ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit...
-
Upload
nguyennhan -
Category
Documents
-
view
222 -
download
0
Transcript of ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit...
![Page 1: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/1.jpg)
ANALYTISCHE CHEMIE I
Trennmethoden
6. Elektrophorese-Methoden
Kapillarelektrophorese / Gelelektrophorese
WS 2007/2008
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
![Page 2: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/2.jpg)
Definition
• Elektrophorese bezeichnet die Wanderung elektrischgeladener Teilchen durch einen als Trägermaterial dienendenStoff in einem elektrischen Feld
• Die Wanderungsgeschwindigkeiten verschiedener Ionen hängenvon deren Ladung, Form und effektiver Größe sowie von der Lösungsumgebung und von der Stärke des elektrischenFeldes ab. Deshalb kommt es im Zuge einer elektrophore-tischen Wanderung zur Trennung untrschiedlicher Ionen.
• Die Elektrophorese kann präparativ und vor allem analytischgenutzt werden
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
![Page 3: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/3.jpg)
Kapillarelektrophorese
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
•Schnell (wenige Minuten)
•Automatisierbar
•Geringe Probenmengen (1-50 nl)
![Page 4: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/4.jpg)
Kapillarelektrophorese - Injektion
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
![Page 5: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/5.jpg)
Kapillarelektrophorese
1. Hochspannung bis zu 30 kV für bessere und schnellere Trennung
2. kleine Durchmesser für eine gute Wärmeabstrahlung
3. Thermostatisierung der Kapillare zum Konstanthalten der Wanderungsgeschwindigkeiten
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
![Page 6: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/6.jpg)
Der elektroosmotische Fluss (EOF)
Durch Wechselwirkung zwischen Puffer und Oberfläche des Trägerma-terials sind im Puffer Wolken von frei beweglichen positiven Ladungen. Diese bewegen sich beim Anlegen der Spannung in Richtung Minus-Pol.
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
![Page 7: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/7.jpg)
Kapillarzonenelektrophorese (CZE)
Kationen µres = µeo + µep
Anionen µres = µeo - µep
Neutralmoleküle µres = µeo
µeo: elektroosmotische Mobilität
µep : elektrophoretischeMobilität
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
![Page 8: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/8.jpg)
Kapillarzonenelektrophorese (CZE)
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
![Page 9: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/9.jpg)
Micellare elektrokinetische Chromatographie (MEKC)
Natriumdodecylsulfat (SDS)Oberflächenaktive Substanzen bilden in der Lösung (mobile Phase) Micellen (pseudostationäre Phase), worin dann die ungeladenen und hydrophoben Komponenten eingeschlossen werden.Die Micellen stehen mit den Monomeren im Gleichgewicht.Die Trennung erfolgt nach steigender Hydrophobizität,
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
![Page 10: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/10.jpg)
KapillarelektrophoreseIsoelektrische Fokussierung (IEF)
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
Die Moleküle werden entspre-chend ihrer elektrischen Ladung aufgetrennt. In einem pH-Gradienten bewegen sich die Moleküle so lange vor-wärts, bis sie ihren isoelek-trischen Punkt erreichen. Bis sie also an dem pH-Wert angelangen, an dem ihre Ladung gleich Null ist.
![Page 11: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/11.jpg)
KapillarelektrophoreseIsoelektrische Fokussierung (IEF)
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
Der elektroosmotische Fluss mussunterdrückt bzw. verhindert werden
Der pH-Gradient wird durch ein spezielles Gemisch synthetischer Ampholyte erzeugt
Am Ende der Trennung wird der Kapillareninhalt durch Druck aus der Kapillare befördert
![Page 12: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/12.jpg)
Nachweisgrenzen einiger Detektionsmethoden in der CE
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
![Page 13: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/13.jpg)
Kapillarelektrophorese - Detektion
UV Fluoreszenz
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
![Page 14: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/14.jpg)
Fluoreszenz - Detektion
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
![Page 15: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/15.jpg)
Kapillarelektrophorese - CE-MS
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
![Page 16: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/16.jpg)
Kapillarelektrophorese - CE-MS
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
![Page 17: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/17.jpg)
Gelelektrophorese
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
![Page 18: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/18.jpg)
Gelelektrophorese - Färbemethoden
Coomassie-BlauBindet unspezifisch an kationische und hydrophobe Seitenketten des Proteins.
Die Nachweisgrenze beträgt 100 - 50 ng.
Proteine können durch Vergleich mit einem Standard quantifiziert werden.
SilberfärbungDabei bilden Ag+ Ionen Komplexe mit Glutamat-, Aspartat- und Cysteinreste. Durch Reduktion entsteht elementares Silber, welches die Proteine sichtbar macht.
Die Nachweisgrenze liegt bei 5 ng.
Da verschiedene Proteine mit unterschiedlicher Intensität angefärbt werden, ist die Silberfärbung nicht zur Quantifizierung von Proteinen geeignet.
Bei der Silberfärbung werden außerdem Nukleinsäuren, Lipopolysaccharide und Glykolipide angefärbt.
Fluoreszenzfarbstoffen-Markierung
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
![Page 19: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/19.jpg)
Gelelektrophorese - Färbemethoden
Coomassie Brilliant Blue R-250
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
![Page 20: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/20.jpg)
Vaterschaften
1. hohe Nachweisempfindlichkeit
2. exakt und reproduzierbar
3. vergleichbar (Datenbanken)
4. individualspezifisch
5. hoher Beweiswert
Wahrscheinlichkeit einen Nicht-Vater als solchen zu erkennen
A>99.99%
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
![Page 21: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/21.jpg)
Trennung von DNA (Agarose-Gelelektrophorese)
?Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
![Page 22: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/22.jpg)
DNA Sequenzierung - Frederick Sanger (1977)
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
![Page 23: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/23.jpg)
Polymerasekettenreaktion(polymerase chain reaction, PCR)
PCR in 1 µl Reaktionsvolumen
Mittels der PCR können begrenzte Bereiche sensitiv und spezifisch innerhalb weniger Stunden in einem thermozyklischen Prozeß millionenfach vervielfältigt (amplifiziert) werden.
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
![Page 24: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/24.jpg)
Polymerasekettenreaktion
Dideoxynucleosidtriphoshat(Kettenabbruch)
Deoxynucleosidtriphoshates(Kettenwachstum)
Sequenzierungprimer ist nur zu einer einzigen Stelle der Matrize komplementär
T7-DNA-Polymerase(enzymatische Synthese des zur Matrize komplementären Stranges)
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
![Page 25: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/25.jpg)
Vaterschaftstest
1. DNA Isolierung
2. PCR
3. Elektrophorese
4. Biostatistische Auswertung
30 Zyklen Millionenfache DNA Vermehrung!
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
![Page 26: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/26.jpg)
Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten
PCR-Amplifikate
In nur einer einzigen PCR-Amplifikation, können sogar mehrere DNA-Bereiche simultan vervielfältigt werden (Multiplex-PCR). Während der PCR-Amplifikation werden die DNA-Fragment-Kopien jeweils mit einem Fluoreszenzfarbstoff versehen. Dies ermöglicht die diskriminative Detektion der Multiplex-PCR-Produktewährend der nachfolgenden Kapillarelektrophorese
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
![Page 27: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/27.jpg)
Multiplex PCR PowerPlex. 16 System (Promega Corp. USA)
DNA-Analysen in der Rechtsmedizin:Identifikation (PCR / Kapillarelektrophorese)
Daktyloskopische Sicherung von Fingerabdrücken auf menschlicherHaut mit anschließender DNA-Typisierung: genetische Bestimmung phänotypisch erkennbarer Eigenschaften (z. B. Haarfarbe / Rothaarigkeit)
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
![Page 28: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/28.jpg)
Gelelektrophorese - SDS-PAGE
Die Proteine werden im Gelstreifen mit Natriumdodecylsulfat (SDS) behandelt. Durch das SDS erhalten die Proteine eine negativ geladene Oberfläche.
Der Gelstreifen wird mit einem SDS-Polyacrylamid-Gel verbunden, in das die Proteine nun einwandern und der Größe nach aufgetrennt werden.
Die Proteine werden mit Farbstoffen visualisiert
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
![Page 29: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/29.jpg)
Gelelektrophorese - SDS-PAGE
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
![Page 30: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/30.jpg)
Die Migration geladener Probenbestandteile(Debye-Hückel-Henry)
Die GrößeDie Ladung
Je größer die Ladung, desto schneller ist die Wanderung
Je kleiner das Teilchen, desto schneller ist die Wanderung
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
![Page 31: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/31.jpg)
Elektrophorese von Proteinen
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
![Page 32: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/32.jpg)
Gelelektrophorese - SDS-PAGE
• negativ geladenes, stark denaturierendes Detergenz
• hebt alle nichtkovalenten Bindungen der Proteinstruktur auf (Micellenbildung)
• Mobilität der SDS-Proteinkomplexe abhängig von Acrylamid-Konzentration
• (zw. 6 u. 15%)
Natriumdodecylsulfat (SDS)
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
![Page 33: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/33.jpg)
Gelelektrophorese - SDS-PAGE
Dithiothreitol (DTT) oder Mercaptoethanol spalten die Disulfidbrücken der ProteineDurch Alkylierung wird dieser Prozess irreversibel.
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
![Page 34: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/34.jpg)
2D Gelelektrophorese
• Viele Proteine (bis zu 3000 Spots) können gleichzeitig visualisiert werden
• Massenspektrometrie möglich
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
![Page 35: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/35.jpg)
pH > pIpH = pIpH < pI
_
+
-
++
++
-
--
pH10
9
8
7
6
5
4
3
Focu
sing
Diff
usio
n
Protein mixture
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
Gelelektrophorese: Isoelektrische Fokussierung (IEF)
Polyacrylamidgelstreifen mit einem immobilisierten pH-Gradienten. In diesem pH-Gradienten bewegen sich die Proteine so lange vorwärts, bis sie ihren isoelektrischen Punkt erreichen. So werden die Proteine im Gel fixiert.
![Page 36: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/36.jpg)
2D Gelelektrophorese
Die zweidimensionale Elektrophorese (2D Elektrophorese) verbunden mitder Massenspektrometrie ist gegenwärtig eine der am weitestenverbreiteten Methoden zur Trennung und Analyse von Proteinen
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
![Page 37: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/37.jpg)
Alzheimer-spezifische Hirnproteine(2D-Gelelektrophorese)
pI 3 10 3 10
MW (kDa)
116 -
97 -
66 -
45 -
29 -
(Alzheimer-Patient)
APP-Proteine
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz
![Page 38: ANALYTISCHE CHEMIE I Trennmethoden 6. Elektrophorese ... · Kapillarelektrophorese mit Laser-detektion der floureszenzmarkierten PCR-Amplifikate In nur einer einzigen PCR-Amplifikation,](https://reader031.fdocuments.net/reader031/viewer/2022022111/5c4f262c93f3c37ea56c4754/html5/thumbnails/38.jpg)
Schlüssel-Technologien der Proteomanalytik
MW(KDa)
45.0 -36.0 -
24.0 -
20.0 -
pI3 4 5 6 7 8 9 10I I I I I I I I
29.0 -
67.0 -
14.2 -
1300 1800 2300 m/z
Protein-Identifizierung
Datenbanksuche / Bioinformatik
Massenspektrometrie
„Peptid-kartierung“:
Sequenz / Molekülspezifische Identifizierung
Gelelektrophorese
Protein-Trennung / Isolierung
Proteolytischer Abbau
Peptid-Gemisch
Analytical Chemistry, Department of Chemistry, University of Konstanz