Acara v Dna Tumb

8/16/2019 Acara v Dna Tumb

1/21

ACARA V

ISOLASI DNA TUMBUHAN

A. PELAKSANAAN PRAKTIKUM

1. Tujuan Praktikum

a. Mengetahui cara isolasi DNA dari beberapa jenis tumbuhan.

b. Mengetahui keefektifan beberapa deterjen untuk isolasi DNA dari beberapa

jenis tumbuhan.

c. Mengamati DNA sel tumbuhan.

2. Waktu Praktikum

elasa! 12 April 2"1#$. Tempat Praktikum

%antai &&&! %aboratorium 'imia! (akultas Matematika dan &lmu Pengetahuan Alam!

)ni*ersitas Mataram.

B. LANDASAN TEORI

DNA +asam deoksiribonukleat, adalah polimer asam nukleat -ang tersusun

secara sistematis dan -ang membaa informasi genetik dari sel khususn-a dan dari satu

generasi ke generasi berikutn-a. &nformasi genetik tersebut disusun dalam bentuk kodon

-ang berupa tiga pasang basa nukleotida dan menentukan bentuk! struktur maupun

fisiologi suatu jasad. &solasi DNA adalah teknik -ang dilakukan untuk memisahkan

DNA dari /at -ang lain dalam sel. (ungsi dari pengisolasian DNA adalah mendapatkan

DNA murni dari dalam sel -ang akan digunakan untuk penganalisisan genotip suatu

organisme +Triiboo! 2""0 01,.

truktur DNA pertama kali dijelaskan oleh ames Watson dan (ranccis 3rick.

Mereka memperoleh model DNA dari hasil foto difraksi sinar 4 -ang dibuat oleh

5osalind (ranklin dan Maurice Wilkins. Watson dan 3rick men-impulkan baha

struktur DNA merupakan rantai ganda +double heli6,. )ntai ganda tersusun dari dua

rantai polinukleotida -ang terpilin. 'omponen nukleotida DNA adalah gula! fosfat dan

basa nitrogen. 'omponen gula pada DNA adalah gula deoksiribosa! -aitu gula ribose

-ang kehilangan satu atom oksigen. 7asa -ang ada pada DNA ada dua macam! -aitu

purin dan pirimidin. Purin terbagi lagi menjadi dua macam! -aitu adenine dan guanine.

Pirimidin terdiri dari dua jenis! -aitu timin dan sitosin +ada*a! 2""8 219,.


2/21

'eseluruhan DNA dalam suatu sel akan membentuk genom. :enom adalah

komplemen lengkap gen;gen atau materi genetik suatu organisme dan terorganisasi

menjadi kromosom. DNA genom adalah semua gen;gen dan semua sekuens DNA

+urutan polinukleotida, -ang fungsional maupun non;fungsional dalm inti suatu

organisme. DNA genom meliputi gen dan intergen. DNA manusia dapat diisolasi

melalui darah. Darah adalah modifikasi jaringan dengan matriks cair -ang disebut

plasma +3ampbell! 2""2 221,.

&solasi DNA

+8,Purifikasi> dan +0,Presipitasi. Prinsip;prinsip dalam melakukan isolasi DNA ada 2!

-aitu sentrifugasi dan presipitasi +(aatih! 2""?,.

&solasi DNA berkualitas tinggi murni! utuh! dan sangat penting untuk setiap

studi molekuler. Namun! isolasi DNA dari tanaman biasan-a terganggu oleh

kontaminasi -ang berlebihan oleh metabolit sekunder. Metode isolasi DNA perlu

disesuaikan untuk setiap spesies tanaman dan bahkan untuk setiap jaringan tanaman

karena kehadiran metabolit ini! tidak seperti hean dan mikroba. Pencarian lebih untuk

mencari cara -ang efisien mengekstraksi DNA dari kedua kualitas -ang lebih tinggi dan

hasil telah men-ebabkan pengembangan beberapa protocol untuk mengisolasi DNA dari

tanaman -ang mengandung metabolit sekunder tingkat tinggi. 7an-ak faktor -ang dapat

men-ebabkan pergeseran atau perubahan dari DNA selama ekstraksi. Degradasi DNA

karena endonuklease adalah salah satu masalah -ang ditemui di isolasi dan pemurnian

DNA berat molekul tinggi dari tanaman! -ang langsung atau tidak langsung

mengganggu reaksi en/imatik. Polisakarida mungkin sangat bermasalah ketika hadir

dalam sampel DNA! karena kehadiran mereka juga dapat menghambat akti*itas

en/imatik +ahu! 2"12,.

)ntuk mengetahui efektifitas dalam memperoleh konsentrasi dan

kemurnian DNA serta efisiensi aktu pengerjaan dari metode isolasi DNA

dengan membandingkan beberapa metode isolasi DNA diantaran-a ektraksi DNA


3/21

dengan 'it +Promega,! 3TA7 dengan phenol! modifikasi 3TA7! dan ekstraksi

DNA dengan thermal lysis. Parameter -ang digunakan adalah nilai kemurnian dan

kualitas DNA hasil isolasi -ang diperoleh dari analisis spektrofotometri dan analisis

elektroforesis serta efisiensi aktu pengerjaan. 'onsentrasi DNA dan kemurniann-a

diukur dengan metode spektrofotometri! sedangkan untuk *isualisasi DNA hasil

isolasi menggunakan metode elektroforesis serta pengujian keberadaan '@

dideteksi dengan bantuan P35 dengan menggunakan Primer pendeteksi '@. @asil

penelitian secara umum menunjukkan baha metode modifikasi 3TA7

memberikan hasil isolasi DNA dengan konsentrasi -ang tertinggi -aitu B"!1"

Cg


4/21

h. :elas ukur 1"" m%

i. 'ertas saring

j. Pipet tetes

k. Pipet gondok 0 m%

l. Pisau

m. Plastik klip

n. 5ak tabung reaksi

o. 5ubber bulb

p. patula

E. Tabung reaksi

r. Timbangan analitik

s. Water bath

2. 7ahan;bahan Praktikum

a. AEuades +@2F,+l,

b. 7aang bomba-

c. 7rokoli

d. 7uah pepa-a

e. 7uah pisang

f. 7uah tomat

g. Detergen bubuk

h. Detergen krim

i. =s batu+s,

j. :aram dapur +Na3l,+s,

k. %arutan etanol +32@0F@, ?#

D. SKEMA KERJA

1. Pembuatan =tanol Dingin


5/21

100 mL etanol 96%

Hasil

Dimasukkan ke dalam erlenmeyer 250 mLDitutup rapat erlenmeyer dengan aluminium foil agar etanol tidak menguapDimasukkan erlenmeyer ke dalam gelas kimia 600 mL yang telah diisi air dan es batu

50 gram daging buah(baang bombay! brokoli! pepaya! pisang! tomat"

#asing$masing dipotong keil$keil dengan pisauDimasukkan ke dalam blender

Hasil

Ditambahkan 50 mL a&uadesDiblender selama '0 detik

5 gram detergen bubuk

Hasil

Dimasukkan ke dalam gelas kimia 600 mLDitambahkan 100 mL a&uadesDiaduk perlahan$lahan selama 15 menit agar tidak munul gelembung pada larutan sabun

' mL larutan detergen bubuk

iltrat

Dimasukkan ke dalam tabung reaksiDitambahkan masing$masing ' mL larutan tumbuhanDitambahkan 1 spatula garam dapur kemudian dikook hingga ampuran homogenDipanaskan dalam ater bath selama 2 menit () * '0$50o+"Disaring ampuran dengan kertas saring

2. Preparasi %arutan Tumbuhan

$. &solasi DNA dengan Detergen 7ubuk

a. Pembuatan %arutan Detergen 7ubuk

b, &solasi DNA


6/21

masukkan ke dalam tabung reaksiambahkan 5 mL larutan etanol 96% dingin melalui dinding tabung reaksi

diamkan hingga terbentuk D-.perhatikan proses munulnya D-. dan diatat semua perubahan yang ter/adiatat aktu yang diperlukan hingga munulnya D-. serta banyak sedikitnya D-. yang terbentgunakan pipet tetes untuk mengambil D-.

Hasil

5 gram detergen krim

Hasil

Dimasukkan ke dalam gelas kimia 600 mLDitambahkan 100 mL a&uadesDiaduk perlahan$lahan selama 15 menit agar tidak munul gelembung pada larutan sabun

8. &solasi DNA dengan Detergen 'rim

a. Pembuatan %arutan Detergen 'rim


7/21

' mL larutan detergen krim

Dimasukkan ke dalam tabung reaksiDitambahkan masing$masing ' mL larutan tumbuhan

Dimasukkan ke dalam tabung reaksiDitambahkan 5 mL larutan etanol 96% dingin melalui dinding tabung reaksiDidiamkan hingga terbentuk D-.

iltrat

Ditambahkan 1 spatula garam dapur kemudian dikook hingga ampuran homogenDipanaskan dalam ater bath selama 2 menit () * '0$50o+"Disaring ampuran dengan kertas saring

b. &solasi DNA

• Diperhatikan proses munculn-a DNA dan dicatat

semua perubahan -ang terjadi

• Dicatat aktu -ang diperlukan hingga munculn-a

DNA serta ban-ak sedikitn-a DNA -ang terbentuk

• Digunakan pipet tetes untuk mengambil DNA

E. HASIL PENGAMATAN

1. Pembuatan %arutan 7uah

@asil


8/21

No Langkah Kerja Ha!" Penga#a$an

1 0" gram daging buah +baang bomba-!

brokoli! pepa-a! pisang! tomat, dipotong

kecil;kecil

Daging buah dibuat menjadi potongan;

potongan kecil.

2 Dimasukkan ke dalam blender!

ditambahkan 0" m% aEuades! dihaluskan

dengan blender selama 8" detik

Didapatkan daging buah seperti bubur

+slurr-,.

7aang bomba- G putih kehijauan.

7rokoli G hijau muda.

Pepa-a G orange.

Pisang G kuning kecoklatan.

Tomat G orange kemerahan.

2. &solasi DNA dengan Detergen 7ubuk


1 0 gram detergen bubuk dilarutkan dalam

1"" m% aEuades! diaduk perlahan selama

10 menit

Warna aal detergen putih. etelah

ditambah aEuades! detergen larut dan

terbentuk larutan berarna putih keruh.

2 8 m% larutan detergen bubuk

dicampurkan dengan 8 m% larutan buah

Didapatkan campuran baang bomba- G

keruh kehijauan. 7rokoli G hijau muda

keruh. Pepa-a G orange keruh. Pisang G

coklat keruh. Tomat G orange keruh.

$ Ditambahkan 1 spatula garam dapur

kemudian dikocok

:aram larut dalam campuran. %arutan

campuran tidak mengalami perubahan

arna.

8 3ampuran dipanaskan dan disaring

dengan kertas saring

Didapatkan larutan campuran menjadi

lebih jernih dan arna larutan tetap.

0 (iltrat ditambahkan 0 m% larutan etanol

?# dingin melalui dinding tabung reaksi

dan didiamkan hingga terbentuk DNA

=tanol tidak larut dalam campuran.

Terbentuk dua fasa. =tanol pada bagian

atas dan campuran larutan tumbuhan pada

bagian baah.

# DNA diambil dengan pipet tetes Tidak terjadi perubahan arna pada DNA

masing;masing tumbuhan.

$. &solasi DNA dengan Detergen 'rim


1 0 gram detergen krim dilarutkan dalam

1"" m% aEuades! diaduk perlahan selama

10 menit

Warna aal detergen biru. etelah

ditambah aEuades! detergen larut dan

terbentuk larutan berarna biru muda.


9/21

2 8 m% larutan detergen krim dicampurkan

dengan 8 m% larutan buah

Didapatkan campuran baang bomba- G

hijau. 7rokoli G hijau lumut. Pepa-a G

orange coklat keruh. Pisang G kuning

keruh. Tomat G hijau lumut keruh.

$ Ditambahkan 1 spatula garam dapur

kemudian dikocok

:aram larut dalam campuran. %arutan

campuran tidak mengalami perubahan

arna.

8 3ampuran dipanaskan dan disaring

dengan kertas saring

Didapatkan larutan campuran menjadi

lebih jernih dan arna larutan tetap.

0 (iltrat ditambahkan 0 m% larutan etanol

?# dingin melalui dinding tabung reaksi

dan didiamkan hingga terbentuk DNA

=tanol tidak larut dalam campuran.

Terbentuk dua fasa. =tanol pada bagian

atas dan campuran larutan tumbuhan pada

bagian baah.

# DNA diambil dengan pipet tetes Tidak terjadi perubahan arna pada DNA

masing;masing tumbuhan.

8. Tabel 'erja

No B%ah De$ergen

Penga#a$an

&arna Ben$%k &ak$% J%#"ah

1 Pepa-a7ubuk Frange muda 7enang terpilin 21 menit H

'rim 'uning coklat 7enang terpilin ?!1" menit HH

2 Pisang7ubuk Putih keruh 7enang terpilin 12!0# menit HH

'rim 7ening biru 7enang terpilin B!0? menit H

$ Tomat7ubuk 7ening keruh 7enang terpilin 1"!9 menit H

'rim @ijau lumut 7enang terpilin ?!$8 menit H

87aang

bomba-

7ubuk 'uning muda 7enang terpilin #!? menit H

'rim @ijau muda 7enang terpilin 9!2 menit H

0 7rokoli

7ubuk 'uning hijau 7enang terpilin 20 menit H

'rim @ijau muda 7enang terpilin 0!2$ menit H

'eterangan

H G sedikit

HH G cukup ban-ak

HHH G ban-ak

HHHH G sangat ban-ak


10/21

'. ANALISIS DATA

1. 7uah Pepa-a dengan Detergen 7ubuk

'eterangan

@asil dari campuran antara larutan buah pepa-a!

larutan detergen bubuk dan etanol dingin adalah

terbentuk 2 fase larutan dimana bagian atas

berarna bening keruh dan bagian baah

berarna orange muda. Di antara kedua fase

terlihat cincin kabut -ang sedikit. DNA terlihat

pada menit ke 21! dengan jumlah -ang sangat

sedikit.

2. 7uah Pepa-a dengan Detergen 'rim

'eterangan

@asil dari campuran antara larutan buah pepa-a!

larutan detergen krim dan etanol dingin adalah


berarna bening dan bagian baah berarna

kuning kecoklatan. Di antara kedua fase terdapat

cincin kabut kuning bening kecoklatan dengan

DNA -ang muncul ke permukaan cukup ban-ak.

Waktu -ang diperlukan untuk munculn-a DNA

adalah ?!1" menit.

$. 7uah Pisang dengan Detergen 7ubuk


11/21

'eterangan

3ampuran antara larutan buah pisang! larutan

detergen bubuk dan etanol dingin adalah



putih keruh. Di antara kedua fase terlihat cincin

kabut. :umpalan DNA terlihat setelah 12!0#

menit dengan jumlah -ang cukup ban-ak.

8. 7uah Pisang dengan Detergen 'rim

'eterangan

3ampuran antara larutan buah pisang! larutan

detergen krim dan etanol dingin adalah terbentuk

2 fase larutan dimana bagian atas berarna

bening dan bagian baah berarna bening

kebiruan. Di antara kedua fase terdapat cincin

kabut. DNA pisang terisolasi kurang baik

sehingga DNA -ang muncul sangat sedikit. Waktu

-ang dibutuhkan DNA adalah B!0? menit.

0. 7uah Tomat dengan Detergen 7ubuk


12/21

'eterangan

3ampuran antara larutan buah tomat! larutan




bening keruh. Di antara 2 fase terlihat cincin

kabut dengan jumlah -ang sedikit. DNA tomat

terisolasi dengan jumlah -ang sedikit. Waktu -ang

diperlukan DNA terpisah adalah 1"!9 menit.

#. 7uah Tomat dengan Detergen 'rim

'eterangan

3ampuran antara larutan buah tomat! larutan



bening dan bagian baah berarna hijau lumut

dan terdapat cincin kabut -ang sedikit di antara 2

fase. DNA -ang muncul sedikit. Waktu -ang

diperlukan untuk munculn-a DNA adalah ?!$8

menit.

B. 7aang 7omba- dengan Detergen 7ubuk

'eterangan

3ampuran antara larutan baang bomba-! larutan


terbentuk 2 fase! bagian atas berarna bening!

bagian baah berarna hijau muda dan terdapat

cincin kabut di antara kedua fase tersebut. DNA

terisolasi kurang baik! DNA -ang terlihat sangat

sedikit sehingga susah diamati. Waktu -ang

diperlukan untuk munculn-a DNA adalah #!?

menit.


13/21

9. 7aang 7omba- dengan Detergen 'rim

'eterangan

3ampuran antara larutan baang bomba-! larutan



bening dan bagian baah berarna hijau muda.

Di antara kedua fase terdapat cincin kabut dengan

arna hijau pudar -ang sedikit. DNA bomba-

kurang terisolasi dengan baik dan dalam jumlah

-ang sedikit sehingga sulit untuk diamati. Waktu

-ang diperlukan adalah 9!2 menit.

?. 7rokoli dengan Detergen 7ubuk

'eterangan

3ampuran antara larutan brokoli! larutan detergen

bubuk dan etanol dingin adalah terbentuk 2 fase

larutan dimana bagian atas berarna bening dan

bagian baah berarna kuning kehijauan. Pada

fase antara terlihat kabut -ang tipis dan sedikit.

DNA tidak terisolasi dengan baik dan sulit

diamati Waktu -ang diperlukan DNA adalah 20

menit.

1". 7rokoli dengan Detergen 'rim


14/21

'eterangan

3ampuran antara larutan brokoli! larutan

detergen krim dan etanol dingin adalah



hijau muda. Pada fase antara terlihat larutan

berarna hijau bening dengan sedikit kabut

cincin -ang sangat sedikit. Waktu -ang

diperlukan untuk munculn-a DNA adalah 0!2$

menit.

G. PEMBAHASAN

DNA + Deoxyribose Nucleic Acid , adalah molekul utama -ang mengkode semua

informasi -ang dibutuhkan untuk proses metabolisme setiap organisme hidup. DNA

tersusun atas tiga komponen utama -aitu gula deoksiribosa! basa nitrogen dan fosfat.

DNA terletak pada kromosom! dijumpai di nucleus! mitokondria dan kloroplas. DNA

dapat mengalami denaturasi -aitu proses pemisahan untai ganda molekul DNA sehingga

konformasin-a berubah! sedangkan renaturasi DNA merupakan proses pembentukan

kembali struktur untai ganda DNA dari keadaan terdenaturasi. @al;hal -ang dapat

mempengaruhi proses denaturasi antara lain suhu -ang tinggi! p@ -ang ekstrim !

kandungan elektrolit NaH atau ' H dan lain;lain.

)ntuk memperoleh DNA murni dari suatu sel dalam jaringan tubuh makhluk

hidup dapat dilakukan teknik isolasi. @asil isolasi DNA setiap jenis atau bagian

tumbuhan dapat berbeda;beda! hal ini dapat terjadi karena adan-a perbedaan

konsentrasi sen-aa polifenol dan polisakarida -ang terkandung di dalamn-a. Proses

isolasi DNA diaali dengan proses ekstraksi DNA. @al ini bertujuan untuk memisahkan

DNA dengan partikel lain -ang tidak diinginkan. Proses ini harus dilakukan dengan

hati;hati! sehingga tidak men-ebabkan kerusakan pada DNA. )ntuk mengeluarkan

DNA dari sel! dapat dilakukan dengan memecahkan dinding sel membrane plasma dam

membrane inti baik dengan cara mekanik maupun secara kimiai +Tim 7iokimia

(M&PA )nram! 2"1#,.


15/21

Pemecahan dinding sel secara mekanik dapat dilakukan dengan pemblenderan

atau penggerus menggunakan mortar dan pistil. edangkan secara kimiai dapat

dilakukan dengan pemberian detergen. Penambahan sabun cair dan garam dapur adalah

untuk melisiskan membran inti untuk mengeluarkan isi inti sel -ang berisi DNA.

etelah menunggu beberapa saat terjadi presipitasi pada lapisan atas bukan lapisan

baah! -ang menunjukkan baha DNA tidak larut dalam etanol tetapi larut dalam air.

'etika molekul DNA terlarut! mereka tersebar dalam larutan sehingga tidak terlihat.

'etika molekul tersebut berpindah kedalam larutan -ang bukan pelarut meraka akan

berkumpul< menggumpal sehingga dapat dilihat. Presipitat DNA terlihat seperti serabut;

serabut putih -ang terkumpul diatas permukaan larutan karena masa jenis etanol lebih

kecil dari pada masa jenis air.

Pada praktikum isolasi DNA ini bertujuan untuk mengetahui cara isolasi

DNA dari beberapa jenis tumbuhan! mengetahui keefektifan beberapa deterjen untuk

isolasi DNA dari beberapa jenis tumbuhan dan mengamati DNA dari sel tumbuhan.

Terdapat 8 tahap dalam praktikum ini -aitu pembuatan etanol dingin! preparasi larutan

tumbuhan! isolasi DNA dengan detergen bubuk dan dengan detergen krim.

Tahap pertama pembuatan etanol dingin dilakukan dengan merendam etanol

?# di dalam es batu dan ditutup dengan aluminium foil. Penggunaan etanol dingin ini

bertujuan untuk men-empurnakan proses presipitasi pada DNA sehingga dapat terlihat

seperti serabut;serabut putih atau berbentuk benang terpilin. =tanol tidak melarutkan

DNA dan berat jenis etanol lebih ringan dari air sehingga DNA lebih mudah untuk naik

ke permukaan. Proses presipitasi berpengaruh terhadap pekatn-a DNA! semakin pekat

DNA -ang dihasilkan pada proses isolasi semakin baik pula proses presipitasi -ang

terjadi. Penggunaan etanol ?# ini dapat juga membersihkan DNA dari pengotor;

pengotorn-a. =tanol merupakan sen-aa -ang mudah menguap sehingga saat proses

inkubasi adah ditutup dengan aluminium foil agar etanol tidak menguap ke udara.

Tahap kedua -aitu preparasi larutan tumbuhan. Tahap ini dilakukan dengan

menghancurkan sampel tumbuhan +baang 7omba-! brokoli! tomat! pisang dan papa-a,

dengan air menggunakan blender. Proses ini bertujuan untuk merusak jaringan -ang ada

pada sel sehingga mempermudah bahan;bahan kimia lain -ang akan digunakan untuk

masuk ke dalam organel;organel sel! dalam hal untuk mengambil DNA. Pemblenderan

dilakukan selama 8" detik! jika proses dilakukan kurang dari 8" detik membrane dan


16/21

dinding sel tidak hancur secara sempurna sehingga DNA di dalamn-a tidak dapat

keluar. edangkan jika proses dilakukan lebih dari 8" detik sampel akan sangat hancur

dan DNA didalamn-a juga akan rusak. Warna sampel baang bomba-! brokoli! papa-a!

pisang dan tomat setelah diblender berturut;turut -aitu putih kehijauan! hijau muda!

orange! kuning kecoklatan dan orange kemerahan.

Tahap ketiga dan keempat -aitu proses isolasi DNA dengan detergen bubuk dan

krim. Penambahan deterjen dalam isolasi DNA dapat men-ebabkan rusakn-a membrane

sel! melalui ikatan -ang dibentuk melalui sisi hidrofobik deterjen dengan protein dan

lemak pada membrane membentuk sen-aa Ilipid protein;deterjen kompleksJ.

en-aa tersebut dapat terbentuk karena protein dan lipid memiliki ujung hidrofilik dan

hidrofobik! demikian juga dengan deterjen! sehingga dapat membentuk suatu ikatan

kimia. Pertama dilakukan proses pelarutan detergen bubuk dan krim dengan aEuades

dan diaduk secara perlahan agar tidak menimbulkan gelembung selama 10 menit.

:elembung;gelembung tersebut dapat mengganggu pengamatan pada proses isolasi

DNA. Proses pengadukan dilakukan selama 10 menit bertujuan agar proses pelarutan

detergen bubuk dengan aEuades dapat terjadi sempurna. Warna larutan detergen bubuk

ialah putih dan larutan krim biru muda. elanjutn-a proses isolasi DNA dilakukan

dengan menambahkan larutan detergen bubuk dengan larutan sampel dan ditambahkan

garam dapur dan dihomogenkan. Penambahan garam ini bertujuan untuk memisahkan

benang;benang DNA dari larutan! juga untuk mengendapkan kotoran;kotoran sehingga

benang DNA akan mudah diamati. 'emudian larutan -ang telah homogen dipanaskan

dalam aterbath selama 2 menit. Warna pada larutan setelah dipanaskan tidak berubah.

Proses pemanasan dilakukan untuk mencegah denaturasi DNA karena DNA akan rusak

pada suhu kamar. Dan dengan pemanasan ini akan mempercepat reaksi karena molekul;

molekul dalam campuran akan lebih sering bertumbukan.

Penggunaan detergen dan garam ini juga berfungsi sebagai buffer -aitu

mempertahankan p@ larutan. Dimana seperti -ang kita ketahui baha DNA dapat rusak

pada p@ -ang tinggi sehingga dibutuhkan buffer agar DNA pada tumbuhan tidak rusak

dan dapat diamati. %arutan buffer juga dapat berfungsi untuk purifikasi dimana 5NA

dan protein -ang menempel pada DNA akan hilang dan mencegah akti*itas e/im

pendegradasi DNA sehingga molekul DNA tidak mengalami perubahan. ampel -angtelah dipanaskan menjadi lebih jernih hal ini dapat terjadi karena adan-a proses


17/21

presipitasi protein! lipid! dan karbohidrat -ang tidak diinginkan pada proses isolasi

DNA. 'emudian sampel larutan disaring dengan kertas saring untuk didapatkan

filtratn-a. elanjutn-a ditambahkan etanol dingin untuk membantu proses pemisahan

DNA. Penambahan etanol dilakukan melalui dinding tabung agar etanol tidak

bercampur dan larut dalam sampel. =tanol berfungsi untuk menggumpalkan dan

membaa DNA ke permukaan sehingga mudah diamati.

@asil pengamatan isolasi DNA dengan detergen bubuk pada sampel papa-a

terbentuk 2 fase dimana bagian atas berarna bening keruh dan bagian baah berarna

orange muda. Di antara kedua fase terlihat cincin kabut -ang sedikit. DNA terlihat pada

menit ke 21! dengan jumlah -ang sangat sedikit. Pada sampel pisang terbentuk 2 fase

larutan dimana bagian atas berarna bening dan bagian baah berarna putih keruh. Di

antara kedua fase terlihat cincin kabut. :umpalan DNA terlihat setelah 12!0# menit

dengan jumlah -ang cukup ban-ak. Pada sampel tomat terbentuk 2 fase larutan dimana

bagian atas berarna bening dan bagian baah berarna bening keruh. Di antara 2 fase

terlihat cincin kabut dengan jumlah -ang sedikit. DNA tomat terisolasi dengan jumlah

-ang sedikit. Waktu -ang diperlukan DNA terpisah adalah 1"!9 menit. Pada sampel

baang bomba- terbentuk 2 fase! bagian atas berarna bening! bagian baah berarna

hijau muda dan terdapat cincin kabut di antara kedua fase tersebut. DNA terisolasi

kurang baik! DNA -ang terlihat sangat sedikit sehingga susah diamati. Waktu -ang

diperlukan untuk munculn-a DNA adalah #!? menit. Pada sampel brokoli terbentuk 2

fase larutan dimana bagian atas berarna bening dan bagian baah berarna kuning

kehijauan. Pada fase antara terlihat kabut -ang tipis dan sedikit. DNA tidak terisolasi

dengan baik dan sulit diamati Waktu -ang diperlukan DNA adalah 20 menit.

@asil pengamatan isolasi DNA dengan detergen krim. Pada sampel papa-a

terbentuk 2 fase larutan dimana bagian atas berarna bening dan bagian baah

berarna kuning kecoklatan. Di antara kedua fase terdapat cincin kabut kuning bening

kecoklatan dengan DNA -ang muncul ke permukaan cukup ban-ak. Waktu -ang

diperlukan untuk munculn-a DNA adalah ?!1" menit. Pada sampel pisang terbentuk 2

fase larutan dimana bagian atas berarna bening dan bagian baah berarna bening

kebiruan. Di antara kedua fase terdapat cincin kabut. DNA pisang terisolasi kurang baik

sehingga DNA -ang muncul sangat sedikit. Waktu -ang dibutuhkan DNA adalah B!0?menit. Pada sampel tomat terbentuk 2 fase larutan dimana bagian atas berarna bening


18/21

dan bagian baah berarna hijau lumut dan terdapat cincin kabut -ang sedikit di antara

2 fase. DNA -ang muncul sedikit. Waktu -ang diperlukan untuk munculn-a DNA

adalah ?!$8 menit. Pada sampel baang bomba- terbentuk 2 fase larutan dimana bagian

atas berarna bening dan bagian baah berarna hijau muda. Di antara kedua fase

terdapat cincin kabut dengan arna hijau pudar -ang sedikit. DNA bomba- kurang

terisolasi dengan baik dan dalam jumlah -ang sedikit sehingga sulit untuk diamati.

Waktu -ang diperlukan adalah 9!2 menit. Pada sampel brokoli terbentuk 2 fase larutan

dimana bagian atas berarna bening dan bagian baah berarna hijau muda. Pada fase

antara terlihat larutan berarna hijau bening dengan sedikit kabut cincin -ang sangat

sedikit. Waktu -ang diperlukan untuk munculn-a DNA adalah 0!2$ menit.

7erdasarkan hasil pengamatan sampel pisang dan papa-a memiliki hasil

isolasi DNA -ang cukup ban-ak diantara sampel -ang lainn-a. @al ini dapat terjadi

karena kandungan air pada buah papa-a dan pisang lebih sedikit dibandingan sampel

tomat! baang bomba- dan brokoli. Dimana kandungan air -ang sedikit memiliki sel

-ang lisis lebih ban-ak dibandingkan sampel -ang memiliki kandungan air -ang

ban-ak. ehingga DNA pada sampel -ang kandungan airn-a sedikit akan ban-ak -ang

dipresipitasikan. Waktu munculn-a DNA pada masing;masing sampel berbeda;beda.

Perbedaan ini terjadi dikarenakan perbedaan jenis detergen -ang digunakan.

'eefektifan penggunaan detergen bubuk dan krim dapat dilihat dari jumlah

DNA -ang mengalami presipitasi pada saat isolasi. Detergen krim memiliki kualitas

-ang paling baik dalam pembentukan DNA pada sampel tumbuhan dikarenakan dalam

detergen krim! kandungan sen-aa kimia untuk melisiskan sel terdapat dalam

konsentrasi -ang lebih tinggi daripada jenis detergen bubuk. 7erdasarkan hasil literature

didapatkan hasil baha antara detergen cair! bubuk! dan cream -ang seharusn-a

mempun-ai da-a rusak paling tinggi dalam memecah membran sel adalah detergen cair.

'arena di dalam detergen cair mengandung konsentrasi -ang tinggi misaln-a laur-l

sulfat -ang dapat berfungsi sama dengan dodesil sulfat dan disodium =DTA! serta

kandungan /at pearna dan /at aktif pemutih -ang biasan-a ada dalam detergen cair.

H. KESIMPULAN

7erdasarkan praktikum -ang telah dilakukan dapat disimpulkan baha


19/21

1. &solasi DNA pada beberapa jenis tumbuhan dapat dilakukan dengan beberapa tahap.

Tahap penghancuran membrane dan dinding sampel agar DNA tumbuhan dapat

diisolasi dengan baik. Tahap isolasi DNA -ang dilakukan dengan mencampurkan

larutan sampel dengan larutan detergen dan larutan garam -ang akan

mempertahankan p@ larutan sehingga DNA tidak rusak. :aram juga akan

membantu memisahkan benang;benang DNA dan mengendapkan kotoran;kotoran.

2. 'eefektifan detergen -ang digunakan dalam isolasi DNA berbeda berdasarkan jenis

detergenn-a. Dimana detergen krim memiliki konsentrasi sen-aa kimia -ang lebih

tinggi dibandingkan detergen bubuk untuk melisiskan dinding dan membrane sel

sehingga isolasi DNA lebih efektif menggunakan detergen krim.

$. DNA dari sel tumbuhan berbentuk benang terpilin atau serabut;serabut putih -ang

dapat diamati pada proses isolasi DNA. %arutan etanol akan membantu

mengendapkan DNA dan membuat DNA terapung ke permukaan karena perbedaan

massa jenis DNA -ang lebih ringan.

DA'TAR PUSTAKA

(aatih! Mukhlissul. 2""?. Isolasi dan Digesti DNA Kromosom. urakarta urnal

Penelitian ains dan Teknologi.

@artono! Andr-. 2""#. Terapi Gizi, Diet dan Rumah a!it . akarta Penerbit 7uku

'edokteran =:3.


20/21

Mul-ani! Kuniar! dkk. 2"12. "erbandingan #eberapa $etode Isolasi DNA %ntu!

Dete!si Dini Koi &erpes 'irus (K&') pada I!an $as (*yprinus *arpio +.).

atinangor )ni*ersitas Padjajaran.

Paikara! Di*-a! dkk. 2"18. Isolaton, ualitati-e and uantitati-e stimation o/ DNA

/rom 'arious ources. &ndia Department of 7iotechnolog- and Microbiolog-

7hilai Mahila Maha*id-ala-a.

ada*a! D. 2""8. +i/e0 The cience o/ #iology 1th dition. )nited tates inauer

Associates &nc.

ahu! unil 'umar! dkk. 2"12. DNA xtraction "rotocol /or "lants 2ith &igh +e-els o/

econdary $etabolites and "olysaccharides 2ithout %sing +i3uid Nitrogen and

"henol . &ndia &nternational cholarl- 5esearch Netork.

Tim 7iokimia. 2"1#. "etun4u! "ra!ti!um #io!imia II untu! "rodi Kimia. Mataram

)ni*ersitas Mataram.

Triiboo! K. 2""0. #iologi $ole!ular . akarta =rlangga.

LAPORAN MINGGUAN PRAKTIKUM

BIOKIMIA II

ACARA V

ISOLASI DNA TUMBUHAN


21/21

Disusun Fleh

NAMA 5&L'& AMA%&A P)T5&

N&M :13 "1$ "8"

PROGRAM STUDI KIMIA

'AKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS MATARAM

()*+

Acara v Dna Tumb

Documents

Transcript of Acara v Dna Tumb