INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS

APLICACIONES DE LA RT-PCR: DETERMINACIN DE mRNA DE CITOCINAS EN CULTIVOS CELULARES Y EN TEJIDOS.BIOLOGA MOLECULAR Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn Equipo: 2 Grupo: 8QM2

Alumnas: CURIEL GONZLEZ DIANA ROJAS TOLEDO EMMA XOCHITL ROLDN LPEZ ARACELI VZQUEZ DORANTES MIREYA

INTRODUCCIN

RT-PCRPCR: Reaccin en Cadena de la Polimerasa RT: reverse transcriptase Transcriptasa reversav

Amplificacin de RNA. Especialmente mRNA.

v

UTILIDAD

La RT-PCR es el mtodo con mayor capacidad de deteccin para la medida de expresin gnica in vitro . Se ha aplicado tambin al anlisis de transcritos de genes expresados en grado mnimo. Para extractos de RNA de diferentes tejidos.

COMPONENTES DE LA RT-PCR

La mezcla inicial de reaccin tiene todos los componentes necesarios: RNA Transcriptasa inversa DNA polimerasa Cebadores dNTPs

La amplificacin de mRNA se hace a travs de la sntesis previa de su cDNA que es el DNA complementario al RNA. Posteriormente se realiza su amplificacin por PCR.

No se obtienen copias de RNA de partida, sino de cDNA.

Sntesis de una hebra de cDNA por accin de la enzima Transcriptasa Inversa que es una polimerasa de DNA dirigida por RNA.

1. DESNATURALIZACIN: Comienza la amplificacin del cDNA por el mecanismo habitual de la PCR.

2. DESNATURALIZACIN: El dplex se amplifica en los sucesivos ciclos.

CITOCINAS

Protenas secretadas por el sistema inmunolgico, cuya funcin principal es regular la respuesta inmune. Son producidas fundamentalmente por los linfocitos y los macrfagos activados, aunque tambin pueden ser producidas por leucocitos polimorfonucleares (PMN), clulas endoteliales, epiteliales y del tejido conjuntivo.

MTODOS DE DETERMINACIN DE LAS CITOCINAS

Cuntificacin directa por ensayos e captura con anticuerpos monoclonales empleando la tcnica de inmunoensayo enzimtico (ELISA). Actividad sobre lneas celulares. Presencia del mRNA correspondiente.

Deteccin de RNA correspondiente

Mtodo no cuantitativo. Se tiene un testigo positivo en el que se amplifica un gen de expresin constitutiva. Lo anterior permite la cuantificacin relativa de los diferentes mRNA mediante densitometra.