Artikel Mikro2

5/24/2018 Artikel Mikro2

1/21

Appl. Environ . Microbiol . 1994 , 60 ( 6 ) : 2017.

J. M. Membre dan P. M. Burlot

marginalis Pseudomonas

Pertumbuhan dan Pectinolytic Kegiatan

Pengaruh Suhu , pH , dan NaCl pada

http://aem.asm.org/content/60/6/2017

Diperbarui informasi dan layanan dapat ditemukan di :

Ini termasuk :

TANDA KONTEN

mengutip artikel ini ) , more

Menerima : RSS Feed , eTOCs , peringatan email gratis ( ketika artikel baru

Informasi tentang perintah cetak ulang komersial :

http://journals.asm.org/site/misc/reprints.xhtml

Untuk berlangganan ke ASM Journal lain pergi ke :

http://journals.asm.org/site/subscriptions/

Download dari http://aem.asm.org/ pada 20 Mei 2014 oleh tamu

TERAPAN DAN LINGKUNGAN MIKROBIOLOGI , Juni 1994, hal. 2017-2022 Vol . 60 , No 6

0099-2240/94 / $ 04,00 +0

Copyright C ) tahun 1994, American Society for Microbiology

Pengaruh Suhu , pH , dan NaCl terhadap Pertumbuhan dan

Kegiatan Pectinolytic Pseudomonas marginalis

J. M. Membre * DAN P. M. BURLOT

Laboratoire de Genie des Procedes et de Technologie Alimentaire , Institut National de

la Recherche Agronomique ,

59651 Villeneuve dAscq Cedex , Prancis

Diterima 10 Januari 1994/Accepted 31 Maret 1994

Interaksi suhu ( 4 , 10 , 18 , dan 30 C ) , pH ( 6 , 7 , dan 8 ) , dan NaCI ( 0 , 2,5 , dan 5 % )

dan mereka


2/21

efek pada laju pertumbuhan spesifik , fase lag , dan enzim pectinolytic Pseudomonas

marginalis dievaluasi .

Metodologi respon permukaan diadaptasi untuk menggambarkan respon parameter

pertumbuhan untuk lingkungan

perubahan . Untuk mendapatkan kondisi yang baik penyimpanan , tindakan gabungan

garam dan suhu yang diperlukan . Pada suhu 4 C

dengan konsentrasi NaCl 5% dan pH 7 , jeda waktu adalah 8 hari dan tidak ada

pertumbuhan diamati pada suhu 4 C

dengan 5 % NaCl dan pH 6 . Dengan tidak adanya garam , P. marginalis bisa tumbuh

terlepas dari suhu dan pH .

Pektat lyase dan pektin lyase diproduksi oleh P. marginalis , sementara aktivitas pektinmetil esterase tidak

diamati dalam kondisi budaya kita . Produksi enzim tergantung pada suhu , pH , dan

garam

konsentrasi tetapi juga pada usia budaya . Enzim Pectinolytic yang berlimpah

diekskresikan selama

fase diam , dan bahkan pada 4 C , setelah 2 minggu penyimpanan , aktivitas enzim

dalam budaya supernatan yang

cukup untuk merusak sayuran . Kedua pertumbuhan bakteri dan produksi enzimatik

harus diperhitungkan

untuk memperkirakan dengan benar kehidupan rak sayuran .

Pseudomonas marginalis adalah bakteri phytopathogenic sering

dilaporkan sebagai penyebab penting dari pembusukan sayuran

sebelum dan setelah panen . Gram - negatif , psychrotrophic

bakteri dianggap flora dominan pada selada

( 11 , 16 , 18 , 19 ) , dan P. marginalis sering digambarkan sebagai

bakteri pectinolytic ( 1 , 14 ) . Pengobatan salad sayuran

dengan larutan yang mengandung klorin dapat digunakan untuk mengurangi

jumlah kontaminasi mikroorganisme , tetapi proses

pemotongan dan pencampuran menciptakan kondisi yang mendukung mikroba


3/21

Pertumbuhan ( 2 ) . Selada memiliki umur simpan sekitar 2 minggu, tergantung

pada kualitas awal , suhu penyimpanan , dan kemasan kondisi .

Gejala utama dari bakteri busuk lunak adalah

maserasi jaringan tanaman yang dihasilkan dari kehancuran

lamella tengah dan dinding sel primer dalam jaringan terjajah .

Kemampuan bakteri busuk lunak menyebabkan pembusukan sayuran

hasil terutama dari kemampuan mereka untuk menghasilkan sejumlah besar

enzim pectinolytic . Pektat lyase ( PL ) aktivitas telah

terdeteksi sebelumnya dalam supernatan bakteri phytopathogenic

dan telah digambarkan sebagai penyebab paling penting dari lembut

penyakit busuk ( 6 , 7 , 17 , 26 ) . Pektin liase ( PNL ) dan pektin metil

esterase ( PME ) juga disebut sebagai enzim yang diproduksi pectinolytic

oleh mikroorganisme ( 6 ) . P. marginalis telah dijelaskan

sebagai bakteri penghasil PL ( 5 , 21 ) , PNL ( 22 , 25 ) , dan kecil

jumlah PME ( 5 , 21 ) .

Untuk mengukur pertumbuhan dan produksi enzim dari P. marginalis

selama penyimpanan pada suhu rendah , dan untuk menentukan

pengaruh pH dan konsentrasi NaCl pada kehidupan rak makanan

produk, kami telah memilih pendekatan mikrobiologi prediktif .

Metode ini menggunakan persamaan matematika untuk memperkirakan bagaimana

karakteristik pertumbuhan ( misalnya , jeda waktu dan laju pertumbuhan spesifik )

dipengaruhi oleh kondisi penyimpanan ( 3 ) . Di antara berbagai

model yang diusulkan , metode permukaan respon secara luas

digunakan dalam mikrobiologi makanan ( 4 , 13 ) . Di sisi lain,

* Sesuai penulis . Mailing address: Laboratoire de Genie des

Procedds et de Technologie Alimentaires , Institut National de la


4/21

Recherche Agronomique , 369 , rue Jules Guesde , BP 39 , 59651 Villeneuve

d' Ascq Cedex , Perancis. Telepon : . ( 33 ) 20 43 54 24 Fax : ( 33 ) 20 43

Alamat 54 65 Surat elektronik : . [email protected] .

Persamaan Arrhenius digunakan untuk menggambarkan pengaruh suhu

pada pertumbuhan Pseudomonas fluorescens ( 1 , 27 ) , dan yang

aplikasi umum ketika beberapa faktor bertindak dalam kombinasi

( 9 ) .

BAHAN DAN METODE

Organisme , media , dan kondisi budaya . organisme

digunakan dalam penelitian ini adalah P. marginalis CFBP 1387 ( ATCC 10844 ,

NCPPB 667 ) . Medium pertumbuhan adalah pektin ( 4 g liter - 1 )

( Unipectine URS 150; Sanofi Bio - industri , Paris , Prancis ) -

ekstrak ragi ( 2 g liter - ' ) - NH4Cl ( 1 g - liter ' ) - MgSO4 ( 0,5 g

liter - ' ) , ditambah dengan piperazine - N , N' -bis ( 2 - ethanesulfonic

acid ) ( 50 mM ) . pH telah disesuaikan menurut eksperimental

desain , dengan NaOH atau H2SO4 .

Percobaan pertumbuhan dilakukan dalam volume 50 - ml media

dalam botol 250 ml . Inokulum adalah 4 % ( vol / vol ) dari 2 - hari

budaya diinkubasi pada suhu 30 C dan pH 7 , dalam rangka untuk mendapatkan awal

konsentrasi biomassa dari 105 CFU / ml . Pertumbuhan diukur

dengan spektrofotometer pada A550 . Densitas optik adalah linear

berkorelasi dengan berat kering . Kurva pertumbuhan bakteri yang dipasang oleh

model pertumbuhan sigmoidal ( dimodifikasi Gompertz ) dengan tiga

parameter ( 28 ) : . ln ( N / NO ) = A - exp { - exp [ p / A ) e ( A -

t ) + 1 ] } , di mana A adalah asimtotik tingkat ln ( N/N0 ) , N adalah sel

density , p . adalah laju pertumbuhan spesifik maksimum ( jam - ' ) , X adalah


5/21

durasi fase lag ( jam ) , t adalah waktu ( jam ) , dan e adalah

eksponensial 1 [ exp ( 1 ) = 2.718 ] .

Tes enzim . Setelah sentrifugasi ( 4.000 x g , 10 menit),

budaya supernatan disaring melalui 0,45 , um - pori ukuran

kertas, disimpan pada suhu -20 C , dan kemudian diuji untuk pectinolytic

aktivitas enzim .

Pengukuran aktivitas PME didasarkan pada penurunan pH

campuran reaksi karena kenaikan dalam kelompok karboksil bebas

selama aksi enzim ( 12 ) . Sampel enzim ( 0,1 ml ) ditambahkan ke

1,5 ml dari 2 % ( wt / vol ) pektin dalam 10 mM bufer fosfat natrium

( pH 7 ) dan 1 ml air suling . Satu unit didefinisikan sebagai

jumlah enzim yang menyebabkan penurunan pH dari 0,1 di 30

min .

Pembelahan glikosidik rantai galacturonan

2017


2018 Membre DAN BURLOT

terjadi dengan adanya alkali dengan reaksi transelimination

yang menghasilkan oligouronides dengan A4 - 5 ikatan rangkap dalam

residu terminal akhir nonreducing rantai ( selanjutnya

disebut asam galacturonic sebagai tak jenuh ) . itu

pembagian lyases dilakukan atas dasar preferensi mereka

untuk sangat esterifikasi asam pectinic ( PNL ) atau asam pectic ( PL ) ( 6 ) .

Kegiatan PL diukur dengan peningkatan A235 dari 4,5

produk reaksi tak jenuh . Pengujian telah sebelumnya

dijelaskan ( 8 ) dan telah dimodifikasi sebagai berikut . Pertama , 0,3 ml dari 1 %


6/21

( wt / vol ) asam polygalacturonic dinetralkan oleh NaOH dicampur

dengan 1,5 ml larutan CaCl2 ( 0,0005 M dalam 0,1 M Tris - HCI [ pH

9 ] ) dan 1,1 ml air suling . Kemudian , 0,1 ml sampel enzim

segera ditambahkan dan peningkatan A235 diukur dalam

Cuvette 3 - ml dengan jalan cahaya 1 - cm pada 30 C dan dipantau sebagai

fungsi waktu dengan spektrofotometer rekaman . satu

unit didefinisikan sebagai jumlah enzim yang menghasilkan 1

, umol produk tak jenuh per min . Kepunahan molar

Koefisien untuk produk tak jenuh pada 235 nm ( C235 ) adalah 4.600

M - ' cm ' , dan unit enzimatik ( U ) dihitung sebagai U =

[ ( AA ) / E235 ] . 106 , di mana AA adalah peningkatan absorbansi per

menit . Untuk mengukur aktivitas pada berbagai suhu , yang

Reaksi dilakukan pada 5,5 , 11 , 17,5 , 25 , 30 , dan 33,5 C.

Kegiatan PNL diukur dengan reaksi antara

produk tak jenuh akhir degradasi pektin dan thiobarbituric

acid ( 23 ) . Setelah inkubasi 5 ml larutan pektin ( 1 %

dalam 0,05 M Tris - HCl penyangga [ pH 8,5 ] ) -1 ml 0,01 M CaCl2 - 1 ml

enzim solusi - 3 ml air suling selama 2 jam pada suhu 30 C,

Reaksi dihentikan dengan penambahan 0,6 ml dari 9 % ( wt / vol )

ZnSO4 7 H20 dan 0,6 ml 0,5 M NaOH . diendapkan

protein dan substrat yang tidak terpakai dihapus oleh sentrifugasi

( 3.000 x g , 10 menit ) . Supernatan dicampur dengan barbiturat

asam , dan campuran dipanaskan dalam bak air mendidih selama 30

min . Setelah pendinginan , A550 dibacakan terhadap referensi

kuvet yang berisi reagen yang sama tetapi yang tidak diserahkan kepada

menetaskan . Satu unit didefinisikan sebagai jumlah enzim yang


7/21

menyebabkan perubahan absorbansi 0,01 . Inkubasi adalah

dilakukan pada 4 , 10 , 18 , dan 30 C untuk mengukur aktivitas sebagai

fungsi temperatur .

Desain eksperimental . Desain eksperimental dipekerjakan

untuk menilai efek dari suhu , pH awal , dan garam

konsentrasi pertumbuhan dan produksi enzim P. marginalis .

Tingkat faktor dan sifat garam dipilih berikut

banyak digunakan dalam proses siap digunakan sayuran . Sebuah faktorial

desain yang digunakan , dengan empat suhu ( 4 , 10 , 18 , dan 30 C ) ,

tiga tingkat pH ( 6 , 7 , dan 8 ) , dan tiga konsentrasi NaCl ( 0 ,

2,5 , dan 5 % [ wt / vol ] ) . Dua percobaan dilakukan pada

setiap kombinasi suhu , pH , dan garam ; hasil

diberikan di bawah ini adalah cara data .

Analisis statistik . Analisis statistik ( koefisien regresi

dan analisis varians ) dilakukan dengan menggunakan GLM yang

Prosedur Analisis Sistem Statistik ( SAS Institute

Inc, Cary , N.C. ) . Dua data yang hilang karena kurangnya

Pertumbuhan (untuk budaya dalam kondisi 4 C , pH 6 , dan 5 %

NaCl ) . Kami tidak percaya bahwa dua nilai dihilangkan mempengaruhi

pengembangan model.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Parameter pertumbuhan . Untuk setiap kombinasi garam , suhu ,

dan pH belajar , ada perbedaan diamati di final

absorbansi dalam fase diam , kecuali ada

pertumbuhan. Jadi , kami hanya memperhitungkan pertumbuhan spesifik

tingkat dan fase lag .


8/21

( i ) Laju pertumbuhan spesifik . Persamaan Arrhenius sering

digunakan untuk menggambarkan hubungan antara tingkat pertumbuhan dan

suhu ( 1 , 24 , 27 ) . Hal ini dapat digunakan pada suhu rendah ,

dan itu adalah sesuai dengan teori laju reaksi absolut .

Hal ini diberikan oleh persamaan berikut : LNP . = - ( E , / R ) - ( 1 / T ) +

C , di mana Ea adalah energi aktivasi , R adalah konstanta gas , T adalah

temperatur absolut , dan C adalah konstanta . Di sisi lain ,

metodologi respon permukaan secara luas digunakan untuk memprediksi

tingkat pertumbuhan sebagai fungsi dari beberapa faktor ( 3 , 13 ) . Dalam hal ini ,

linear , efek kuadrat , dan interaktif dari faktor-faktor yang diuji dalam

model regresi linier umum . Kami telah memutuskan untuk menggambarkan

efek dari tiga faktor dalam model umum yang mengambil

efek interaktif dari variabel ke rekening. tanggapan

metodologi permukaan telah dilakukan dengan faktor 1 / T

( kebalikan dari temperatur absolut ) , pH , dan konsentrasi NaCl .

Hanya istilah yang signifikan (uji t , P < 0,05 ) ditulis dalam

persamaan akhir . Persamaan laju pertumbuhan spesifik adalah

ditulis sebagai berikut : Ln [ L = 152,04-9375 1.2 - ( 1 / T ) -1.64

NaCl 5,49 * pH 12593197 * ( 1 , T2 ) -0.06 - NaCl2 - 0.39 * PH22 +

204.24 * ( 1 / T ) * NaCl +0.13 - pH * NaCl . Analisis varians

menunjukkan bahwa model signifikan ( P < 0,05 ) , dan

memiliki nilai R2 0,87 . Persamaan model pertumbuhan ini mirip

persamaan Davey ( 9 ) , tapi di sini , interaksi dengan garam

suhu dan pH diperhitungkan . The Arrhenius

Persamaan tidak sepenuhnya berlaku di suhu kami

jangkauan. Istilah kuadrat signifikan 1Ff2 menunjukkan bahwa kita


9/21

telah mempelajari efek suhu sedikit di bawah optimum

suhu laju pertumbuhan . Dalam Gambar . 1 , diamati dan meramalkan

nilai-nilai yang diplot sebagai fungsi dari suhu dan pH pada dua

konsentrasi NaCl ( 0 dan 2,5 % ) .

Suhu memiliki efek penghambatan yang kuat terhadap laju pertumbuhan .

P. marginalis tumbuh pada media kultur sintetis pada suhu rendah

( 4 C ) dengan laju pertumbuhan spesifik 0,033 h- 1 ( generasi

waktu 21 jam) pada pH 7 dan 0 % NaCl , sedangkan pada pH yang sama dan

konsentrasi garam , . adalah 0,23 h- ( waktu generasi 3 h) di

300C .

Dalam media kultur tanpa NaCl , laju pertumbuhan optimum

diamati pada pH 7 pada semua suhu . Dengan ditambahkan garam ,

sedikit atau tidak ada perbedaan yang diamati antara tingkat pertumbuhan

budaya ditumbuhkan pada media pada pH 7 dan pada pH 8 , sedangkan budaya asam

Media menghambat pertumbuhan pada semua suhu .

NaCl penurunan pertumbuhan di semua pH dan suhu . untuk

Misalnya , pada 18 C dan pH 7 , , . turun dari 0,1 h- ' ( generasi

waktu 7 jam) dengan 0 % NaCl 0,076 h- ' ( waktu generasi 9

h) dengan 2,5 % NaCl dan 0,023 h- 1 ( waktu generasi 30 h)

dengan 5 % NaCl . Kami tidak melihat pertumbuhan P. marginalis

setelah 42 hari pada medium kultur dengan 5 % NaCl dan pH 6 pada

4 C. Dengan demikian , kombinasi dari media asam dan garam ditambahkan

adalah kondisi yang baik untuk menghindari pembusukan makanan , terutama pada low

suhu .

( ii ) Lag waktu . Menurut pendekatan Davey ( 10 ) , yang

logaritma dari kebalikan dari waktu lag ( Ln [ 1 / L ] ) dimodelkan sebagai


10/21

fungsi dari tiga variabel suhu , pH , dan NaCl

konsentrasi . Untuk pemodelan laju pertumbuhan spesifik , respon

metodologi permukaan dipekerjakan untuk menguraikan kedua

memesan model yang jumlahnya banyak . Pemeriksaan model dipasang oleh t

Tes menunjukkan bahwa suhu tiga istilah linear ( 1 / T )

NaCl , dan pH ; satu istilah kuadrat , PH2 ; dan dua interaksi ,

l * NaCl dan pH * NaCl , yang signifikan . Persamaan lag

waktu ditulis sebagai berikut : Ln ( 1 / L ) = -0.2554-9499.95 - ( 1 /

T ) -7,22 * NaCl 8,85 - pH - 0,6114 * PH2 + 1615,8 - ( 1 / T ) - NaCl +

0,1336 * NaCl - pH .

Analisis varians menunjukkan bahwa model adalah

signifikan ( P < 0,05 ) , dan memiliki nilai R2 sebesar 0,89 . Dalam Gambar . 2 ,

nilai-nilai yang diamati dan meramalkan diplot sebagai fungsi dari

suhu dan pH pada dua konsentrasi NaCl ( 0 dan

2,5 % ) .

APPL . ENVIRON . Microbiol .


PERTUMBUHAN DAN PECTINOLYTIC KEGIATAN P. marginalis 2019

0.4

. I 0.3

* _ 0,2

0.0

30

41o

s

Da


11/21

ce

I.

.0

Gambar . 1 . Pengaruh suhu dan pH terhadap laju pertumbuhan spesifik . Prisma teduh,

nilai-nilai yang diamati ; pilar , diprediksi nilai . ( a) konsentrasi NaCl

0 % ; ( b ) konsentrasi NaCl 2,5 % .

Garam sangat meningkat jeda waktu . Sebagai contoh, pada pH 6 dan

30 C , L meningkat dari 4 jam dengan 0 % NaCl menjadi 54 jam dengan 2,5 %

NaCl dan 990 jam ( 6 minggu ) dengan 5 % NaCl .

Efek kuadrat dari pH menunjukkan bahwa lag terpendek

waktu terjadi antara pH 7 dan 8 . Suhu memiliki besar

efek pada jeda waktu .

( iii ) Penghambat pertumbuhan . Menurut King et al . ( 16 ) , yang

populasi bakteri pada selada diproses didominasi oleh

anggota genera Pseudomonas ( 57 % ) , Serratia ( 8 % ) ,

dan Erwinia ( 8 % ) . Mayoritas bakteri tersebut isolat

salad digambarkan sebagai psychrotrophic ( 18 ) . Untuk mendapatkan yang baik

kondisi penyimpanan makanan , tindakan gabungan dari suhu

dan garam diperlukan . Siap-ke - menggunakan sayuran , pada pH 6 atau

6.1 ( 16 ) , akan memiliki umur simpan dari 6 hari pada suhu rendah

( 4 C ) dan konsentrasi NaCl 2,5 % . Tanpa penambahan garam ,

P. marginalis tumbuh pada suhu 4 C dan pH 6 setelah jeda waktu 20 jam , dengan

tingkat pertumbuhan 0,027 h- 1 . Dengan kondisi tersebut , setelah 2

minggu , dengan kontaminasi awal dari 4,1 log10 CFU / g

membukanya campuran salad ( 16 ) , populasi P. marginalis mencapai sampai

7,8 loglo CFU / g . Nilai ini sependapat dengan hitungan bakteri

kontaminan dalam selada disimpan pada 2,8 C ( 7,3 loglo CFU / g ) .


12/21

Produksi enzim Pectolytic dan aktivitas . Ceponis dan

Friedman ( 5 ) melaporkan bahwa aktivitas PME ditemukan menjadi sedikit

dalam budaya P. marginalis filtrat pada selada , dan menurut

Nasuno dan Starr ( 21 ) , sejumlah kecil PME bisa

diekskresikan oleh P. marginalis . Dalam penelitian ini , tidak ada aktivitas PME adalah

mencatat pada setiap suhu , pH , atau konsentrasi garam . PL dan

PNL telah ditemukan dalam filtrat budaya , dan kegiatan mereka

yang diukur . Kehadiran mereka di P. marginalis telah

telah dilaporkan oleh beberapa penulis ( 5 , 21 , 22 , 25 ) , tapi di sini,

pengaruh faktor lingkungan seperti suhu , pH , dan

Konsentrasi NaCl pada produksi mereka dijelaskan .

( i ) Kinetika produksi PL dan PNL . Produksi

PL dan pektin lyase ( PNL ) dengan cepat meningkat selama awal

fase diam dalam supernatan . Sebagai kepadatan sel akhir

adalah kombinasi yang sama apa pun faktor , kecuali dalam

kasus tidak ada pertumbuhan , jumlah enzim yang telah sebanding .

Dengan konsentrasi pektin awal dari 4 g / liter,

produksi masih terdeteksi selama pertumbuhan stasioner

fase . Dalam Tabel 1 , PL dan produksi PNL dicatat sebagai

fungsi waktu budaya dan suhu . Pada 18 C dan pH 7 ,

tanpa penambahan NaCl , P. marginalis mencapai stasioner

fase setelah 3 hari inkubasi ; saat ini PL dan PNL

kegiatan adalah 5,8 dan 7,6 U , masing-masing. produksi enzimatik

meningkat secara linear , dan di 17 hari supernatan budaya ,

kegiatan pectinolytic besar terdeteksi ( PL , 20,2 U , PNL ,

12,1 U ) . Selain itu, setelah 2 minggu penyimpanan pada 4 C , PL dan


13/21

Kegiatan PNL adalah sebagai kuat sebagai 3 - hari budaya supernatan

aktivitas enzim pada 18 C. Dalam kondisi , P. marginalis ini

bisa menjadi kontaminan bakteri yang menyebabkan penting

kerusakan sayuran disimpan selama lebih dari 1 minggu bahkan dalam

cool room .

VOL . 60 , 1994



40

30

20

. c

o ;

10

0

4

6

30 8

Gambar . 2 . Pengaruh suhu dan pH terhadap waktu lag . Prisma teduh, nilai-nilai yang

diamati ; pilar , diprediksi nilai . ( a) konsentrasi NaCl 0 % ; ( b )

Konsentrasi NaCl 2,5 % .

( ii ) Pengaruh suhu pada produksi dan aktivitas . dua

jenis eksperimen yang dilakukan untuk mengukur pengaruh

suhu pada produksi enzim pectinolytic dan aktivitas .

Pertama , PL dan PNL produksi diukur dalam supernatan dari

budaya diinkubasi pada berbagai suhu . Setelah 3 , 7 , 10 , 14 ,

dan 17 hari budaya , produksi pectinolytic ditentukan


14/21

pada suhu 30 C mengikuti metode yang dijelaskan di atas . Dalam Tabel 1 , kita

dapat melihat bahwa setelah 7 hari dari budaya pada 4 C , P. marginalis

menghasilkan 1,3 U PL ( dan 4,2 U dari PNL ) sedangkan pada 18 C , P.

marginalis menghasilkan 7,6 U PL ( dan 7,8 U dari PNL ) . itu

penyimpanan produk makanan di kamar dingin menurun sangat dalam

produksi enzim pectinolytic sehingga memungkinkan kerusakan

Produksi Tabel 1 . Dari PL dan pektin lyase PNL sebagai fungsi dari

suhu dan waktu inkubasi , untuk supernatan budaya

tumbuh pada pH 7 tanpa penambahan garam

PL produksi produksi PNL

Temp

( OC ) 7 10 7 10

hari hari hari hari

4 1.3 2.2 4.2 8.7

10 1.7 2.7 4.1 6.1

18 7,6 10,1 7,8 9,6

30 12.1 16.8 8.1 8.6

sayuran yang harus dihindari . Respon produksi enzim

pada berbagai suhu berbeda untuk PL dan PNL . dengan kami

Kisaran suhu ( 4 sampai 30 C ) tidak ada produksi optimum

ditemukan untuk PL . Produksi meningkat dengan suhu

budaya pertumbuhan . Namun, produksi PNL adalah maksimum pada

suhu 18 C. Untuk enzim ini , produksi optimum

di bawah suhu pertumbuhan optimum ( 25 sampai 30 C ) .

Dalam literatur , mayoritas bakteri isolat pada salad

dicirikan sebagai psychrotrophs , mampu pertumbuhan di kedua


15/21

6 dan 30 C ( 16 , 18 ) . Dengan demikian , bakteri psychrotrophic seperti P.

marginalis disesuaikan dengan tumbuh di bawah suhu optimum

dan dapat merusak sayuran karena mereka enzimatik

konten . Perilaku ini telah diamati untuk

protease dan lipase dari P. fluorescens ( 15 , 20 ) . Hasil ini mungkin

menjadi penting untuk suhu penyimpanan . Sebuah sedikit peningkatan dalam

suhu dapat meningkatkan produksi enzim merusak

tanpa peningkatan paralel dalam jumlah bakteri .

Akhirnya , pengukuran aktivitas pada berbagai suhu

dilakukan . Supernatan budaya tumbuh pada suhu 4 C dan pada

18 C dianalisis , dan kegiatan PL dan PNL yang diukur .

Dalam Gambar . 3 , kegiatan enzim dari budaya 11 hari tumbuh

pada 18 C diplot sebagai fungsi temperatur . kegiatan PL

meningkat secara eksponensial dengan suhu , sementara aktivitas PNL

meningkat secara linear dengan suhu . Kami memperoleh sama

kesimpulan dengan budaya 33 hari ditanam pada suhu 4 C. kegiatan itu



PERTUMBUHAN DAN KEGIATAN PECTINOLYTIC DARI P. marginalis

PL PNL

Saya . ___

0 5 10 15 20

Suhu ( C )

25 30 35

Gambar . 3 . Kegiatan PNL dan PL diukur pada berbagai suhu . Supernatan kultur 11 hari

ditanam pada 18 C , pH 7 , tanpa garam

Selain itu .


16/21

dibagi dengan 4 untuk PL , dan oleh 2 untuk PNL , saat suhu

jatuh 18-4 C.

Sebagai kesimpulan , pada suhu rendah ( 4 C ) P. marginalis memiliki

potensi lemah untuk merusak sayuran , tetapi jika suhu

meningkat menjadi 18 C ( suhu udara ambien ) untuk hanya beberapa

jam , enzim yang diproduksi pada suhu rendah akan menjadi

aktif , dan kemudian produk makanan akan dimanjakan dengan cepat .

( iii ) Pengaruh pH dan konsentrasi garam . Dalam kasus ini tidak ada PL

dan produksi PNL diamati dalam medium kultur dengan 5 %

NaCl . Selain garam sangat menghambat produksi enzim . di

Tabel 2 , pengaruh pH dan konsentrasi NaCl diberikan untuk

dua suhu inkubasi kultur . Tanpa penambahan garam , PL

produksi meningkat dengan pH . Di sisi lain , ada

tidak ada perbedaan antara produksi PNL pada pH 7 dan pH

8 . Pada pH 6 , produksi enzim pectinolytic adalah yang terendah di

semua suhu dan konsentrasi garam . banyak sayuran

salad diasamkan dengan penambahan dressing berbasis cuka ,

dan siap digunakan sayuran biasanya dicampur , cincang ,

diiris , atau parut ; produk ini jatuh , oleh karena itu, ke dalam

kisaran rendah - keasaman ( 18 ) . P. marginalis seharusnya tidak dapat

menghasilkan sejumlah besar enzim pectinolytic dalam kondisi

penyimpanan dingin , karena pH selada dan

siap digunakan salad . Kesimpulannya, mikrobiologi prediktif

pendekatan , diterapkan untuk mempelajari phytopathogenic microor -

Produksi PL dan PNL sebagai fungsi dari pH dan garam Tabel 2 .

Konsentrasi ( % [ wt / vol ] ) , untuk supernatan kultur 30 hari tumbuh


17/21

pada suhu 4 C dan budaya 8 hari tumbuh pada 18 C

PL pro ( produksi produksi PNL

NaCI concn ( % ) NaCI concn ( % )

pH

( ) 2,5 0 2,5

4 C 18C 18C 4 C 4 C 18 C 4 C 180C

6 2,5 1,5 0,1 0,23 7,1 1,2 1,8 0,5

7 5,9 10,3 0,3 0,4 12,3 5,5 7,5 4,0

8 8,2 17,7 0,3 0,3 12,2 6,5 5,2 4,2

ganisms , harus memperhitungkan pertumbuhan bakteri dan

produksi enzimatik dalam rangka untuk memberikan indikasi yang benar

pembusukan ketika memperkirakan masa simpan makanan .

UCAPAN TERIMA KASIH

Kami berterima kasih kepada Martine Kubaczka untuk bantuan teknis .

REFERENSI

1 . Brocklehurst , T. F. , dan B. M. Lund . 1981. Sifat pseudomonad

menyebabkan pembusukan sayuran disimpan pada suhu rendah .

J. Appl . Bacteriol . 50:259-266 .

2 . Brocklehurst , TF , CM Zaman - Wong , dan M. Lund . 1987. A

perhatikan pada mikrobiologi kemasan eceran siap salad

sayuran . J. Appl . Bacteriol . 63:409-415 .

3 . Buchanan , RL 1993 makanan Predictive mikrobiologi . . tren Makanan

Sci . Technol . 4:6-11 .

4 . Buchanan , R. L. , dan J. G. Phillips . Model permukaan 1990. Response

untuk memprediksi dampak dari pH suhu , natrium klorida

konten , konsentrasi natrium nitrit dan suasana di


18/21

pertumbuhan Listeria monocytogenes . J. Food Prot . 53 (5) :370-376 .

5 . Ceponis , M. J. , dan B. A. Friedman . 1959. Pectolytic enzim

Marginalis Pseudomonas dan pengaruhnya terhadap selada . Fitopatologi

49:141-144 .

6 . Chesson , A. 1980. Maserasi dalam kaitannya dengan pasca panen

penanganan dan pengolahan bahan tanaman . J. Appl . Bacteriol .

48:1-45 .

7 . Collmer , A. , dan N. T. Keen. 1986. Peran enzim pectic di

patogenesis tanaman. Annu . Rev Phytopathol . 24:383-409 .

8 . Collmer , A. , J. L. Ried , dan M. S. Mount . Metode 1988. Assay untuk

enzim pectic . Metode Enzymol . 161:329-335 .

9 . Davey , KR 1989. Sebuah model prediktif untuk gabungan suhu

dan aktivitas air terhadap pertumbuhan mikroba selama fase pertumbuhan . J.

Appl. Bacteriol . 67:483-488 .

10 . Davey , KR 1991. Penerapan dari Davey ( linear Arrhenius )

model prediktif untuk fase lag pertumbuhan mikroba . J. Appl .

Bacteriol . 70:253-257 .

11 . Denis , C, dan B. Picoche . 1986. Microbiologie des l6gumes frais

predecoupes . Ind Aliment . Agric . 6:547-553 .

12 . Forster , H. 1988. Pectinesterases dari Phvtophthora infestans .

Metode Enzymol . 161:355-361 .

13 . Gibson , AM , N. Bratchell , dan TA Roberts . 1988 . Memprediksi

pertumbuhan mikroba : respon pertumbuhan salmonella di laboratorium

10

8 -

6


19/21

4

2

VOL . 6 ( ) . 1994 2021

-0

.1

. -I

.0

.1

.1

J. ,

e

x

.0 ,

lw



media yang dipengaruhi oleh pH , natrium klorida dan suhu penyimpanan .

Int . J. Food Microbiol . 6:155-178 .

14 . Gross , D. C, dan Y. S. Cody . 1985. Mekanisme patogenesis tanaman

oleh spesies Pseudomonas . Bisa. J. Microbiol . 31:403-410 .

15 . Gugi , B. , N. Orange, F. Hellio , JF Burini , C. Guillou , F. Leriche ,

dan J. F. Guespin - Michel . 1991. Pengaruh suhu pada pertumbuhan

beberapa kegiatan enzim diekspor dalam bakteri psychrotrophic

Pseudomonasfluorescens . J. Bacteriol . 173:3814-3820 .

16 . King, AD , JA Magnuson , T. Torok , dan N. Goodman . 1991.

Flora mikroba dan kualitas penyimpanan selada sebagian diproses . J.


20/21

Sci Food . 56 (2) :459-461 .

17 . Liao , CH 1989. Analisis lyases Pektat dihasilkan oleh busuk lunak

bakteri yang terkait dengan pembusukan sayuran . Appl. Environ .

Microbiol . 55:1677-1683 .

18 . Manvell , P. M. , dan M. R. Ackland . Deteksi cepat 1986. Dari

pertumbuhan mikroba dalam salad sayuran pada dingin dan suhu penyalahgunaan .

Microbiol Food . 3:59-65 .

19 . Marchetti , R. , MA Casadei , dan ME Guerzoni . 1992. Mikroba

dinamika populasi dalam salad sayuran siap digunakan . Ital . J. Food

Sci . 2:97-108 .

20 . Merieau , A. , B. Gugi , JF Guespin - Michel , dan N. Oranye. 1993.

Pengaturan suhu sekresi lipase oleh Pseudomonas fluorescens

saring MFO . Appl. Microbiol . Biotechnol . 39:104-109 .

21 . Nasuno , S. , dan M. P. Starr . 1966 enzim pectic . Pseudomonas

marginalis . Fitopatologi 56:1414-1415 .

22 . Nikaidou , N. , Y. Kamio , dan K. Izaki . 1992 Kloning Molekuler dan .

urutan nukleotida gen lyase pektin dari Pseudomonas

marginalis N6301 . Biochem . Biophys . Res . Commun . 182 ( 1 ) : 14 -

19 .

23 . Pitt , D. 1988. Pektin liase dari Phoma medicaginis var pinodella .

Metode Enzymol . 161:350-354 .

24 . Schoolfield , RM , PJH Sharpe , dan CE Magnuson . 1981.

Regresi non - linear tingkat bergantung pada suhu biologis

model berdasarkan teori reaksi - tingkat absolut . J. Theor . Biol .

88:719-731 .

25 . Sone , H. , J. Sugiura , Y. Itoh , K. Izaki , dan H. Takahashi . 1988.


21/21

Produksi dan sifat pektin liase di Pseudomonas marginalis

diinduksi oleh mitomycin C. Agric . Biol . Chem . 52 ( 12 ) : 3205 -

3207 .

26 . Tsuyumu , S. , dan A. K. Chatterjee . 1984. Pektin produksi lyase

di Erwinia chrysanthemi dan soft- rot spesies Erwinia lainnya . Physiol .

Pathol tanaman . 24:291-302 .

27 . Willcox , F. , M. Mercier , M. Hendrickx , dan P. Tobback . 1993.

Pemodelan pengaruh suhu dan karbon dioksida pada

pertumbuhan Pseudomonas fluorescens . Microbiol Food . 10:159 -

173 .

28 . Zwietering , MH , I. Jongenburger , FM Rombouts , dan K. van't

Riet . Pemodelan kurva pertumbuhan bakteri 1990. . Appl. Environ .

Microbiol . 56:1875-1881 .



Artikel Mikro2

Documents

Transcript of Artikel Mikro2