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14 % des couples “en âge de procréer” consultent pour infécondité
3 % présentent une stérilité
38 %
8 %34 %
20 %+
+
-
-
Origine des facteurs en cause
(sur 1318 couples consultant)
Thonneau et al., 1991
Rappel des définitions
CONCEPT DE RESULTAT
avoir ou pas
fécond infécond
Mesure :
grossesse, enfant
CONCEPT D’APTITUDE
capacité d’avoir
fertile infertile
Mesure :
fécondabilité
Délai nécessaire pour concevoir , DNC = nombre de cycles
(mois) nécessaires pour parvenir à une grossesse après tout
arrêt de “précautions” anticonceptionnelles
Fécondabilité, f = 1/DNC
Fécondabilité moyenne dans les pays dévelopés
0,20-0,25 (en moyenne, 4-5 cycles pour concevoir)
Rappel des définitions
L’hypofertilité masculine se présente initialement comme une
infécondité du couple
Quelle est la part respective des facteurs féminins et masculins
contribuant à cette infécondité ?
Les 2 partenaires doivent être explorés : l’approche est rationnelle et
progressive
Le spermogramme-spermocytogramme est avec le test post-coïtal
l’un des 2 examens de base s’imposant
QUAND ?
Après X années de rapports sexuels normaux et réguliers sans
aucune protection
Facteur “thérapeutique”
60 % des couples concoivent à 6 mois,
90 % en 18 mois
Rôle du facteur temps
Facteur de “sélection des inféconds”
Après 18 mois d’infécondité,
la fécondabilité est estimée à 0,05
Prescription
Prélévement
Transport
Conservation
Traitement
Validation
Présentation
Transmission
Interprétation
Pré-
analytique
Analytique
Post-
analytique
Analyse
La vaste majorité des procédures
détaillées décrites dans le manuel
de l’OMS est
accessible
en français
dans le cahier
bioforma
« Exploration
de la fonction
de reproduction/
versant masculin »
Méthodes reconnues
(A)
Méthodes reconnues,
adaptées ou
développées (B)
Méthode automatisée de
type quantitatif
Cytométrie de flux après
marquage
Etude de la qualité du
noyau du
spermatozoïde
Échantillon(s) biologique(s)
d'origine humaine :
sperme (*)
Méthodes reconnues
(A)
Méthodes reconnues,
adaptées ou
développées (B)
Méthode manuelle de type
qualitatif et quantitatif
Identification par
microscopie optique
après coloration (bleu
d’aniline,
fragmentation sur
lame, …)
Etude de la qualité du
noyau du
spermatozoïde
Échantillon(s) biologique(s)
d'origine humaine :
sperme (*)
Méthodes reconnues
(A)
Méthodes reconnues,
adaptées ou
développées (B)
Méthode manuelle de type
qualitatif et quantitatif
Examen microscopique à
fort grossissement
Etude morphologique des
spermatozoïdes
mobiles
Échantillon(s) biologique(s)
d'origine humaine :
sperme (*)
Méthodes reconnues
(A)
Méthodes reconnues,
adaptées ou
développées (B)
Méthode automatisée de
type qualitatif et
quantitatif
Coloration et examen
microscopique
Etude morphologique et
identification des
cellules
(spermocytogramme, …)
Échantillon(s) biologique(s)
d'origine humaine :
sperme, urine (*)
Méthodes reconnues
(A)
Méthodes reconnues,
adaptées ou
développées (B)
Méthode manuelle de type
qualitatif et quantitatif
Coloration (Papanicolaou,
Eosine-Nigrosine,
Harris-Schorr, …) et
examen microscopique
Etude morphologique et
identification des
cellules (vitalité,
cellules rondes,
spermocytogramme,
…)
Échantillon(s) biologique(s)
d'origine humaine :
sperme, urine, échantillon
épididymaire et
testiculaire (*)
Test de migration-
survie
Préparation en vue
d'AMP
Méthodes reconnues
(A)
Méthodes reconnues,
adaptées ou
développées (B)
Méthode automatisée de
type quantitatif
Cytométrie de flux, avec ou
sans traitement
(centrifugation,
gradient,…)
sur échantillon frais ou après
décongélation
Détermination de la
concentration des
spermatozoïdes
Échantillon(s) biologique(s)
d'origine humaine :
sperme, urine (*)
Spermogramme
Test de migration-
survie
Préparation en vue
d'AMP
Méthodes reconnues
(A)
Méthodes reconnues,
adaptées ou
développées (B)
Méthode automatisée de
type qualitatif et
quantitatif
Examen microscopique,
avec ou sans
traitement
(centrifugation,
gradient,…)
sur échantillon frais ou après
décongélation
Détermination de la
concentration des
spermatozoïdes,
mobilité et/ou
mouvement (*)
Échantillon(s) biologique(s)
d'origine humaine :
sperme, urine (*)
Spermogramme
Test de migration-
survie
Préparation en vue
d'AMP
Test de Hühner/Test
post-coïtal
Méthodes reconnues
(A)
Méthodes reconnues,
adaptées ou
développées (B)
Méthode manuelle de type
qualitatif et quantitatif
Examen direct macro- et
microscopique, avec
ou sans traitement
(centrifugation,
gradient,…)
sur échantillon frais ou après
décongélation
Recherche et
identification des
spermatozoïdes,
volume, pH,
viscosité,
agglutination,
mobilité,
concentration,
cellules rondes (*)
Échantillon(s) biologique(s)
d'origine humaine :
sperme, urine, échantillon
épididymaire et
testiculaire, glaire
cervicale (*)
Remarques
(Limitations,
paramètres
critiques, …)
Référence de la
méthodePrincipe de la méthode
Nature de
l’examen/analyse
Nature de l’échantillon
biologique
Méthodes reconnues
(A)
Méthodes reconnues,
adaptées ou
développées (B)
Méthode automatisée de
type quantitatif
Cytométrie de flux après
marquage
Etude de la qualité du
noyau du
spermatozoïde
Échantillon(s) biologique(s)
d'origine humaine :
sperme (*)
Méthodes reconnues
(A)
Méthodes reconnues,
adaptées ou
développées (B)
Méthode manuelle de type
qualitatif et quantitatif
Identification par
microscopie optique
après coloration (bleu
d’aniline,
fragmentation sur
lame, …)
Etude de la qualité du
noyau du
spermatozoïde
Échantillon(s) biologique(s)
d'origine humaine :
sperme (*)
Méthodes reconnues
(A)
Méthodes reconnues,
adaptées ou
développées (B)
Méthode manuelle de type
qualitatif et quantitatif
Examen microscopique à
fort grossissement
Etude morphologique des
spermatozoïdes
mobiles
Échantillon(s) biologique(s)
d'origine humaine :
sperme (*)
Méthodes reconnues
(A)
Méthodes reconnues,
adaptées ou
développées (B)
Méthode automatisée de
type qualitatif et
quantitatif
Coloration et examen
microscopique
Etude morphologique et
identification des
cellules
(spermocytogramme, …)
Échantillon(s) biologique(s)
d'origine humaine :
sperme, urine (*)
Méthodes reconnues
(A)
Méthodes reconnues,
adaptées ou
développées (B)
Méthode manuelle de type
qualitatif et quantitatif
Coloration (Papanicolaou,
Eosine-Nigrosine,
Harris-Schorr, …) et
examen microscopique
Etude morphologique et
identification des
cellules (vitalité,
cellules rondes,
spermocytogramme,
…)
Échantillon(s) biologique(s)
d'origine humaine :
sperme, urine, échantillon
épididymaire et
testiculaire (*)
Test de migration-
survie
Préparation en vue
d'AMP
Méthodes reconnues
(A)
Méthodes reconnues,
adaptées ou
développées (B)
Méthode automatisée de
type quantitatif
Cytométrie de flux, avec ou
sans traitement
(centrifugation,
gradient,…)
sur échantillon frais ou après
décongélation
Détermination de la
concentration des
spermatozoïdes
Échantillon(s) biologique(s)
d'origine humaine :
sperme, urine (*)
Spermogramme
Test de migration-
survie
Préparation en vue
d'AMP
Méthodes reconnues
(A)
Méthodes reconnues,
adaptées ou
développées (B)
Méthode automatisée de
type qualitatif et
quantitatif
Examen microscopique,
avec ou sans
traitement
(centrifugation,
gradient,…)
sur échantillon frais ou après
décongélation
Détermination de la
concentration des
spermatozoïdes,
mobilité et/ou
mouvement (*)
Échantillon(s) biologique(s)
d'origine humaine :
sperme, urine (*)
Spermogramme
Test de migration-
survie
Préparation en vue
d'AMP
Test de Hühner/Test
post-coïtal
Méthodes reconnues
(A)
Méthodes reconnues,
adaptées ou
développées (B)
Méthode manuelle de type
qualitatif et quantitatif
Examen direct macro- et
microscopique, avec
ou sans traitement
(centrifugation,
gradient,…)
sur échantillon frais ou après
décongélation
Recherche et
identification des
spermatozoïdes,
volume, pH,
viscosité,
agglutination,
mobilité,
concentration,
cellules rondes (*)
Échantillon(s) biologique(s)
d'origine humaine :
sperme, urine, échantillon
épididymaire et
testiculaire, glaire
cervicale (*)
Remarques
(Limitations,
paramètres
critiques, …)
Référence de la
méthodePrincipe de la méthode
Nature de
l’examen/analyse
Nature de l’échantillon
biologique
Fluctuations
du nombre total de
spermatozoïdes par
éjaculat chez un
même individu
(n=5, 1 recueil/1-2mois)
Un spermogramme ?
… des spermogrammes !
Prélèvement
Les instructions
pour le prélèvement
sont affichées dans la pièce
de recueil et reprises
verbalement par le personnel
installant le patient
dans la pièce de recueil
Caractéristiques du
sperme évaluées dans
l’analyse du sperme ou
spermogramme-
spermocytogramme
1. Caractéristiques
physiques
2. Caractéristiques
spermatiques
3. Autres cellules
Hétérogénéité du mouvement des
spermatozoïdes humains: méthode de l’OMS
OMS OMS
1999 2010
(37°C) (ambiant
ou 37°C)
a=10
PR=24
b=14
c=9 NP=9
d=13 IM=13
… dans un hémocytomètre
L’OMS recommande la
Cellule de Neubauer modifiée
Règle pour compter :
<10 sp. par grand carré compte sur 25 grands carrés
10-40 sp. par grand carré compte sur 10 grands carrés
>40 sp. par grand carré compte sur 5 grands carrés
Mesure de la concentration de spermatozoïdes
Caractéristiques de la chambre de la cellule
de Neubauer « improved » : Carré central
de la chambre comportant 25 grands carrés,
chacun composé de 16 petits carrés
Evaluation de la morphologie
des spermatozoïdes
« En routine la normalité morphologique des
spermatozoïdes doit être évaluée par une méthode de
classification basée sur des critères stricts (dixit WHO)
Le % de spermatozoïdes morphologiquement normaux
est calculé à partir de l ’évaluation de 200 spermatozoïdes
Dans certains cas, il est souhaitable de recenser le détail des
atypies morphologiques pour calculer l’Index d’Anomalies
Multiples » WHO (1999-2010)
Evaluation de la morphologie des
spermatozoïdes en France
La méthode de David modifiée a été adoptée en France par la plupart des
laboratoires publics et privés
En plus de l ’évaluation du % de spermatozoïdes morphologiquement
normaux
elle permet:
le classement de 7 anomalies de la tête
3 anomalies de la pièce intermédiaire
5 anomalies de la pièce principale
le calcul de l’index d'anomalies multiples (IAM)
Principe de la classification de David
et du calcul de l’IAM
3 anomalies
présentes
3 anomalies
recenséesNombre total d'anomalies T = 103
1,56= IAM T / Nb de spz anormaux :
03320
2
03200
81
34
2653
Piè
ce
Piè
ce
pri
nci
pal
e in
term
édia
ire
Têt
e
Multiple
Morphologiquement normal
Anomalie du postacrosome
AllongéeAmincie
MicrocéphaleMacrocéphale
Reste cytoplasmique
AmincieAnguléeAbsenteCourte
EnrouléeMultiple
Acrosome anormal ou absent
Irréguliere
Formation initiale et continue + CQ:Une nécessité en Biologie polyvalente...
Un impératif absolu en BDR !
en Biologie de la Reproduction tests
principalement au microscope
→ nature subjective
L’étape analytique
en Biologie polyvalente Automates
PRÉ-REQUIS AUX CIQ (ET EEQ)
Nécessité impérieuse d’une formation théorique et pratique initiale
(BDR non enseignée en école / spécificité du domaine / nature
subjective des analyses au microscope)
d’après Mortimer
EVALUATION DE 100 SPERMATOZOIDES PAR
62 TECHNICIENS : VARIABILITE ET INFLUENCE
DU SUIVI DES BONNES PRATIQUES
Eustache et
Auger, 2003
Différence (%) par rapport
aux données de référence
p<0,01
Participants suivant
les recommandations
Participants ne suivant
pas les recommandations
p<0,05
p<0,01
p<0,01
- 20 -10 0 10 20 30 40
ROLE DE L'EXPERIENCE CHEZ 12 TECHNICIENS:
EXEMPLE DE LA CONCENTRATION
VARIABILITE INTRAINDIVIDUELLE CV
11 %
31 %
4/12 4/12
2/12 2/12
Exact et Précis
Exact et Imprécisou Précis et Inexact
Inexact etImprécis
Pratique quotidienne et > 3 ans
Pratique récenteet/ou épisodique
VARIABILITE INTERINDIVIDUELLE
Auger et al, 2000
Pratique quotidienne et > 3 ans
Pratique récenteet/ou épisodique
Caractéristiques du
sperme évaluées dans
l’analyse du sperme ou
spermogramme-
spermocytogramme
1. Caractéristiques
physiques
2. Caractéristiques
spermatiques
3. Autres cellules
Eléments d’orientation
du compte rendu de
l’analyse de sperme
2. Caractéristiques
spermatiques
Efficacité de la spermatogénèse
Nombre total
Qualité de la spermiogénèse
Profil morphologique
Maturation épididymaire
Mobilité/vitalité
Nature du micro-environnement
du tractus génital
Mobilité/vitalité
Eléments d’orientation
du compte rendu de
l’analyse de sperme
3. Autres cellules
Processus « toxique » au
niveau de la cohésion des
cellules de l’épithélium
séminifère (=exfoliation des
cellules germinales plus ou
moins profondes)
Cellules de la lignée germinale
(possible) inflammation /
infection du tractus et/ou des
glandes associées
Cellules de la lignée blanche
notamment des polynucléaires
Orientation pronostique*
(plusieurs examens si
nécessaire)
Elle se fonde sur:
La durée d’infécondité
Le reste du bilan dans le
couple
Les valeurs de référence
disponibles
* Elle présente
une certaine
relativité
Délai d’abstinence sexuelle (n’affecte pas la morphologie)
Ensemble des caractéristiques( Nb total de spz. Mobiles / normaux)
Défauts avec «résonnance» fonctionnelle (vitalité, acrosome,…)
Répéter après 3 mois en cas d’«anomalies» *
Accorder une certaine relativité aux seuils proposés et éviter les termes oligo, …
Interprétation
* variabilité intra-individuelle et modulation «environnementale»
PRÉ-REQUIS A L’INTERPRETATION DES RESULTATS DE L’EXAMEN DE SPERME (AUSSI TMS, QUALITE PAILLETTE, etc...)
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95100
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95100
Inte
rva
lle d
e c
on
fia
nce
à 9
5%
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
70
75
80
85
90
95
100
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
70
75
80
85
90
95
100
Intervalles de confiance à 95%pour un % trouvé à partir d'un échantillonage de 200
Résultats :
Tech 1: 15%
Tech 2: 22%
Les intervalles liés à l’incertitude
de mesure pour les résultats
15% et 22% se recouvrent :
Les résultats ne doivent pas être
considérés comme différent//////
EXEMPLE DE LA RELATIVITE D’UN RESULTAT DE TMS
Estimation du nombre total
de spermatozoïdes mobiles
progressifs (x106)
selectionables dans
l’éjaculat entier
Le nombre de spermatozoïdes mobiles
trouvés est “n’importe quelle valeur” dans
un intervalle large de plusieurs millions de
spermatozoïdes mobiles!
IGNORER LES MARGES D’INCERTITUDE
PEUT NOTABLEMENT NUIRE A
L’INTERPRETATION AUSSI BIEN POUR LE
DIAGNOSTIC QUE POUR LA POSSIBLE
STRATEGIE EN AMP
I sur l’estimation de la mobilité dans l’echantillon
sélectionné
I sur mesure volume fraction/ejaculat
I sur estimation concentration dans le
sperme natif
extrapolation àl’ejaculat entier
+
+
+
Incertitude (I) globale:
Qu’est ce qu’une morphologie normale ?
Selon l’OMS 99 : 15 % de spermatozoïdes normaux
Selon cette étude :
40% (critères de David)
Selon cette étude :
19% (critères stricts)
et 39% (critères de David)
Probabilité d ’obtention d’une grossesse
en 1 an sans aucun traitement
(population générale, volontaires)
Slama et al, 2001
0 20 40 60 80
Critères de David
% grossesses obtenues sans aucun
traitement 1 an et 3 ans après
un 1er examen de sperme
(bilan d’une infertilité du couple)
Jouannet et al, 198880
60
40
20
0<20 30 40 50 60 >60
% spermatozoïdes normaux
3
2
1
00 10 20 30 40 50
Critères stricts
Les limites des valeurs de référence de l’OMS:
Exemple de la concentration
Probabilté d’obtention d’une grossesse dans le cycle
en fonction de la concentration
Bonde et al., 1998
Délai d'infécondité
Fertilité antérieure : couple/homme/femme
Sexualité
Mode de vie / profession
Antécédents médicaux généraux
Antécédents génito-urinaires
Fertilité dans la famille
Traitements médicaux suivis
Examens biologiques antérieurs : sperme, autres
Questionnaire partenaire féminin
Examen clinique uro-génital
Bilan pour prise en charge ultérieure
L’EXPLORATION DE L’HOMME DOIT COMPORTER
UN INTERROGATOIRE ET UN EXAMEN CLINIQUE :