AISLAMIENTO DE Trichoderma sp. Y ACTINOMYCETES A PARTIR DE SUELOSDE CLAVEL (Dianthus caryophyllus) Y EVALUACIÓN DE SU CAPACIDAD ANTAGO-

NICA in vitro SOBRE Fusarium oxysporum. f. sp. Dianthi

Isolation of ~richoderma sp. and Actinomycetes from Camation tDianthus caryophyllus) Soil and Evalua-tion in vitro of their Antagonic Activity against Fusarium oxysporum. f. sp. dianthi

Marcela Márquez 1, María Mercedes Martínez/ y Marcela Franco 2

RESUMEN

Uno de los problemas más Jimitantes en el cultivode clavel en Colombia es el marchitamiento vascularcausado por Fusarium oxysporum f. sp. dianthi (Foxd) elmétodo empleado actualmente para controlar y/o preveniresta enfermedad es la aplicación de fungicidas, los cuálesno son tan efectivos como se espera y al emplearse enexceso causan daños al medio ambiente. Por lo tanto eluso de poblaciones microbianas nativas para controlar estaenfermedad se perfila corno una alternativa importanteen los programas de erradicación de la enfermedad.Algunas especies de Trichoderma y de Actinomycetes,se han estudiado, por la capacidad de producir sustanciasinhibitorias del crecimiento y/o la actividad de estefitopatógeno. En este estudio se aislaron diversas cepasde estos microorganismos controladores y se evaluó invitro su actividad antagónica.

Se aislaron seis cepas de Trichoderma y treinta deActinomycetes a partir de la rizósfera de diferentescultivos de clavel de la Sabana de Bogotá; la inhibicióndel crecimiento de Foxd fue evaluada in vitro por mediode la interacción hongo-hongo y actinomycete-hongoal medir el porcentaje de inhibición micelial (%MI))y la formación de un halo de inhibición alrededor delcrecimiento de Foxd. Los aislamientos de Trichodermasp y Actinomycetes mostraron un %MI mayor al 50%.El aislamiento VI de Trichoderma sp (T-VI) presentóun %MI del 89% mientras que el aislamiento VII deActinomycetes (A-VII, identificado como Streptomycessp) alcanzó un %MI del 91%, un halo de inhibiciónmayor a 1cm. Posteriormente, fue imposible determinar laactividad antagónica en asociación entre los aislamientosT-VI YA-VII debido al efecto inhibitorio de Streptomycessp sobre Trichoderma sp.

Palabras claves: marchitamiento vascular, controlbiológico, antagonismo, porcentaje de inhibiciónmicelial

SUMMARYOne of the major problems of the carnation crop inColombia is the vascular wilt disease caused by Fusariumoxysporum f.. sp. dianthi (Foxd).

Since the only method currently used to control andlorprevent the disease is the application offungicides, whichare not as effective as expected and when used in excesscausing asevere environmental damage, the alternativeof using native microbiaJ populations for the control isa very interesting perspective. Among these biologicalagents, Trichoderma sp. and some actinomycetes havebeen studied due to their ability to produce substancesthat inhibit the growth andlor activity ofthis phytopatho-gen. In this study several strains of both kinds of bio-logical agents were isolated and tested for antagonisticactivity in vitro.

Six Trichoderma sp strains and thirty different acti-nomycetes were isolated from soils of three carnationcrops farms of the Bogota Plateau. Inhibition of Foxdgrowth was evaluated in vitro by measuring the myce-lium inhibition rate (%MI) and the inhibition zone ofFoxd growing in contact with the putative antagonistsin fungi-fungi and fungi-actinomycete interactions. Wefound that al! Trichoderma sp and actinomycetes isola-tes exhibited an %MI greater than 50%. Isolate VI ofTrichoderma sp (TVI) reached an %MI as high as 89%while isolate VII of actinomycetes (AVII, later identifiedas Streptomyces sp) reached an %MI of 91% with aninhibition zone greater than 1 cm.

Furthermore, it was impossible to determine theassociated antagonistic activity ofTVI and AVII isolatescultured together because the latter inhibited the growthof the former.

Key words: vascular wilt disease, biological control,antagonism, mycelium inhibition rate.

I Estudiante de Microbiología Industrial, Facultad de Ciencias Pontificia Universidad Javeriana, Bogotá. D. C2 Profesor Facultad de Ciencias Pontificia Universidad Javeriana, Bogotá. D.C franco@javerco1.javeriana.edu.co

Agronomía Colombiana, 2002. 19 (1-2): 81-87

INTRODUCCIÓN

Entre las enfermedades introducidas al país en losúltimos 25 años relacionados con el cultivo del clavelse encuentra el marchitamiento vascular producido porFusarium oxysporum f sp. dianthi (Pril.& Del.) Snyd.& Hans. Esta enfermedad es una de las más limitantespor su fácil propagación a partir de material infectadoy por su alta persistencia en el suelo. La aplicaciónde vapor al suelo y algunos fumigantes (Metán-sodio,Basamid®, metilsotiocianato, entre otros), son empleadoscon frecuencia para el manejo de ésta enfermedad la cuales una de las más limitantes por su fácil propagación apartir de material infectado y por su alta persistencia enel suelo (Arbeláez, 1993b).

Los residuos tóxicos productos del uso continuode pesticidas, afectan la salud de los trabajadores ydeterioran el ambiente; como medida complementaria,se ha planteado el uso del control biológico, buscandola reducción de la actividad del inóculo o actividades deun patógeno, mediante la acción natural de uno o másmicroorganismos o sustancias microbianas, a través de lamanipulación del ambiente, huésped o antagonistas o poruna introducción masiva de uno o más microorganismos(Baker y Cook 1982). Para el control de Foxd sehan empleado diversos hongos y bacterias; entre estosse encuentran F oxysporum no patogénico (Rattink,1992), Pseudomonas fluorescens, Streptomyces coelicolor(Ochoa, 1996) y otros actinomycetes capaces de producirun amplio espectro de antibióticos y sustanciasfungistáticas, como enzimas degradadoras de la paredde los hongos (Yuan y Crawford 1995) y Trichodermaharzianum, el cual es el agente fúngico controladormás estudiado y empleado en el control de otrosfitopatógenos como Rhizoctonia solani y Phytophtoracinnamoni (Arbeláez, 1993c, Elias Arcos y Arbeláez,1993).

Con el fin de conocer la capacidad antifúngica quepresentan Trichoderma sp. y algunos actinomycetessobre F oxysporum f. sp dianthi; en este trabajo,se evaluó por medio de tres técnicas la actividadantagónica de estos microorganismos aislados de larizósfera de clavel (Dianthus caryophyllus) de la Sabanade Bogotá; mediante pruebas in vitro individualmente yen asociación.

MATE RIALE SY MÉTODOS

Los ensayos se realizaron en el laboratorio deMicrobiología de Suelos, Departamento de Microbiología,Facultad de Ciencias de la Pontificia UniversidadJaveriana, en colaboración con el laboratorio de lacorporación CorpoGen, en Bogotá, D.C. Colombia.

Muestreo

Se realizaron muestreos aleatorios de suelos rizosféricos

y de plantas que presentaran síntomas característicos delmarchitamiento vascular, en cultivos de clavel (Dianthuscaryophyllus) en fincas de la Sabana de Bogotá, lascuales fueron transportadas en bolsas y refrigeradas a 4°C hasta el momento de su procesamiento.

Aislamiento e identificación

Trichoderma sp. y Actinomycetes: El aislamiento dedichas cepas se realizó a partir de las muestras de sueloprocedentes de tres fincas productoras de clavel de laSabana de Bogotá, utilizando el método de diluciónen placa (Sylvia et al, 1998). A partir de muestrascompuestas teniendo en cuenta la finca y la variedad,se realizaron diluciones seriadas en agua peptonada al0,1 %, para el aislamiento de los microorganismos seemplearon dos medios: agar papa dextrosa (PDA) pH 5,5para Trichoderma sp y agar avena pH 6,8 suplementadocon nistatina al 0,1% (Franco, 1999) para el aislamientode los actinomycetes; incubando a temperatura ambientedurante ocho días.

Posterior al aislamiento, se efectuó el reconocimientode los hongos aislados para identificar su género yespecie por medio del estudio de sus característicasmicroscópicas y macroscópicas según las claves deBamet (1995). Para la identificación de las cepas deactinomycetes se realizaron análisis macroscópicos delas colonias, Tinciones de Gram y pruebas bioquímicas(Cross, 1989).

Fusarium oxysporum f. sp dianthi: El aislamientodel fitopatógeno se realizó a partir del material vegetalsintomático recolectado el cual se desinfectó en unasolución 1:10 de hipoclorito de sodio por un minuto,posteriormente se lavaron con abundante agua destiladaestéril para retirar el exceso del germicida, a continuaciónse realizaron cortes que se transfirieron a un tubocon caldo papa dextrosa (CPD) pH 5,5, se llevarona incubar 6-8 días a temperatura ambiente. De lostubos que presentaron crecimiento micelial, se transfirióuna pequeña porción de éste al agar PDA acidificado(Dimock, 1948 citado por Pizano, 1987), para demostrarla idoneidad del cultivo se realizó el reconocimientode estructuras macroscópicas y microscópicas (Bamett,1995) y para identificar su raza fisiológica, se realizó unaPCR siguiendo el protocolo y los iniciadores Fus 6 yARJM 1.2 (específicos para la raza II, la cual es la máspredominante en Colombia y en el mundo) descritos porAnzola y Rojas (2000).

Pruebas de Antagonismo in vitro

Para establecer la capacidad inhibitoria de los diferentesaislamientos de Trichoderma sp. y Actinomycetes sobreF oxysporum f.sp. dianthi, se efectuaron pruebas en agarPDA por triplicado, durante 8 días, para la evaluación seempleó la técnica de enfrentamiento.

La interacción Hongo-Hongo se evalúo por medio dela técnica de enfrentamiento por medio de cultivo dual

Agronomía Colombiana, 2002 Vol. 19 . Nos. 1-2

(Pinzón et al, 1999), en agar PDA pH 5,5 a una distanciade 7 cm entre sí y se incubaron a temperatura ambiente;para evaluar la capacidad antagónica de Trichodermasp. se evaluó el porcentaje de inhibición del crecimientomicelial (% MI) del patógeno, para calcular éste seempleó el modelo matemático utilizado por Pérez et al.(2000), (Figura 1).

%M,: Porcentaje de inhibición micelialMA: Crecimiento micelial influenciadoMll: Creci miento miceliallibre (Controlde crecimiento)

Figura l. Porcentaje de inhibición micelial.

Para determinar la interacción Actinomycete-Hongo serealizaron pruebas de antagonismo en agar PDA pH 6,8,con incubación a 28°C durante 8 días utilizando dostécnicas diferentes: Inicialmente la técnica descrita porIgarashi et al. (1997) en la cual se realizó un masivo delactinomycete a 3 cm del borde formando un cuadrante,

en el centro de éste por medio de punción se inoculóal fitopatógeno, posteriormente la técnica empleada porGómez y Ortega (1993), en la cual el actinomycete seinoculó en una línea vertical atravesando todo el diámetrode la caja y en las extremidades (a 1 cm del borde de lacaja) por punción se inoculó al fitopatógeno. Después dedeterminar la actividad antifúngica contra F. oxysporumf. sp. dianthi de los aislamientos de Actinomycetes;se evaluó con las técnicas anteriores la actividad delmejor actinomycete frente al aislamiento de Trichodermasp. que presentó mejor actividad antagónica frente alfitopatógeno. Inicialmente, para aceptar al actinomycetecomo antagonista se evaluaron los criterios de selecciónde cada una de las técnicas: en Igarashi se evaluó elcrecimiento del patógeno el cual debía ser menor o igual a1cm y en la técnica de Gómez y Ortega la presencia de unhalo de inhibición alrededor del patógeno; posteriormentese determino el % MI.

RESULTADOSY DISCUSIÓN

Aislamiento e identificación de los microorganismos: lasmuestras de suelo demostraron una población variada deacuerdo con la finca, la cual se observa en la Gráfica l.

Trichoderma sp Acti nomycetes

34%

[] Facatativa mil Guasca O Tabio

43%

Grafica l. Porcentaje de la población encontrada en los suelos rizosfericos de clavel.

Esta variedad coincide con el estudio realizado porGarcés de Granada et al. (1999), en el cual se estableceel potencial de los suelos colombianos para albergardiversas especies de hongos especialmente Trichodermasp. esto se observó de igual forma en este estudio, debidoa la variedad en la población de hongos (Trichodermasp) y bacterias como los actinomycetes con capacidadantagónica contra diversos hongos, la presencia de estosmicroorganismos controladores en suelos afectados porel Marchitamiento Vascular, se puede inferir que éstosson suelos con capacidad supresiva, la cual se encuentravinculada con la actividad microbial del suelo que es

2002

de origen nativo y presenta condiciones adversas para eldesarrollo de un determinado fitopatógeno por medio demicostasis, competencia microbial o factores antibióticos(Camargo y Sanabria, 1993).

De las diferentes muestras de suelo se aislaron seis cepasde Trichoderma sp; las cuales se identificaron de acuerdoa sus características macroscópicas de crecimiento rápidoen PDA, textura pulverulenta de color blanco que setoma a un verde olivo a través del tiempo y sin pigmentodifusible en el medio y microscópicas por sus hifas conpocos septos, conidióforos erectos con ramificaciones a

Márquez et al. : Aislamiento de Trichoderma sp. y Actinomycetes ...

lado y lado de las hifas; estas ramificaciones presentabanforma de botella (fiálides), conidias pequeñas globosashiálinas; (Barnett, 1995); igualmente se recuperaron 30cepas de actinomycetes que se identificaron de acuerdocon sus características macroscópicas de consistenciafirme y adherencia fuertemente al sustrato con aspectopulverulento, olor a suelo húmedo y la presencia de exo yendo-pigmentación (Veldkamp 1978, citado por Franco,1999) y sus características microscópicas bacterias Grampositivas que forman racimos de filamentos (hifas) y susconidias las cuales podían estar solas, en parejas cadenascortas o largas (Cross, 1989).

A partir de los esquejes sintomáticos, se obtuvierondos cepas las cuales de acuerdo a sus característicasmacroscópicas de crecimiento algodonoso de colorblanco a durazno y pigmentación púrpura del medioy a la formación de sus macroconidas en forma dehoz se identificaron como F oxysporum f. sp dianthi;posteriormente se realizó una PCR con el fin de identificarla raza fisiológica de cada uno de los aislamientos. Losiniciadores empleados fueron diseñados por Anzola yRojas (2000) a partir de un fragmento de 2600pb elcual presento homología con el gen que codifica para alenzima a-L-arabinofumorosidasa (secuencias reportadasen el NCBI Gen Bank), los cuales son específicos parala raza JI, de acuerdo con los estudios realizados porArbeláez, (1992) y Barrera el al. (1997). Esta razapredomina en los cultivos de clavel de la Sabana deBogotá; la cepa Fax 1, amplificó con dichos iniciadoresindicando que este corresponde a F. oxysporum f. sp.dianthi raza II y fue la cepa empleada en las pruebas invitro (Figura 2).

1 2 4 53

Figura 2. Determinación de la raza fisiológica de Fusarium oxysporumpor medio de PCR Carril l. l kb DNA ladder, 2. Control PositivopMosBlue 2600pb, 3. Fox 1,4. Fox I1, 5) Control negativo.

Las pruebas de antagonismo in vitro con los seisaislamientos de Trichoderma sp. demuestran la actividadcontroladora de este hongo sobre el patógeno (Fox 1),coincide con lo observado en diferentes estudios, yasea por medio de micoparasitismo (Pérez et al, 2000),antibiosis (Mitchell, 1992), u otros mecanismos decontrol (Angula et al, 1992, Elías, 1993, entre otros.).Estadísticamente se encontraron diferencias significativas

en relación con el %MI entre las cepas (p = 0.031),aunque las diferentes cepas presentaron un %MI 3 al 50%y en algunas se observó esporulación sobre el patógenolo cual indica una posible actividad micoparasítica, y/ocomo consecuencia de su mayor tasa de crecimientomicelial con relación a la del patógeno y por lo tantoa su mayor capacidad de colonización del sustrato; sinembargo el mayor antagonismo se presentó con la cepaT-VI la cual disminuyó el crecimiento del patógeno enun 89 %MI y a su vez se observó una zona clara (posiblehalo de inhibición) alrededor de Fox-l, por la producciónde alguna sustancia antifúngica; los resultados de estaspruebas se observan en la Tabla 1 y Figura 3.

Tabla l. Antagonismo in vitro de Trichoderma sp sobre F. oxysporumf. sp. dianthi.

Cepa Mu MA T H E %M¡

T-I 6.4cm 2cm 5,7cm O + 68

T-Il 6.4cm 1,6cm 5,2cm O + 75

T-JII 6.4cm 2,4cm 4,4cm O - 62

T-IV 6.4cm 2,8cl11 3,7cm O - 56

T-V 6.4cm 2,7cm 4,7cm O,9cm - 59

T-VI 6.4cm O.7em S.2em Icrn - 89

MA Crecimiento micelial influenciado. MB. Crecimiento miccliallibre (Control) T. Trichoderma H: Halo E. Esporulación sobre elpatógeno.

Figura 3. Antagonismo entre T-VI vs Fox-Idespués de ocho días de incubación.

En las pruebas para determinar la capacidad antagónicade los Actinomycetes, con la técnica de Igarashi seobservó la actividad antagónica de siete aislamientos estose determinó por el crecimiento del patógeno menor oigual a 1 cm y el %MI fue mayor al 80% estadísticamenteno se encontraron diferencias significativas entre las cepas(p=0.304); no obstante con la técnica de Gómez y Ortega,el número de aislamientos con capacidad antagónica se

Agronomía Colombiana, 2002 Vo1.19· Nos. 1-2

disminuyó a cinco cepas las cuales se seleccionaron porpresentar un halo de inhibición alrededor del fitopatógenoy un %MI mayor al 50% en esta técnica si se observarondiferencias estadísticamente significativas (p=0.00 1), deacuerdo con los resultados de las dos técnicas se escogióla cepa A-VII por presentar %MI del 91% (Igarashi) y72% Y un halo de 1.2 cm (Gómez y Ortega) (Tabla 2 yFigura 4), posteriormente se identificó como Streptomycessp por medio de pruebas bioquímicas. Los resultadosde estas pruebas demuestran la capacidad antagónica dediversas especies y aislamientos de actinomycetes, lacual se ha observado en diferentes estudios, como losrealizados por Lahdernperá (1987) en Finlandia, quien

demostró la variada actividad antagónica de diversasespecies y aislamientos de Streptomyces en el control deF. oxysporum f sp. dianthi. La especie antagonista másefectiva, de acuerdo con este estudio, fue el aislamientode Streptomyces griseoviridis, comercializado con elnombre de Mycostop®, y ha presentando resultadossatisfactorios en el control del marchitamiento vasculardel clavel, en cultivos comerciales en varios países deEuropa; de igual forma, Molano (2000) y Franco (1999)quienes según el aislamiento utilizado, establecieron lacapacidad antagónica de éstos sobre Fusarium oxysporumf. sp. dianthi.

Tabla 2. Antagonismo in vitro de los Actinomycetes sobre F. oxysporum f. sp. dianthi.

IGARASHI GOMEZ & ORTEGACepa MA %M, E H (cm) MA %M, E

A VII <1 0.6 91 1.2 1.8 72AVlIl <1 0.67 89 O 3.5 +AXll >1 1.15 + 0.35 2.65 58A Xlll >1 2.5 + 0.83 2.17 66AXVI 1 1 84 O 3.5 +A XIX >1 1.83 + 0.25 2.78 56AXX l 0.93 85 O 3.6 +AXXI 1 1 84 O 2 68AXXIl 1 l 84 O 3.2 +

A XXVII <1 0.83 87 0.78 2.3 64 -Mn- 6.4cm ,Mo- 6.4cm

.,MA. Crecimiento rnicelial influenciado Mo. Crecimiento micelial libre (Control) T,antagonista

H: Halo E. Esporulación sobre el

Figura 4. Antagonismo entre A-VII vs Fox-I después de ocho días de incubación a. Igarashi, b. Gómez y Ortega

Al realizar la asociación entre la mejor cepa deActinomycete (A-VII) con el mejor antagonista deTrichoderma sp. (T-VI), para potenciar el efectocontrolador sobre el fitopatógeno, los resultados de ésta no

fueron satisfactorios (Figura 5) debido a que la sustanciaantifúngica producida por Streptomyces sp. inhibió elcrecimiento y desarrollo del aislamiento de Trichodermasp. debido a que se observo un halo de inhibición

2002 Márquez et al. : Aislamiento de Trichoderma sp. y Actinomycetes ...

mayor a 1 cm (Gómez y Ortega) y un crecimiento deésta menor a 1 cm (Igarashi); este efecto inhibitoriofue observado de igual manera por Ocho a (1996) alenfrentar a Streptomyces coelicolor frente a Trichodermahamatum; sin embargo, en estas pruebas se observóque el efecto inhibitorio producido por el antibiótico

secretado por S. coelicolor duró únicamente 5 días y apartir del sexto, 1. hamatum pudo crecer sobre la zonade inhibición, lo cual no se presentó al enfrentar losantagonistas A-VII contra T-VI, impidiendo real izar unaasociación para lograr potenciar la inhibición de Foxd.

Figura 5. Antagonismo entre A-VII del Actinomycete y T-VI de Trichoderma sp despues de 8 días de incubación a. Igarashi, b. Gomez yOrtega.

Posteriormente, para corroborar la capacidad antagónicaejercido por Streptomyces sp. y Trichoderma sp. invitro sobre F. oxysporum f. sp. dianthi se planteatrabajar bajo condiciones normales en invernaderos decultivos de clavel, afectados por el marchitamientovascular, empleando los microorganismos antagonistasdirectamente como inoculantes para tratar de establecersu adaptación ecológica y efecto antagónico sobre elfitopatógeno.

LITERATURA CITADAANZOLA, J. M YROJAS, A. 2000. Caracterización de un

fragmento de 2600 pares de bases obtenido comomarcador molecular de Fusarium oxysporum f.sp.dianthi y su utilidad en el diagnostico molecularde este patógeno. Tesis de grado para optar al titulode Biólogo. Facultad de Ciencias, Departamentode Biología. Universidad Nacional...Bogotá D.C.

ARBELÁEZ, G. Y CALDERÓN, O. L. 1992.Determination of the physiological races ofFusarium oxysporum on carnation of ColombiaActa Horticulturae, 307: 43-49.

ARBELÁEZ, G. 1993A. Las enfermedades vascularesdel clavel en Colombia y en el mundo AgronomíaColombiana. 10: 12-18.

ARBELÁEZ, G. 1993B. La floricultura colombiana deexportación. Agronomía Colombiana. 10: 5-11.

ARBELÁEZ, G.; GUZMÁN, S.; LEÓN, i.,GONZÁLEZ, M., MOLlNA, J.C.;PARRA, J.;ANGULO, J.F. &ALVAREZ, J. D. 1993c. Controlintegrado del marchitamiento vascular del clavelocasionado por Fusarium oxysporum f.sp. dianthi.Agronomía Colombiana. 10: 68-89.

BAKER. R. & COOK, J. 1982. Biological control ofplantpathogens. American Phytopathological society.USA.

BARNET1. H. L. 1995. Ilustrae genera of imperfectfungi the Saccardo system of classification. 3ed.Minnesota. p. 78-86 143-145.

BARRERA, A. GÓMEZ, S Y ARBELÁEZ, G. 1997.Determinación de razas fisiológicas de Fusariumoxysporum f.sp. dianthi en ocho fincas del "grupoChía" cultivadoras de clavel, localizadas en lasabana de Bogotá. Fitopatología Colombiana21 :53-59.

Agronomía Colombiana, 2002 Vo1.19· Nos. 1-2

CAMARGO, O. y. SANABRIA, 1. 1993. Estudiode algunos aspectos epidemiológicos delMarchitamiento vascular ocasionado por Fusariumoxysporum f.sp. dianthi y dinámica de laspoblaciones del hongo en el suelo de un cultivocomercial de clavel. Tesis de grado para optaral titulo de Ingeniero Agrónomo. Facultad deAgronomía. Universidad Nacional. Bogotá D.C.

CROSS. T. 1989. The Actinomycetes II: Growth andexamination of Actinomycetes. en S. T. Williams,M. E. Sharpe y G. G. Holt (Eds), Bergey's manualof systematic bacteriology, Vol.4. Williams andWilkins, Baltimore. p. 2340-2347.

ELÍAS, R; ARCOS, O Y ARBELÁEZ, G.. 1993.Estudio del antagonismo de algunas especies deTrichoderma aisladas de suelos colombianos enel control de Fusarium oxysporum y Rhizoctoniasolani. Agronomía Colombiana. 10: 52-61.

FRANCO, M. 1999. Aislamiento, caracterización yevaluación de Actinomycetes inhibidores dealgunos hongos fitopatógenos, En Maestría deMicrobiología, Universidad Nacional. BogotáD.C

GARCÉS DE GRANADA E.; OROZCO, M. y ZAPATA,C. 1999. Fitopatología en flores, Acta BiológicaColombiana, 4:5-26.

GÓMEZ, S y ORTEGA, L.M. 1993. Evaluación deStreptomyces griseoviridis (MYCOSTOP@), enel control de Fusarium oxysporum f. sp. dianthi,en dos variedades de clavel estándar bajocondiciones comerciales. Ingeniero AgrónomoEn: Departamento de Agronomía. UniversidadNacional.

IGARASHI, M.; KINOSHITA, N. IKEDA, T.;NAKAGAWA, E.; HAMMADA, M &TAKEUCHI, T. 1997. Resomycin a novelherbicidal and antifungal antibiotic produced bya strain of Streptomyces platensis. The Jouranl ofAntibiotics 57:71-79.

LAHDENPERÁ., M. L. 1987 The control of Fusariumwilt on carnation with Streptomyces preparationActa Horticulturae 216:85-91.

MITCHELL, R. 1992. Environmental microbiology, EdtWiley-Liss, New York. p. 336-350.

2002

MOLANO, A. F. 2000. Evaluación y selección de unmedio de cultivo para al obtención de un antifúngicoa partir de Nocardia gardneri. Mosquera-Colombia.Tesis de grado para optar al titulo de Microbiólogo.Facultad de Ciencias Básicas, departamento deMicrobiología. Pontificia Universidad Javeriana.Bogotá D.C.

OCHOA, 1. M. 1996. Control biológico delmarchitamiento vascular del clavel ocasionadopor Fusarium oxysporum f.sp. dianthi medianteel uso de los microorganismos potencialmenteantagonistas Pseudomonas fluorescenes,Streptomyces coelicolor y Trichoderma hamatumTesis de grado para optar al titulo de Biólogo.Facultad de Ciencias Básicas, Departamento deBiología, Pontificia Universidad Javeriana. BogotáD.C.

PÉREZ, L. F., RAMÍREZ, c.x., MARTÍNEZ, M.M.y ALGECIRA, N. 2000. Efecto de las variablescondiciones de fermentación y el sustrato enla producción de Trichoderma harzianum, Tesisde grado para optar al titulo de MicrobiólogoIndustrial. Facultad de Ciencias Básicas,Departamento de Microbiología, PontificiaUniversidad Javeriana. Bogotá D. C.

PINZÓN, L.; SALGADO, R. Y MARTÍNEZ, G. 1999.Antagonismo entre diferentes cepas deTrichoderma sp. y Fusarium oxysporum. f. sp.dianthi (Pril. & Del.) Snyd. & Hans. FitopatologíaColombiana. 23: 7-11

PIZANO, M. 1987. Prueba de esquejes de clavel paradetectar enfermedades vasculares y en particularFusarium oxysporum f. sp. dianthi.

RATTINK, H. 1992. Biological control of Fusariumwilt disease of carnation by a non pathogenicisolate of Fusarium oxysporum, Acta Horticulturae307:37-42.

SYLVIA, D. FUHRMANN, J.; HARTEL, P.; YZUBERER, D. 1998. Principles and applications ofsoil microbiology, Edt Prentice Hall. New Jersey.

YUAN, W. M y CRAWFORD, D. L. 1999.Characterisation of Streptomyces lydicusWYEC 108 as potential agent against fungalroot and seed rots. Applied. EnvironmentalMicrobiology, 61:3119-3128.

Márquez et al. : Aislamiento de Trichoderma sp. y Actinomycetes ...