9 Native-PAGE法による絶滅危惧植物分類の試み
5
1 はじめに 、 を に げ、 しい 、 育 を してきた。しかし、 に されている に 学 が れてい る が多く、 に 一 に 態学 変 異が より 大きいため、 にあたる に が く を してしまう が しい、 いうこ をいつ 感じてい た。そうした 、 学 学 に、 態 以 、しか 々が以 から てきたミクリ が ある、 いうこ が されている を つけ、こ に づいた を み、そ を確 きる を た する。 2 研究の目的 において、 態 による ちろん、それに え て 態 較以 を に し、さらにそれら を確 したい。こ れが に れ 、 わから いた めに に まれて に い られていく、 多く を から っていくこ が きるように る。 3 研究の方法 、一 に DNA を 較する が っ えられ るが、 に えられた 、 を えてみれ 、 するこ ある。 こ ため、DNA が 映されている 々 を 較する によるこ にした。ここ により、 泳 アイソザイムを し、 多 を 較する を するこ にした。 タンパク あり、 学 DNA により まってしまう。ほ ん す て に アイソザイム れる、 一 体 じ 体 る異 る が するこ が られている。そ アイソ ザイム によって をしているため、 泳 するこ によりアイソザイムを 較するこ 、 が きる。 帯 液 pHによって変わ り、 、アルカリ に帯 す る。 泳 において 、 体 、帯 によって を さ 移 さ せるため、泳 する さ 違いによってアイソザ イムを するこ が きる。泳 して ポリアクリルアミド・ゲル(Poly AcrlamideGel を いた。 泳 (ElectropHoresis し て 、一 に く いられている、 く変 さ せたタンパク を いるSDS PAGE が 易 あり、 さえ ある。 しかし がら、こ をタンパク に する 、 が スポットに対 する か、 確 が しい。 タ ンパク を 変 (Native まま し、活 を いて みを する Native PAGE を するこ にした。 (1) 以 いる 、 に して り95%エタノールを ませたペ ーパータオル いてから した。また、 多く を けるため を し、 め ・イオン した 、オートクレーブ した。 した 、 学グレード、あるい 泳 された を いたが、そ 多く 、 泳 多 されているSigma Aldorich ある。 による を けるた め 、 タンパク 汚 を するため、 する きに ずポリエチレン い て 袋、また ゴム 袋を した。 ア pHを 一 に つため、 泳 よく いられている、以 10 トリス 液 をつくり、 ─ ─ 99 9 Native-PAGE法による絶滅危惧植物分類の試み 〈 〉
Transcript of 9 Native-PAGE法による絶滅危惧植物分類の試み
2
3
DNA
95 Sigma-Aldorich pH 10
99
4B29cm 8cm1235g710 31cm2770g10617cm 464g
4B1345cmA 12720g7 A2241cm6540g 101237cm3420g
1013cm 10B
9363 A57cmB 79cm 3.57.0g
464 1223cm2350g
536.5cm7 57.5cm
72.5g
5 4
2 2.31278
10
3
4a 100 46 111745
5 0.40.5m
6
7
10mA 3020mA
37
2 GOT
LAP SKDH ADH LDH MDH
G6PDH6
FDH GDH
4
Rm
1GOT GOT . AC
A 2002
B 2003
101
4 mol/l)M 4 s t a c k i n g buffer(50ml) A 1M HC1 48ml
Trizmabase 36.6g TEMED 0.23ml
Trizmabase 5.98g 100ml C 29.2g
BIS 0.8g 100ml F
Trizmabase 6.0g 28.8g
1000ml pH8.3 G 0.14g 100ml G' 10 g 9ml
1000ml) reservoirbuffer pH4.3 0.2M PHospHate bufferpH 7 .5 )
0.1M Tris-HCI pH8.0 0.2M Tris-HCI pH8.0 0.1M Tris-HCI pH7.0 0.2M L-L-Asparticacid 2M KOH 4.0 L-Ieucyl-B-napHthylamide 1M DL- 2M NaOH 1.0Magnesium chloride 6
0.1BPB) 0.2M Tris-0.2M Maleate,pH3.8 NAD
NADP
5 20
1530μl
10mA 3020mA
37
2 GOT
LAP SKDH ADH LDH MDH
G6PDH6
FDH GDH
4
Rm
1GOT GOT . AC
A 2002
B 2003
101
4 mol/l)M 4 s t a c k i n g buffer(50ml) A 1M HC1 48ml
Trizmabase 36.6g TEMED 0.23ml
Trizmabase 5.98g 100ml C 29.2g
BIS 0.8g 100ml
G' 10 g 9ml
1000ml) reservoirbuffer
pH4.3 0.2M PHospHate bufferpH 7 .5 )
0.1M Tris-HCI pH8.0 0.2M Tris-HCI pH8.0 0.1M Tris-HCI pH7.0 0.2M L-L-Asparticacid 2M KOH 4.0 L-Ieucyl-B-napHthylamide 1M DL- 2M NaOH 1.0Magnesium chloride 6
0.1BPB) 0.2M Tris-0.2M Maleate,pH3.8 NAD
NADP
5 20
1530μl
7GPDHFDHLDH GPDHFDHLDH
8 NativePAGE
5
1
2MDH GDH
3
103
e100GOT GOT GOTGOT
2ADH ADH ADH
E ADH1
fastF
3MDH MDH
4SKDH SKDHF
4F
5GDH GDH 2 GDH1
6LAP
7GPDHFDHLDH GPDHFDHLDH
8 NativePAGE
5
1
2MDH GDH
3
103
2ADH ADH
ADH
E ADH1
fastF
3MDH MDH
4SKDH SKDHF
4F
5GDH GDH 2 GDH1
6LAP
3
DNA
95 Sigma-Aldorich pH 10
99
4B29cm 8cm1235g710 31cm2770g10617cm 464g
4B1345cmA 12720g7 A2241cm6540g 101237cm3420g
1013cm 10B
9363 A57cmB 79cm 3.57.0g
464 1223cm2350g
536.5cm7 57.5cm
72.5g
5 4
2 2.31278
10
3
4a 100 46 111745
5 0.40.5m
6
7
10mA 3020mA
37
2 GOT
LAP SKDH ADH LDH MDH
G6PDH6
FDH GDH
4
Rm
1GOT GOT . AC
A 2002
B 2003
101
4 mol/l)M 4 s t a c k i n g buffer(50ml) A 1M HC1 48ml
Trizmabase 36.6g TEMED 0.23ml
Trizmabase 5.98g 100ml C 29.2g
BIS 0.8g 100ml F
Trizmabase 6.0g 28.8g
1000ml pH8.3 G 0.14g 100ml G' 10 g 9ml
1000ml) reservoirbuffer pH4.3 0.2M PHospHate bufferpH 7 .5 )
0.1M Tris-HCI pH8.0 0.2M Tris-HCI pH8.0 0.1M Tris-HCI pH7.0 0.2M L-L-Asparticacid 2M KOH 4.0 L-Ieucyl-B-napHthylamide 1M DL- 2M NaOH 1.0Magnesium chloride 6
0.1BPB) 0.2M Tris-0.2M Maleate,pH3.8 NAD
NADP
5 20
1530μl
10mA 3020mA
37
2 GOT
LAP SKDH ADH LDH MDH
G6PDH6
FDH GDH
4
Rm
1GOT GOT . AC
A 2002
B 2003
101
4 mol/l)M 4 s t a c k i n g buffer(50ml) A 1M HC1 48ml
Trizmabase 36.6g TEMED 0.23ml
Trizmabase 5.98g 100ml C 29.2g
BIS 0.8g 100ml
G' 10 g 9ml
1000ml) reservoirbuffer
pH4.3 0.2M PHospHate bufferpH 7 .5 )
0.1M Tris-HCI pH8.0 0.2M Tris-HCI pH8.0 0.1M Tris-HCI pH7.0 0.2M L-L-Asparticacid 2M KOH 4.0 L-Ieucyl-B-napHthylamide 1M DL- 2M NaOH 1.0Magnesium chloride 6
0.1BPB) 0.2M Tris-0.2M Maleate,pH3.8 NAD
NADP
5 20
1530μl
7GPDHFDHLDH GPDHFDHLDH
8 NativePAGE
5
1
2MDH GDH
3
103
e100GOT GOT GOTGOT
2ADH ADH ADH
E ADH1
fastF
3MDH MDH
4SKDH SKDHF
4F
5GDH GDH 2 GDH1
6LAP
7GPDHFDHLDH GPDHFDHLDH
8 NativePAGE
5
1
2MDH GDH
3
103
2ADH ADH
ADH
E ADH1
fastF
3MDH MDH
4SKDH SKDHF
4F
5GDH GDH 2 GDH1
6LAP