19-Seminar trigliceridi.pdf

Farmaceutski FakultetFarmaceutski Fakultet TanjaTanja ToTomimi i Ivana Jorgai Ivana Jorgaevievi

ANALITIKAANALITIKATrigliceridiTrigliceridi

Tanja TomiTanja Tomi i Ivana Jorgai Ivana JorgaevieviFarmaceutski FakultetFarmaceutski Fakultet

OsnovniOsnovni parametriparametri lipidnoglipidnog statusastatusa

Ukupan holesterol (esterifikovan i slobodan)

Trigliceridi

HDL-holesterol

LDL-holesterol


TrigliceridiTrigliceridi Trigliceridi su estri glicerola i

ostatka masnih kiselina Glavni depo energije u organizmu Primarna funkcija je da obezbede

potrebnu energiju Sinteza triglicerida odvija se u

jetri,adipoznom tkivu i intestinumu Nalaze se u svim lipoproteinima,ali

su glavna komponenta onihlipoproteina ija je gustina manja od 1.019kg/L (hilomikroni,hilomikronskiostaci,VLDL i IDL)

U stanju gladovanja hilomikroninisu prisutni u cirkulaciji ,a TG koji su prisutni u plazmi potiu od VLDL-a

Ukoliko su TG povieni u stanju gladovanja to ukazuje na neki poremeaj


Odreivanje Odreivanje trigliceridatriglicerida

Znaaj odreivanja triglicerida

Dislipidemije Familijarna hipertrigliceridemija Rizik od kardiovaskularnih poremeaja Za izraunavanje LDL-C


1. Hemijske metode 2. Enzimske metode

Problemi pri odredjivanju Problem standarda Uticaj glicerola Lipemian serum

Odreivanje Odreivanje trigliceridatriglicerida


1.Trigliceridi se ekstrahuju sa organskim rastvaraem ili preiste sa absorbensom kao to je zeolit;

2.Trigliceridi + ROH glicerol + 3 masne kiseline3.Glicerol + perjodat formaldehid + HCOOH +JO3-4.Merenje stvorenog formaldehidaa. Hantzscova kondenzacija HCHO +NH4+ + acetilaceton lutidinlutidin 412 412 nmnm

b. Egriwes reakcija hromotropna reakcijac. Schryver-ova reakcija sa fenilhidrazinomd...

Hemijske metode odreivanja Hemijske metode odreivanja trigliceridatriglicerida


Referentna metoda za triglicerideCDC-sijalinska kiselina-ekstrakcija hloroformom-hemijska ekstrakcija KOH-hromogena reakcija

Pojmovi-ukupni trigliceridi-trigliceridi (eliminisan glicerol)-CDC referentni trigliceridi


Tri stupnja u odreivanju trigliceridahidroliza

Trigliceridi glicerolkonverzija

Glicerol intermedijerbojena reakcija

Intermedijer Bojeno ili fluorescentno jedinjenje

EnzimskeEnzimske metode odreivanja metode odreivanja trigliceridatriglicerida


I stupanjHidroliza triglicerida

- potpuna sa lipazom- deluje i na prisutne mono i digliceride- in vivo i in vitro hidroliza triglicerida- uticaj samo 3 % - neznatno

II stupanj- konverzije glicerola u intermedijer

III stupanj- NADH- kolorimetrijski formazan ili hinonimin



1. Preko NADHLipaza

Trigliceridi glicerol + 3 masne kiselineGlicerol

Glicerol + ATP glicerol-3-fosfat + ADPkinaza

PiruvatADP + PEP ATP + piruvat

kinazaLaktat

Piruvat + NADH + H+ Laktat + NAD+dehidrogenaza


340 340 nmnm


2. Preko formazana

LipazaTrigliceridi glicerol + 3 masne kiseline

GlicerolGlicerol + ATP glicerol-3-fosfat + ADP

kinazaGlicerolfosfat

Glicerol-3-fosfat + NAD+ NADH + H+dehidrogenaza

+ dihidroksiaceton fosfatDiaforaza

NADH + oks tetrazolijum NAD+ + red tetrazolijum500500--590 590 nmnm


3. Preko vodonik peroksidaLipaza

Trigliceridi glicerol + 3 masne kiselineGlicerol

Glicerol + ATP glicerol-3-fosfat + ADPkinaza

GlicerolfosfatGlicerol-3-fosfat + O2 H2O2 +

oksidazadihidroksiaceton fosfat

PODH2O2 + 4-hlorfenol + 4-aminofenazonHCl + 2H2O + hinonimim

510 510 nmnm


Standard za trigliceride

1. Primarni vodeni standard glicerola- izostaje i stupanj hidrolize TG2. Standard triglicerida

- serumski TG su meavina raznih masnih kiselina- triolein i tripalmitin (2:1 W/W) normalan odnos u plazmi nezasienih i zasienih masnih kiselina- u rezultatitima su TG kao triolen

3. Sekundarni kalibratori4. Standard trioleina


Interferencija slobodnog glicerola

1.Endogeni glicerol-Normalno: 5-10 mg/dL-Poveane vrednosti endogenog glicerola se javljaju kod:

-dijabetesa-emocionalnog stresa-intravenoznih lekova ili hrane-kod dueg uvanja uzoraka zbog hidrolize fosfolipidaiz eritrocitne membrane

2.Egzogeni glicerol-Epruvete presvuene glicerolom (kapilarna krv),filteri za sterilizaciju,krema za ruke,laboratorijski deterdenti


Uticaj slobodnog glicerola

Trigliceridi = (0,98 x glicerol) - 0,07 mmol/L

Trigliceridi = (0,828 x glicerol) + 0,088 mmol/L


2 metode eliminacije glicerola

1. Metoda spoljne slepe probe 2 reagensa:

-jedan sadri sve za odreivanje TG ;-drugi ne sadri lipazu (meri samo endogeni glicerol)-iz razlike ukupnog i slobodnog dobija se glicerol prisutan u TG

2. Metoda unutranje slepe probe- u samom reagensu postoji sve to treba da se eliminie endogeni glicerol,a da se ne oslobodi jedinjenje koje se moe meriti- na automatu se radi samo jedna analiza , pod uslovom da postoji opcija dodavanja jednog reagensa pa drugog- malo due vreme izvoenja- glicerol se ne moe izmeriti


Slepa proba za glicerol

- Izvodi se zbog slobodnog glicerola (naroito bitno kod enzimskih metoda, kod kojih se meri ukupan glicerol(slobodan i esterifikovan), pa se tada dobijaju lane poviene vrednosti)- Ukoliko su TG > 2,83 mmol/L- Rezultat se izdaje sa naznakom uraene SP- Epidemioloke studije ukljuuju i SP- Kod hospitalizovanih pacijenata- Ambulantni samo dijabetiari ili endokrinoloki sluajevi- Pravilno uvanje i transport uzoraka

-lipaza deluje na sobnoj temperaturi-puna krv se ne sme uvati zbog hidrolize fosfolipida iz eritrocita


Lipemini serumi

-Efekat lipaze koja isti jer hidrolizuje TG-Lipoproteini bogati TG su velike estice koje odbijaju svetlost, interferiraju i daju arteficijalnu visoku vrednost apsorbancije-Dodatkom reagens rastvora i lipaze dolazi do redukcije turbiditeta jer je veliina lipoproteinskih estica smanjena- Problem kod korienja slepe probe uzorka- Uvoenje deterdenta delimino eliminie ovaj efekat-Jako lipemini (sa hilomikronima) se moraju promeati-Osloboena velika koliina masnih kiselina interferira svojim turbiditetom i inhibicijom lipaze (efekat inhibicije zavrnog produkta)- Uvoenja hemijskog rezervoara za masne kiseline(albumin i alfa-ciklodekstrin)


uvanje uzoraka

- Zbog aktivnosti lipaze uzorke treba to pre obraditi- uvanje uzoraka na -20C- Visoka aktivnost lipaze kod hepariniziranih

pacijenata


Interferencije- glicerol- askorbinska kiselina

oksido-redukcione reakcije; uzimanje vitamina C- bilirubin

hemijska i spektralna - hemoliza

jaka hemoliza- jaka lipemija

Primena slepe probe uzorka


TumaTumaenje rezultata odreivanja enje rezultata odreivanja trigliceridatriglicerida

Specifinost tumaenja rezultata ispitivanja lipidnogstatusa je to ne postoje referentne ili normalne vrednosti za lipidne parametre ve preporuene vrednosti.

Preporuene vrednosti su date od strane odreenih nacionalnih odbora za lipide, a zasnivaju se na vrednostima lipidnih parametara koje imaju najmanji rizik za pojavu kardiovaskularnih bolesti.


Tumaenje rezultata odreivanja triglicerida

Ateregenost triglicerida(posredno su aterogeni ,jer se razmenjuju izmeu lipoproteinskihestica i time doprinose poveanoj aterogenosti LDL estice i smanjenoj protektivnoj ulozi HDL estice)

Rizine vrednosti Optimalne vrednosti Nizak rizik Visok rizik


Ove vrednosti su relevantne iskljucivo odredjivanjemnakon 8 12h gladovanja.

Tumaenje rezultata odreivanja triglicerida

Veoma visokavrednost,veoma visokrizik

> 5.70> 500

Visoka vrednost,visokrizik

2.26 - 5.69200 - 499

Granicna vrednost1.70 - 2.25150-199

Normalnavrednost,nizak rizik

< 1.69< 150

ZnacajNivo mmol/lNivo mg/dl

Tanja TomiTanja Tomi i Ivana Jorgai Ivana JorgaevieviFarmaceutski FakultetFarmaceutski Fakultet Tanja TomiTanja Tomi i Ivana Jorgai Ivana JorgaevieviFarmaceutskiFarmaceutski FakultetFakultet

19-Seminar trigliceridi.pdf

Documents

Transcript of 19-Seminar trigliceridi.pdf