Aura Falla

Field Marketing Manager – BioM & Microscopy

“Variables Pre –Analíticas  y Aspectos de seguridad en el Laboratorio de Citología “ 

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Tinción Papanicolaou – Tinción PAP

1917 - Estudios hormonales1943 - Investigaciones en cáncer de cuello uterino

Características celulares a ser evaluadas

Características nucleares a ser evaluadas

Número de células Tamaño y variaciones de tamaño

Relación núcleo /citoplasma

Su distribución PosiciónSi estan aisladas NúmeroSi están agregadas Patrones de cromatinaModificaciones superficie HipercromasiaTamaño y forma CromocentrosApariencia citoplásmatica Número de nuecléolos,

tamaño y formaTinción del citoplasma MitosisProductos de adpatación functional

Necrosis

Cuerpos de Inclusión

Criterios de Malignidad

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Citodiagnóstico y Tinción PAP

OBJETIVO :

“ El éxito y la eficacia de la detección cervical, se mide por su capacidad para detectar casos pre-cancerosos (sensibilidad) y evitar, al mismo tiempo, los diagnósticos falsos positivos (especificidad) ”

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Tinción PAP – Variables pre y post- analíticas

Componentes importante en el proceso de operaciones de un laboratorio, porque existe una diversidad de variables que afectan a un resultado .

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Tinción PAP – Control de Calidad (CC)

El control de calidad es un conjunto de acciones aplicadas en la ejecuciónde una prueba para asegurar que los resultados, productos o servicios puedan ser entregados. Involucra:

a)Verificación de la adecuada técnica de muestreob)Verificación de la adecuada técnica de procesamientoc)Verificación de una correcta lectura con base en procesos diseñados para identificar y corregir deficiencias

Implementar un buen CC permite garantizar la REPRODUCIBILIDAD y la VALIDEZ de las interpretaciones en citología

Riesgo Vital : FALSOS NEGATIVOS (sub diagnóstico)

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Falsos Negativos : Sub diagnóstico

Los dos mayores componentes del % de falsos negativos son:

1.Error en la toma de muestra : las células anormales no se recolectan o no son transferidas a la lámina2.Error de detección : Las células anormales se omiten durante la observación microscópica o se interpretan de manera equivocada.

IMPORTANTE : Diversos estudios estiman que los 2/3 de falsos negativos seatribuyen a una mala toma de muestra y 1/3 a errores de interpretación.

Tasas de FN : Estimación entre el 5% al 30% (según la Agency for Health CarePolicy and Research - USA)

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Factores que influyen en los FN en citología

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Factores que influyen en la sensibilidad de la citología de cuello uterino

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La Fase PRE ANALÍTICA en el Lab. de Citología

Comprende:

1.La Toma y Remisión de la muestra al laboratorio de citología2. Recepción de la muestra por parte del laboratorio

Recomendaciones :•Explicar el procedimiento a la paciente•Llenar la solicitud con la filiación del paciente y rotular la lámina•En presencia de flujo vaginal, hacer una limpieza cuidadosa previa con torunda, gasa o un aplicador humedecida con solución salina.•Evaluar presencia de lesiones en vagina y vulva.•No realizar tacto vaginal antes de la toma de muestra.

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La Fase POST ANALÍTICA en el Lab. de Citología

Comprende:

1. Proceso de coloración (manual o automática)2. Proceso de lectura e interpretación cito morfológica3. Proceso de reporte y archivo de resultados

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• La Fijación pulverizable es la más usadaactualmente.•Lacas comunes pueden contener hidrocarbonos clorinados o fluorados.•Los fijadores basados en PEG ensolución alcohólica han demostrado serlos fijadores más óptimos

La Fijación como variable pre analítica : Comenzando bien!

Film protector : Excelente preservación y rápida fijación Evitar la desecación y contracción celular!

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Procedimiento M Fix:

• Se colocan las muestras sobreun papel filtro y se dispara el spray a unos 15 a 20 cm con unángulo de 45°C.

• Aplicar el spray 3 veces (0.3 a 0.6 ml.). Seca en 10’.

• Rinde aprox. 250 aplicaciones

• Se retira solo con agua

• IMPORTANTE : No se requiere alcoholes descendentes para retirarlo, soloagua y luego el 1er. Colorante.

Proceso de Fijación : comenzando bien!

• Recolección inapropiada• Transferencia deficiente desde el

dispositivo a la lámina.• Secado al aire sin fijación previa.• Contaminación con talco de los

guantes o lubricante

Errores más comunes:

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Otro proceso de Fijación : comenzando bien!

• Recolección inapropiada• Transferencia deficiente desde el

dispositivo a la lámina.• Secado al aire sin fijación previa.• Contaminación con talco de los

guantes o lubricante

Errores más comunes:

1. Etanol absoluto al 96% 2. Etanol desnaturalizado con Metil etil cetona al 1%

Preservación de las estructuras finas del material celular por 30 minutos

* Metil etil cetona : desnaturaliza el alcohol y aumenta su poder de deshidratatción, es neutral en la reacción de fijación

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La Fijación con PEG + Alcohol : comenzando bien!

Antes :Merckofix®

Ahora : M Fix ®

Costo . S/ 0.12 / prueba

Estandarizando el proceso de coloración : RtU

Hematoxilina + EA 50Orange G + hematoxilina Hematoxilina

Eosina Y

Ligth Green

VesuvinaOrange GHematoxilina a Hemateína

Tinciones Lista para USO o RtU (Ready to Use)Hematoxilina + EA 50(mezcla polícroma)Orange G + hematoxilina Hematoxilina

Hematoxilina de Harris (5 g)Hematoxilina de MayerHematoxilina de Gill II (2 g)

EA 31EA 50EA 65

Importante : Disponibilidad del colorante oxidado (hemateína) durante la vida media del colorante.Quelación de la hemateína con los iones metálicos trivalentes

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Eosin Y tiñe más fuertemente células maduras escamosas, núcleos y cilias, mientras que el Ligth green tiñe células metabólicamente activas:

Células superficiales rosadas con Eosin Y, las parabasales e intermedias tiñen verde o azul-verdosas con el Light green.

Reacción tintorial 3a - EA 31 3b - EA 50

Ciánofilo (basofilico) citoplasma

Verde intenso Azul-verdoso

Eosinófilo (acidofílico) citoplasma

Rosado Rosado

Eritrocitos Rojo Rojo

Citoplasma queratinizado Rosado a Naranja Rosado a Naranja

Núcleos celulares Azul, violeta oscuro, marrón

Mircroorganismos Gris-azules

Tricomonas Gris-verdes

Tinciones Lista para USO o RtU (Ready to Use)

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CHEQUEAR LAS SUSTANCIAS EN LA WEB

DEFINIR LOS RIESGOS

EVALUAR LA EXPOSICIÓN A LOS RIESGOS

EL PROVEEDOR DEBE AYUDAR AL USUARIO A IDENTIFICAR LOS RIESGOS y A TOMAR

CONCIENCIA DE ELLOS

Citología y Aspectos de Bioseguridad

22/04/23

1. Sea que el laboratorio de citología prepare los colorantes o use soluciones lista para uso, debe manejar las FDS : Fichas de Datos de Seguridad como parte de las buenas prácticas en el laboratorio.

2. Las FDS reportan información muy importante sobre el manejo de los reactivos químicos y colorantes usados como ingredientes en citología.

3. Las soluciones de colorantes listos para uso, reducen el riesgo de exposición y el manejo de reactivos químicos.

4. Las hojas FDS nos indican las barreras de protección que debemos usar al manipular los reactivos químicos y colorantes usados en el Lab de Citología

5. Regulaciones locales existentes (SUNAT) y consciencia en aspectos de bioseguridad son tendencias que estan llevando al uso de sustitutos del xileno (xilol)

Citología y Aspectos de Bioseguridad

22/04/23

Modificaciones en la formulación de la Hematoxilina:

1. En los colorantes listo para uso, se reemplazó el agente oxidante ,Cloruro de mercurio, por el Yodato de sodio (370 mg) debido a su toxicidad. No altera la vida útil del colorante y produce idénticos resultados de tinción nuclear.

2. Las soluciones de Gill , no muy frecuente usadas, son las más respetuosas con el medio ambiente. Todas contienen Yodato de sodio y no requieren ser filtradas.

Recomendaciones de Almacenamiento de los reactivos de uso en citología

1. Los colorantes listo para uso, son altamente inflamables, tal como lo indica sus FDS (Ficha de datos de Seguridad). Debe organizarse el almacén de manera adecuada.

2. Las mismas condiciones de almacenamiento, rigen para M Fix.

.

Citología y Aspectos de Bioseguridad

Inflamables

La característica mas notable de GHS - AHORANuevos pictogramas y cambio en el etiquetado

Peligros Físicos

Peligros de Salud Peligros ambientales

Explosivos Inflamables

Peligroso MAPeligro por aspiracion

AdvertenciaIrritante CorrosivosPeligro

CorrosivosGas presurizadoOxidantes

Hojas de Datos de Seguridad (SDS o FDS)Consideraciones Generales

22/04/23

Modificaciones en el uso de aclarantes :

1. El xileno posee más riesgos a la exposición continua que un sustituto del mismo.

2. La FDS (Ficha de Seguridad) del Xileno o Xilol, debe ser leida por todo el personal del laboratorio de citología y tomar consciencia de los riesgos y el control de los mismos.

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Citología y Aspectos de Seguridad

AdvertenciaIrritante

Inflamable

22/04/23

Modificaciones en el uso de aclarantes :

1. Los susititutos son compuestos hidrocarburos menos tóxicos por ser compuestos orgánicos de cadena abierta (alifática).

2. Los sustitutos del xileno nos conducen a realizar procesos de deshidratación más limpios y el uso de alcoholes absoiultos de grado apropiado por ser algo más oleosos.

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Citología y Aspectos de Bioseguridad

22/04/23

La opción de uso de un Sustituto del Xilol

Mezcla de hidrocarbonos alifáticos C9-C11.

Ahora con tasa de evaporación mas alta.

Muestras a aplicar :Tejido fijado, secciones de parafina , muestras citológicas.

 Mayor capacidad para disolver la parafina, >6 gr de parafina en 150 ml de solvente

Menos olor que el xileno, no cancerígeno, no tiene impacto en el medio ambiente. Su uso no afecta las metodologías convencionales.

Muy bajo contenido de sustancias aromática (rango ppm )

Necesita un Medio de montaje especial.

No Descarte como residuo especial.

Citología y Aspectos de Bioseguridad

Neoclear : Indicaciones de Uso

22/04/23

Neo-Clear®, Cat. No. 1.098435000

(Sustituto del Xilol)

Consideraciones especiales al trabajar con Neoclear :

1. Dado que Neoclear tiene una tasa de evaporación más baja que el Xilol , el exceso de Neoclear debe ser retirado (adsorbiéndolo con ayuda de una hoja de papel toalla o filtro por 1’ o 2’), luego se procede con el montaje normal con Neomount. Esperar 30’ para el secado.

2. La turbidez de los baños de alcohol no ocurre si la calidad del mismo es “extra puro” o de 96° a más.

3. Dado que el Neoclear es un derivado de las isoparafinas, tiene una consistencia ligeramente aceitosa, por lo que los alcoholes de grado técnico, podrían no ser efectivos en el proceso de deshidratación

Citología y Bioseguridad

22/04/23LS&A PM SPA, Ute Schmidt

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Neo-Mount®, Cat. No. 109016.0500

Agente de montaje basado en la formulación de Neo-Clear®

Las mejores propiedades ópticas

Tiempo de secado aproximado: 30 min

Comparable con el medio de montaje basado en xyleno.

Resultado brillantey aclaramiento ideal por

compatibilidad química

Histología – Montaje especial

Los medios de montaje basados en Xylol darán montajes nublados con Neo-Clear®.

Neoclear : Aplicación en Citología

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16/05/2002

Productos para Citología : Soluciones Ready to Use

• Alta reproducibilidad, estabilidad lote a lote

• Coloraciones brillantes y de alta calidad,resultados estables.

• Fácil manipuleo.

• Tiempo de trabajo y esfuerzo son reducidos.

• Alta capacidad de las soluciones preparadas para maximizar ya sea el número de muestras procesadas y la economía del laboratorio.

• Larga viabilidad de las soluciones

• Seguridad química en el laboratorio de citología.

Células Normales

Células Anormales

Muchas Gracias

Contacto :aura.falla@merckgroup.comCelular : 996410096RPM : #996410096