SEAHORSE - Spiny seahorse Hippocampus histrix CLOWNFISH - Common clownfish Amphiprion sp.
Analyseurs « Seahorse » - reseau...
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Seahorse XF Extracellular Flux Analyzersand Assay Kits
XF Stress Test KitsXF96 & XF24 FluxPaks XF24 Islet FluxPaks
XF Cell Culture Microplate
Assay Medium
Solid State Sensor
Cell Monolayer
Sensor Probes
Fiber Optics
Well 1 Well 2
Measuring Mitochondrial Respirationand Glycolysis in a Microplate
A temporary7µl (XF24)
micro-chamber is
formed
The bio-cartridge is
raised,bringing thesystem backto baseline
The bio-cartridge is
raised,bringing thesystem backto baseline
The bio-cartridge is
raised,bringing thesystem backto baseline
Measuring Oxygen Consumption Rate (OCR) andMeasuring Oxygen Consumption Rate (OCR) andExtracellular Acidification Rate (ECAR)Extracellular Acidification Rate (ECAR)
Well 1 Well 2
Time (min)
100
120
130
140
150
160
1 2 3 47.20
7.25
7.30
7.35
7.40
7.45
pH (E
CA
R)
5 6 7
mm
Hg
(OC
R) C2 C2 C2 C2
C2
C2 C2C2
C2
C2C2
C2
C2
C2C2
C2
C2C2
C2C2
C2
C2C2
C2
C2 C2 C2 C2C2 C2 C2 C2 C2 C2 C2
C2C2
C2
C2
C2
C2
C2C2
C2
C2
C2
C2C2
C2
C2
C2
C2 C2 C2 C2 C2
ECAR
OCR
The rate iscalculatedfrom the
slope
0
100
200
300
400
500
600
0 50 100 150 200
Glycolysis (ECAR, mpH/min)
Aer
obic
Res
pira
tion
(OC
R, p
mol
es/m
in)
LessEnergy
MoreGlycolytic
MoreAerobic
MoreEnergy
FCCP
Basal2-DG
Rot2-DG+ Rot
2 or 4 Injection Ports/Well
Multiple Automatic Injection Ports Allows MoreConditions to be Assessed
Samplesinjected
automatically
Notre expérience– Lignées établies (nombreuses)– Cultures primaires (MF, neurones, Myotubes)– Fragment d’organes (XF 24).– Mais pas d’expérience sur du matériel « flottant »: mitochondries, levures cellules non
adhérentes...
• Les « plus »– Consommation O2 : Basale / fuite / Réserve / non mitoch– Facilité de mise en oeuvre.– Cellules attachées donc dans leur état « normal ».– Accès à des « N » élevés.– Rendement coût/information (consommables).
• Les « moins »– Equipement couteux– Réponse lente / interactivité faible– Normalisation mal résolue.– La variable pH (= glycolyse) contrainte sur le milieu et interprétation...– O2 « atmosphérique ».