14. nedelja: Pitanja za ulazni test

1. Šta su imunodeficijencije i kako se dele?

2. Koje su imunodeficijencije prouzrokovane poremećajima komponenti urođene imunosti (primeri)?

3. Koje su imunodeficijencije prouzrokovane poremećajima T- i B-limfocita (primeri)?

4. Kako se određuje broj pojedinih populacija leukocita u perifernoj krvi?

5. Kako biste u uzorku krvi pacijenta odredili broj, izdvojili i funkcionalno ispitali subpopulacije limfocita

(B-ćelije, pomoćničke T-ćelije, citotoksične T-ćelije)?

6. Šta je to protočna citofluorimetrija i kakva je njena primena?

7. Koji su osnovni markeri T-limfocita, B-limfocita i NK ćelija?

8. Kako se indukuje i meri proliferacija T- i B-limfocita?

9. Kako se određuju ukupni imunoglobulini u perifernoj krvi, a kako specifični imunoglobulini za određene antigene?

10. Šta su to provokacioni testovi, kožne probe rane i kasne preosetljivosti (primeri)?

Molimo vas da na sledeći seminar donesete:

1.Popunjen indeks

Šifra predmeta: IMUNNaziv nastavnog predmeta: ImunologijaGodina: IIStatus predmeta: OESPB: 3Predavanja: 15Vežbe: 10Ostalo: 20

Molimo vas da na sledeći seminar donesete:

i

2. Popunjenu anketu o nastavi iz Imunologije koja se nalazi odštampana u Priručniku za nastavu iz Imunologije (poslednja strana)

Molimo vas da date i komentare

Ispitivanja ćelija imunskog sistema

Ispitivanja ćelija imunskog sistema

Izdvajanje ćelija

Određivanje broja

Funkcionalna ispitivanja in vitro

Krv

Limfoprep

Gustina

1.077 g/ml

centrifugiranje

Mononuklearne ćelije periferne krvi

Eritrociti i

Granulociti

Izdvajanje MNĆ periferne krvi pomoću gradijenta gustine

Izdvajanje MNĆ periferne krvi pomoću gradijenta gustine

Krv

Limfoprep

Gustina

1.077 g/ml

centrifugiranje

Mononuklearne ćelije periferne krvi

Eritrociti i

Granulociti

Razdvajanje ćelija pomoću paramagnetnih kuglicaMACS®

Heterogena populacija ćelija inkubirana sa antitelima obeleženim magnetnim česticama se nanosi na kolonu od čelične vune

U magnetnom polju obeležene ćelije ostaju

vezane za kolonu a neobeležene se ispiraju

Nakon uklanjanja magnetnog polju obeležene ćelije se ispiraju i sakupljaju

Određivanje broja ćelija

Na osnovu morfologije i bojenja leukocitna formula iz komore i krvnog razmaza

Na osnovu veličine i granuliranosti automatski brojači ćelija

Na osnovu specifičnih površinskih molekula T-limfociti:

B-limfociti:

NK ćelije:

CD3, CD4, CD8....

Ig, CD19, CD20...

CD16, CD56...

Protočni citofluorimetarFACS®

Protočna citofluorimetrija

Mlaz tečnosti koji nosi fluorescentno

obeležene ćelije

Zelena foto-multiplikatorska cev (PMT)

Crvena PMT

Smeša ćelija obeleženih fluorescentnim antitelima

Granuliranost

Veličina

Protočna citofluorimetrija

Mlaz tečnosti koji nosi fluorescentno

obeležene ćelije

Zelena foto-multiplikatorska cev (PMT)

Crvena PMT

Smeša ćelija obeleženih fluorescentnim antitelima

Granuliranost

Veličina

Dot plot prikaz

Histogramski prikaz

Protočna citofluorimetrija (klinička primena)

Imunofenotipizacija (identifikacija i kvantitiranje populacija i subpopulacija limfocita)

Karakterizacija ćelija kod limfoproliferativnih bolesti, tumora i imunodeficijencija

Određivanje produkcije reaktivnih oblika kiseonika i azota

Određivanje sadržaja DNK (ćelijski ciklus)

Identifikacija aktivacionih molekula (npr. površinski aktivacioni markeri, intracelularni Ca++, fosforilacija intracelularnih proteina)

Detekcija specifičnih intracelularnih proteina (npr. citokina)

Detekcija i kvantitiranje apoptoze ćelija

Protočna citofluorimetrija (istraživačka primena)

Funkcionalna ispitivanja fagocita

Hemotaksa

Adherencija IngestijaRespiratorni prasakIntracelularno ubijanje

Funkcionalna ispitivanja NK ćelijaCitotoksičnost

K 562

Produkcija citokina

IFN-γ (ELISA)

Ispitivanje funkcija NK ćelija

Citotoksičnost (oslobađanje 51Cr K562)

NK ćelije sa obeleženim ciljnim

Obeležavanje ciljnih ćelija sa 51Cr

Ubijene ćelije oslobađaju 51Cr

Određivanje broja ćelija

Ispitivanje funkcionalnih svojstava

T-ćelija

(proliferacija, produkcija citokina, citotoksičnost)

B-ćelija

(proliferacija, produkcija antitela)

Ispitivanje ćelija stečene imunosti

(T i B-limfocita)

Ispitivanje funkcija T-limfocita

Proliferacija

Stimulacija: poliklonskim aktivatorima (mitogenima: PHA, ConA) antigenima

Meri se inkorporacijom 3H timidina u novosintetisanu DNK

Pacijent medijum ConA

A.B. 430±3143905±389

D.G. 230±84 1200±227

Produkcija antitela (B-limfociti)(Nefelometrija, RID, ELISA)

Produkcija citokina (T-limfociti) (ELISA)

Citotoksičnost (CTL)(Citotoksični test)

Ispitivanje efektorskih funkcija B i T-limfocita

Nakon ovog seminara možete da odgovorite na

sledeća pitanja

I Kako se izdvajaju ćelije imunskog sistema? Izdvajanje na gustinskom gradijentu MACS® Protočna citofluorimetrija (FACS®)

II Kako se određuju broj i fenotipske karakteristike ćelija imunskog sistema?

Diferencijalna leukocitna formula Protočna citofluorimetrija (FACS®)

III Kako se ispituju funkcije ćelija imunskog sistema in vitro?

Fagociti (hemotaksija, fagocitoza, respiratorni prasak, ubijanje) NK ćelije (citotoksičnost, produkcija IFN-γ ) T-ćelije (proliferacija, citotoksičnost, produkcija citokina) B-ćelije (proliferacija, produkcija antitela)

10.__9.__8.__7.__6.__5.__4.__3.__2.__1.__

CD16 i CD56j.Proliferacija T-limfocita se ispituje10.

stimulacijom sa T-ćelijskim mitogenimai.Za merenje količine antitela koriste se 9.

nefelometrija, RID, ELISAh.Za merenje nivoa produkcije citokina koristi se

8.

membranski imunoglobulini, CD19, CD20

g.Efektorske funkcije T-ćelija su7.

CD3 i CD4 ili CD8f.Respiratorni prasak fagocita je smanjen6.

razlike u gustini i površinskim markerima

e.Ubilačka aktivnost NK ćelija se određuje5.

citotoksičnim testomd.Površinski markeri NK ćelija su4.

kod obolelih od hronične granulomatozne bolesti

c.Površinski markeri B-limfocita su3.

ELISAb.Površinski markeri T-limfocita su2.

produkcija citokina i citotoksičnosta.Izdvajanje ćelija iz krvi vrši se na osnovu1.

e f g j d c a b h i

Sledeća nedelja

SeminarPrikaz kliničkih slučajeva

PredavanjeSekundarne imunodeficijencije