a2 Practicals for Biology

download a2 Practicals for Biology

of 23

Transcript of a2 Practicals for Biology

  • 8/18/2019 a2 Practicals for Biology

    1/23

     O b  s  er v 

    i  n g p a t   t   er n

     s  b  y  e

     c  ol   o gi   c 

     al  

     s  am

     pl  i  n g.

     C  on

     t  r  ol  l   e

     d v 

     a

    r i   a b l   e

     s ? 

       A   b   i  o   t   i  c

       f  a  c   t  o  r  s ,   l   i  g   h   t ,   t  e  m

      p ,  s  o   i   l ,

      w  a   t  e  r ,   h  u  m   i   d   i   t  y ,  o   2  c  o  n  c  e  n   t  r  a   t   i  o  n ,

      p   H

     ,  a  s  p  e  c   t  s   l  o  p  e  a  n

      g   l  e

    H  ow

     d  o y  o u ex 

     e c  u t   er  an

     d  om

     s  am

     pl  i  n g?     S

      e   t  u  p  g  r   i   d  u  s   i  n  g   t  a  p  e  m  e  a  s  u  r  e ,  u  s  e

      r  a  n   d

      o  m

      n  u  m   b  e  r  s   t  o  g

      e  n  e  r  a   t  e  p  o   i  n   t  s

       t  o

      p   l  a  c  e  q  u  a   d  r  a   t  e   t  o  c  o   l   l  e  c   t   d  a   t  a

  • 8/18/2019 a2 Practicals for Biology

    2/23

    H  ow

     d  o y  o u

     ex  e c  u t   e s  y  s  t   em

     a t  i   c  s  am

     pl  i  n

     g?     L

       i  n  e   t  r  a  n  s  e  c   t ,   t  a  p  e  m  e  a  s  u  r  e   l  a   i   d  a   l  o  n  g

      s  e  v  e  r  a   l   z  o  n  e  s   t  o   b  e   l  o  o   k  e   d  a   t

      a  n   d  q  u  a   d  r  a   t  e

      a  r  e  u  s  e   d   t  o  r

      e  c  o  r   d   d  a   t  a  a   t  r  e  g

      u   l  a  r   i  n   t  e  r  v  a   l  s

    H  ow d  o y  o um

     e a

     s  ur  e a b  un

     d  an

     c  e , d  en

     s i   t   y ? 

       D  e  n  s   i   t  y  =  p  r  e  s

      e  n  c  e  o   f

      o  r  g  a  n   i  s  m  s  p  e  r  q  u  a   d  r  a   t  e

  • 8/18/2019 a2 Practicals for Biology

    3/23

    H  ow

     d  o

     y  o um

     e a s  ur  ef  r  e

     q u en

     c  y ? 

       P  e  r  c  e  n   t  a  g  e  o   f  q  u  a   d  r  a   t  e

      s  q  u  a  r  e

      s  c  o  n   t  a   i  n   i  n  g  o  r  g  a  n   i  s  m  s

    Wh 

     a t   d  o y  o u

     u s  e a pi   t  f   al  l    t  r  a

     p

    f   or ? 

       T  o  c  o   l   l  e  c   t   i  n  v  e  r   t  e   b  r  a   t  e  s

  • 8/18/2019 a2 Practicals for Biology

    4/23

  • 8/18/2019 a2 Practicals for Biology

    5/23

    Wh 

     a t   d  o y  o u u s  e a t   ul  l   gr  en

    f   unn

     el   f   or ?     T

      o  c  o   l   l  e  c

       t  o  r  g  a  n   i  s  m  s   f  r  o  m

       l  e  a   f   l   i   t   t  e  r

    Wh 

     a t   d  o y  o u u s 

     e aB 

     e ar m

     anf   un

    n el   f   or ? 

       T  o

      c  o   l   l  e  c   t  o  r  g  a  n   i  s  m

      s   f  r  o  m

      w  a   t  e  r

  • 8/18/2019 a2 Practicals for Biology

    6/23

     O b  s  er v 

    i  n g p a t   t   er n

     s  b  y  e

     c  ol   o gi   c 

     al  

     s  am

     pl  i  n

     g.P  o

     s  s i   b l   e

     ev 

     al   u

     a t  i   oni   s 

     s  u e s ? 

      c  o  n  s   t  a  n   t  c   h

      a  n  g   i  n  g  o   f  a   b   i  o   t   i  c

      c  o  n   d   i   t   i  o  n  s ,

      m  o  v  e  m  e  n   t

      o   f  o  r  g  a  n   i  s  m ,  s  a  m

      p   l   i  n  g   t  a   k  e  n

      w   i   t   h   i  n  s  m  a   l   l   a  m  o  u  n   t  o   f   t   i  m  e ,

       l   i  m   i   t  a   t   i  o  n  s  o   f

      o  n   l  y  o  n  e  s   t  u

       d  y ,  c  o  n  s   i   d  e  r  a   t   i  o  n

       f  o  r  s  a   f  e   t  y  o   f

      o  r  g  a  n   i  s  m  s ,

       d   i  s  r  u  p   t   i  o  n  o   f  n  o  r

      m  a   l    h  a   b   i   t  a   t ,

      e   t   h   i  c  s  o   f

      m  e  a  s  u  r   i  n  g  w   i   l   d  o

      r  g  a  n   i  s  m  s

    T h 

     e ef  f   e

     c  t  

     of   t   em

     p of  h 

     a t   c h i  n g

     s  u c  c  e s  s  of  

     b r i  n

     e s h r i  m

     p.I  n

     d  e p en d 

     en

     t  

     an

     d  d  e p en d 

     en

     t  v 

     ar i   a

     b l   e

     s ? 

       I  n

       d  e  p  e  n   d  e  n   t  :   t  e  m  p

       D  e  p  e  n   d  e  n   t  :

      n  u  m   b  e  r  o   f  s   h  r   i  m  p  s   h  a   t  c   h  e   d

  • 8/18/2019 a2 Practicals for Biology

    7/23

    T h 

     e ef  f   e

     c  t   of   t   em

     p of  h 

     a t   c h 

    i  n g s  u c  c  e s  s 

     of  

     b r i  n

     e s 

    h r i  m p.

     C  on

     t  r  ol  l   e

     d 

    v  ar i   a

     b l   e

     s ?     C

      o  n   t  r  o   l   l  e

       d  v  a  r   i  a   b   l  e  s  :   l   i  g   h   t

       i  n   t  e  n  s   i   t  y ,

      p   H ,  s  a   l   t  c  o  n   t  e  n   t ,  p  r  e  s  e  n  c  e

      o   f  c   h   l  o  r   i  n  e

       f  r  o  m

       t  a  p  w

      a   t  e  r ,  o  x  y  g  e  n  c  o  n

      c  e  n   t  r  a   t   i  o  n

     O p t  i  m a

    l    t   em p er  a

     t   ur  ef   or 

     b r i  n

     e s h r i  m p

     e g g s  t   oh 

     a t   c h 

       2   8   d  e  g  r  e  e  s ,  m  o  s   t  e  g  g

      s  s   h  o  u   l   d   h  a   t  c   h

       b  e   t  w  e  e

      n   2   5   t  o   3   0   d  e  g  r  e  e  s   i  n   t   h   i  s  p  r  a  c   t   i  c  a

       l

  • 8/18/2019 a2 Practicals for Biology

    8/23

    T h 

     e ef  f   e

     c  t   of   t   em

     p of  h 

     a t   c h i  n

     g s  u c  c  e s  s  of  

     b r i  n

     e s h r i  m

     p.P  o s  s i   b l   e

     ev 

     al   u

     a t  i   oni   s 

     s  u e s ? 

      e   t   h   i  c  s  o   f   h  a   t  c   h   i  n  g  s   h  r   i  m

      p  u  n   d  e  r

       d   i   f   f  e  r  e  n   t  c

      o  n   d   i   t   i  o  n  s ,  u  s   i  n  g

      a  n   i  m  a   l  s   i  n

      e  x  p  e  r   i  m  e

      n   t  s ,  m  a  y   b  e  a   d   i   f

       f  e  r  e  n  c  e   i  n

       l   i  g   h   t  a   t  e  a  c

       h  s  a  m  p   l  e ,   f   l  u  c   t  u  a

       t   i  n  g   t  e  m  p  s ,

      n  o   t  a  c  c  u  r  a

       t  e  s  a   l   t  m  e  a  s  u  r  e  m

      e  n   t  s ,  m  a  y

      n  o   t   h  a  v  e

      c  o  u  n   t  e   d  e  x  a  c   t   l  y

       4   0  e  g  g  s ,

      m  a  y  m   i  s  s

      s  e  e   i  n  g  s  o  m  e   b  a

       b  y  s   h  r   i  m  p

    Wh 

     a t   s  t   a t   t   e s 

     t   u s  e d f   or 

     c  or r  el   a

     t  i   on? 

       S  p  e  a  r  m  a  n  s

      r  a  n   k

  • 8/18/2019 a2 Practicals for Biology

    9/23

    Wh 

     a t   s  t   a t   t   e s  t   u s  e d  t   o c  om

     p ar  em

     e an

     s ? 

       S   t  u   d  e  n   t   t   t  e  s   t

    Wh  a t   s  t   a t   t   e s  t   u s  e d  t   o c  om

     p ar  em

     e d i   an

     s ? 

      m  a  n  n  w   h   i   t  n  e  y

      -  u   t  e  s   t

  • 8/18/2019 a2 Practicals for Biology

    10/23

    I  nwh 

     a t  

     s  t   a t   t   e s  t   s  d  o y  o u

    r  e j   e c  t  n

     ul  l  

    h  y  p o t  h  e s i   s i  f  

     t  h  e c  al   c 

     ul   a

     t   e d v 

     al   u

     e

    i   s m

     or 

     e t  h  an

     t  h  e c r i   t  i   c 

     a

    l   v  al   u

     e? 

      s   t  u   d  e  n   t   t   t  e  s   t  a  n   d  s  p  e  a  r  m

      a  n  s  r  a  n   k

    I  nwh 

     a t   s  t   a

     t   t   e s  t   s  d  o y  o ur  e

     j   e c  t  

    n ul  l   h 

     y  p o t  h  e s i   s i  f  

     t  h  e c  al   c 

     ul   a

     t   e d 

    v  al   u

     ei   s l   e

     s  s  t  h  an

     t  h  e c r i   t  i   c 

     al   v 

     al   u e? 

      m  a  n  n  w   h   i   t  n  e  y  u   t  e  s   t

  • 8/18/2019 a2 Practicals for Biology

    11/23

  • 8/18/2019 a2 Practicals for Biology

    12/23

    D N 

    A  g el    el   e

     c  t  r  o ph 

     or 

     e s i   s  ,

     o u t   c  om e of  

     t  h i   s 

     pr  a

     c 

     t  i   c  al  ? 

       D   N   A  w   i   l   l    b

      e  s  e  p  a  r  a   t  e   d  o  u   t   t   h  r  o  u  g   h   t   h  e

      a  g  a  r  g  e   l ,  w   i   t   h   t   h  e   h  e  a  v   i  e  s   t   (   b

       i  g  g  e  s   t   )   D   N   A

      s   t  r  a  n   d  s  n  e

      a  r   t   h  e  w  e   l   l  s  a  n   d

       t   h  e   l   i  g   h   t  e  s   t

       (  s  m  a   l   l  e  s   t   )  w

       i   l   l    b  e  a   t   t   h  e  o  p  p  o  s   i   t  e  e  n   d .   T   h  e

       D   N   A  r  e  s   t  r   i  c

       t   i  o  n   l  a   d   d  e  r  c  a  n   b

      e  u  s  e   d  a  s  a

       “  r  u   l  e  r   ”   t  o  m  e  a

      s  u  r  e   t   h  e  s   i  z  e  o   f   t   h  e   f  r  a  g  m  e  n   t  s

    D N A 

     am

     pl  i  f  i   c  a t  i   on

     u s i  n

     g

    P  C R 

     , e q

     ui   pm

     en

     t  n

     e e d  e d ? 

       T   h

      e  r  m  o  c  y  c   l  e  r ,   D   N   A

      s  a  m  p   l  e ,   t  a  q

      p  o   l  y  m  e  r  a  s  e ,  n  u  c   l  e  o   t   i   d  e  s ,  p  r   i  m  e  r  s

  • 8/18/2019 a2 Practicals for Biology

    13/23

    D N 

    A  g el    el   e

     c  t  r  o ph 

     or 

     e s i   s .

     q ui   pm

     en

     t  n

     e e d  e

     d ? 

      s  e   l  e  c   t  e   d  r  e  s   t  r   i  c   t   i  o  n  e  n  z  y  m  e  s ,

      a  g  a  r  g  e   l ,  g  e   l

       t  a  n   k ,  e   l  e  c   t  r   i  c

      a   l   s  u  p  p   l  y ,  m   i  c  r  o  p

       i  p  e   t   t  e  s ,   D   N   A

      s  a  m  p   l  e ,   l  o  a   d   i  n  g   d  y  e ,   U   V   l   i  g

       h   t ,  c  a  m  e  r  a ,

       b  u   f   f  e  r  s  o   l  u

       t   i  o  n ,   D   N   A  r  e  s   t  r   i  c

       t   i  o  n   l  a   d   d  e  r

    D N A 

     am

     pl  i  f  i   c  a

     t  i   on

     u s i  n

     gP 

     C 

    R  ,

    wh 

     a t   or  d 

     er 

     of   t  h 

     e t   em

     p er  a

     t   ur 

     e s ? 

       9   4 ,   5   4 ,   7

       2

  • 8/18/2019 a2 Practicals for Biology

    14/23

  • 8/18/2019 a2 Practicals for Biology

    15/23

    E f  f   e

     c  t   s 

     of   d i  f  f   er  en

     t   an

     t  i   b 

    i   o t  i   c  s  on

     b  a c  t   er i   a.

     C  on

     t  r  ol  l   e

     d v 

     a

    r i   a b l   e

     s ?    c

      o  n  c

      e  n   t  r  a   t   i  o  n  o   f  a  n   t   i   b

       i  o   t   i  c ,

      a  m  o  u

      n   t  o   f  a  n   t   i   b   i  o   t   i  c ,   d   i  s  c  s   i  r ,

       b  a  c   t  e  r   i  a   l   s  p  e  c   i  e  s ,   t  e  m  p

     ,  r  u   l  e  r

    E f  f   e

     c  t   s  of  

     d i  f  f   er  en

     t   an

     t  i   b i   o

     t  i   c  s  on

     b  a c  t   er i   a.I  n

     c  u

     b  a t  i   on

     t  i  m e an

     d  t   em p?     4

       8   h

      o  u  r  s ,   3   0   d  e  g  r  e  e  s ,  u  p  s   i   d  e   d  o  w  n

  • 8/18/2019 a2 Practicals for Biology

    16/23

    E f  f   e

     c  t   s 

     of   d i  f  f   er  en

     t   an

     t  i   b 

    i   o t  i   c  s  on

     b  a c  t   er i   a.

    P  o s  s i   b l   e

     ev 

     al   u

     a t  i   oni   s 

     s  u e s ? 

       E  n  s  u  r   i  n  g   t   h  e   d   i  s  c  s  a  r  e  e  v  e

      n   l  y  p   l  a  c  e   d

      o  n   t   h  e

      p  e   t  r   i    d   i  s   h ,   h  a  v   i  n  g  g  o  o   d

      a  s  e  p   t   i  c   t  e  c   h  n   i  q  u  e   t  o  p  r  e  v

      e  n   t  p   l  a   t  e

      c  o  n   t  a  m   i  n  a   t   i  o  n ,  a  g  e  o   f  a  n   t   i   b   i  o   t   i  c ,   i   f  o  u   t  o   f

       d  a   t  e   l   i   k  e   l  y

       t  o   b  e   l  e  s  s  e   f   f  e  c   t   i  v  e ,  r  e  p  e  a   t  s ,

      a  c  c  u  r  a  c  y  o   f   i  n  c  u   b  a   t   i  o  n   t   i  m  e

      a  n   d   t  e  m  p

    M e a s  ur i  n

     g

     t  h  er  a

     t   e of  

     ox 

     y  g en

     u p t   ak 

     e.

     C  on t  r  ol  l   e

     d v 

     ar i   a

     b l   e

     s ? 

      n  o  o   f  o  r  g  a  n   i  s  m

      s ,   t  e  m  p ,

       t   i  m  e ,  a  m  o  u  n   t  o   f

      s  o   d  a   l   i  m  e

  • 8/18/2019 a2 Practicals for Biology

    17/23

  • 8/18/2019 a2 Practicals for Biology

    18/23

     U  t   u b  er  e

     s  pi  r  om

     e t   er .A 

     d v 

     an d 

     d .A 

     d v ? 

       d .  a   d  v  :   t  e  n   d

      e  n  c  y   f  o  r  c  o  n  n  e  c   t   i  o  n  s   t  o   l  e  a   k

       i  n  e   l   d  e  r   l  y  m

      o   d  e   l  s   (  m  a   k   i  n  g   t   h  e  e  q  u   i  p  m  e  n   t

      u  s  e   l  e  s  s   )  e  x

      p  e  n  s   i  v  e ,  a   d  v  :   d  o

      e  s  n  o   t  n  e  e   d

       t  o   h  a  v  e  a  n  a

       d   d   i   t   i  o  n  a   l   c  o  n   t  r  o   l   a  s  a  s  e  c  o  n   d

       t  u   b  e   b  a   l  a

      n  c  e  s  o  u   t   t   h  e  e   f   f  e

      c   t  s  o   f   t   h  e

      c   h  a  n  g  e  s   i  n   t  e

      m  p  a  n   d  a   t  m  o  s  p   h

      e  r   i  c  p  r  e  s  s  u  r  e

    E f  f   e

     c  t   s  of  

     ex 

     er  c i   s  e

     on

     t  i   d  al   v 

     ol   um

     e an

     d 

     b r  e

     a t  h i  n

     gr  a

     t   e.E 

     q ui   pm

     en

     t  n

     e e

     d  e d ? 

      s  p   i  r  o

      m  e   t  e  r ,   k  y  m  o  g  r  a  p

       h ,   d   i  s   i  n   f  e  c   t  a  n   t ,

      e  y  e  p  r  o   t  e  c   t   i  o  n ,  s  o   d  a   l   i  m  e

  • 8/18/2019 a2 Practicals for Biology

    19/23

    D  e

    f  i  n e t  h  e t  i   d  al   v 

     ol   u

    m e? 

       T   h  e   t   i   d

      a   l   v  o   l  u  m  e   i  s   t   h  e

      v  o   l  u  m  e

      o   f  a   i  r   b  r  e  a   t   h  e   d   i  n  a  n   d  o  u

       t   i  n  o  n  e

       b  r  e  a   t   h  a   t  r  e  s   t .   T   h  e   t   i   d  a   l   v  o   l  u  m  e   f  o  r

      m  o  s   t  a   d  u   l   t  s   i  s  o  n   l  y  a   b  o  u   t

       0 .   5   d  m   3 .

    D  ef  i  n

     e t  h  ev i   t   al    c 

     a p a c i   t   y ? 

       V   i   t  a   l   c  a  p  a  c   i   t  y   i  s   t   h  e  m  a  x   i  m  u  m

      v  o   l  u  m  e

      o   f  a   i  r   t   h  a   t  c  a  n   b  e   b  r  e

      a   t   h  e   d   i  n  o  r  o  u   t

      o   f

       t   h  e   l  u  n  g  s   i  n  o  n  e   f  o  r  c  e   d   b  r  e  a   t   h

  • 8/18/2019 a2 Practicals for Biology

    20/23

  • 8/18/2019 a2 Practicals for Biology

    21/23

    Wh 

     a t  i   s r  e

     s i   d 

     u al    ai  r  ,

     an d 

    w

    h  a t   d  o e s i   t  

     pr  ev 

     e

    n t  ? 

       S  o  m  e  a   i  r  a   l  w  a  y  s  r  e  m  a   i  n

      s   i  n   t   h  e

       l  u  n  g  s  a  s

      r  e  s   i   d  u  a   l   a   i  r  a  n   d  c  a  n  n  o   t   b  e

       b  r  e  a   t   h  e   d

      o  u   t .   R  e  s   i   d  u  a   l   a   i  r  p  r  e  v  e  n   t  s

       t   h  e  w  a   l   l  s  o   f   t   h  e   b  r  o  n  c   h   i  o

       l  e  s  a  n   d

      a   l  v  e  o   l   i    f  r  o

      m

      s   t   i  c   k   i  n  g   t  o  g  e   t   h

      e  r .   A  n  y  a   i  r

       b  r  e  a   t   h  e   d

       i  n  m   i  x  e  s  w   i   t   h  r  e  s   i   d  u  a   l   a   i  r .

    I  nv 

     e s  t  i   g a t  i  n gh 

     a b i   t   u a t  i   on

     t   o a s  t  i  m ul   u

     s .

    I  n d  e p en

     d  en

     t   an

     d  d  e p en

     d  en

     t  v 

     ar i   a b l   e

     s ? 

       I  n

       d  e  p  e  n   d  e  n   t  :  n  u  m   b  e  r  o   f  p  o   k  e  s

       D  e  p  e  n   d  e  n   t  :  r  e   t  r  a

      c   t   i  o  n   t   i  m  e

  • 8/18/2019 a2 Practicals for Biology

    22/23

    I  nv 

     e s 

     t  i   g a t  i  n gh 

     a b i   t   u

     a t  i   on t   o a

     s  t  i  m ul  

     u s . C  on

     t  r  ol  l   e

     d v 

     a

    r i   a b l   e

     s ? 

      r  e  p   l   i  c  a   t   i  o  n  u  s   i  n  g  s  n  a

       i   l  s  o   f

      a  p  p  r  o  x   i  m

      a   t  e   l  y  s  a  m  e  s   i  z  e

      a  n   d  a  g  e ,

      e  q  u  a   l    h  a  n   d   l   i  n  g   h   i  s   t  o  r  y ,   d  r  y   i  n  g  o  u   t

    I  nv 

     e s  t  i   g a t  i  n gh 

     a b i   t   u

     a t  i   on

     t   o

     a

     s  t  i  m ul   u

     s .E 

     q ui   pm

     en

     t  n

     e e d  e

     d ?     1  g   i  a  n   t  a   f  r   i  c  a  n   l  a

      n   d  s  n  a   i   l ,   1

       d  a  m  p  e  n  e   d  c  o   t   t  o  n

      w  o  o   l    b  u   d ,

      c   l  e  a  n   f   i  r  m

      s  u  r   f  a  c  e ,  s   t  o  p  w  a   t  c   h

  • 8/18/2019 a2 Practicals for Biology

    23/23

    I  nv 

     e s  t  i   g a t  i  n g

    h  a b i   t   u

     a t  i   on

     t   o a

     s  t  i  m ul   u

     s .wh 

     a t  

    h  a p p en

     s w

    i   t  h r  e

     p e a t   e d  s  t  i  m

     ul   a t  i   on? wh 

     y 

     d  o e s  t  h  e s n

     ai  l    t   ak 

     el   e

     s  s  t  i  m e

     t   or  e- em

     er  g

     e?    r  e

      p  e  a   t  e   d  s   t   i  m  u   l  a   t   i  o  n  =  c  a   l  c   i  u

      m

      c   h  a  n  n  e   l  s ,

      p  r  e  s  y  n  a  p   t   i  c  m  e  m   b  r  a  n  e   l  e  s  s

      r  e  s  p  o  n  s   i  v  e ,

       l  e  s  s  c  a   l  c   i  u  m

       i  n   t  o  p  r  e  s  y  n  a  p   t   i  c  n  e  u  r  o  n  e ,

       l  e  s  s  n  e  u  r  o   t  r  a  n  s  m   i   t   t  e  r ,  a  c   t   i  o  n  p  o   t  e  n   t   i  a   l    l  e  s  s

       l   i   k  e   l  y ,   f  e  w  e  r

      a  c   t   i  o  n  p  o   t  e  n   t   i  a   l  s

      p  r  o   d  u  c  e   d   i  n

      p  o  s   t  s  y  n  a  p   t   i  c  m  o   t  o  r  n  e  u  r  o  n  e ,

       l  e  s  s  r  e  s  p  o  n  s

    I  nv 

     e s  t  i   g a t  i  n gh 

     a b i   t   u

     a t  i   on

     t   o

     a

     s  t  i  m ul   u

     s .P 

     o s  s 

    i   b l   e ev 

     al   u

     a t  i   oni   s 

     s  u e s ?     S

      n  a   i   l  s  a   l  r  e  a   d  y   h  a  n   d   l  e   d   b  e   f  o  r  e   t   h  e

    e  x  p  e  r   i  m  e  n   t  m  a  y  n  o   t  r  e

      a  c   t   i  n   t   h  e  s  a  m  e

    w  a  y ,   d

      e   t  e  r  m   i  n   i  n  g  w   h  e  n

      a  s  n  a   i   l    h  a  s   f  u   l   l  y

    e  e  m  e

      r  g  e   d  c  a  n   b  e   h  a  r   d

     ,   l  a  c   k  o   f  m  o   i  s   t  u  r  e

    a  y  e  n  c

      o  u  r  a  g  e  s  n  a   i   l  s   t  o

      s   t  a  y   l  o  n  g  e  r   i  n   t   h  e

       i  r

    h  e   l   l ,  m

      e  a  s  u  r   i  n  g  e  y  e  s   t  a   l   k   l  e  n  g   t   h   i  n  s   t  e  a   d