88576016-Determinacao-de-proteina
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Determinação de proteína pelo método de HARTREE Hartree, E. F., Determination of Protein: A Modification of the Lowry Method that Gives Linear Photometric Response. Analytical Biochemistry, 48, 422-427 (1972) A) Solução A 2 g de tartarato duplo de sódio e potássio 100 g deNa 2 CO 3 e dissolver em 500 mL de NaOH 1 N Dissolver em água para 1000 mL B) Solução B 2 g de tartarato duplo de sódio e potássio 1 g de CuSO 4 .5 H 2 O Adicionar 10 mL de NaOH 1 N C) Solução C 1 mL de reagente de Folin Ciocareau 2 N Diluir em 15 mL de H 2 O Obs.: A solução C deve ser preparada no momento da análise e deverá estar entre 0,15 e 0,18 N quando titulada a pH 10,0 com NaOH 1 N Se a acidez exceder 0,18 N ajustar o pH com NaOH A solução A e B são utilizáveis por 6 meses e devem ser armazenadas no escuro Linearidade: 15 a 110 mg Sensibilidade: 10 a 100 μg/mL Padrões: solução aquosa de BSA 100 μg/mL (5mg – 50 mL) Preparar 3 mL de cada diluição (20, 40, 60 e 80 μg/mL) Diluição Padrão 100 μg/mL H 2 O 20 μg/mL 600 μL 2400 μL 40 μg/mL 1200 μL 1800 μL 60 μg/mL 1800 μL 1200 μL 80 μg/mL 2400 μL 600 μL 100 μg/mL 3000 μL –
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Determinação de proteína pelo método de HARTREE
Hartree, E. F., Determination of Protein: A Modification of the Lowry Method that Gives Linear Photometric Response. Analytical Biochemistry, 48, 422-427 (1972)
A) Solução A 2 g de tartarato duplo de sódio e potássio 100 g deNa2CO3 e dissolver em 500 mL de NaOH 1 N Dissolver em água para 1000 mL
B) Solução B 2 g de tartarato duplo de sódio e potássio 1 g de CuSO4.5 H2O Adicionar 10 mL de NaOH 1 N
C) Solução C 1 mL de reagente de Folin Ciocareau 2 N Diluir em 15 mL de H2O
Obs.:
A solução C deve ser preparada no momento da análise e deverá estar entre 0,15 e 0,18 N quando titulada a pH 10,0 com NaOH 1 N
Se a acidez exceder 0,18 N ajustar o pH com NaOH A solução A e B são utilizáveis por 6 meses e devem ser armazenadas no escuro Linearidade: 15 a 110 mg Sensibilidade: 10 a 100 μg/mL
Padrões: solução aquosa de BSA 100 μg/mL (5mg – 50 mL)
Preparar 3 mL de cada diluição (20, 40, 60 e 80 μg/mL)
Diluição Padrão 100 μg/mL H2O20 μg/mL 600 μL 2400 μL40 μg/mL 1200 μL 1800 μL60 μg/mL 1800 μL 1200 μL80 μg/mL 2400 μL 600 μL
100 μg/mL 3000 μL –
Técnica:1 mL de amostra0,9 mL de reagente ABanho maria 50˚C – 10 minutosResfriar à temperatura ambiente0,1 mL do reagente BTemperatura ambiente 10 minutos
3 mL do reagente CAgitar em vortexBanho maria 50˚C – 10 minutosResfriar à temperatura ambiente
Ler em 650 nm
