4. Manual de Micología

1

BENEMRITA UNIVERSIDAD AUTNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

LICENCIATURA: QUMICO FARMACOBILOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGA

MANUAL DE PRACTICAS DEL

LABORATORIO DE MICOLOGIA

INTEGRANTES:

MSP. MA DE LA CRUZ MENESES SANCHEZ

MEC. ANA BERTHA ESCOBEDO LOPEZ

MC. PATRICIA GUADALUPE SUAREZ

ALBORES

D.C. ANA MARTA DE LOS ANGELES LOBO

SANCHEZ

MC. ALEJANDRO RUIZ TAGLE

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INDICE

Prctica No. 1 Seguridad en el Laboratorio 3

Prctica No. 2 Aislamiento y siembra de hongos en placa y tubo 5

Practica No. 3 Reconocimiento de estructuras bsicas de los hongos 8

Practica No. 4 Estructuras de reproduccin asexual en hongos saprfitos 12

Prctica No. 5 Identificacin macro y microscpica de hongos saprfitos

ms frecuentes 15

Prctica No. 6 Dermatofitos (Tias) 18

Prctica No. 7 Identificacin macro y microscpica de Dermatofitos 22

Prctica No. 8 Cromomicosis y Esporotricosis (Micosis subcutneas) 25

Prctica No. 9 Criptococosis (Micosis oportunistas) 28

Prctica No. 10 Candidiasis (Micosis oportunistas) 31

Prctica No. 11 Aspergilosis (Micosis oportunistas) 37

Prctica No. 12 Accin fungicida de desinfectantes utilizados en la

Eliminacin de hongos en superficies inertes 39

Bibliografa 41

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Prctica No. 1

Seguridad en el Laboratorio

Introduccin

Los laboratorios de Micologa son ambientes especiales con respecto a la seguridad de

aquellos que trabajan en ellos, las muestras clnicas de pacientes recibidas para su estudio

significan un riesgo para el personal debido a los agentes infecciosos que pueden contener.

Los cultivos de agentes infecciosos producto de muchas de las actividades del

miclogo clnico tambin constituyen una amenaza.

La educacin del personal que manipula a diario los agentes potencialmente

infecciosos y la educacin por medio de avisos sobre riesgos biolgicos, as como

instrucciones escritas y verbales de aquellos que solo tienen una exposicin limitada al

ambiente del laboratorio son las medidas disponibles ms importantes para prevenir las

infecciones adquiridas en el laboratorio, los riesgos de un laboratorio de Micologa pueden

extenderse a laboratorios adyacentes.

Adems del riesgo por infeccin los laboratorios de Micologa tambin estn

expuestos a todos los riesgos asociados a cualquier ambiente de laboratorio como incendio,

riesgos elctricos, qumicos, materiales radiactivos, mal funcionamiento de los equipos,

peligros dependientes de desastres naturales, situaciones ambientales como pisos

deslizantes, sistemas de circulacin de aire deficiente.

Se debe poseer un manual de seguridad que contenga informacin sobre la conducta

a seguir en caso de una contingencia.

Objetivo

Dar a conocer a los alumnos a travs de un seminario las reglas de seguridad a

seguir durante el desarrollo de las prcticas a realizar.

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Tcnicas a emplear

Exposicin oral del tema utilizando material didctico (acetatos, diapositivas)

Material a emplear.

Acetatos y diapositivas

Desarrollo de la prctica

1. Exposicin oral

2. Ronda de preguntas

3. Aclaracin de dudas

Reporte

Resumen de lo expuesto durante el Seminario

Cuestionario

1. Defina que es seguridad

2. En un laboratorio que factores pueden alterar la seguridad

3. Que pasos se deben seguir para establecer la seguridad

4. De los factores que pueden alterar la seguridad cual considera el ms importante

5. Una breve crtica acerca del tema

5





Prctica No. 2

Aislamiento y siembra de hongos en placa y tubo

Introduccin

La mayora de los alimentos y productos agrcolas, son invadidos por diversos

microorganismos durante su desarrollo y su almacenamiento, siendo los hongos los ms

abundantes y la principal causa de los procesos de putrefaccin de los alimentos y de los

granos, ocasionando severas prdidas econmicas.

Algunos hongos se encuentran como flora normal de diversas cavidades y mucosas

del organismo humano, as como estn presentes en el suelo y las plantas, donde se

considera que tales sitios son su hbitat normal.

Objetivo

El alumno se familiarizar y aprender a manejar las diversas tcnicas de

aislamiento y siembra de hongos para su posterior identificacin.

Tcnicas a emplear

A) Tcnica de dilucin y vertido en placa (sustratos slidos o lquidos muy

contaminados).

1. Preparar de 4 a 5 tubos con 9 mL de agua destilada, o bien, solucin salina

isotnica, esterilizar y numerar del 1 al 5.

2. Se suspende en el tubo 1, un mL, o bien, un gramo de alimento muestra a analizar.

3. Homogenizar perfectamente la prueba.

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4. Con ayuda de una pipeta estril, tomar 1 mL del tubo 1 y traspasarlo al tubo 2; con

otra pipeta estril, se toma una alcuota de 1 mL y se lleva al tubo 3; as

sucesivamente hasta llegar al tubo 5.

5. De las dos ltimas, tomar 1 mL de cada una y depositarlos respectivamente en las

placas de Petri estriles y vacas.

6. Adicionar aproximadamente 20 mL del medio PDA o SDA, estril, fundido y

enfriado a 45C.

7. Homogenizar por rotacin de las placas sobre la mesa.

8. Dejar solidificar e incubar a 28C por 4 a 5 das.

9. Hacer observaciones cada 48 h hasta la aparicin de colonias caractersticas de

hongos.

B) Tcnica de siembra por puntos en placa o tubo (sustratos slidos poco

contaminados).

1. Fragmentar dentro de una placa el material a estudiar.

2. Con la ayuda de asas micolgicas flameadas y estriles distribuir de 4 a 5

fragmentos de la muestra sobre la superficie de una placa de Petri con medio

SDA o PDA (si utiliza tubo distribuya de 2 a 3 fragmentos de la muestra sobre

la superficie del pico de flauta).

3. Incubar a 28C durante 3 a 4 das observando el desarrollo alrededor de los

fragmentos cada 48 h.

C) Tcnica de exposicin de placa (medio ambiente).

1. Distribuir placas con medio SDA o PDA en los sitios donde se desee hacer el

aislamiento.

2. Destaparlas y exponerlas al ambiente de 5 a 10 min, taparlas.

3. Incubar a 28C durante 4 a 5 das y observando cada 48 h hasta la aparicin de

colonias de hongos.

Material a emplear

1. Suelo.

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2. Refrescos embotellados.

3. Granos (arroz, trigo, frjol, etc.)

4. Alimento (chocolate, yogurt, queso, etc.)

5. Placas con medio SDA o PDA.

6. Tubos con tapn de rosca con medio SDA o PDA.

7. Tubos con solucin salina isotnica, o bien, agua estril.

8. Placas de Petri y pipetas de 1 mL estriles.

PDA= Papa Dextrosa Agar.

SDA= Sabouraud Dextrosa Agar.


1. Proceder al aislamiento de hongos por la tcnica de dilucin y vertido en placa.

2. Proceder al aislamiento de hongos por la tcnica de puntos en placa o tubo.

3. Proceder al aislamiento de hongos por la tcnica de exposicin de placas.

Cuestionario

1. Defina el trmino aislamiento

2. Cules son las tcnicas de aislamiento para hongos?

3. Cul es la composicin qumica de los medios de cultivo para hongos?

4. Cmo define un hongo contaminante?

5. Cul es la temperatura adecuada de crecimiento de un hongo?

6. Menciona si la muestra estaba libre de contaminacin, en caso de haber estado

contaminada por hongos o levaduras menciona cuantas colonias aislaste por mL de

muestra.

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Prctica No. 3

Reconocimiento de las estructuras bsicas de los hongos

Introduccin

La mayora de los que deben relacionarse con la rama micolgica, a menudo se sienten

confundidos y desalentados en sus tentativas para estudiar los hongos debido a la gran

variacin en el aspecto macroscpico de las colonias, a la multiplicidad de las estructuras

microscpicas y a la nomenclatura poco conocida.

Sin embargo, estas dificultades son ms psicolgicas que reales y cuando se llegan a

dominar unos cuantos conceptos bsicos basados en las morfologas macroscpica y

microscpica, la identificacin de los hongos resulta ms fcil y rpida que en otras

bacterias ordinarias.

Los hongos emiten una o ms prolongaciones tubulares llamadas tubos germinales o

tambin llamadas hifas, que se alargan por el crecimiento de su extremo distal. La hifa

puede dividirse por formacin de paredes transversales a intervalos regulares.

Las hifas divididas por tabiques se denominan hifas tabicadas, sin embargo algunos

hongos no desarrollan tabicaciones en las hifas y se denominan no tabicadas o cenocticas.

Finalmente, el conjunto de hifas desarrollan lo que se conoce como micelio, la

diferenciacin de los hongos se basa principalmente en su aspecto colonial y morfologa

microscpica.

A) La morfologa colonial se basa en los siguientes parmetros: a. Aspecto

b. Consistencia.

c. Pigmentacin de la colonia.

d. Difusin de pigmento al medio.

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e. Luz reflejada.

f. Luz transmitida.

g. Bordes.

B) Morfologa microscpica ( referente al micelio ) a. Tabicado o septado.

b. Cenoctico.

c. Hialino.

d. Pigmentado (fugilaginoso, carotenoide )

e. Macrosifonado

f. Microsifonado.

Objetivo

El alumno ser capaz de diferenciar las colonias de los hongos y los diversos tipos

de estructuras bsicas, como por ejemplo, el micelio por medio de tcnicas de observacin

en fresco o directa y algunas preparaciones facilitadas por el profesor, valorando estos

parmetros como fundamentales en la identificacin de los hongos.

Tcnicas a emplear

A) Tcnica de resiembra en tubo. 1. Con el asa micolgica en ngulo de 90 tomar un pequeo fragmento de loas

colonias con morfologa diferente y depositarlo en un tubo con medio inclinado

PDA o SDA.

2. Incubar a 28C.

3. Observar cada 40 h el desarrollo de las colonias.

B) Tcnica de observacin microscpica en fresco.

1. Sobre un porta objetos depositar una gota de colorante azul de algodn lactofenol.

2. Con el asa micolgica tomar un pequeo fragmento de la colonia y colocarlo sobre

el porta objetos.

3. Agregar una gota de alcohol al 70% (esto es necesario solo en el caso de hongos con

esporulacin abundante).

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4. Dilacerar el fragmento de la colonia con ayuda da agujas de diseccin o bien con la

misma asa micolgica.

5. Colocar sobre la preparacin un cubre objeto evitando formar burbujas de aire.

6. Observar al microscopio a seco dbil y seco fuerte, nunca usar aceite de inmersin.

Material a emplear

1. Colonias de hongos aisladas en la prctica anterior.

2. Colonias de hongos proporcionadas por el profesor.

3. Tubos con medio PDA o SDA.

4. Colorante azul de algodn.

5. Preparaciones fijas proporcionadas por el profesor.

6. Porta y cubre objetos.


1. Observar las colonias aisladas de los sustratos (prctica # 1).

2. Escoger diferentes tipos de colonias y resembrarlas en tubos con medio PDA o

SDA.

3. Observar comparativamente las caractersticas macroscpicas de las colonias

desarrolladas.

4. Hacer preparaciones en fresco con azul de algodn lactofenol de las colonias

aisladas resultando de la prctica anterior.

5. Observar comparativamente el micelio de las muestras aisladas con las

preparaciones fijas proporcionadas por el profesor.

Dibujos:

a) Hifa.

b) Micelio.

c) Micelio macrosifonado septado.

d) Micelio macrosifonado cenoctico.

e) Micelio septadofugilaginoso.

f) Micelio microsifonado.

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Descripcin macroscpica de las cepas tipo proporcionadas por la responsable del

laboratorio.

Cuestionario

1. Defina el trmino hifa y micelio

2. Mencione la clasificacin del micelio segn:

a.- Funcin

b.- Dimetro

c.- Continuidad

d.- Coloracin

3. Por la morfologa macroscpica y microscpica, cmo puede ser un hongo?

4. Cmo fue el crecimiento obtenido de la prctica anterior?

5. Mencione los parmetros utilizados en la lectura de morfologa colonial de hongos

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Prctica No. 4

Estructuras de reproduccin asexual en hongos saprfitos

Introduccin

La espora se refiere a un rgano que tiene como funcin la multiplicacin del hongo, las

esporas tienen una forma definida que puede ser redonda, ovalada, ms o menos larga etc.

Pueden ser unicelulares o pluricelulares; su tamao vara de 2 a varias decenas de

micras, su pared es sencilla o doble. Las esporas asexuadas se forman ya sea en el interior

de un saco por lo que se conoce como endosporas o en el exterior conocindolas como

exosporas, fijadas a la extremidad o sobre el trayecto de una hifa.

Tambin pueden ser producidas por rganos especiales, al ser puestas en libertas las

esporas pueden multiplicarse y dar origen a una colonia. Las esporas asexuadas son el

resultado de la transformacin de la hifa, sin el concurso de fenmenos sexuales y se

dividen en tres grupos:

A) Talosporas que a su vez se subdividen en:

a) Artrosporas.

b) Blasrtosporas.

c) Dictiosporas.

d) Clamidosporas.

e) Aleuriosporas.

B) Conidiosporas.

C) Esporangiosporas.

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Objetivo

Que el alumno se introduzca en el conocimiento bsico de las diferentes estructuras

de reproduccin asexual, parmetro bsico e importante en la identificacin microscpica

de los diferentes hongos filamentosos y levaduriformes.

Tcnicas a emplear

Preparacin de placas para microcultivo.

1. Seleccionar placas Petri de 20 x 100 mm.

2. Colocar dentro de la placa un crculo de papel filtro.

3. Sobre el crculo de papel colocar una varilla de vidrio de 8 mm de dimetro doblada

en V.

4. Sobre la varilla colocar un porta y un cubre objetos (22 x 22 mm).

5. Esterilizar las placas as preparadas.

6. Colocar glicerol al 10% estril.

7. Formol al 10%.

8. Pinzas, pipetas estriles.

9. Placa con medio de cultivo SDA o PDA (se deber seccionar en cuadros pequeos

en una zona estril).

Material a emplear

1. Colonias de hongos aisladas en la prctica anterior.

2. Colonias de hongos proporcionadas por el profesor.

3. Cultivos de Candida albicans en medio de Agar Harina de Maz o medio para

clamidosporas.

4. Preparaciones fijas proporcionadas por el profesor


1. Realizar la tcnica de microcultivo a partir de las colonias obtenidas en tubo.

2. Observar y comparar al microscopio los diversos tipos de esporas asexuales en


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3. Hacer los dibujos y anotar en nombre del hongo correspondiente:

a) Artrosporas.

b) Blastosporas.

c) Clamidosporas.

d) Esporangiosporas.

e) Conidiosporas.

f) Macroconidias.

g) Dictiosporas.

h) Fialosporas

Cuestionario

1. Defina el termino espora

2. Mencione los grupos de esporas por las cuales se reproducen los hongos

3. Un hongo filamentoso, porque tipo de esporas se reproduce?

4. Una levadura, porque tipo de esporas se reproduce?

5. Qu tcnica se utiliza para la observacin microscpica de las esporas?

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Prctica No. 5

Identificacin macro y microscpica de los hongos saprofitos ms

frecuentes

Introduccin

La presencia de hongos en alimentos y productos alimenticios no es una novedad, se

conoce desde hace mucho tiempo y de hecho estos hongos, levaduras o mohos han sido

utilizados para alterar de manera deseable el sabor y olor de algn alimento (maduracin de

quesos y carnes, produccin de vinos y cerveza). Los hongos tambin se conocen como

deterioradores de los alimentos, actualmente existen ciencias especializadas en el estudio de

los hongos, ya que stos han demostrado gran relevancia en las reas mdica, alimenticia,

agrcola, etc.

En el rea mdica por los diversos cuadros clnicos que producen en el humano,

causando hasta la muerte (esto es cuando no se lleva a cabo un buen diagnstico de

laboratorio y mdico). En el rea de la industria alimenticia posee gran valor como

contaminantes de materia prima y producto terminado, causando en la mayora de los casos

perdidas econmicas a la empresa, o bien son utilizados como elementos de gran valor en la

produccin de diversas enzimas, antibiticos y vitaminas. En el rea agrcola, pueden

producir destruccin de cosechas, o bien se asocian a otros microorganismos del suelo

contribuyendo al logro de cultivos frondosos.

Los diferentes tipos de hongos saprfitos pueden entonces tener efectos nocivos o

bien aportar beneficios.

Objetivo.

Que el alumno establezca los diversos parmetros macro y microscpicos para la

identificacin propia y definitiva de los hongos saprfitos ms frecuentes.

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Material a emplear.

1. Preparaciones obtenidas a partir del microculivo.

2. Preparaciones fijas proporcionadas por el profesor.

3. Cepas de hongos saprfitos proporcionados por el profesor.

Desarrollo de la prctica.

1. Desmontar la preparacin del microcultivo. Teir y sellar.

2. Hacer comparaciones microscpicas entre las preparaciones obtenidas por los

equipos y las preparaciones fijas proporcionadas por el profesor.

3. Hacer los dibujos correspondientes a:

a. Rhizopus.

b. Mucor.

c. Aspergillus.

d. Penicillum.

e. Geotrichum.

f. Hormodendrum.

4. Describir la morfologa macroscpica de los hongos filamentosos.

5. Describir la morfologa macroscpica de los hongos levaduriformes.

Cuestionario

1. Qu parmetros se deben considerar para hacer una identificacin microscpica de

los hongos?

2. Anote la ficha de identificacin de los siguientes hongos

a. Rhizopus

b. Mucor

c. Aspergillus niger

d. Penicillum sp

e. Ulocladium sp

f. Alternaria sp

g. Sacharomyces cereviceae

h. Rodhotorula sp

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Prctica No. 6

Dermatofitos (tias)

Introduccin

Las tias constituyen un grupo de micosis causadas por hongos taxonmicamente

relacionados que afectan los tejidos queratinizados: piel, cabello, uas en el humano,

plumas, cuernos y piel de animales. Estos hongos pertenecen a numerosas especies

agrupadas en tres gneros: Trichophyton, Microsporum, Epidermophyton.

Los hongos pertenecientes a estos gneros tienen como caracterstica comn la de

poseer enzimas queratinofilicas para atacar a la queratina presente en la piel y otras

estructuras del hospedero, por lo que se conocen con el nombre de dermatofitos y

dermatofitosis o tias a las enfermedades que ellos producen.

Los dermatofitos manifiestan su estado parasitario a travs de hifas ramificadas o

bien hifas con artrosporas, esta forma la adquieren en el tejido que atacan. En el estado

saprofito o vegetativo estos hongos presentan estructuras ornamentadas y variadas que se

toman como base para la diferenciacin entre diferentes gneros y especies a nivel

microscpico.

Objetivo

Familiarizar al alumno con las diversas tomas de muestras clnicas de acuerdo a la

zona afectada por los dermatofitos; instruirlo en el manejo de las tcnicas en fresco a travs

de la cual buscara el estado parasitario de los mismos en las diferentes muestras clnicas

Tcnicas a emplear

A) Obtencin de escamas.

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1. El laboratorista deber de proveerse de alcohol, gasa, lancetas estriles, placas de

Petri y un marcador.

2. Se localiza la parte afectada y se analiza macroscpicamente la lesin anotando si

hay o no descamacin, resequedad, si hay bordes, etc.

3. Se limpia la zona afectada con gasa y alcohol.

4. Se hace un raspado ligero con uno de los bordes de la lanceta (de ser posible obtener

fragmentos de la lesin con pinzas).

NOTA: Cuando el paciente es un nio y no resiste el raspado, o si la descamacin

no es visible, la muestra se toma adhiriendo a la piel un trozo de cinta "SCOTCH" y

retirndola de golpe, la cual se colocara en un porta objeto para su transporte y

observacin.

5. El producto de la lesin se recolecta en placas de Petri.

6. Se toman los datos del paciente escribindolos con marcador en la parte superior de

la placa.

7. En el laboratorio, con una parte de la muestra se realiza una preparacin en fresco

de la siguiente manera:

a) Sobre un porta objetos agregar una gota de NaOH o KOH del 5 al 10%

(solucin aclarante).

b) Se deposita un pequeo fragmento de muestra y se deja reposar por 10 min.

c) Se deposita un cubre objetos sobre la preparacin, tratando de no formar

burbujas de aire y se deja reposar la muestra por 15 min.

d) La preparacin se observa al microscopio con el objetivo seco dbil y seco

fuerte, tratando de buscar la fase parasitaria del hongo.

8. En zona de esterilidad junto a un mechero, la muestra clnica sobrante se siembra

por la tcnica de punto en placa y en tubos con medios de cultivo que contengan

SDA, PDA, Agar microbitico, etc.

9. Se encuban las placas a 28C durante 4 a 5 das haciendo la revisin de las siembras

cada 48 h hasta la aparicin de las colonias caractersticas.

B).- Tcnica del raspado de uas.

1. Se sienta al paciente en alto y se procede a limpiar la ua afectada con alcohol.

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2. El borde del dedo afectado se deposita sobre el margen de la placa de Petri.

3. Se raspa la ua con una navaja de afeitar nueva, yendo de la parte proximal a la

distal.

4. La muestra se recolecta en la caja de Petri y se tapa para su transporte.

NOTA: SI ms de una ua est afectada, se debe usar un equipo limpio para cada

ua (navajas limpias).

C).- Tcnica de obtencin de cabellos.

1. Examinar el cuero cabelludo del paciente.

2. Depilar con pinzas los cabellos afectados y al mismo tiempo colectar las escamas

que se encuentren sobre el cuero cabelludo.

3. Depositar las muestras sobre una placa de Petri estril y cerrarla.

4. Cuando el paciente es un nio que no resiste la depilacin los cabellos se toman con

una cinta "Scotch".

5. A partir de entonces se procede igual que en el paso # 7 de la primera tcnica

descrita en esta prctica.

Material a emplear

1. Diversas muestras clnicas parasitadas por dermatofitos.

2. Tubos con medio SDA, PDA, Micobiotico.

3. KOH o NaOH al 5-10%.

4. Cepas de:

a) Trichophyton (T. mentagrophytes, T. rubrum, T. tonsurans, T.

concentricum).

b) Microsporum gypseum.

c) Epidermophyton floccosum.


1. Hacer preparaciones en fresco con las muestras de pelo y/o escamas, de piel y/o

uas.

2. Buscar artrosporas e hifas ramificadas (fase parasitaria comn de los dermatofitos)

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3. Cultivar las muestras clnicas por la tcnica de punto en placa o en tubo, empleando

los diversos medios de cultivo.

4. Hacer microcultivo de las cepas tipo proporcionadas por el profesor.

5. 5.- Hacer la descripcin macroscpica de las cepas tipo proporcionadas por el profesor.

Dibujos

Muestra positiva a fase parasitaria.

Descripcin macroscpica de las cepas tipo.

Cuestionario

1. Defina el trmino tia.

2. Por su topografa cmo se clasifican las tias?

3. Qu tcnicas se emplean en la toma de muestras para tias?

4. Qu solucin se emplea para realizar el en fresco de una muestra de tia?

5. Qu se debe observar en la preparacin en fresco para determinar que se trata de

una tia?

6. Hacer un reporte de la muestra utilizada con la siguiente informacin:

a) Tipo de muestra

b) Observaciones de la lesin

c) Microorganismo aislado

d) Conclusiones

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Prctica No. 7

Identificacin macro y microscpica de los dermatofitos

Introduccin.

Se ha podido llegar a una clasificacin simplificada de los dermatofitos mediante el cultivo

de los mismos y la seleccin de ciertos caracteres morfolgicos especficos como criterios

para la diferenciacin entre gneros y especies.

Por este mtodo, Emmons demostr con claridad mxima que tan solo procede

considerar tres gneros: Microsporum, Trichophyton, Epidermophyton, la diferenciacin de

los gneros y sus respectivas especies se basa en las caractersticas macroscpicas de las

colonias y en la morfologa microscpica.

Gnero Trichophtyon: Por examen macroscpico, la colonia tiene aspecto

algodonoso, pulverulento o polvoriento o velloso, liso o creo. La pigmentacin vara

notablemente, ya que en cultivo pueden ser blancos, rosados o rojos, purpreos, violetas,

anaranjados, amarillos o pardos. Puede presentarse pigmento difusible al medio, que se

aprecia al reverso de la placa o tubo; este pigmento puede variar del color beige al caf o

rojo vino intenso.

Por examen microscpico las macroconidias son raras o no existen en algunas

especies, a menos que el hongo se desarrolle sobre un medio de cultivo apropiado y se

observan como grandes estructuras fusiformes en mazo, de pared gruesa o lisa de 4 a 6

micras de ancho por 10 a 50 micras de longitud.

Pueden verse tambin otras estructuras como micelio en raqueta, clamidosporas y

cuerpos nodulares o hifas en espiral.

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Gnero Microsporum: En cultivo desarrollo un micelio areo, algodonoso, lanudo,

pulverulento o polvoriento, cuyo color vara del ante al blanco o matices ms intensos del

pardo.

Por examen microscpico, la pared espinosa de las macroconidias caracteriza al

gnero, puede ser pequea (de dos septos) o grande (de 6 a 12 septos), fusiforme u oval, de

pared gruesa o delgada, se presentan microconidias, se advierten tambin hifas septadas

similares a clamidosporas.

Gnero Epidermophyton: Por su aspecto macroscpico, los cultivos son

caractersticamente aterciopelados o pulverulentos, con surcos radiales ventrales y color

amarillo verdoso.

Por examen microscpico solo producen grandes macroconidias de pared delgada,

lisas, multitabicadas y en mazo. En el micelio se ven clamidosporas e hifas en raqueta, este

gnero solo incluye una especie (E. floccosum)

Objetivo

Familiarizar al alumno con los parmetros macro y microscpicos de los dermatofitos en

base a las cepas tipo.

Material a emplear

1. Microcultivos sembrados en la prctica anterior.

2. Cepas tipo proporcionadas por el profesor.

3. Formol al 10%.


5. Barniz de uas transparente.

Desarrollar la prctica

1. Hacer un anlisis macroscpico de los cultivos obtenidos a partir de la muestra

problema y cepas tipo proporcionales por el profesor.

2. Desmontar los microcultivos despus de haber desactivado con formol al 10% por

lo menos 45 min antes y hacer un anlisis microscpico comparativo con


3. Hacer la descripcin macroscpica de las cepas tipo proporcionadas por el profesor.

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Dibujos

a) Trichophyton tonsurans.

b) Trichophyton rubrum.

c) Trichophyton mentagrophytes.

d) Microsporum gypseum.

e) Epidermophyton floccosum.


Cuestionario

1. De la clasificacin con gnero y especie de Dermatofitos

2. Qu tipo de tejido atacan los Dermatofitos?

3. Cul es el sustrato que degradan los Dermatofitos?

4. Que poseen los Dermatofitos para poder degradar este sustrato?

5. En trminos generales cmo es la morfologa macroscpica de un Dermatofito?

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Prctica No. 8

Cromomicosis y esporotricosis

(micosis subcutneas)

Introduccin.

Esporotricosis, es una micosis generalmente subcutnea y benigna, pero que en raros casos

puede ser generalizada y mortal.

Afecta especialmente las extremidades superiores e inferiores y excepcionalmente

produce enfermedad pulmonar primaria al penetrar por va respiratoria.

La esporotricosis prevalece en campesinos, empacadores de alfarera y vendedores

de diversos zacates, la va de entrada es a travs de la piel, mediante un traumatismo

cutneo con espinas u otros objetos vegetales.

En su fase parasitaria, el hongo se observa como levaduras gemantes alargadas (en

forma de puro) o redondeadas de 3 a 10 micras de dimetro. En la fase saprobia el hongo

tiene micelio delgado (1 a 2 de dimetro), tabicado, ramificado, que esporula mediante

conidiforos en forma de flor de margarita.

El examen directo del pus no permite en general visualizar al hongo; raramente se

pueden observar las formas parasitarias en frotes de pus teidos por el mtodo de

Hotchkiss-Mac Manus.

El cultivo es el mejor mtodo diagnstico de la esporotricosis, mediante la siembra

del pus en placa con SDA, las colonias al principio son pequeas y blancas y crecen de

micelio areo; a medida que aumenta el crecimiento, la superficie de la colonia adquiere

aspecto hmedo, rugoso y membranoso, el color puede variar de crema al negro.

Cromomicosis, es una micosis verrucosa, crnica, de evolucin lenta, generalmente

se localiza en miembros inferiores. Se caracteriza por la formacin de ndulos cutneos

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verrucosos y lesiones ulcerocostrosas que a veces son pedunculadas, dando apariencia de

coliflor.

Es prevalente en campesinos del sexo masculino, especialmente en los que no

protegen sus pies adecuadamente de los traumatismos causados por plantas, en algunas

lesiones, el hongo se halla en las escamas, en el pus y los tejidos subcutneos a travs de

biopsias.

En el examen en fresco de estos productos biolgicos, se observan unas clulas

redondeadas de color castao y paredes gruesas, aisladas, o en grupos, llamadas

Corpsculos de Meddlar, en ocasiones, estas llamadas clulas fumagoides miden de 6 a 12

de dimetro y aparecen divididas transversalmente.

Esta micosis es producida por diversos hongos negros, todos pertenecientes al grupo

de los Dematiceos, entre los ms conocidos cabe citar al gnero Phialophora, que posee

una sola especie patgena: P. verrucosa, caracterizada por la produccin de filides en

forma de botella que producen esporas en su interior, las cuales son expulsadas por el

cuello de la filide, aparentando un florero

Cladosporium carrionil, nica especie considerada patgena, se identifica porque

slo puede esporular en forma de cladosporio, es decir, cadenas de conidias acroptalas de

longitud moderada.

El gnero Fonsecae comprende a las especies siguientes: F. pedrosoi, F. compacta,

F, dermatitidis, especialmente F. pedrosoi esporula de tres maneras diferentes: acrotecas,

cladosporios y por filides.

Acroteca, se caracteriza por la produccin de conidiforos semejantes a clavas, de

donde nacen las conidias en la punta y a los lados.

Objetivo

Familiarizar al alumno con el manejo y conocimiento macro y microscpico de las

cepas como agentes etiolgicos de la esporotricosis y cromomicosis.

Tcnicas a emplear

A. Tcnica de observacin directa o en fresco.

B. Tcnica de microcultivo (cepas tipo).

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Material a emplear

1. Placas para microcultivo.

2. Placas con agar Saboraud seccionadas en cuadros.

3. Glicerol estril al 10%.

4. Formol al 10%.

5. Pipetas estriles.


7. Cepas proporcionadas por el profesor.

8. Porta y cubre objetos.


1. Sembrar microcultivo con las cepas tipo.

2. Hacer preparaciones directas a partir de las cepas tipo (es recomendable no usar

colorante para que se observe el tipo de micelio en el caso de los hongos

dematiceos).

3. Hacer la descripcin macroscpica de las cepas tipo.

Dibujos

a) Sporothrix schenkii.

b) Phialophora verrucosa.

c) Fonsecae pedrosoi.

d) Cladosporium carrionii.


Cuestionario

1. Cules son las micosis subcutneas mas frecuentes en Mxico?

2. Mencione los gneros que pertenecen al grupo de los Demateaceos

3. Los Demateaceos, cmo se observan al microscopio en su fase de levadura?

4. La morfologa macroscpica de un Demateaceo en general cmo es?

5. Mencione el tipo de esporulacin de cada uno de los Demateaceos

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Prctica No. 9

Criptococosis

(Micosis oportunistas)

Introduccin

La criptococosis es una micosis oportunista que afecta primariamente a pulmones,

producindose una enfermedad que generalmente cursa en forma asintomtica, pudiendo

diseminarse a cualquier rgano de la economa, particularmente a meninges y sistema

nervioso central, donde produce meningitis subaguda o crnica.

El hongo fue aislado por primera vez por Emmons del excremento y nidos de

palomas; Sanfelice lo aisl del zumo de frutas.

El diagnstico de laboratorio se hace en base a los productos biolgicos como

esputo y lquido cefalorraqudeo, el hongo se manifiesta en el producto de la lesin como

un organismo en forma de levadura con pared gruesa y en gemacin, de 5 a 20 micras de

dimetro, rodeado por una cpsula ancha, refrctil.

Deben cultivarse todos los materiales en agar sangre a 37C y en agar Saboraud a

temperatura ambiente, puede aadirse cloranfenicol al medio para evitar la presencia de

bacterias en las muestras, pero nunca cicloheximida, dada la sensibilidad de Criptococcus

neoformasa la misma. Sobre agar glucosa Saboraud a temperatura ambiente, el organismo

crece con lentitud, produciendo colonias en forma de levadura que al principio pueden ser

blancas, rugosas y granulosas.

En las preparaciones macroscpicas se comprueba la presencia de organismos y

clulas en gemacin con tubos germinales, en la etapa de crecimiento no se advierte

cpsula, la colonia se desarrolla a 37C sobre agar Sabouraud con apariencia mucoide,

viscosa, de color crema a pardo, en su morfologa se observan levaduras encapsuladas al

teir con tinta china.

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Objetivo

Familiarizar al alumno con la bsqueda de la fase parasitaria del hongo a travs de

la tincin con tinta china y que a la vez conozca la morfologa colonial macroscpica del

agente etiolgico.

Tcnicas a emplear

A. Obtencin de esputo.

B. Concentracin de esputo.

C. Obtencin de Lquido Cefalorraqudeo (es preferible que esta muestra sea obtenida

por un profesionista experto en la obtencin de dicho lquido).

CONCENTRACIN DEL LQUIDO CEFALORRAQUDEO.

1. Centrifugar la muestra a 2000 rpm durante 20 min.

2. Con pipeta Pasteur estril separar cuidadosamente el sobrenadante y pasarlo a un

tubo estril.

3. Utilizar el sedimento para las pruebas diagnsticas de rutina.

TINCIN NEGATIVA (con tinta china)

1. En un porta objetos poner una gota de tinta china.

2. Con un asa bacteriolgica poner una o dos asadas del sedimento (ya sea esputo o

LCR)

3. Poner un cubre objetos tratando de no formar burbujas de aire.

4. Montar la muestra y observar al microscopio a seco dbil y seco fuerte, tratando de

hallar la fase parasitaria del hongo.

Material a emplear

1. Frascos de boca ancha estriles.

2. Tinta china.

3. Asa bacteriolgica.

4. Porta y cubre objeto.

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5. Pepsina al 1%.


1. Obtener muestras patolgicas y concentrarlas siguiendo las tcnicas ya descritas.

2. Hacer preparaciones en fresco con la tinta china.

3. Buscar la fase parasitaria de C neoformans en las preparaciones con tinta china.

4. Observar las caractersticas coloniales de C. neoformans en agar Saboraud.

Dibujos

a) Criptococcus neoformans.


Cuestionario

1. Qu estructura es caracterstica de Criptococcus neoformans?

2. Qu tcnica de coloracin se utiliza para observar al agente etiolgico de la

Criptococosis?

3. Cules son los cuadros clnicos mas graves que puede ocasionar este hongo?

4. Qu tipo de muestras se pueden utilizar en el diagnstico de una Criptococosis?

5. A qu antibitico es sensible Criptococcus neoformans?

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Prctica No. 10

Candidiasis

(Micosis oportunista)

Introduccin

La Candidiasis, por los diversos cuadros clnicos que presenta, puede causar desde una

micosis superficial, una subcutnea, hasta una profunda o bien comportarse como

oportunista. Candida albicans puede causar infeccin aguda o subaguda, produciendo

lesiones en boca, vagina, piel, uas, bronquios, pulmones y ocasionalmente, septicemia,

endocarditis o meningitis.

Como pueden aislarse cepas patgenas de Candida albicans en piel normal, mucosa

oral y vaginal normales y en la materia fecal de individuos sanos, salta a la vista que la

mayor parte de las infecciones tienen un origen endgeno y la determinacin de la fuente

de infeccin constituye un problema tan difcil como en el caso de infecciones de

Staphylococcus aureus.

La presencia de Candida en el individuo normal explica la diseminacin durante las

enfermedades debilitantes, padecimientos malignos del sistema hematopoytico, diabetes,

lupus eritematoso, enfermedades granulomatosas, etc...

La Candidiasis ataca a personas de todas las edades y razas y en ambos sexos,

habindose reconocido ciertos factores predisponentes. Los antibiticos de amplio espectro

y las drogas citotxicas favorecen la infeccin por Candida albicans y otras especies de

Candida.

Actualmente, Candida albicans y Candida stellatoidea son los agentes etiolgicos

que se presentan con mayor frecuencias en casos de candidiasis, pero existen otras especies

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tambin capaces de producir enfermedad en el hombre: Candida krusei; Candida

tropicalis; Candida guillemondii; Candida pseudotropicalis; Candida parakrusei.

Objetivo

El alumno ser capaz de seleccionar las tcticas de trabajo que lo lleven a la

identificacin de Candida albicans a partir de diversos especmenes clnicos.

Tcnicas a emplear

A) Tomar de exudados farngeos.

1. El paciente debe presentarse sin haber tomado alimentos, con aseo bucal hecho al

menos 12 h antes de tomar la muestra.

2. Se coloca al paciente sentado en posicin odontolgica. Auxiliarse con una lmpara

adecuada para visualizar perfectamente la cavidad oral.

3. Mediante un abatelenguas estril sujetar la lengua e introducir un hisopo estril,

raspando con la punta del algodn las partes ms afectadas de las amgdalas, sin

tocar vula.

4. Repetir la operacin con otro hisopo estril.

5. Se colocan los hisopos dentro de un tubo con solucin salina estril.

B).- Toma de exudados vaginales.

1. La paciente debe presentarse sin aseo o aplicacin de medicamentos vaginales por

lo menos 24 h antes de la toma de la muestra y sin estar menstruando, a menos que

sea estrictamente necesario.

2. Se coloca a la paciente en posicin ginecolgica y se introduce en la vagina un

espejo vaginal en posicin paralela a los labios; se debe ir rotando el espejo con

mucho cuidado hasta tenerlo en posicin horizontal. Se localiza con cuidado el

cuello y se fija el espejo (de preferencia evitar el uso de sustancias lubricantes).

3. Se toma la muestra con dos hisopos estriles del sitio donde se localice la lesin (de

preferencia del fondo del saco y cuello de la matriz).

4. Uno de los hisopos se rota sobre un porta objetos, para tincin de Gram.

5. Se introducen los dos hisopos en un tubo con solucin salina isotnica.

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C).- Tcnica de siembra por punto en tubo y placa.

En el caso de que la muestra sea de escamas o raspado de uas.

D).- Tcnica de observacin en fresco con KOH o NaOH.

Tincin de Gram

1. Fijar el frote por calor.

2. Cubrir el porta objetos con cristal violeta por un minuto.

3. Lavar con agua corriente.

4. Cubrir la preparacin con lugol durante un minuto.


6. Decolorar con solucin alcohol-cetona.


8. Contrastar con safranina por 30 segundos.


10. Examinar al microscopio con aceite de inmersin.

Aislamiento por estra cruzada

1. Depositar suavemente el inculo del hisopo rotndolo sobre la superficie del medio

de cultivo, en la zona perifrica de uno de los sectores de la placa.

2. Extenderlo con el asa bacteriolgica (prevenir flameada y enfriada en el medio), sin

separarla de la superficie del medio: dibujar de 4 a 5 trozos en zig-zag continuo y

separado.

3. Quemar el asa y enfriar dentro del medio.

4. Repetir la operacin anterior cuidando de tocar solamente los extremos de las

ltimas estras.

5. La siguiente estra se lleva hasta el centro del medio sin tocar en ningn momento

las estras de los otros sectores.

Identificacin rpida de Candida albicans

A).- Tubo germinativo en suero.

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1. Inocular una pequea cantidad de clulas en 0.5 mL del suero (de preferencia de

pacientes diabticos).

2. Incubar a 37C en agitacin durante 30 a 60 min o en condiciones estacionarias

durante 2 h.

3. Montar entre portada y cubre objetos una gota de la suspensin y observar al

microscopio a seco dbil y seco fuerte.

B).- Produccin de clamidosporas (Tcnica de Dalmov)

1. Marcar en dos partes iguales el reverso de las placas de Petri con medio Oxgall y

Clamidosporas o bien Harina de Maz.

2. En uno de los sectores de cada medio, descargar el inoculo de la cepa problema,

trazando un zig-zag abierto con el asa, procurando no sobrepasar la superficie de 2

cm cuadrados.

3. Flamear el asa y repasar la estra en sentido contrario.

4. Flamear el cubre objetos y colocarlo sobre la siembra, presionndolo ligeramente

con el extremo contrario del asa.

5. Repetir la misma operacin en el sector contrario y con cepa testigo.

6. Incubar las placas a 28C durante 48 a 96 h.

7. Destapar las placas y observar al microscopio directamente sobre el agar y cubre

objetos a seco dbil y seco fuerte.

De la cepa problema hacer una suspensin en solucin salina estril para sembrar los

medios para la fermentacin y asimilacin de carbohidratos.

Zimograma:

1. Utilizar una serie de tubos de hemlisis conteniendo cada uno 4 mL de medio base

de Wickerham y 1 mL de los azcares a probar al 6%. Adicionar una campana de

Durham como indicador de la produccin de gas.

2. Inocularlos con dos gotas de la suspensin.

3. Incubar a 28C durante 72 h.

4. Hacer las lecturas de produccin de cido y gas.

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Auxonograma:

1. Utilizar una serie de tubos de 16 x 150 mm con tapn de rosca, conteniendo cada

uno 4.5 mL del medio base y 0.5 mL de los azcares a probar al 5%.

2. Inocular con dos gotas de la suspensin.

3. Incubar a 28C y observar el crecimiento cada 48 h.

Material a emplear

1. Cepa del gnero Candida (Candida albicans).

2. Exudado farngeo.

3. Exudado vaginal.

4. Suero humano.

5. Placas Petri con:

a) Gelosa sangre.

b) Saboraud dextrosa.

c) Clamidospora.

d) Oxgall y Biggy.

6. Tubos de medio de:

a) Saboraud inclinado.

b) Micobiotico inclinado.

7. Medio base de Wickerham.

8. Medio base para asimilacin de carbohidratos.

9. Solucin salina estril.

10. Abate lenguas e hisopos estriles.

a. Pipetas Pasteur estriles.

11. Equipo de tincin de Gram.

12. NaOH o KOH al 10%.

13. Preparaciones fijas.


1. Proceder a la toma del exudado farngeo.

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2. Trabajarlo simultneamente con las muestras proporcionadas por el profesor

(exudado vaginal y/o uas o escamas), siguiendo la metodologa para el diagnstico

de Candida.

3. Identificar hasta especie las levaduras aisladas de las muestras problema.

4. Observar la morfologa parasitaria de Candida albicans en preparaciones fijas

proporcionadas por el profesor.

Dibujos

a) Observacin en fresco de exudado farngeo.

b) Observacin en fresco de exudado vaginal.

c) Frote de exudado farngeo. Tincin de Gram.

d) Frote exudado vaginal. Tincin de Gram.

Cuestionario

1. Aparte de Candida albicans, qu otras especies existen?

2. Cules son los cuadros clnicos que con mayor frecuencia produce Candida albicans?

3. Para la produccin de Clamidosporas, en qu medio de cultivo se debe hacer crecer a Candida?

4. En una tincin de Gram, cmo se observa a este agente etiolgico?

5. Qu pruebas de laboratorio se utilizan para determinar la especie de este hongo?

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Prctica No. 11

Aspergilosis

(Micosis oportunistas)

Introduccin

La Aspergilosis es micosis de animales y seres humanos causadas por hongos oportunistas

del gnero Apergillus en especial A. fumigatus, A. nigery A. flavus.

Pueden dar enfermedad pulmonar alrgica o invasora, aspergiloma, diseminarse a

sistema nervioso central u otros rganos o localizarse, en inmunodeprimidos es sistmica y

letal. Es una enfermedad cosmopolita y rara que afecta a cualquier edad, raza o sexo,

predomina en varones adultos, los aspergilomas se ha observado en tuberculosos curados.

Las formas alrgicas parecen ms frecuentes en campesinos y en quienes trabajan

con granos, como los empleados de silos y molinos. Como factores predisponentes estn el

uso de antibiticos de amplio espectro, citotxicos y glucocorticoides, leucemia, trasplantes

de rganos en especial mdula sea, infecciones por citomegalovirus, no suele observarse

en pacientes con SIDA.

En aves como pavos y pollos hay epidemias de aspergilosis de vas respiratorias por

consumo de granos contaminados, en bovinos y ovinos ocasionan abortos.

Objetivo

Familiarizar al alumno con la bsqueda de la fase parasitaria del hongo a travs del

examen en fresco y que a la vez conozca la morfologa colonial macroscpica del agente

etiolgico.

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Tcnicas a emplear

A. Obtencin de expectoracin, escamas, exudados, raspado de uas

B. Realizar examen directo empleando KOH al 10% o SSI

C. Cultivo en Agar Saboraud o Agar Papa Dextrosa de 1 a 3 das a 28C

Material a emplear

1. Frascos de boca ancha estriles, placas Petri estriles, medio de transporte

2. KOH al 10%.

3. Asa micolgica, lancetas estriles

4. Porta y cubreobjetos.

5. Agar Saboraud y/o Agar Papa Dextrosa.


1. Obtener muestras patolgicas siguiendo las tcnicas ya descritas.

2. Hacer preparaciones en fresco con KOH AL 10% o SSI.

3. Buscar la fase parasitaria de las especies de Aspergillus

4. Observar las caractersticas coloniales de las especies de Aspergillus en el agar

correspondiente.

Dibujos

a) Especies de Aspergillus.

Descripcin macroscpica de cada una de las cepas tipo.

Cuestionario

1. Qu estructura es caracterstica de las especies de Aspergillus?

2. Qu tcnica de coloracin se utiliza para observar a los agentes etiolgicos de la

Aspergilosis?

3. Cules son los cuadros clnicos mas graves que puede ocasionar las diferentes

especies de este hongo?

4. Qu tipo de muestras se pueden utilizar en el diagnstico de una Aspergilosis?

5. A qu antifngico son sensibles las diferentes especies de Aspergillus?

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Prctica No. 12

Accin fungicida de Desinfectantes utilizados en la eliminacin de hongos

en superficies inertes

Introduccin.

Los desinfectantes son preparaciones con propiedades germicidas es decir que eliminan

microorganismos patgenos, deben su accin a los ingredientes activos que contienen.

Entre los principales tenemos: fenol, cresol, aceite de pino, alcohol isopropilico, los

ingredientes activos son completamente emulsificantes y otros ingredientes inertes como el

agua, colorantes,fijadores, teniendo las siguientes caractersticas :

Deben tener una buena concentracin de ingredientes activos lo cual garantiza su

efectividad y poder residual.

Si son desinfectantes para ambientes domsticos deben tener un aroma agradable,

para lo cual se pueden adicionar esencias aromticas, las cuales no alteran en absoluto el

poder del ingrediente activo.

No deben contener sustancias txicas para el organismo humano o para animales

menores, esto quiere decir que al aplicarse el producto este no contamine

Objetivo

Determinar la accin de desinfectantes utilizados en la eliminacin de hongos a

nivel de superficies inertes.

Tcnicas a emplear

A. Preparacin de placas Petri con en medio de cultivo seleccionado

B. Preparacin de los diferentes desinfectantes a las concentraciones a probar

C. Purificar las cepas de hongos causantes de contaminacin ambiental.

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Material a emplear

1. Placas Petri

2. Agar Saboraud y/o Agar Papa Dextrosa.

3. Asa micolgica

4. Benzal, hipoclorito de sodio, fenol, aceite de pino, alcohol isoproplico

5. Cepas a probar


1. Previamente las placas fueron preparadas con una mezcla entre los desinfectantes y

el agar correspondiente

2. Sembrar las diferentes cepas a probar en las cajas Petri con la mezcla previa

3. Debern prepararse 2 placas por cada una de las cepas, una solo con agar, la

segunda con agar y el desinfectante

4. Los desinfectantes debern encontrarse a una concentracin conocida, la primera

placa ser la relacin del desinfectante con el agar correspondiente de uno a uno, la

segunda sin ninguna concentracin del agente

5. Diariamente por aproximadamente una semana ser medido el crecimiento radial de

cada una de las placas, para poder llevar as un control de crecimiento.

Reporte

Todas las mediciones sern graficadas para denotar la relacin de crecimiento entre estas,

para poder identificar as el mejor desinfectante

Cuestionario

1. Defina que es un desinfectante

2. De los desinfectantes conocidos cual o cuales son los ms efectivos

3. Que desinfectantes presentan una elevada toxicidad

4. Que otros desinfectantes se conocen

5. Los hongos pueden crear resistencia a los desinfectantes

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BIBLIOGRAFA

a) Segretain, G., E. Drouhet y F. Mariat. 1995. Diagnstico de Laboratorio en

Micologa Mdica. 7 reimpresin. Traduccin de Ernesto Macotela Ruiz. La prensa

Mdica Mexicana. Mxico.

b) Arenas, R. 2008. Micologa Mdica. 3 Ed; Ed. Interamericana.

c) Bonifaz, A. 2010. Micologa Mdica Bsica. 3 Ed; Ed. McGraw-Hill

Interamericana.

d) Conant, N.F., D. Trillersonsmith, R. Denia Baker, J. Lamar. 1994. Micologa.

Nueva Editorial Interamericana.

e) Koneman. Diagnostico Microbiolgico. 6 Ed. Ed. Mdica Panamericana. (2006)

f) Lpez, M.R., F. Hernndez. 2009. Principios de Micologa Mdica, Clnica,

Diagnostico y Teraputica. 1 Ed. Ed. Mndez Editores

g) Murray, P.R. 2012. Microbiologa Mdica. 6 Ed; Ed. Elsevier Mosby.

h) Velasco, C.O., J. Tay Zavala. 1995. Introduccin a la Micologa Mdica. Ed.

Francisco Mndez Cervantes.

i) Torres, R.J. 1995. Micologa Mdica. 4 Ed; Ed. MASSON.

j) Torres, R.J. 1996. Micosis que afectan piel y mucosas. 3 Ed; Ed. DOYMA.

k) Clayton, Y.M., G. Garoth, R.J. Hay, A. Lagni, P. Vanbreuseghem. 1994.

Biomedicaltopics. Micosis Superficiales. Ed. Centro de Publicaciones Cientficas.

Farmitalia Carlo Erba. Milano, Italia.

l) Zapater, R.C. 1996. Micologa Mdica. 6 Ed; Ed. El Ateneo.

m) Ramrez Cueto, M.A. Manual de Laboratorio de Micologa. Facultad de Ciencias

Qumicas, Departamento de Microbiologa. BUAP.

4. Manual de Micología

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