Aula 2. Resistência a Fungicidas - Parâmetros de estudo
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Resistência de Fitopatógenos a
FungicidasProfs. Eiko Mori Andrade Spinelli e Milton Luiz da Paz Lima
1
Instituto Federal Goiano câmpus Urutaí
VI Semana de Ciências Agrárias
Programa do curso:
Teoria:
1 - Conceitos.
2 - Tipos de fungicidas.
3 - Resistência dos patógenos.
4 - Manejo da resistência ou Estratégia anti-resistência.
5 - Resultados:
Prática:
A) repicagem
B) medição do diâmetro da colônia:
cálculo da AACPCM;
calculo da % de inibição e porcentagem de crescimento;
calculo da taxa de crescimento;
Classes de sensibilidade;
cálculo do EC50 2
1. Diâmetro da colônia
Fonte: milksci.unizar.es
Soma / 2 = diâmetro médio
Placas de Petri
3
CulturasPenicillium sp.Aspergillus flavus
Cladosporium sp.
Colletotrichum falcatum Bipolaris sp. Sclerotinea sp.
4
Paz Lima, 2010Paz Lima, 2010Paz Lima, 2014
Cálculo da AACPCM
Área abaixo da curva de progresso do crescimento micelial
Usa-se a variável dependente: diâmetro da colônia
Valor adimensional
Medidas coletadas no tempo;
5
Visconti et al. (2010)
AACPCM
Calculo AACPCM
6
1 12
2 14
3 15
4 26
5 32
6 42
7 50
Isolado 1 Isolado 2
1. Cálculo a mão
2. Cálculo no excell
1 43
2 50
3 58
4 70
5 75
6 84
7 95
AACPCM isolado 1 =
((2-1)*(14+12)/2)) +
((3-2)*(15+14)/2)) +
((4-3)*(26+15)/2)) +
((5-4)*(32+26)/2)) +
((6-5)*(42+32)/2)) +
((7-6)*(50+42)/2)) =
AACPCM isolado 2 =
((2-1)*(50+43)/2)) +
((3-2)*(58+50)/2)) +
((4-3)*(70+58)/2)) +
((5-4)*(75+70)/2)) +
((6-5)*(84+75)/2)) +
((7-6)*(95+84)/2)) =
x y
Y=diâmetro da colônia
AACPCM
7
Visconti et al., 2010
AACPCM
8
Visconti et al., 2010
Cálculo da % de inibição;
Quanto do crescimento em escala de porcentagem teve seu crescimento inibido.
É realizado através da regra de três utilizando o valor da testemunha como padrão.
Cada isolado fúngico pode reagir diferentemente as dosagens de fungicidas aplicados.
Calculo:
Valor do diâmetro de
colônia da testemunha100 %
Quanto em %
corresponde?
Valor do diâmetro da
colônia nas dosagens
de fungicida
O calculo é feito numa escala de dias de cálculo
% de Crescimento
% de Crescimento-100
= % de inibição
9
Classes de Sensibilidade – determinação de amplitudes
Isolado
Tipo de
ingrediente
ativo 10 ppm % Cresc Classificação Isolado 100 ppm % Cresc Classificação
Coll soja Cercobin 56 intermediario Coll soja Cercobin 44 intermediario
Coll soja Cercobin 57 intermediario Coll soja Cercobin 47 intermediario
Coll anturio Cercobin 61 intermediario Coll anturio Cercobin 24 intermediario
Coll anturio Cercobin 71 intermediario Coll anturio Cercobin 20 intermediario
Coll caqui Cercobin 16 sensível Coll caqui Cercobin 16 sensível
Coll caqui Cercobin 16 sensível Coll caqui Cercobin 16 sensível
Coll dracena Cercobin 83 insensivel Coll dracena Cercobin 45 intermediario
Coll dracena Cercobin 83 insensivel Coll dracena Cercobin 32 intermediario
Coll uva Cercobin 61 intermediario Coll uva Cercobin 42 intermediario
Coll uva Cercobin 66 intermediario Coll uva Cercobin 29 intermediario
Coll tomate Cercobin 16 sensível Coll tomate Cercobin 16 sensível
Coll tomate Cercobin 16 sensível Coll tomate Cercobin 16 sensível
Coll iuca Cercobin 44 intermediario Coll iuca Cercobin 16 sensível
Coll iuca Cercobin 47 intermediario Coll iuca Cercobin 19 sensível
Coll mandioca Cercobin 92 insensivel Coll mandioca Cercobin 22 intermediario
Coll mandioca Cercobin 89 insensivel Coll mandioca Cercobin 22 intermediario
Coll soja Nativo 40 intermediario Coll soja Nativo 25 intermediario
Coll soja Nativo 38 intermediario Coll soja Nativo 24 intermediario
Coll anturio Nativo 25 intermediario Coll anturio Nativo 22 intermediario
Coll anturio Nativo 24 intermediario Coll anturio Nativo 21 intermediario
Coll caqui Nativo 60 intermediario Coll caqui Nativo 45 intermediario
Coll caqui Nativo 55 intermediario Coll caqui Nativo 36 intermediario
Coll dracena Nativo 39 intermediario Coll dracena Nativo 21 intermediario
Coll dracena Nativo 38 intermediario Coll dracena Nativo 22 intermediario
10
Classes de Sensibilidade – determinação de amplitudes
10 ppm 100 ppm 10 pmm 100 ppm
Soja 57 46 20,6964 I I 39 25 18,4853 I I
Antúrio 66 22 20,2712 I I 25 22 26,0251 I I
Caqui 16 16 30,3024 S S 58 41 6,9490 I I
Dracena 83 39 14,4274 IS I 39 22 18,9914 I I
Uva 63 36 20,8849 I I 27 23 25,1047 I I
Tomate 16 16 20,2222 S S 47 27 23,4861 I I
Iuca 46 18 22,6304 I S 24 24 27,1560 I I
Mandioca 91 22 21,5873 IS I 34 22 25,3889 I I
10 ppm 100 ppm 10 ppm 100 ppm
Soja 64 34 20,7516 I I 33 33 17,7778 I I
Antúrio 23 16 27,1111 I S 22 18 25,3095 I S
Caqui 21 21 21,8516 I I 20 20 24,2515 S S
Dracena 54 44 9,9458 I I 51 31 19,1845 I I
Uva 57 35 19,5030 I I 42 16 23,8485 I S
Tomate 50 18 22,0528 I S 73 16 23,2096 I S
Iuca 30 18 26,6250 I S 22 16 18,2778 I S
Mandioca 57 31 18,4744 I I 27 20 22,4221 I I
Azoxistrobina + ciproconazol
Trifloxistrobina +
Piraclostrobina +
epoxiconazol
% de
Crescimento
100 ppm
EC50 (mg
ia/mL)
EC50 (mg
ia/mL)
Isolados
Isolados
% de
Crescimento
100 ppm
% de
Crescimento
100 ppm
EC50 (mg
ia/mL)
% de
Crescimento
10 ppm
% de
Crescimento
10 ppm
% de
Crescimento
10 ppm
% de
Crescimento
100 ppm
EC50 (mg
ia/mL)
% de
Crescimento
10 ppm
Tiofanato metílico
11
Efeito de herbicidas
sobre agentes
fitopatogênicos
Rosa et al., 2010 [Acta Sci., Agron. (Online) vol.32
no.3 Maringá July/Sept. 2010]12
Cálculo da taxa de crescimento;
Regressão linear temos: intercepto e coeficiente angula=taxa de crescimento
Validação pelo teste de hipótese da regressão
Excel não faz, programas mais robustos possuem essa função
Excel =proj.lin(conjunto de dias;conjunto do diâmetro
y = -0,4691x + 61,598R² = 0,4922
0
20
40
60
80
100
0 20 40 60 80 100Diâ
metr
o d
a c
olô
nia
(m
m)
Dosagem Azoxistrobina + Ciproconazol
intercepto Taxa de
crescimento 13
Calculo da taxa de crescimento
14
1 43
2 50
3 58
4 70
5 75
6 84
7 95
Resultado dado é mm/dia
mmdia
Cálculo do EC50
Tirar logaritmo das dosagens – 0,1, 1, 10 e 100 ppm
15
log10-1
-1
0
0
1
1
2
2
0,1
0,1
1
1
10
10
100
100
1) Calculo do log das dosagens 2) Cálculo do coeficiente
angular - bx
0,1
0,1
1
1
10
10
100
100
100
100
100
100
56,25
57,14286
43,75
47,14286
Dosagens F
% de
Crescimento
3) Cálculo do INTERCEPTO
0,1
0,1
1
1
10
10
100
100
100
100
100
100
56,25
57,14286
43,75
47,14286
Dosagens F
% de
Crescimento
Cálculo do EC50 - Continuação
16
EC50 = 50 - INTERCEPTO
COEFICIENTE ANGULAR
VALOR EM MODULO
Critérios de Sensibilidade
dos isolados a fungicidas
17
Estatística na análise de Resistência a fungicidas
Fatores de variação Diametro da colônia % de inibição
Isolados F 7, 160 = 58,18** F 7,128 = 36,82**
Dosagem F 4, 160 = 3580,22** F 3,128 = 2550,82**
Fungicida F 3 , 160 = 164,15** F 3,128 = 76,57**
Dosagem x Fungicida F 12, 160= 33,91** F 9,128 = 10,72**
Isolados x Dosagem F 28, 160= 14,89** F 21,128 = 12,25**
Isolados x Fungicida F 21, 160 = 33,59** F 21, 128 = 30,41**
Isolado x Fungicida x Dosagem F 84,160 = 12,74** F 63, 128 = 12,34**
CV 6,3 10,418
Estatística na análise de Resistência a fungicidas
a
b bcbc bc c
dd
0
10
20
30
40
50
60
Soja Mandioca Uva Anturio Dracena Tomate Iuca Caqui
Méd
ias
do
Diâ
met
ro d
a c
olô
nia
(m
m)
Hospedeiros de origem dos isolados
a
b
c
d
e
0
10
20
30
40
50
60
70
80
0 0,1 1 10 100
Méd
ias
do
Diâ
metr
o d
a c
olô
nia
(m
m)
Dosagens de fungicidas utilizadas
19
Estatística na análise de Resistência a fungicidas
a
bc
d
0
10
20
30
40
50
60
Tiofanato metílico piraclostrobina +
epoxiconazol
azoxistrobina +
ciproconazol
trifloxistrobina +
tebuconazol
Méd
ias
do
Diã
met
ro d
a c
olô
nia
(m
m)
Fungicidas utilizados 20
Tabela 3. Amplitudes das EC50 para os isolados de
Colletotrichum spp. para os diferentes tipos de
fungicidas.
21
Fungicidas 0-5 6-10 11-15 16-20 21-25 26-30
Tiofanato metílico
Trifloxistrobina+Tebuconazol
Piraclostrobina+Epoxiconazol
Azoxistrobina+Ciproconazol