UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA

FACULTAD DE AGRONOMA

Departamento Acadmico de Ciencias Agrarias

ARTCULO CIENTFICO

GERMINACIN DE SEMILLA Y OBTENCIN DE LA RELACIN ANA/BAP PARA LA ORGANOGNESIS DE LA CAOBA (Swietenia macrophylla C. King) EN CULTIVO IN VITRO 1/

RENATO DIAZ CHIRINOS 2/JULIO ALFONSO CHA WONG 3/

1/ Tesis para optar al ttulo de Ing Agr, Universidad Nacional Agraria de la Selva. Tingo Mara.2/ Tesista, Bachiller en Ciencias Agrarias, Facultad de Agronoma. UNAS. Tingo Mara.3/ Asesor, Blgo M.Sc. Docente de Facultad de Agronoma. UNAS. Tingo Mara.

RESUMEN

Con el fin de determinar un medio de y la concentracin apropiada de cido giberlico en la germinacin in vitro de las semillas de caoba y la relacin cido naftalenactico/bencilaminopurina (ANA/BAP) para la organognesis de los segmentos nodales de caoba en cultivo in vitro. Fue conducido un experimento en el laboratorio de Biotecnologa de la Facultad de Agronoma UNAS, de Julio a diciembre del 2012. Para determinar la mejor condicin de germinacin, se utilizaron los medios basales Murashige Skoog MS (1962) y Lloyd Mc Cown WPM (1980) y agar ms agua a estos medios se les aadi diferentes concentraciones de cido giberlico, al mismo se realizaron ensayos de micropropagacion in vitro de caoba, para establecer la relacin optima de ANA/BAP apropiado para la fase de multiplicacin de yemas y ndulos de caoba, para los estudios pertinentes el mtodo estadstico utilizado fue el Diseo Completamente al Azar (DCA) utilizando la prueba de Tukey (=0.05) para la comparacin de medias.

En los experimentos de germinacin las semillas de caoba, fueron desinfestadas por inmersin en etanol 70 (1 minuto), seguidas de una solucin de NaOCl al 2% ms el agregado de dos gotas de Tween, durante 5 minutos y en agitacin; finalmente se enjuag tres veces con agua destilada estril para luego ser sembrados en los tratamientos que contenan MS* WPM* con conbinaciones de 0,1y 3 mg/l de cido giberlico. Para los ensayos de micropropagacion se utilizaron plntulas de caoba germinadas in vitro de cual se extrajo segmentos de 1-1.5 cm de largo, las mismas que fueron sembradas en el medio MS* con variadas relaciones de ANA/BAP.

Del estudio realizado, el medio WPM* con una concentracin de 1 mg/L de cido giberlico, result ms ptimo en la germinacin y desarrollo vegetativo de las plntulas, teniendo mayor altura de plntula y longitud de raz, sin embargo el testigo; medio (agar ms agua) con concentraciones de AG3 de 0, 1 y 3 mg/L produjeron acciones inhibitorias en el desarrollo de plntulas de caoba. En tanto la mejor relacin de ANA/BAP en la multiplicacin de segmentos nodales de caoba fueron las concentraciones de 2,5 mg/l ANA y 1.5 mg/l de BAP en el medio MS* (1962) por otro lado las dosis de 2.5 mg/l de ANA ms 0.5 mg/l de BAP inhibe el desarrollo de las plntulas al formar callos.

Palabras clave: Germinacin, micropropagacin, segmentos, cido giberlico, naftalenactico, bencilaminopurina, In vitro, hormona, balance.

ABSTRACT

In order to determine an average of and the appropriate concentration of gibberellic acid in the in vitro seed germination mahogany and relationship acid naphthaleneacetic / benzylaminopurine (ANA / BAP) for organogenesis of the nodal segments mahogany in vitro culture . An experiment was conducted in the laboratory of Biotechnology, College of Agronomy-some, from July to December 2012 to determine the best condition for germination, Murashige Skoog basal media MS (1962) and Lloyd Mc Cown WPM used (1980 ) and agar to the media more water was added different concentrations of gibberellic acid, the same assays in vitro micropropagation mahogany were conducted to establish the optimal ratio of ANA / BAP appropriate for the multiplication phase of buds and nodules mahogany for relevant studies the statistical method used was Completely Randomized Design (DCA) using the Tukey test ( = 0.05) for comparison of means.

In experiments mahogany seed germination were decontaminated by immersion in 70 ethanol (1 minute) followed by a solution of 2% NaOCl plus the addition of two drops of Tween for 5 minutes stirring; finally rinsed three times with sterile distilled water before being planted in treatments containing WPM * MS * 0,1y with COMBINATIONS of 3 mg / l of gibberellic acid. For micropropagation trials mahogany seedlings germinated in vitro were used which segments 1-1.5 cm long extracted, they were planted in MS medium with varying ratios * ANA / BAP.

From the study, the WPM * medium with a concentration of 1 mg / L of gibberellic acid, proved optimal vegetative germination and seedling growth, seedling height having increased root length and yet the control; (agar plus water) with AG3 concentrations of 0, 1 and 3 mg / L produced inhibitory actions on the development of plantlets of mahogany. While the best value of ANA / BAP in multiplying mahogany nodal segments were the concentrations of 2.5 mg / l NAA and 1.5 mg / l BAP in MS medium * (1962) on the other hand the dose of 2.5 mg / l NAA + 0.5 mg / l BAP inhibits the growth of seedlings to form calli.Keywords: germination, micropropagation, segments, gibberellic acid, naphthaleneacetic acid, benzylaminopurine, In vitro hormone balance.INTRODUCCINLos sistemas agroforestales en el Per vienen tomando cada vez ms fuerza, es as que, se vienen instalando cultivos asociados de caf o cacao con especies maderables de corto y largo crecimiento vegetativo, por ejemplo, de la familia Meliaceae, lo cual incrementara la rentabilidad de tales cultivos, principalmente cuando los precios de los productos cosechados son bajos.

Es as, que la Swietenia macrophylla C. King, conocida mayormente como caoba, se ha convertido en una de las especies ms solicitadas para su comercializacin en el pas, por las caractersticas fsicas y mecnicas que presenta su madera. Sin embargo, visto que no existen reas reforestadas de consideracin que contrarresten los volmenes de madera que se extraen, se deben plantear soluciones que permitan regenerar bosques o sistemas que contengan estos rboles.

La escasez de semilla, unido a la prdida progresiva y rpida de su viabilidad a partir del cuarto mes, as como, la irregularidad en su produccin, la alta diversidad de especies por rea, la baja frecuencia de individuos por rea, la dificultad de acceso y el alejamiento de los rodales semilleros, ocasionan frecuentemente el uso limitado de la caoba en los programas agroforestales. De otro lado, esta especie presenta un rpido crecimiento y buena adaptabilidad en nuestra zona; esto significa pensar en programas de reproduccin de plntulas en forma extensiva, por sus ventajas, las tcnicas de cultivo in vitro ofrecen una alternativa para la produccin de plntulas a gran escala y preservacin del germoplasma. Adems, permite superar las restricciones de los mtodos de propagacin sexual tradicionales. No obstante, existen escasas metodologas especficas para la introduccin de la caoba con esta tecnologa en la economa del pas. Es por estas razones que es necesario estandarizar una metodologa de micropropagacin para esta especie.

El objetivo principal de este trabajo de investigacin fue determinar un medio de cultivo con la concentracin de cido giberlico apropiado para la germinacin de semilla de caoba y obtencin de la relacin cido naftalenactico/bencilaminopurina (ANA/BAP) para la organognesis de la caoba en cultivo in vitro.MATERIALES Y METODOS

El presente trabajo de investigacin se realiz en el Laboratorio de Micropropagacin in vitro de la Facultad de Agronoma, Universidad Nacional Agraria de la Selva (UNAS), ubicada en el km 1.5 carretera Tingo Mara Hunuco, del distrito de Rupa Rupa, provincia de Leoncio Prado, departamento de Hunuco

El objetivo de los ensayos de germinacin responder a probar la mejor concentracin de cido giberlico y el medio de cultivo en el desarrollo de las semillas de caoba. El material vegetal que se utiliz fueron semillas de caoba (S. macrophylla C. King) provenientes de rodales semilleros del Bosque Reservado de la Universidad Nacional Agraria de la Selva (BRUNAS); las cuales se recolectaron en el mes de Julio del 2012.

Los medios de cultivo, utilizados fueron el MS* (1962) y WPM*(1980) los que contenan 30 g/L de Sacarosa (azcar), 7 g/L de agar, con concentraciones de 0, 1 y 3 mg/L de cido giberlico. En donde se establecieron las semillas de caoba, que fueron desinfectadas por inmersin en etanol 70 (1 minuto), seguidas de una solucin de NaOCl al 2 % ms el agregado de dos gotas de Tween, durante 5 minutos y en agitacin constante. Para luego ser sembradas frascos esterilizados en temperaturas de 121C y 15 libras de presin. Los tratamientos en estudio fueron Los medios MS, WPM y Agar +agua con combinaciones de 0,1 y 3 mg/L de cido Giberlico en donde evaluaron la altura y dimetro de plntula, tiempo y porcentaje de germinacin y la Longitud de raz.

En la micropropagacin in vitro, se busc establecer la relacin optima de cido naftalen actico (ANA) y bencilaminopurina (BAP) apropiada para la fase de multiplicacin, con segmentos uninodales de 1 1.5 cm de largo, tomados del pice y entre el tercer nudo y el nudo cercano a los cotiledones cultivados en tubos de ensayo de 2.5 x 15 cm con 12 ml/tubo con temperaturas de 25C por 16 horas de luz. En el estudio de la presente investigacin se utiliz el Diseo Completamente al Azar (DCA) con dos factores y 9 repeticiones para cada tratamiento y con un ndulo por repeticin, los resultados fueron sometidos a la prueba de Tukey con un nivel de significancia de 0.05 de probabilidad, los que fueron analizados en el paquete estadstico Minitab 16 versin 2010.RESULTADOS Y DISCUSINAltura de plntula en la Germinacin.

En el Cuadro 1 segn la prueba de Tukey ( = 0.05), se observa que entre los tratamientos: T8 (WPM +1 mg/L AG3), T5 (MS + 1 mg/L AG3), T9 (WPM + 3 mg/L AG3), estadsticamente no existe diferencias; cuyas alturas de plntula oscilan entre 6.26 6.8 cm logrados en un periodo de dos meses despus de la instalacin, respecto al resto de los tratamientos con los cuales son estadsticamente diferentes, cabe sealar que los tratamientos testigo; medio (Agar ms agua) con concentraciones de 0, 1 y 3 mg/L de AG3 produjeron acciones inhibitorias en el desarrollo de plntulas de caoba, puesto que despus de germinar no mostraron desarrollo vegetativo alguno. Cuadro 1. Prueba de Tukey ( = 0.05) de altura de plntula de caoba.Clave de los tratamientosTratamiento

Altura de Plntula (cm)Significacin

T8 (WPM +1 mg/L AG3)6.800a

T5 (MS + 1 mg/L AG3)6.744a

T9 (WPM + 3 mg/L AG3)6.261a

T6 (MS + 3 mg/L AG3)3.500b

T7 (WPM + 0 mg/L AG3)3.444b

T1 (Agar + Agua + 0mg/L AG3)0.000c

T2(Agar+ Agua + 1mg/L AG3)0.000c

T3 (Agar + Agua + 3mg/L AG3)0.000c

T4(MS +0 mg/L AG3)0.000c

De otro lado se descarta que la inhibicin de estas semillas se debe a la metodologa de desinfeccin ya que los dems tratamientos dieron resultados favorables en la altura de planta, el proceso de desinfeccin fue parecido a lo propuesto por MUOZ (2003) en semillas de cedro, donde la semilla se escarific manualmente, la desinfeccin del ex plante se hizo con leja comercial (5.1%) al 50% v/v por 15 min, 3 enjuagues con agua estril.

Cuadro 2. Prueba de Tukey ( = 0.05) para los efectos simples, en la altura de planta en caoba.A en b2A en b3B en a2A en b1

TratAltura (cm)Sig.TratAltura (cm)Sig.TratAltura (cm)Sig.TratAltura (cm)Sig.

a1b20.0000Aa1b30.000ab1a20.000aa1b10.000a

a2b26.7444Ba2b33.500bb2a26.700ba2b10.000a

a3b26.8000BA3b36.260bb3a23.500ba3b13.444b

a1: Medio agar + aguab1 0 mg/L AG3 a2 Medio MSb2: 1 mg/L AG3 a3 Medio WPMb3: 3 mg/L AG3

Para el efecto simple A en b2, entre el tratamiento a2b2 (Medio MS con 1 mg/L AG3) y el tratamiento a3b2 (Medio WPM con 1 mg/L AG3 ), no existi diferencias estadsticas significativas a excepcin de tratamiento a1b2 ,para el efecto simple A en b3 entre el tratamiento a2b3 (Medio MS con 3 mg/l AG3) y el tratamiento a3b3 (medio WPM con 3 mg/l AG3), no existi diferencias estadsticas, pero si para hubo diferencias altamente significativas entre los tratamiento a1b3. Para el efecto simple B en a2 entre el tratamiento b2a2 (1 mg/L AG3 en el medio MS) y el tratamiento b3a2 (3 mg/L AG3 en el medio MS), no existi significancia estadstica, para el efecto simple A en b1, entre el tratamiento a2b1 (Medio MS con 0 mg/L AG3) result significativo con respecto a los dems tratamientos.

Figura 1. Comportamiento de la altura de planta para los efectos simples del factor medio de cultivo y concentracin de AG3De acuerdo al Cuadro 2 y Figura 1, para las mejores respuestas se encuentran en los efectos A en b3 y B en a2 en donde se observa que las semillas de caoba responden mejor en el proceso de germinacin en los tratamientos a2b3 (Medio MS con 3 mg/L AG3) y b2a2 (1 mg/L AG3 en el medio MS) y responden a acciones inhibitorias al Medio Agar ms agua con diferentes con combinaciones de 0,1 y 3 mg/L de cido giberlico respecto al efecto simple A en b1, entre el tratamiento a3b1 (Medio MS con 0 mg/L AG3) sin estmulo a la germinacin result significativo con respecto a los otros tratamientos, con una altura de 3.4 cm en donde se puede observar que en este medio no se utiliz AG3 el desarroll este resultado, se asemeja a los obtenidos por TACORONTE et al. (2002) en el cultivo de segmentos de caoba, donde el medio bsico utilizado para la germinacin in vitro fue el de Murashige y Skoog a la mitad de la fuerza inica (1/2 MS).

Dimetro de plntula De acuerdo a la prueba de Tukey ( = 0.05), presentada en el Cuadro 9, para dimetro de plntula realizada para los tratamientos podemos apreciar entre los cinco primeros lugares, en orden de mrito para la caracterstica de dimetro de plntula, estadsticamente no existen diferencias; dentro de estos tratamientos estn involucrados tales como: T5 (MS + 1mg/L AG3), T7 (WPM + 0 mg/L AG3), T6 (MS + 3 mg/L AG3), T9 (WPM + 3 mg/L AG3), T8 (WPM +1 mg/L AG3) cuyos dimetros oscilan entre 1.87 - 2.59 mm, adems cabe sealar que el promedio de dimetro no va acorde a la altura de plntula. De otro lado, las semillas instaladas en los tratamientos T1 (Agar + 0mg/LAG3), T2 (Agar + 1mg/L AG3), T3 (Agar + 3mg/L AG3), T4 (MS +0 mg/L AG3) no mostraron desarrollo vegetativo alguno, visto que estas plntulas inhibieron su crecimiento una vez germinadas.

Cuadro 3. Prueba de Tukey ( = 0.05) de dimetro de planta.Clave de tratamientoTratamiento

Dimetro de Plntula (cm)Significacin

T5 (MS + 1 mg/L AG3)2.5967a

T7 (WPM + 0 mg/L AG3)2.5133a

T6 (MS + 3 mg/L AG3)2.5133a

T9 (WPM + 3 mg/L AG3)1.9533a

T8 (WPM + 1 mg/L AG3)1.8789a

T1 (Agar + 0 mg/L AG3)0.000B

T2(Agar+ 1mg/L AG3)0.000B

T3 (Agar + 3mg/L AG3)0.000B

T4(MS + 0 mg/L AG3)0.000B

Las columnas que presentan las mismas letras agrupan tratamientos que no presentan diferencia estadstica.

En el Cuadro 4, se presentan los resultados resumidos del anlisis de variancia correspondiente a los efectos simples de la altura de planta de caoba.

Cuadro 4. Prueba de Tukey ( = 0.05) para los efectos simples del dimetro de planta de caoba.A en b2

Trat.Dimetro de planta (cm)Sig.

a1b20.000A

a2b22.597A

a3b21.880A

b2: 1 mg/l AG3 a1: Medio agar + agua a2 Medio MS a3 Medio WPM Para el efecto simple A en b2, entre el tratamiento a2b2 (Medio MS con 1 mg/L AG3) y el tratamiento a3b2 (Medio WPM con 1 mg/L AG3), no existi diferencias estadsticas significativas, ni con el a1b2 que germinados las semillas en este condicin no mostraron desarrollo alguno.

Figura 2. Comportamiento de la altura de planta de caoba para los efectos simples del factor de medio de cultivo y concentracin de AG3De acuerdo al Cuadro 11 y Figura 4, para el efecto simple A en b2, los tratamiento a2b2 (Medio MS con 1 mg/L AG3) y el tratamiento a3b2 (Medio WPM con 1 mg/L AG3 ), no existi diferencias estadsticas significativas, y tuvieron comportamientos similares al mostrar que con dosis de 1 mg/L de AG3. ,es por ello que queda demostrado que las mejores condiciones de germinacin se dan en medios de cultivo en donde contengan nutrientes, vitaminas, sales y reguladores pudiendo ser esta el medio MS o WPM y la mejor dosis de AG3 es de 1 mg/L visto que esta gibelina estimula e ayuda en la germinacin de la semilla.

Tiempo de germinacin:

En cuanto al tiempo de germinacin, de caoba oscila entre 8 a 10 das, despus de haber sido sembrados en los medios de cultivo, este dato es muy diferente a las pruebas de germinacin ex vitro por ROJAS (1987) en donde las semillas lograron germinar en17 das, con una resistencia a la germinacin de 25 das, estos resultados son favorecidos por la uniformidad del medio ambiente donde las condiciones controladas de temperatura 28 C aceleran el proceso de germinacin.

Las condiciones de germinacin ptimas se dan en el medio donde contienen nutrientes, vitaminas, sales y reguladores pudiendo ser el medio MS o WPM con concentraciones de 1 mg/L de AG3 tal como seala PEREZ (1981) de otro lado el medio WPM con o mg/L AG3 fue favorable en la germinacin, e desarrollo de plntula, este se puede dar debido a la composicin del medio del cultivo. Esto es muy semejante a los obtenidos por MONTES (2007) en donde se utiliz un medio de agua destilada, 3 % de sacarosa, 0.65 % de agar sin reguladores de crecimiento y se ajust a un pH de 5.7 en el caso del medio WPM con 0 mg/L de AG3 no mostro desarrollo vegetativo positivo al mostrar desarrollo vegetativo, en caso del medio agar ms agua al germinar la semilla es inhibido.

Porcentaje de Germinacin

El porcentaje de germinacin fue de 100% bajo una temperatura, fue de 100% bajo una temperatura 28 y 30 C y a plena luz, parmetros que fueron muy similares a los obtenidos por MONTES (2007), Esto tambin se depende mucho de la viabilidad de las semillas tal como lo sealan los trabajos de MURAYANA y ANGULO (1986).

Porcentaje de contaminacin

El porcentaje de contaminacin, se manifiesta en todo trabajo in vitro, en este trabajo hubo una contaminacin de 10% con bacterias, la baja contaminacin se podra deberse a la apropiada desinfeccin donde la semillas se escarificaron, seguido de inmersin en etanol 70C por 1 minuto, luego con hipoclorito de sodio 2 % ms dos gotas de Tween por 5 minutos en agitacin y finalmente tres enjuagues con agua destilada estril, este se asemeja a los trabajos de MUOZ (2003).

Micropropagacin de segmentos Altura de plntulaEl desarrollo de los brotes, uno de los factores de directa influencia es la concentracin hormonales en este caso del balance auxina y citoquinina. Tal como lo detalla Skoog Y Miller (1965), citado por CARDENAS (2010), mientras una alta relacin auxina/citoquinina estimula la formacin de races, una baja relacin ayuda a la formacin de brotes, a niveles intermedios, esta premisa coincide con nuestras respuestas donde una relacin (2.5 ANA +1.5 BAP) mg/L asignada al tratamiento T9 donde el porcentaje de emisin de brotes es del 100% a diferencia del T3 (2.5 ANA + 0.5 BAP) mg/L dio origen a la formacin de callos.

Cuadro 5. Prueba de Tukey ( = 0.05) de altura de plntula de segmentos micropropagados de Caoba en la relacin de ANA/BAP.Clave de tratamientosTratamiento (mg/L)

Altura de Plntula (cm)Significacin

T9 (2.5 ANA +1.5 BAP) 2.044a

T5 (0.5 ANA + 1.5 BAP) 1.333b

T6 (0.5 ANA + 1.5 BAP) 1.222b

T8 (0.5 ANA + 2.5 BAP) 1.050bc

T7 (1.5 ANA + 1.5 BAP) 0.783bc

T1 (0.5 ANA + 0.5 BAP) 0.733bc

T4(2.5 ANA + 2.5 BAP) 0.717bc

T2 (1.5 ANA + 0.5 BAP) 0.417bc

T3(2.5 ANA + 0.5 BAP) 0.000c

Las columnas que presentan las mismas letras agrupan tratamientos que no presentan diferencia estadstica. Del Cuadro 18 y Figura 7, se deduce que existen diferencias estadsticas significativas entre los tratamientos para altura de planta, lo que quiere decir que los resultados fueron diferentes, siendo el tratamiento T9 (aplicacin al medio MS concentraciones de 2.5 ANA + 1.5 BAP mg/L) con una altura de 2.044 cm superior a todos y el tratamiento, el T3 (Medio MS con concentraciones de 2.5 ANA y O.5 BAP mg/L ) no produjo respuesta alguna a las aplicaciones de ANA y BAP, pues tuvo una accin inhibitoria ya que se produjo la formacin de callos, y por ende no logro desarrollar altura de plntula.

Figura 3. Altura de plntula alcanzada en los distintos tratamientos alcanzados en 45 das de evaluacin.

La diferencia estadstica entre los tratamientos, indica que los comportamientos fueron diferentes en la expresin de esta caracterstica, por lo que no estara influenciado por efectos del factor (A) que el cido naftalenactico (ANA) pero si por el factor (B) bencilaminopurina (BAP) y la interaccin de estas.

Al realizar las comparaciones entre los promedios de los tratamientos se observa que estos anlisis se asemejan a los resultados obtenidos por Rodrguez (2003) citado por COLLADO et al. (2004), donde indica que existe un incremento de los valores de longitud de los brotes segn disminuye o elimina la concentracin de 6-BAP en el medio de cultivo. En este caso cuando se utilizan concentraciones menores de 0.25 mg/L como. De otro lado cuando se utiliz altas concentraciones de ANA como en el T3 (2.5 ANA + 0.5 BAP) mg/L se inhibe el desarrollo de los brotes, al formar callos.

De otro lado cabe hacer mencin que existen factores que influencian tales como la especie de caoba y el tipo de explante utilizado, y no es solo dependencia de la relacin ANA/BAP tal como seala TACORONTE et al., (2002).

Das de formacin de brotes

El tiempo de formacin de los brotes promedio fue de 10 das con uno o dos pares de brotes, en donde la relacin (2.5 ANA + 1.5 BAP) mg/L tuvo una mejor respuesta, lo que difiere a los resultados obtenidos por PEREZ et al (2002) en la micropropagacin de cedro (meliaceae) donde el promedio de das de brote fue de 14,5 das, usando 2,2 M de 2-Ip, 6.5 de kinetina y 13,3 M de la BAP.De otro lado algunos brotes tuvieron desarrollo de callos a los 12 das, tal el T3 donde se us la Auxina ANA a razn de 2.5 mg/L y 0.5 mg/ BAP (Figura 16 de Anexo). Este resultado se asemeja a los obtenidos por GONZALES (2007) con el uso de Dicamba (compuesto qumico organoclorado derivado del cido benzoico) en medio MS como en WPM en concentraciones de 0 - 2 mg/L induce a la formacin de callos a los 7 das posteriores a la siembra, al igual que los obtenidos por (TACORONTE et al., 2002) donde manifiesta que la auxina (ANA) toma valor positivo, indicando que el aumento de su concentracin conlleva a una mayor formacin de callos, mientras que el aumento progresivo de la concentracin de citoquinina (BA), tiene un efecto contrario al disminuir el porcentaje de la repuesta ANA.

Nmero de hojas

La formacin de hojas comenz a las dos semanas despus de la siembra, donde se manifestaron tres respuestas diferentes en los tratamientos similares a los obtenidos por TACORONTE et al. (2002) en la propagacin in vitro de caoba, cuando se prob una relacin de ANA/BA de (1,5/1,5). Es as que los tratamientos T7 (1.5 mg/L BAP + 1.5 ANA) y T9 (1.5 mg/L + 2.5 mg/L ANA) en medios de cultivo MS, en el tratamiento T7 se presentaron yemas arosetada, donde el crecimiento del vstago no es alargado y un conjunto de hojas poco desarrolladas se concentran en el pice y en el T9 se presentaron hojas verdaderas con muy buen desarrollo del vstago (Figura 16 de Anexos).

Los tratamientos T1 con una relacin de ANA/BAP de (0.5/0.5), T5 relacin de ANA/BAP de (0.5/1.5), T3 relacin ANA/BAP de (2.5/0.5), y el T4 con una relacin de ANA/BAP de (2.5/2.5), dieron como respuesta callos. Esta respuesta se debe a la auxina (ANA) donde toma valor positivo, donde un alta concentracin conlleva a una mayor formacin de callos, mientras que el aumento progresivo de la concentracin de citoquinina (BA), tiene un efecto contrario al disminuir el porcentaje de la repuesta ANA (TACORONTE et al., 2002).

Porcentaje de sobrevivencia y contaminacinSe tuvo un porcentaje de sobrevivencia de 90% de un total de 81 ndulos de caoba instalados, esta alta taza de sobrevivencia se debe a una buena calidad de plantas de caoba obtenidas en el laboratorio con el tratamiento T8 (WPM +1 mg/L AG3) este resultado se parece a los datos obtenidos por PEREZ (2001) en cedro, el promedio de supervivencia fue de 70.8 % y se obtuvo hasta un 100% con 2,2 M de kinetina y 13,3 M de 2-iP, pero cuando se utiliz solo BAP tuvo una sobrevivencia de 33.3 % lo que en nuestro trabajo fue lo contrario, pueda que se deba a las concentraciones de la auxina ANA quienes estimulan el desarrollo de brotes. El porcentaje de contaminacin fue del 10%, la cual es muy baja debido a las condiciones aspticas de la que se extrajeron los segmentos nodales las cuales fueron extradas de plntulas de caoba germinadas in vitro con 4 semanas de edad.

Longitud, porcentaje y das de formacin de races. En los experimentos en estudio la presencia de races fue nula, esta se atribuye a causas hormonales visto los trabajos de BERNAL et al.(2009), donde la mejor respuesta fue 53 % de enraizamiento cuando se utilizaba concentracin de 5.7 M de la auxina AIA en un mes y medio de evaluacin, y la Baja capacidad de enraizamiento se mostr con la auxina AIB, dado que fue inhibido completamente en las concentraciones de 2.46, 4.92, 7.38, 9.84 y 12.3 M de AIB.Estos pueden deberse a que el estudio se prob ANA y BAP inductores de brotes y callos, y no como el caso de AIA estimuladores de desarrollo radicular.

CONCLUSIONES

1. El medio de cultivo Lloyd y Mc Cown con una concentracin de 1 mg/L de AG3. , fue el ptimo en la germinacin de semillas in vitro de caoba.

2. Las condiciones de germinacin slo con agar junto con las tres concentraciones de AG3 probadas tuvieron efectos inhibitorios en las semillas de caoba.

3. La mejor relacin de cido naftalenactico (ANA) y bencilaminopurina (BAP) en la organognesis de caoba, fue el tratamiento T9 (2.5 ANA +1.5 BAP) mg/L usando el medio Murashige y Skoog.BIBLIOGRAFIA

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