimenghitung waktu mundur.
Setelah proses sterilisasi selesai, sumber panasdimatikan dan tekanan dibiarkan turun perlahanhingga mencapai 0 psi. Autoklaf tidak boleh dibukasebelum tekanan mencapai 0 psi.
-
7/31/2019 Autoklaf Dan Teknik Sterilisasi
24/27
MENDETEKSI KINERJA AUTOKLAF
Untuk mendeteksi bahwa autoklaf bekerjadengan sempurna dapat digunakan mikrobapenguji yang bersifat termofilik dan memiliki
endospora yaitu Bacillus stearothermophillus. Umumnya mikroba ini tersedia secara komersial
dalam bentuk spore strip. Kertas spore strip inidimasukkan dalam autoklaf dan disterilkan.
Setelah proses sterilisasi lalu ditumbuhkan padamedia. Jika media tetap bening makamenunjukkan autoklaf telah bekerja denganbaik.
-
7/31/2019 Autoklaf Dan Teknik Sterilisasi
25/27
HAL-HAL YANG HARUS DIPERHATIKAN
Untuk mencegah terjadinya presipitasi, pencoklatan(media menjadi coklat) dan hancurnya substratdapat dilakukan pencegahan sbb :
Glukosa disterilkan terpisah dengan asam amino
(peptone) atau senyawa fosfat Senyawa fosfat disterilkan terpisah dengan asam
amino (peptone) atau senyawa garam mineral lain.
Senyawa garam mineral disterilkan terpisah dengan
agar Media yang memiliki pH > 7,5 jangan disterilkan
dengan autoklaf
Jangan mensterilisasi larutan agar dengan pH < 6,0
-
7/31/2019 Autoklaf Dan Teknik Sterilisasi
26/27
HAL-HAL YANG HARUS DIPERHATIKAN
Beberapa media atau bahan yang tidak disterilkandengan autoklaf adalah :
1) Bahan tidak tahan panas seperti serum, vitamin,antibiotik, dan enzim.
2) Paelarut organik, seperti fenol.3) Buffer engan kandungan detergen, seperti SDS
Erlenmeyer hanya boleh diisi media maksimum dari total volumenya, sisa ruang dibirkan kosong.
Jika mensterilkan media 1L yang ditampung padaerlenmeyer 2L maka sterilisasi diatur dengan waktu30 menit.
-
7/31/2019 Autoklaf Dan Teknik Sterilisasi
27/27
TERIMAKASIH