ANTIVIRAL ACTIVITYCells and virus. Vero (African green monkey kidney) and C6/36 mosquito cell line are grown in Eagles minimum essential medium (MEM) (Gibco) supplemented with FBS. The stocks of DENV virus were prepared in C6/36 HT cells and titrated by plaque formation in Vero cells.Cell viability assays (toxicity assay) using MTT method. 5 x 103 cells are seeded in 96-well plates and allowed to adhere during overnight incubation period at 33oC or 37oC for C6/36 HT and Vero cells, respectively. Thereafter, Different concentrations of the algae extract are added and incubation followed during 48 h before viability determination. Solvents are used for preparation of test compound iss serve as negative control. In the MTT method, 10 uL of MTT (final concentration 5 mg/mL) will be added to each well. After 4 h of incubation at 33 (C6/36 HT cells) or 37 oC (Vero cells), the supernatant will be removed, 100 l 1N isopraponal in HCl will be added to each well and absorbance will be measured at 570 nm. The percentage cell viability density will be calculated. Concentration which has percentage cell viability density greater than 50% will be used for further assay.Antiviral assay. Antiviral activity is evaluated by a virus yield inhibition assay. C6/36 HT and Vero cells grown in 24-well microplates (3.0 x 105 cells per well) will be infected with DENV-2 at an m.o.i. of 0.1 in the presence of different concentrations of the compounds, two wells per concentration. After 48 h of incubation at 33oC (for C6/36 HT cells) or 37oC (for Vero cells), cell supernatants will be collected and the virus yields will be determined by real-time PCR. All determinations will be performed twice and each in duplicate

UJI AKTIVITAS ANTIVIRUSSel dan virus. Vero (Sel ginjal monyet hijau Afrika) dan dan sel nyamuk C6/36 yang tumbuh di media essential minimum Eagle (MEM) (Gibco) dilengkapi dengan FBS. Kultur virus DENV disiapkan di sel HT C6 / 36 dan dititrasi dengan pembentukan plak pada sel Vero.Tes viabilitas sel (toksisitas assay) dengan menggunakan metode MTT. 5 x 103 sel dipisahkan ke dalam 96 piring dan mengikuti periode inkubasi semalam, masing-masing 33C atau 37C untuk C6/36 HT dan sel Vero. Setelah itu, konsentrasi ekstrak ganggang yang berbeda ditambahkan dan inkubasi dilanjutkan selama 48 jam sebelum penentuan kelayakan. Pelarut yang digunakan untuk persiapan uji senyawa iss berfungsi sebagai kontrol negatif. Dalam metode MTT, 10 uL dari MTT (akhir konsentrasi 5 mg / mL) akan ditambahkan ke masingmasing , baik. Setelah 4 jam inkubasi pada 33C (C6 / 36 HT sel) atau 37C (sel Vero). Supernatan akan dihilangkan, 100 ml 1N isopraponal di HCl akan ditambahkan ke masingmasing dengan baik dan absorbansi diukur pada 570 nm. Persentase kepadatan viabilitas sel dihitung. Konsentrasi yang memiliki persentase kepadatan viabilitas sel lebih besar dari 50% akan digunakan untuk pengujian lebih lanjut.Uji antivirus. Aktivitas antivirus dievaluasi melalui uji penghambatan hasil virus. Sel C6 / 36 HT dan sel Vero yang tumbuh baik di 24 microplates (3,0 x 105 sel per sumur) akan terinfeksi DENV2 pada 0,1 m.o.i. dengan adanya konsentrasi yang berbeda dari senyawa, dua sumur per konsentrasi. Setelah 48 jam inkubasi pada 33C (untuk C6 / 36 HT sel) atau suhu 37C (untuk sel Vero), supernatan sel dikumpulkan dan hasil virus akan ditentukan oleh realtime PCR. Semua penentuan akan dilakukan dua kali dan masingmasing dalam duplo (duplikasi)