Anticuerpos.ppt
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UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN
BIOMEDICINA
Métodos y Técnicas de Estudio en Biología Celular
UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN
BIOMEDICINA
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UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA
Inmunoblotting (western blot), Dot/slot blotInmunocitoquímicaInmunofluorescenciaInmunoprecipitaciónELISA/EIA/RIACromatografía de inmunoafinidadMicroscopia electrónica (morfología)
UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA
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Estructura de los anticuerpos
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Tipos de Anticuerpos
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Selección clonal: Delección
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Selección clonal: expansión
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Conceptos
Inmunógeno, antígeno.Carrier: BSA, KLH.Unión covalente (cross-linking): MBS, glutaraldehido, DSS.Péptidos inmunogénicosProteínas nativas y desnaruralizadas.Otras moléculasAdjuvante de Freund: completo e incompleto.Primera inmunización y recuerdos.
Conceptos
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Anticuerpos policlonales
1. Inmunización del conejo
2. Recuerdos
3. Extracción de sangre
4. Preparación del suero
5. Purificación del anticuerpo (métodos opcionales)
6. Caracterización del antisuero
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Anticuerpos policlonales
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Anticuerpos monoclonales
1. Inmunización del ratón
2. Extracción del bazo
3. Preparación de hibridomas (mieloma+B)
4. Selección de los clones
5. Producción y uso de anticuerpos
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Elección del tipo de anticuerpo
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Marcaje de Anticuerpos
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Marcaje de Anticuerpos para uso en Células
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Immunoblotting (western blot)Immunoblotting (western blot)
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Inmunocitoquímica
Las flechas indican la presencia de neuronas con hormona liberadora de la hormona del crecimiento en el Núcleo Arcuato (cerebro) de rata de 4 meses.
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Inmunocitoquímica
Localización de la “calbinding” (calbindina) en cerebelo de rata
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Microscopia (confocal e inmunofluorescencia)
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Inmunoprecipitación
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Inmunoprecipitación
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ELISA
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ELISA
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Cromatografía de inmunoafinidadCromatografía de inmunoafinidad
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Oro Coloidal
Internalización de transferrina marcada con oro coloidal (6,6 nm) en células endoteliales. La barra corresponde a 0,25 M.
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Oro Coloidal
Internalización de transferrina marcada con oro coloidal (6,6 nm). G: aparato de Golgi; Lu: lumen vascularLa barra corresponde a 0,25 M.