2. P PROTEIN
-
Upload
nurrahma-putrie-hapsari -
Category
Documents
-
view
335 -
download
8
description
Transcript of 2. P PROTEIN
-
PENENTUAN PROTEIN SERUMDENGAN METODA BIURET( KINGSLEY )
-
3
+ 3 ml dietil eter , 2 campur , kocok kuat- kuat , sekali-sekali tutup dibuka kemudian pusingkan 10 menit
4 3 Ambil 2 ml
Ambil 2 ml
1 7,5 ml Na2SO4 23 % 0,5 ml serum vortex 20 detik ( cam- pur pelan-pelan )117,5 ml H2O + 0,5 ml Standard S Ambil 2 ml
B : Ambil 2 ml H2O
PT s I s a A 2
-
PT = PROTEIN TOTAL
A = ALBUMIN + 4 ml REAGENS S = STANDARD BIURET B = BLANKO
BACA : Kolorimeter Klett : filter 55 atau Spektrofotometer
-
Perhitungan
Bila H2O = 0 R TP R B R A R B PT = X C S g/dl A = X C S g/dl RS R B Rs R B G = T P A g/dl B = 2 ml H20 + 4 ml R. Biuret
Bila R B = 0 R PT R APT = X C S g/dl A = X C S g/dl atau RS R S PT = R PT X 15,4 g/dl A = R A X 15,4 g/dl G = PT A g/dl
-
Bila pada pemeriksaan yang saudara lakukan didapatkan kadar albumin darah yang rendah . Jelaskan keadaan apa saja yang dapat menimbulkan hipoalbuminemia ini !
-
H A R G A N O R M A L TOTAL PROTEIN ( TP ) = 5 8 g/dl ( g% )
Albumin = 3,5 5,5 g/dl
Globulin = 1,5 3 g/dl
-
REAGEN BIURET : CuSO4 & NaOH / KOH OH UREACO - H2N Cu NH2CO NH2 NH HN C = OCO - H2N-K K-NH2-CO NH2 OH OH
Terbentuk : Kupri potasium Biuret atau Biuret Potasium Kuprihidroksida CO-NH2NCO-NH22 guguskarbamilDisebut Biuret karena reaksi ini positif untuk biuret atau biurea, tapi ternyata reaksi ini positif juga bila terdapat 2 atau lebih ikatan peptida dan 2 atau lebih gugus karbamil .
2 ikatan peptida R1 R2 R3 NH2 C CONH C CONH C COOH 3 asam amino H H H
-
dan
2
-
REAGEN BIURET : POSITIF NH2 UREA1. Biurea C = O, S,NH,H2 NH2 NH C = O C = O NH2 NH22. Bikarbamil CONH2 , S, NH, H2 KARBAMIL N CONH2 CONH2
3. 2 ikatan peptida R1 R2 R3 NH2 C CONH C CONH C COOH H H H CH2 CH COOH4. Asam amino histidin HN N NH2
-
Reagen Biuret positif dengan adanya minimal 2 ikatan peptida
R1 R2 R3 NH2 C CONH C CONH C COOH H H H
DIPEPTIDA : 2 asam amino = 1 ikatan peptida TRIPEPTIDA : 3 asam amino = 2 ikatan peptida POLIPEPTIDA lebih besar daripada 10 asam amino PROTEIN lebih besar dari 100 asam amino
-
1. PENENTUAN KADAR GLUKOSA DARAH DIGUNAKAN SERUM OLEH KARENA SERUM TIDAK MENGANDUNG FIBRINOGEN
PENENTUAN KADAR PROTEIN SERUM MENURUT KINGSLEY BERGUNA : 1. membantu menegakkan diagnosis 2. status gizi
A. Na2SO4 1/3 jenuh mengendapkan fibrinogen B Na2SO4 1/2 jenuh ( Na2SO4 23 % ) mengendapkan ( NH4 )2 SO4 jenuh fibrinogen dan globulin C. Na2SO4 jenuh mengendapkan fibrinogen, globulin, albumin
-
SERUM : PT = A + G
PT A = G
PLASMA : PT = A + G + F
PT- A = G + F
PT = protein total PT - A = G + F A = albuminG = globulinF = fibrinogen
-
4. PROTEIN + CuSO4 + BASA UNGU / VIOLET
5. 1. Dietil eter, lipid Na2SO4 23%
2. globulin
3. albumin dan Na2SO4 23 %
Guna dietil eter : 1. menggumpalkan globulin 2. menghilangkan kekeruhan oleh karena lipid1
-
REAGENS BIURET1 . GIES : CuSO4 3% dan KOH 10% CuSO4 peka thd autoreduksi
2. WEICHSELBAUM : K-NA tartrat ( stabilisator , Cu+2O tak terbentuk ) CuSO4.5H2O , NaOH KJ (mencegah autoreduksi )
3. GORNAL, BARDAWILL, DAVID : K-Na tartrat, CuSO4 dan NaOH 10%
4. WELKER : CuSO4 1% dan NaOH 40%
-
PENURUNAN KADAR ALBUMIN PLASMA ( HIPOALBUMINEMIA )KEHILANGAN ALBUMIN : Kebocoran albumin di ginjal pada penyakit nefritis, sindroma nefrotik.PASOKAN PROTEIN YANG INADEKUAT : T.B.C, keganasan, gangguan pencernaan protein, gangguan penyerapan asam amino, penurunan intake protein.GANGGUAN SINTESIS : sirosis hatiKATABOLISME PROTEIN MENINGKAT : Diabetes mellitus yang berat, tirotoksikosisHAMIL DAN LAKTASIPENGENCERAN PLASMA / KEHILANGAN PROTEIN : sesudah perdarahan hebat, dehidrasi berat, luka bakar hebat7. KELAINAN GENETIK
-
SEPARASI PROTEIN
1. FRAKSINASI : Garam ( salt ) dan Pelarut ( solvent ) Salting out : Presipitasi protein oleh Na2SO4/(NH4)2SO4 Tiap protein berbeda sifat pengendapannya2. ELEKTROFORESIS : Pergerakan molekul di medan listrik Perbedaan kecepatan migrasi partikel bermuatan pada medan listrik 3. ULTRACENTRIFUGE : Variasi masa dan bentuk molekul . Protein dengan BM besar akan mengendap paling cepat 4. KROMATOGRAFI : Perbedaan pola pergerakan antara fase gerak dan fase diam untuk memisahkan komponen (berupa molekul) yang berada pada larutan. Molekul yang terlarut dalam fase gerak, akan melewati kolom /kertas yang merupakan fase diam . Adanya perbedaan ukuran, bentuk, muatan molekul dan kelarutan partikel , kecepatan pergerakan akan berbeda .5. ANALISIS IMMUNOKIMIA : Perbedaan struktur molekul thd reaksi antisera . Ab tertentu akan terikat dengan antigen yang sesuai
-
STOOL CHROMATOGRAPHY
Karbohidrat Laktosa Feses
-
E I A Ag - Ab - E Ag-E + Ab Ag Ab - E + SUBSTRAT WARNA
S / Ag + Ab S / AgAb Ab : TERBATAS
ENZYME IMMUNO ASSAY
-
RADIO IMMUNO ASSAY
Ag* + Ab Ag* Ab ( * label radioaktif ) S / Ag + Ab S / Ag Ab
Ab : TERBATAS
-
STANDARD CALIBRATION CURVEAbsorbanceSTANDARD
****`*