Actividad antiviral de engystol
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ACTIVIDAD ANTIVIRAL DE ENGYSTOL: UN ANALISIS IN VITRO
Urías Hernández, Linda Rios, Amilkar Rodríguez
INTRODUCCION
Influenza VRS Rinovir
us
Tratamiento
Amandatina
Inh de la neuraminid
asaAnálogos
de nucleosido
sEngystol ®
INTRODUCCION
OBJETIVO: Estudiar los efectos de la preparación homeopática Engystol® en un panel de virus
patógenos humanos in vitro.
INTRODUCCION
Presentación: Comprimidos y solución inyectable.
Ingredientes activos: Vincetoxicum hirundinaria y azufre.
Otros estudios: asociado con estimulación del sistema inmunitario en términos de la actividad fagocítica, la función de granulocitos, y una mejor respuesta humoral. Sin embargo, todavía no está claro si estos efectos son mediada por las propiedades inmunoestimulantes de Engystol o si Engystol por sí mismo tiene actividad antiviral directa.
Presente estudio investigo una actividad antiviral de engystol en
un panel de virus patógenos humanos
ARN Y ADN
Rinovirus, influenza A, VRS, Herpes simple tipo 1,
adenovirus
Estimulación potencial
de la actividad antiviral
celular por inducción
del sistema de
interferón por
Engystol.
ENGYSTOL ®
MATERIALES Y METODOSSustancia de ensayo • Formulaciones comercialmente disponibles de
Engystol®• Se suministran de forma gratuita por el fabricante
como ampollas estériles
Fármacos de referencia • Aciclovir, ribavirina, y clorhidrato de amantadina
fueron utilizados como controles positivos.
Células y virus • Rinovirus humano se obtuvo del instituto de virología
de la universidad de Friedrich Schiller de Jena, Alemania
• VSR, Influenza, H1N1, VHS, Adenovirus se obtuvieron del instituto de higiene de la Universidad de Tubingen Alemania
MATERIALES Y METODOS
Ensayos del virusInmunoensa
yos
Ensayo de placa
Titulaciones del virus
Ensayo de citotoxicid
adInvitro: ensayo
enzimático
Microscopio: cultivos celulares
Ensayos para
actividad antiviralReducción de placas
Cultivo celulares
MATERIALES Y METODOSDeterminación de la infectividad de los virus recién sintetizado Controles Elisa y titulaciones del
virus para dosis infecciosa en cultivo: Cuando las dosis de infección fueron demasiado alta para permitir la evaluación de los títulos de virus mediante ensayo de reducción de placa
1. Control de células2. Control del virus
¿EN RESUMEN?Preparación homeopática• Vincetoxicum hirundinaria • AzufreMenos EA y eficaz en el Tto de infecciones virales y respiratorias.
¿¿Estimulación la actividad fagocítica, la
función de granulocitos, y una
mejor respuesta humoral VS antiviral??
• RVH• V. influenza A• VSR• Adenovirus 5• VHS 1
Panel de VH patógenos: ARN y ADN con y sin
envoltura.
¿EN RESUMEN?HEPVSR
Adenovirus 5VHS 1
HeLa
RVH
Células Canine Kidney Madin Darby
V. influenza A
CITOTOXICIDAD
• Ensayo enzimático
• Microscopio: Cultivos
ANTIVIRAL• Reducción
de placa.• Casos y
controles
TITULACIÓN DE VIRUS• Ensayos de
placa• ELISA• TCID 50
LA CUANTIFICACIÓN DE INTERFERÓN DE TIPO I EN EL
CULTIVO CELULAR DE CÉLULAS TRATADAS CON
ENGYSTOL.
Engystol se añadió en un sistema libre de células en diluciones de 1: 2, 1: 4, 1: 8, 1:16, 1:32, 1:64, 1: 640, y 1: 6,400 a un alto título de adenovirus suspensión durante 120 minutos a 34 ° C y 5% de CO2.
Engystol se añadió en diluciones de 1: 2, 1: 4, 1: 8, 1:16, 1:32, y 1: 320 a las células sensibles de virus.
ANÁLISIS DE LA INFLUENCIA ANTIVIRAL
DIRECTA DE ENGYSTOL EN ADENOVIRUS.
RESULTADOS Citotoxicidad de HEP y células MDCK fue baja. No hubo citotoxicidad con Engystol, ya sea en ensayos de MTT o en
exámenes microscópicos a una dilución de 1: 2 para las células HEP y dilución de 1: 4 para las células MDCK.
Morfología celular: HEP y MDCK no se vio afectada por el tratamiento. Células HeLa tratadas con las sustancias de ensayo diluidas mostraron
viabilidad similar a los controles no tratados.
RESULTADOS Reducción de placa 22%: HRV 14 Alta concentración de Engystol reducción de 37% en placas de VSR. No hubo efecto de Engystol en virus de influenza A, ni en el ensayo de
reducción de placas, ni en el ensayo de titulación de punto final
RESULTADOS Adenovirus Ensayo de placa Inhibición del 73% de las proteínas
adenovirales TCID50: Disminución del 57% en la infectividad de la
descendencia de adenovirus.
HSV-1 Ensayo de placa: Dilución de 1: 2 se asoció con una
reducción del 80% en las proteínas virales. Dilución de 1:16: Reducción de 28%.
TCID50: La dilución más baja de Engystol condujo a una inhibición de 64% y una dilución de 1:16 dio lugar a una reducción de 20%
DISCUSIÓN Se indica actividad antiviral específica dosis-
dependiente de Engystol, evaluada por ensayos de reducción de placa y análisis de infectividad.
Inhibición ~80%
Adenovirus
Virus herpes simple-1
MAYORES EFECTOS
Inhibición 20-30%
Virus sincitial respiratorio
A ALTAS CONCENTRACIONES
EXPLICACIONES ALTERNATIVASUna posible heterogeneidad entre las preparaciones (un riesgo con los preparados homeopáticos y herbales)
Una dosis muy baja de virus en los ensayosUna interacción directa de Engystol con ADN-virusUn efecto antiviral indirecto de Engystol por inducción del sistema antiviral celular de Interferón
DISCUSIÓNLos resultados fueron muy similares con dos lotes diferentes de Engystol, lo que indica la homogeneidad entre las preparaciones. Los diferentes títulos de virus mostraron resultados similares para los ensayos de punto final de titulación, y en ELISA, lo que indica que el efecto no es dependiente de la dosis de virus.La preincubación de adenovirus con Engystol produjo una inhibición de la proteína de la cápside en ELISA, sin reducir infectividad del virus.
Se necesita un análisis detallado para aclarar la naturaleza de los cambios en la cápside por el agente homeopático.
DISCUSIÓNEs una cuestión abierta en qué medida los efectos antivirales
directos observados pueden ser responsables de los beneficios
clínicos. Las concentraciones de los
componentes activos de Engystol en los experimentos actuales no son directamente comparables
con los del agente usado clínicamente.
¿El grado de inhibición observado es suficiente para
dar cuenta de los efectos clínicos de la infección viral?
CONCLUSIÓNSi se puede demostrar de manera concluyente que Engystol, tiene
efectos antivirales, esto sería una adición bienvenida a las opciones de
tratamiento para las infecciones virales.Este trabajo apoya un efecto directo
del agente homeopático Engystol en una variedad de virus humanos,
evaluado en ensayos específicos. Se necesita más trabajo para
establecer una explicación de los efectos a nivel molecular y evaluar la relevancia de los resultados in vitro
en la práctica clínica.