A cura di Prof Mario Giusiani AZIENDA OSPEDALIERA UNIVERSITARIA PISANA SEZIONE DIPARTIMENTALE DI...
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A cura diProf Mario Giusiani
AZIENDA OSPEDALIERA UNIVERSITARIA PISANAAZIENDA OSPEDALIERA UNIVERSITARIA PISANA
SEZIONE DIPARTIMENTALE DI SEZIONE DIPARTIMENTALE DI TOSSICOLOGIA FORENSETOSSICOLOGIA FORENSE
VIA ROMA 55VIA ROMA 55PISAPISA
ATTIVITA’ DI LABORATORIO DI I° E II° LIVELLO
SEZIONE DI TOSSICOLOGIA FORENSESEZIONE DI TOSSICOLOGIA FORENSE
La sezione attualmente si trova collocata in Pisa via Roma 55 ed è costituita da:
•Portineria•Segreteria•Direzione
•Sala prelievi•Laboratorio preparazioni•Laboratorio cromatografia e spettrofotometria• Laboratorio immunochimica
ORGANIGRAMMA DELLA SEZIONE DIPARTIMENTALE ORGANIGRAMMA DELLA SEZIONE DIPARTIMENTALE DI TOSSICOLOGIA FORENSEDI TOSSICOLOGIA FORENSE
TIPOLOGIA DELLE INDAGINI ESEGUITE DALLA SEZIONE DI TIPOLOGIA DELLE INDAGINI ESEGUITE DALLA SEZIONE DI TOSSICOLOGIA UNIVERSITARIA TOSSICOLOGIA UNIVERSITARIA
DOTAZIONE STRUMENTALEDOTAZIONE STRUMENTALE
TECNICHE IMMUNOCHIMICHE
• 1 Sistema AxSym (Abbott) per analisi immunochimiche con tecnica FPIA
• 1 Sistema ILab 650 (Instrument Laboratory) per analisi immunochimiche con tecniche CEDIA, EMIT, DRI
Ultimamente sono state messe a punto nuove metodiche immunochimiche che ci hanno Ultimamente sono state messe a punto nuove metodiche immunochimiche che ci hanno
permesso di ampliare la gamma di sostanze per le quali è possibile richiedere la permesso di ampliare la gamma di sostanze per le quali è possibile richiedere la
determinazione su campioni urinari. In particolare:determinazione su campioni urinari. In particolare:
• 6-monoacetil morfina (6-MAM, metabolita specifico dell6-monoacetil morfina (6-MAM, metabolita specifico dell’’eroina)eroina)
• cocaina (come tale)cocaina (come tale)
• EDDP (metabolita del metadone)EDDP (metabolita del metadone)
• MDMA (ecstasy, come tale)MDMA (ecstasy, come tale)
• etilglucuronide (metabolita specifico delletilglucuronide (metabolita specifico dell’’etanolo)etanolo)
• LSDLSD
• sample check (per identificazione di campioni di urina adulterati)sample check (per identificazione di campioni di urina adulterati)
La determinazione di queste nuove sostanze è di notevole importanza sia a livello La determinazione di queste nuove sostanze è di notevole importanza sia a livello
tossicologico-forense ma anche clinico in quanto offre una possibilità in più per il tossicologico-forense ma anche clinico in quanto offre una possibilità in più per il
monitoraggio del paziente.monitoraggio del paziente.
ANALISI DI TIPO CHIMICO-CLINICO ANALISI DI TIPO CHIMICO-CLINICO RECENTEMENTE INTRODOTTERECENTEMENTE INTRODOTTE
DOTAZIONE STRUMENTALEDOTAZIONE STRUMENTALE
TECNICHE CROMATOGRAFICHE
•1 GC FOCUS CON DETECTOR FID•1 GC FOCUS CON DETECTOR DI MASSA A SINGOLO QUADRUPOLO (DSQII) ENTRAMBI GESTITI DA AUTOCAMPIONATORE TRIPLUS (THERMO FINNIGAN)
•1 GC TRACE CON DETECTOR MS/MS A TRAPPOLA IONICA (POLARIS Q) CON AUTOCAMPIONATORE AS2000 (THERMO FINNIGAN)
•1 GC MS QP 2010 ULTRA SHIMADZU SINGOLO QUADRUPOLO CON AUTOCAMPIONATORE
•1 GC 9000 (FISONS) CON DETECTOR FID
•1 HPLC PERKIN HELMER LC 250 CON DETECTOR DAD 235•1 LC MS AD ALTA RISOLUZIONE (ACQUISTO IN PROGRAMMAZIONE)
DOTAZIONE STRUMENTALEDOTAZIONE STRUMENTALE
TECNICHE SPETTROFOTOMETRICHE
• 1 Strumento JASCO V630 per analisi spettrofotometriche nel campo UV/VISIBILE
CLASSIFICAZIONE DEI LABORATORILaboratorio di base nell’ambito della Biochimica
Tossicologica
Laboratorio di I° livello (solo test di screening)
Matrice biologica urina
Tipo di analisi immunochimica
Cut-off stabilito a livello regionale
Strumentazioni analizzatori automatici di chimica clinica
Procedure stabilite nei manuali della qualità e linee
guida
Controllo di qualità si, partecipazione a programma VEQ
Catena di custodia no
CLASSIFICAZIONE DEI LABORATORILaboratorio di base nell’ambito della Biochimica
Tossicologica
Laboratorio di II° livello (screening e conferma)
Matrice biologica tutte
Tipo di analisi immunochimica e cromatografica
Cut-off stabilito a livello regionale
Strumentazioni analizzatori automatici di chimica clinica, GC-MS,
HPLC-MS
Procedure stabilite nei manuali della qualità e linee guida
Controllo di qualità si, partecipazione a programma VEQ
Catena di custodia si
MATRICI UTILIZZATE NEI LABORATORI DI II LIVELLO
MATRICI CONVENZIONALI:
urine sangue
MATRICI ALTERNATIVE:
saliva sudore capelli peli unghie
NECESSITA’ DELLE ANALISI DI SECONDO LIVELLO O DI CONFERMA
I test di screening immunochimici possono fornire :
• Falsi positivi
• Falsi negativi
NON SONO QUINDI DIFENDIBILI IN CASO DI CONTENZIOSO
Nel referto redatto dal laboratorio di I° livello dovrebbe sempre essere specificato che il risultato non è stato confermato con tecniche specifiche (es. GC/MS) e quindi è da considerarsi solo indicativo.
Campi di applicazione relativi ai laboratori di Tossicologia Forense di II livello
Diagnosi con valenza medico-legale nei seguenti
campi:
1. valutazione tossicodipendenza e/o assunzione droghe;
2. determinazione causa della morte da droga e/o altri tossici;
3. idoneità alla guida;
4. infortunistica stradale;
5. mansioni lavorative a rischio;
6. porto d’armi;
7. idoneità a specifiche norme concorsuali;
8. affidamento di minori;
9. annullamento di matrimonio,
10. etc.
Settori inerenti lSettori inerenti l’’attività della Sezione attività della Sezione di Tossicologia Forensedi Tossicologia Forense
valutazione tossicodipendenza e/o assunzione droghe (Ser.T.; carceri, Altre
USL ecc.) idoneità alla guida (artt. 119, 186 e 187 C.D.S.); mansioni lavorative a rischio; determinazione causa della morte da droga e/o altri tossici; accertamento principi attivi stupefacenti su reperti clandestini infortunistica stradale; porto d’armi; idoneità a specifiche norme concorsuali; affidamento di minori; annullamento di matrimonio, etc.
tutte diagnosi con valenza medico-legale
Scelta della matrice e prelievo del campione
Laboratorio
Preparazione del campione
Separazione delle sostanze in esame
Trattamento pre-analisi
Analisi strumentale
Valutazione critica del risultato
Scelta della matrice e prelievo del campionesaliva
capelli o altromateriale pilifero
organi
sangue
unghie
umor vitreourinesudore
In rapporto allIn rapporto all’’informazione che si vuole ottenere:informazione che si vuole ottenere:
Diagnosi di Diagnosi di attualitàattualità d d’’uso: sangue, saliva uso: sangue, saliva
Diagnosi di Diagnosi di uso recenteuso recente: urina, sudore: urina, sudore
Diagnosi di Diagnosi di uso/esposizione abitualeuso/esposizione abituale: capelli, peli, unghie: capelli, peli, unghie
Diagnosi di avvelenamento (sangue, urine, organi)Diagnosi di avvelenamento (sangue, urine, organi)
Scelta della Matrice BiologicaScelta della Matrice Biologica
Scelta della Matrice BiologicaScelta della Matrice Biologica
URINAGIORNI
CAPELLIMESI
0 3 6 9 12 15 18
tempo (giorni)
SANGUEORE
Tipo di Matrice Volume campione Sostanze e metaboliti ricercati
Test impiegati Tempo medio di rilevamento
e picco massimo
Il sangue Matrice il cui prelievo è invasivo.
Dimostra una esposizione relativamente recente
(poche ore dopo l’assunzione).
Occorre il consenso del soggetto.
Matrice di grande importanza, soprattutto
perché conosciuta in ogni sua caratteristica.
Quantità del prelievo limitata. I volumi sono
variabili, a seconda del test impiegato. ll prelievo di
sangue su vivente viene fatto con l’uso di un
anticoagulante come eparina, sodio citrato o
ossalato. Il campione deve essere refrigerato fino al momento della analisi.
•ALCOOL•OPPIACEI•COCAINA
•AMFETAMINE•CANNABINOIDI
•BENZODIAZEPINE•BARBITURICI
•ETC..È matrice di uso comune per la rivelazione di tutto ciò che può essere stato
assunto.
1.Ria2.Emit3.Eia4.FPIA
Direttamente per alcune sostanze o dopo
deproteinizzazione1.GLC 2.HPLC
3.GC/MSDopo estrazione
Dipende dalla emivita del tossico:
via di assunzionetipo di farmaco
La concentrazione che un tossico raggiunge
nel sangue dipende dal suo volume di distribuzione
apparente (Vd) in relazione al fatto che la distribuzione avvenga
solo nell’acqua plasmatica o nell’acqua
totale (H2O extracellulare (plasmatica e
interstiziale) e H2O intracellulare).
Se un composto chimico si
distribuisce rapidamente nei
tessuti, abbassa la sua concentrazione
nel sangue.
Via di entrata della sostanza nella
matrice
Risultati ecut-off
Vantaggi Svantaggi Possibili adulterazioni
Dal flusso sanguigno:1.e.v.
2.assorbimento:-Gastrointesti
n.,- polmonare,-cutaneo.
I risultati ottenuti valutano un uso recente di sostanza stupefacente (limitato ad ore), visto che la durata di uno xenobiotico è
breve nel sangue. I cut-off variano da
sostanza a sostanza e sono legati alla metodica
impiegata.
1.matrice di impiego comune2.non può essere
soggetto a modificazioni e/o adulterazioni
3.relazionabile con altre matrici
4.molteplici metodiche e test la impiegano come matrice di
elezione insieme alle urine
1.la sostanza ha una permanenza in matrice di
poche ore2.necessita generalmente di
una estrazione3.concentrazioni in genere basse o nulle dopo poco
tempo4.non discrimina la
cronicità d’abuso, ma solo la fase acuta
5.matrice pericolosa per l’operatore: trasmissione di
possibili infezioni.
Non può essere adulterata o
modificata se non dopo il prelievo.
Il prelievo deve essere compiuto con
anticoagulanti che possono dare
interazione in alcuni casi. Possibile interfrenza del
disinfettante, se a base alcolica, sull’alcolemia.
Tipo di Matrice Volume campione Sostanze e metaboliti ricercati
Test impiegati Tempo medio di rilevamento
e picco massimo
La saliva È senza dubbio la matrice non convenzionale più comunemente usata in
sostituzione al sangue per la discriminazione di
droghe.Si preleva per via orale:
Espettorazione.Tampone (in genere ottenuto dopo stimolazione con Acido
Citrico).Prelievo non è invasivo.
Relazionabile in alcuni casi con la concentrazione di xenobiotico nel sangue. I volumi sono molto piccoli,
con concentrazioni di sostanze spesso molto basse.
Matrice ottimale nei test “road-side”, vista la sua facile
campionatura e la velocità di analisi di screening.
1.OPPIACEI (morfina e codeina)
2.COCAINA (ecgonina metilestere e cocaina)
3.AMFETAMINE4.CANNABINOIDI
5.BENZODIAZEPINE6.BARBITURICI
7.PCP8.ALCOOL
9.NICOTINA10.ETC..
1.QED per fluido orale
2.SPME3.Syva Rapid Test
4.Biomedix5.Frontline6.DrugWipe
7.CortezDako8.Eia
9.GC/MS10.etc…
1.Dipende dalla emivita del tossico:
via di assunzionetipo di farmaco (acido
o basico).Volume di
distribuzione del farmaco
1.Dipende anche dal rapporto saliva/plasma
2.Dipende dal pHGeneralmente
valuta le 12-24 ore dopo la
somministrazione. Per la cocaina ad es. valuta le 48-120 ore
dopo somministrazione orale ed è rilevabile
anche per 2-5 gg
Via di entrata della sostanza nella matrice
Risultati ecut-off
Vantaggi Svantaggi Possibili adulterazioni
e.v.assorbimento
oralmenteintranasale
fumoetc…
si valuta il farmaco in saliva perché la sua azione
farmacologica dipende dalla frazione libera di farmaco
nel plasma (non legata alle proteine seriche).Questa frazione è
normalmente escreta dalla ghiandola salivare nella
saliva.
Correlazioni siero/saliva per morfina 1/3 che nel
siero.Basse concentrazioni di droga in relazione alla
assunzione di droga stessa, fatta eccezione che per
l ’alcool.Limite di sensibilità del saggio
GC/MS 1 ng/ml per tutti gli analiti (cocaina, ecgonina
metilestere, etc…)cut-off: impiegati
generalmente quelli del sangue
1.non invasività del prelievo.
2.facilità di prelievo ripetuti nel tempo.
3.possibilità di quantizzare la frazione
libera del farmaco.4.non sempre, ma spesso
relazionabile con le concentrazioni di sangue
ed urine.5.matrice meno deplorevole rispetto alle urine di maggior
impiego.
1.necessità di tecniche analitiche sensibili per
farmaci a piccole concentrazioni
2.concentrazioni molto inferiori a quelle urinarie.
3.alterazione della concentrazioni salivare di
un farmaco nei casi di stimolazione del flusso salivare per la raccolta.
4.soggetto alla differenza di pH della saliva.
5.la sostanza ha una permanenza in matrice limitata, relazionabile a
quella presente nel sangue.
Facilmente adulterabile,
soprattutto per contaminazione
orale. Dipende dal pH.Rischio di
contaminazioni orali, intranasali.
Tipo di Matrice Volume campione Sostanze e metaboliti ricercati
Test impiegati Tempo medio di rilevamento
e picco massimo
Le urine Prelievo non invasivo. Si ottiene per minzione. La
raccolta deve essere fatta in contenitore sterile; volume mai
inferiore ai 40 ml; pH tra 4.6 e 8; temperatura di 32-38 °C.
Con le urine si effettua lo screening generale di ricerca
di sostanze d’abuso.Il campione deve essere
refrigerato fino al momento della analisi.
Viene considerata però matrice deplorevole e facilmente
adulterabile.
1.OPPIACEI2.COCAINA
3.AMFETAMINE4.CANNABINOIDI
5.BENZODIAZEPINE6.BARBITURICI
7.ETC..È matrice di uso comune per la rivelazione di tutto ciò
che può essere stato assunto, farmaci e droghe.
1.Ria2.Emit3.Eia4.FPIA
5.Strip EasyCheck6.ecc.
Direttamente su campione urinario
1.GLC2.HPLC
3.GC/MSDopo estrazione
Dipende dalla emivita del tossico:
via di assunzionetipo di farmaco (acido
o basico).Volume di
distribuzione del farmaco
Il tempo di discriminazione dipende anche:
DoseFrequenza di utilizzo.Le sostanze possono
permanere nelle urine per alcuni
giorni.Generalmente il picco massimo di
droga si ha nelle 6 ore.
Via di entrata della sostanza nella matrice
Risultati ecut-off
Vantaggi Svantaggi Possibili adulterazioni
Dal sangue per filtrazione glomerulare.
La concentrazione trovata dipende molto
anche dal tipo di sostanza ricercata e dal
pH delle urine.
I risultati ottenuti valutano lo stato acuto
Il tempo di rivelazione medio va da 1 a 5 giorni.
Cut-off sondati e accettati a livello internazionale.
1.possibilità di campionare grandi volumi.
2.possibilità di analizzare sia le sostanze che i loro metaboliti, anche dopo
diversi giorni3.relazionabile con altre
matrici.4.molte metodiche e test, la impiegano come matrice di
elezione.5.matrice di screening di
maggior impiego.
1.scarsa rilevanza clinica nella quantitativa vista la dipendenza da: soggetto,
dose, via di somministrazione, tempo
di latenza, stato fisiologico dell’individuo,
ecc.2.fornisce un dato di
presenza/assenza ma non fornisce indicazioni sulla quantità di dose assunta
e sul momento di assunzione.
3.la concentrazione dipende dai volumi
urinari.4.mancanza di correlazione con lo stato psico-fisico del
soggetto.
Facilmente adulterabile.
Assunzione di molti liquidi o sostanze
che interagiscono o falsano la
concentrazione.Aggiunta di diverse
sostanze dopo il prelievo.
Per valutare l’idoneità del campione, si può
ricorrere alla determinazione
urinaria di creatinina del pH e del peso specifico.
Tipo di Matrice Volume campione Sostanze e metaboliti ricercati
Test impiegati Tempo medio di rilevamento
e picco massimo
Il sudore Matrice non convenzionale di utilizzo sempre più frequente.
Prelievo non invasivo.Viene prelevato da:
Ascella.Palmo,Etc…
In genere il prelievo viene fatto con un “sweat patch”.Volumi molto piccoli, con
concentrazioni di sostanze spesso molto basse.
Matrice ottimale vista la sua facile campionatura ed a
lungo responso.
1.NICOTINA (cotinina)2.METADONE
3.OPPIACEI (eroina)4.COCAINA
5.AMFETAMINE6.CANNABINOIDI
7.BENZODIAZEPINE8.BARBITURICI
9.PCP10.ALCOOL
11.ETC..È matrice di uso comune per la rivelazione di tutto ciò che
può essere stato assunto, farmaci e droghe.
1.Ria2.SPME
3.DrugWipe4.GC/MS dopo
estrazione5.LC/DAD6.LC/MS7.etc…
Problematica la valutazione del picco massimo.Generalmente si
studia la concentrazione in un certo tempo (es. 1
settimana). Alcuni studi compiuti
su volontari ci indicano che la concentrazione
di cocaina dopo somministrazione
sottocute, ha un picco dopo 2 ore, ed è
rilevabile fino al 3° giorno.
Via di entrata della sostanza nella
matrice
Risultati ecut-off
Vantaggi Svantaggi Possibili adulterazioni
Dal flusso sanguigno:1.e.v.
2.assorbimento:-gastrointesti
n.,- polmonare,-cutaneo.
Si rileva il 10% della cocaina.Deve essere fatto un
prelievo entro 2 ore ai fini della rivelazione di
cannabis.Il cut-off per la cocaina
considerato in diversi studi è > 15ng/puff.
La sensibilità dei test su sudore per:
amfetamine 92%cocaina 67%oppiacei 62%
1.matrice molto studiata negli ultimi anni.
2.si ritrova generalmente in studi comparati con la
saliva.3.impiegata anche in test
“road side”.4.esistono diversi studi che indicano la correlazione tra sudore e plasma o urine per l’abuso di amfetamine. In
tutti si indica la possibilità da parte di test di screening di discriminare MDMA e HMMA
la dove esiste una reale positività in sangue e urine (impiegando il “Drugwipe”).
1.volume molto basso: piccole concentrazioni
dipendenti per lo più dal soggetto.
2.la concentrazione dipende molto dalle caratteristiche del
soggetto, dalla sua temperatura e da altri fattori specifici del campionamento
3.la sostanza ha una permanenza in matrice piuttosto lunga ma a concentrazioni basse
4.difficoltà, in alcuni casi, alla raccolta.
5.facile inquinamento ambientale del patch e
possibili adulterazioni del campione.
6.poca relazionabilità con le altre matrici.
Facilmente adulterabile.
Molti falsi (+) e (-) dovuti al
maneggiamento errato del “patch”. Dipendenza con la temperatura del
soggetto, ad esempio: all’ aumento della T,
aumenta la produzione di sudore e quindi
migliora il campionamento.
Facile inquinamento ambientale.
Volumi non ben quantificabili.
Dipendenza con il tempo di permanenza del “patch” sulla cute.
Tipo di Matrice Volume campione Sostanze e metaboliti ricercati
Test impiegati Tempo medio di rilevamento e picco massimo
Le unghie Matrice di nuovo impiego (anche se per
avvelenamento impiegata già nell’800)
Crescita media dell’unghia 0.1 mm/giorno.
L’unghia normale di un soggetto adulto si rinnova in circa 4 mesi (crescita media
0.5-1.2 mm/settimana).L’unghia grande del piede si
rinnova totalmente in 12 mesi (variabilità soggettiva
elevata).Prelievo non invasivo su
vivente (taglio).
1.AMFETAMINE:3-4 metilendiossi
amfetamina.3-4 metilendiossi metamfetamina.
1.COCAINA:(che ritroviamo in
quantità di 2-10 volte maggiore della
benzoilecgonina)1.CANNABINOIDI
2.etc.
1.Ria (su cocaina), ma risente nella
incorporazione, della natura liofila e dello
stato di ionizzazione della droga
2.GC/MS
Il tempo di rilevamento va da
soggetto a soggetto.La crescita di 1-2 cm al
mese, in modo discontinuo, fa si che
non sia possibile definire un ben preciso
tempo medio. Analogamente è impossibile poter definire un picco
massimo di incorporazione.
Via di entrata della sostanza nella
matrice
Risultati ecut-off
Vantaggi Svantaggi Possibili adulterazioni
1.dalla lunula per via circolatoria e conseguente
incorporazione.2.dal letto dell’unghia (radice ungueale) per diffusione alla stessa.
3.esposizione alla contaminazione esterna ed a fluidi biologici dal margine libero (sudore, sebo, saliva, urine…)E’ da ricordare che
durante l’accrescimento la droga può essere
incorporata continuamente o come
singolo evento.
I risultati ottenuti sono in grado di dare una discriminazione di
presenza/assenza di droga nella matrice (per lo più
positività di tipo qualitativo), ma vista la possibile
differenziazione di crescita ed i numerosi fattori di
influenza, non è possibile fornire un risultato che dia notizie chiare su come e quando si è fatto uso di droga, e se in maniera
occasionale oppure in modo continuo. Ricordiamo la
difficile relazionabilità con altre matrici.
1.facilità di stoccaggio2.stabilità del campione3.discrimino droghe per
mesi e/o anni.
1.contaminazione ambientale2.fattori di variabilità:
età (più lento accrescimento
nell’anziano; nel neonato in 6-8 settimane si
rinnova)sesso
ereditarietàambiente
differenza di crescita
individuale3.non proprio chiara la incorporazione del
farmaco
Da ricordare primo fra tutti l’inquinamento
ambientale sotto unghia (soprattutto delle mani)
in tal caso è utile ad esempio prelevare quelle dei piedi meno soggette
ad inquinamento.
Tipo di matrice Volume campione Sostanze e metaboliti ricercati
Test impiegati Tempo medio di rilevamento e picco massimo
I peli del corpo
Matrice di nuovo impiego, apparentemente simile al
capello.Prelievo non invasivo.
Si attua in soggetto vivente per taglio a livello della cute. La grammatura di campione varia a seconda del metodo
impiegato.Si parla di peli pubici, ascellari, barba, baffi
etc…
1.COCAINA (cocaina e benzoilecgonina)
2.OPPIACEI (morfina e monoacetilmorfina)
3.AMFETAMINE (amfetamina, metamfetamina, MDMA,
MDE)4.METADONE (metadone,
metadone metabolita)5.CANNABINOIDI THC, THC
carbossilato)6.CODEINA
7.etc….Gli stessi che per il capello.
oRIAoEMIToFPIAoHPLC
oGC/MS in SIMDopo lavaggio dei peli
sminuzzati, estrazione e derivatizzazione
Il tempo di rilevamento riguarda
la lunghezza che per il pelo ha una fase di crescita di circa sei mesi e poi si ferma. Abbiamo quindi una
discriminazione a lungo termine.
La maggior parte dei peli vengono cambiati ogni
circa 1 anno, con crescita controllata.
Impossibile definire un picco massimo.
Sembra comunque che la sostanza appaia già
nel pelo dopo poche ore dalla somministrazione..Non è da dimenticare la
possibile contaminazione esterna.
Via di entrata della sostanza nella
matrice
Risultati ecut-off
Vantaggi Svantaggi Possibili adulterazioni
1.diffusione dalla circolazione sanguigna e
immagazzinamento.2.escrezione in sudore dalla cute che bagna i
peli.3.per mezzo di una matrice
oleosa proveniente dal follicolo del pelo stesso.4.per contaminazione
ambientale.Come per il capello.
I risultati ottenuti sono di natura qualitativa e
quantitativa.I peli ascellari sembrano
fermare la loro crescita al raggiungere 5-6 cm.
1.prelievo non invasivo
2.minore potenziale di inquinamento
3. facilità di prelievo4.livelli di droga
sono maggiori nei peli pubici quindi
nel capello ed infine nei peli
ascellari.
1.falsi (+) e falsi (-) per assorbimento dall’ambiente.
2.% di crescita non costante per cui influenza
l’incorporazione del farmaco (analisi non affidabile come
sul capello).3.difficoltà nel determinare il
tempo di discriminazione.4.scarsa correlazione con
il capello a causa della crescita più veloce e del
minor contatto con il sudore del capello.
Contaminazione esterna, anche
da parte delle urine.
Tipo di Matrice Volume campione Sostanze e metaboliti
ricercati
Test impiegati Tempo medio di rilevamento e picco massimo
I capelli Matrice di nuovo impiego ma già sondata a lungo negli ultimi anni.Prelievo non invasivo in soggetto
vivente (per taglio a livello della cute). La grammatura di campione varia a
seconda del metodo impiegato anche se generalmente se ne prelevano 100
mg (range di prelievo 10-200 mg). Il campione viene prelevato dalla
regione occipitale o nuca.
1.COCAINA (cocaina e benzoilecgonina)
2.OPPIACEI (morfina e monoacetilmorfina)
3.AMFETAMINE (amfetamina,
metamfetamina, MDMA, MDE)
4.METADONE (metadone, metadone metabolita)
5.CANNABINOIDI THC, THC carbossilato)6.CODEINA
oRIAoEMIToFPIAoHPLC
oGC/MS in SIM dopo lavaggio dei capelli sminuzzati, estrazione e
derivatizzazione
Il tempo di rilevamento riguarda la lunghezza del prelievo di capelli.
La crescita difatti è di circa 0.35 mm al giorno con una
variabilità di sesso (maggiore nelle donne).
Abbiamo discriminazione a lungo termine: mesi e anni. Impossibile definire un
picco massimo anche se la concentrazione di sostanza decresce lungo il capello.
Via di entrata della sostanza nella matrice
Risultati ecut-off
Vantaggi Svantaggi Possibili adulterazioni
1.diffusione dalla circolazione sanguigna e
immagazzinamento.
2.escrezione in sudore dalla cute
che bagna i capelli.3.per mezzo di una
matrice oleosa proveniente dal
follicolo del capello stesso.4.per
contaminazione ambientale.
I risultati ottenuti sono di natura qualitativa e quantitativa. Vanno indicati come ng di
xenobiotico/mg capelli.Alcuni cut-off (ng/mg):
6MAM: <0.5 no consumo; 0,5-2 consumo basso; 2-10 consumo medio;
>10 consumo altoCOCAINA: <1 no consumo; 1-4
consumo basso; 4-20 consumo medio; >20 consumo alto
Principali fattori di variabilità:meccanismi incorporazione;
natura legame droga/matrice;
stato solido e disomogeneità del capello;
velocità di crescita capelli;pigmentazione: nel capello
biondo si ha minore concentrazione di droga rispetto al capello scuro.
Inoltre varia con: età, luogo di prelievo, tipo di droga.
1.prelievo non invasivo.2.scarso
potenziale di inquinamento.3.il farmaco
rimane all’interno del capello per un
tempo indefinito.4.facilità di prelievo.
5.ripetibilità del dato in caso di
eventuali conferme.
6.monitoraggio farmaci assunti.7.possibilità
differenziazione assuntori leggeri,
moderati, pesanti
1.difficile interpretazione del dato analitico.
2.variabilità cinetica di incorporazione dei farmaci dovuta alla
velocità di crescita del capello.
3.falsi (+) e falsi (-) per assorbimento dall’ambiente.4.non esistono
metodiche standardizzate sia per
il prelievo che per l’estrazione della
matrice e cut-off fissi.5.mancanza di
standard di riferimento.
6.pochi kit commerciali per l’analisi del capello.
7.concentrazione maggiore alla radice
rispetto al fusto8.Scarsa correlazione
pelo/capello
Risente dell’uso di:sbionditura
tintapermanenteparticolari detergenti.
Idoneità del campione (es. capelli)Idoneità del campione (es. capelli)
Modalità di Raccolta dei capelli Modalità di Raccolta dei capelli
epidermideepidermide
cmcm
00
33
66
Sostanze identificateSostanze identificate Contenuto di informazioneContenuto di informazione
composto immodificatocomposto immodificato(es. cocaina, THC)(es. cocaina, THC) ++ ++
metaboliti specifici metaboliti specifici (es. 11OH-THC, 6-acetilmorfina,(es. 11OH-THC, 6-acetilmorfina,benzoilecgonina)benzoilecgonina) +++ +++
metaboliti non specificimetaboliti non specifici(es. morfina)(es. morfina) + +
Individuazione degli AnalitiIndividuazione degli Analiti
Catena di custodia:Catena di custodia: processo atto a garantire processo atto a garantire AUTENTICITAUTENTICITÀÀ,, INTEGRITINTEGRITÀÀ TRACCIABILITTRACCIABILITÀÀ del campione dal prelievo allo smaltimentodel campione dal prelievo allo smaltimento
Controcampione (per eventuale analisi di Controcampione (per eventuale analisi di revisione)revisione)
Modalità di Raccolta del CampioneModalità di Raccolta del Campione