ACTIVIDAD CATALÍTICA DE LA AMILASA SALIVAL

Luz Mary Moreno

Valentina González

Sara Gómez Rodríguez

Objetivos de la practica.

Es aprender sobre los conceptos de enzima y la actividad enzimática teniendo una definición mas amplia de catálisis en cuanto a las principales variables que determinan su comportamiento como también estudiar el papel de la amilasa salival en el proceso de digestión de los carbohidratos.

Fundamentos teóricos.

¿Qué son las enzimas y la actividad catalítica?

Las enzimas son proteínas que catalizan reacciones químicas en los seres vivos.

La actividad catalítica es la capacidad del catalizador de acelerar o disminuir una reacción. se compone por tres partes: soporte, fase activa, selectividad.

Características generales

(catalizadores)

Características especiales

(enzimas)

Se requieren pocas cantidades.

No se consumen en la reacción.

No afectan la posición de equilibrio

Son catalizadores selectivos y específicos.

Son moléculas que se pueden regular y controlar al igual que su actividad.

Acoplan reacciones: Aprovechan la energía de la reacción exergónicas e impulsan reacciones endergónicas.

Propiedades de las enzimas.

Aumentan la velocidad de reacción:

De 106 to 1012 veces vs sin enzima.Aún más rápido que los catalizadores químicos.

Condiciones de reacción:

Temperatura 25-40 oC (algunas hasta 75 oC)pH neutro (5-9), la mayoría 6.5 – 7.5Presión atmosférica normal

Capacidad de regulación:Por concentración de sustratoPor concentración de enzimaPor inhibidores competitivos

(semejantes al sustrato)Por inhibidores no

competitivos (modificación covalente de la enzima)

Por regulación alostérica

Alta especificidad de reacción:Interacción estere específica

con el sustratoNo hay productos colaterales

Aspectos sobre las enzimas.

1.La enzima y su sustrato

2. Unión al centro activo

3. Formación de productos

Variables que afectan la actividad catalítica.

La actividad catalítica de las enzimas se ve influenciada por varios factores: concentración del sustrato y de la enzima, la ausencia o presencia de cofactores, inhibidores y efectores, el aumento o disminución de la temperatura y las variaciones del pH.

Efecto del pH sobre la actividad enzimática.

4 37 85 Temperatura oC)

Vo

Actividad enzimática y variación la T°

Actividad enzimática en función de la concentración de sustrato

Sobre el sustrato y la digestión

Granos de almidón en células de patata visto con escáner de barrido

Generalidades del almidón:

El almidón funciona como fuente de energía.

Sus propiedades físicas ayudan a mejorar la textura y la aceptabilidad de los alimentos.

El almidón es un polímero de glucosas, unido por enlaces -glicosídicos, y formado por dos compuestos diferentes: la amilosa (10 – 20 %) y la amilopectina (80 – 90 %).

Estructura del almidón.

La alfa- amilosa es un polímero lineal de alfa(1->4)D-glucopiranosa

 La amilopectina esta ramificada y consta de residuos de alfa(1->4)D-glucopiranosa enlazadas entre sí por uniones alfa(1->6)

Digestión del almidón

Como carbohidrato de la dieta humana para ser absorbido a través de la pared intestinal su digestión e hidrólisis es realizada por enzimas digestivas ubicadas en boca (amilasa salival, estomago (amilasa mas HCl) e intestino delgado ( amilasas pancreáticas ( y ).

Mecanismo de acción y tipos de amilasa.

α-Amilasa: Actúa a lo largo de cualquier punto de la cadena de los carbohidratos y su pH óptimo está entre 6.7 y 7.2.

β-Amilasa: Actúa desde el extremo no reductor de la cadena, catalizando la hidrólisis del segundo enlace y rompiendo dos unidades de glucosa (maltosa) y tiene un PH optimo de 12

Amilopectina-amilasa

-maltosa + DextrinasAmilopectina-amilasa

-maltosa + Dextrinas

γ-Amilasa: Actua en enlace glucosídico en el extremo no reductor de la cadena de amilosa y amilopectina liberando glucosa. A diferencia de las otras amilasas, esta forma es más eficaz en   medios ácidos y su pH óptimo es de 3.

Sección experimental.

Objetivos.

Comprender la forma como diversos factores influyen sobre la actividad catalítica de las enzimas.

Evaluar la dependencia que puede presentar una reacción enzimática con respecto a la acidez del medio, a la temperatura y a la concentración de la enzima.

Materiales y reactivos. Soluciones buffer 0.1 M, así: De citrato con

pH 3.0, De fosfato con pH 5.0, De fosfato con pH 7.5, De borato con pH 9.0, De borato con pH 10.0 y de Borato con pH=11.

Solución de amilosa (almidón) al 1 %. Solución de NaCl al 0.9 %. Solución de lugol : 5 mmoles de 2 por litro

de K (30 g/L). Solución de amilasa salival diluida en agua

en proporción 1 en 4.

Procedimiento.Sobre la actividad de la enzima amilasa.

EVALUACION DEL CAMBIO DE pH

• Disponga de 8 tubos de ensayo.• Calcule el porcentaje de reacción.

Excepto al 8 agregue 1 mL de solución .

EVALUACIÓN CAMBIO DE CONCENTRACIÓN DE LA ENZIMA. Se realizara sobre la reacción de hidrólisis de la

amilosa. Prepare 5 soluciones acuosas de amilasa salival en diferentes

proporciones.

Disponga de 3 tubos de ensayo con 4 mL de almidón y 2 mL

de NaCl

Coloque los tubos en baño

termostatizado a 37ºC durante 10’

A cada uno de los tubos agregue una solución de amilasa salival y mezcle por inversión

Tomar de cada tubo 1 mL de solución y agregar 1 gota de

lugol.

EVALUACIÓN DEL CAMBIO DE TEMPERATURA.

Se realizara sobre la actividad de la enzima amilasa.Preparar un baño de:

hielo a 4ºC, un termostatizado a 37ºC y uno de agua hirviendo a

94ºC

Disponga de 4 tubos con 4mL de almidón y 2mL de

NaCl.

Coloque los tubos en los baños previamente preparados y dejarlos

durante 10’.

Agregue 1 mL de solución de amilasa

salival, 1 en 8.

Mezcle por inversión y llevar a cada tubo a respectivo baño

por 5’ mas.

A cada uno de los tubos agregue 3 gotas

de lugol. Agite y observe los resultados

Gracias.