9. Fluorometría

7/23/2019 9. Fluorometra

1/50

9.Espectrofotome

tra

deuorescencia


2/50

LUMINISCENCIA MOLECULAR

I. Fuorescencia

II. Fosforescencia

III.!uimiouminiscencia

Fotones

Rx.


3/50

Fuorescencia

Fundame

nta

E"citado

# $

#%

$

Fuorescencia de

resonancia


4/50

Fundame

nta

E"citado

# $

#&

$

Desplazamiento deStokes

Fuorescencia


5/50

Estados singulete y triplete

Sin'ueteFundame

nta

Sin'uete

E"citado

(ripete

E"cita

do

FLUORESCEN

CIA

FOSFORESCENC

IA


6/50

A)sorci*n + emisi*n ener'aradiante


7/50

,rocesos de desacti-aci*n

Relajacin vibracional

A

/

/

/

/


8/50



9/50


Conversin interna

E"citado$

E"citado

#

0E

Nivelesenergticos

prximos

Solapamientonivelesvibracionales


10/50


Conversin interna

E"citado$

E"citado

#

Ener'ae/ui-aente aenace d1)i

Con-ersi*n interna

predisociaci*n


11/50


Conversin interna + Relajacinvibracional

E"citado$

E"citado

#

Fundame

nta

# $


12/50


Conversin interna + Relajacin

vibracional

Espectros de e"citaci*n + emisi*n de una

disouci*n de /uinina


13/50



14/50


Cruce entre sistemas

Sin'uete2

(ripete2

r, I, O

2

lofavorecen


15/50

Factores /ue afectan auorescencia

Rendimiento 3o e4ciencia5

cu6ntico3a5 %

%fotones

7uorescentes8fotones totaesa)sor)idosEstructur

aAm)ient

e


16/50

(RANSICIONESELEC(RNICAS

2#::: ; #:: s

n2; #:0?s

kces

0

2 & kcesn0

2

ces % cruce entre

sistemas

ESin'uete2=(rip

ete2


17/50

ES(RUC(URA@condensaci*n anios

,iridina (iofenoFurano

!uinoinaIndo


18/50

ES(RUC(URA@ sustitu+entes

(omado de Soo' +B

n 0 2 & 02


19/50

ES(RUC(URA@ ri'ide

#.::.$

Con-ersi*n

interna


20/50

ISOLDEN(

E

CC$0 I


21/50

p@

resonancia

Sustitu+entes 6cidos 3o

)6sicos5@ estado i*nico % f


22/50

CONCEN(RACIN

A

/

/

/

/

A

A

A

AA

A

autoamorti'ua


23/50

CONCEN(RACIN

autoa)sorci*n

A A


24/50

ES,EC(ROS E


25/50

ES,EC(ROS E


26/50

ES,EC(ROS E


27/50

Instrumentaci*n uorometra


28/50

INS(RUMEN(OS E OLE AK

omado de Skoog ! cols "#$


29/50

ES,EC(ROFLUORME(RO

Arco


30/50

apicaciones


31/50

ANLISIS CUAN(I(A(IDO

Kr + Sn

Ri)oa-ina 3-it

$5

N = N

OH

OH

SO3

N

aA@ F0

Granate de aliarina R


32/50


ARENALINA


33/50


EJempo ! muestra de ! " de cereal se tratcon #cido y una $e%ue&a cantidad de '(nO)

$ara o*idar la riboavina ,Rb- $resente. Ele*ceso de '(nO)fue eliminado con H/O/.

0a disolucin anterior se trans1ri a unmatra de 2 m0 y se diluy 4asta la marca.

5na al6cuota de /2 m0 de esta disolucin setrans1ri a una celda7 se a"re" una $e%ue&acantidad de ditionita de sodio $ara convertirla Rb8o*idada a Rb y se ley la uorescencia

relativa7 en un e%ui$o $reviamente ajustado


34/50

0a lectura de intensidad de emisin relativa7re"istrada como R95 en el e%ui$o fue de unidades para e )anco y ? unidadespara a muestra.

5na se"unda de /) m0 tomada a $artir de la

disolucin de la muestra o*idada7 se adicioncon ! m0 de una disolucin est#ndar de Rb de.2 ":m0.

Esta al6cuota se trans1ri a una celdae%uivalente a la em$leada $ara el blanco y lamuestra sin adicin de est#ndar7 y fue tratadacon ditionita de sodio $ara obtener Rb. 0a

lectura de esta fue de 9? unidades.


35/50


EJempo $ una $astilla antimalaria esanaliada $ara determinar laconcentracin de %uinina. ;ara tal$ro$sito una tableta de !.


36/50

;osteriormente7 una disolucin $atrn de%uinina de concentracin e%uivalente a

! $$m $ro$orciona una lectura de #P:unidades7 cuando es tratada y le6da bajolas mismas condiciones %ue la muestra$roblema.

Calcular la masa7 en m"7 de %uinina$resente en la tableta farmacutica.


37/50

ANLISIS CUALI(A(IDO

Fuorocromo marcador colorantecon ca$acidad de uorescer al sere*citado a una en $articular.

Fuor*foro "ru$o funcional de

una molcula ,fuorocromo- %ue leim$arte la $ro$iedad deuorescencia.

&ttp'(())).medic.ula.ve(&istologia(anexos(microscop)eb(*+

N+,-(capitulo/


38/50

ANLISIS CUALI(A(IDO

&ttp'(())).medic.ula.ve(&istologia(anexos(microscop)eb(*+

N+,-(capitulo/


39/50

ANLISIS CUALI(A(IDO

Fi'. I. Espectros e"citaci*n ; emisi*nEs$ectro e*citacin ,l6nea continua- y es$ectro deemisin ,l6nea $unteada- de uoresce6na y

rodamina.


40/50

Microscopia de uorescencia

@>;AB aul

G9;B verde

RO@>(AN>BrojoFi'. II.

C1ua en


41/50

,rocesos ceuares

Fi'. III. Ca$T. Gradientes de Ca/+en un leucocito7monitoriados con 9ura / ,i%uierda-. (odi1cacin "radiente de

Ca/+$or %uimiota*is ,derec4a-

omado de 0odis& ! cols. iol. 1elular !*olecular "#$ edic%


42/50

E"presi*n '1nica

cNA %exas2red3enoma 4

F51

omado de 1orval6n 7. "899/%. :er;les de expres. gnica en decisiones

Fi'. ID. ;er1l de e*$resin "nica7 an#lisis

tumoral


43/50

FOSFORESCENCIA


44/50

FOSFORESCENCIA,rocesos de desacti-aci*n. 1ruce

entre sistemas


45/50

Fosforescencia@ caractersticas

,ro)a)iidad

t#=$#:0Q;#:s

Re/uiere

(

-iscosidad

Sin'uete2

(ripete2


46/50

!uimiouminiscencia

0uminol"qumica


47/50

!uimiouminiscencia

R"

/umica

ener"6a

Anaito

lu


48/50

!uimiouminiscencia

eterminaci*n Nor'6nico

muestra

##:: C NO O

LUK NO$


49/50

!uimiouminiscencia

NO

cataiad

or

CO$0

CO$0

N$

u


50/50

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