1290 Infinity II - agilent.com · • Nuevos conectores para intercambiar muy fácilmente ......

1290 Infinity II

Ultra-eficiencia con UHPLC.

Soluciones y configuraciones

con la NUEVA serie Infinity II.

Análisis dirigido mediante

técnicas de LC con acoplamiento

a espectrometría de masas en

tándem

November 20, 2015

1

Mensaje de Eficiencia:

November 20, 2015

2

Eficiencia Analítica

Eficiencia Instrumental

Eficiencia Laboratorio

Un Nuevo Punto de

Referencia

en Eficiencia

Agilent 1290 Infinity II LC, la nueva

generación en “Ultra High

Performance Liquid Chromatography”

Aumenta la eficacia de su empresa

en tres dimensiones:




November 20, 2015

3

:

Eficiencia Analítica.Incomparable rendimiento de Separación y Detección entregar los

datos de análisis de la más alta calidad para la máxima confianza en

sus resultados :

• Máxima eficacia en la separación mediante UHPLC:

• Ultra low Dispersion kits (ULD)

• LC-1DLC-2D comprehensive multidimensional

• 1300 bars a 2mL/min, hasta 5mL/min a 800 bars

• Mínimo “carryover” (contaminación cruzada): <9 ppm con la opción

de multi-lavado con 3 solventes y limpieza del asiento de la aguja.

• Máxima sensibilidad y rango dinámico: DAD: 60mm max Ligth cell

y HDR. // nuevo ELSD 1290 Series II.

• Máxima precisión de tiempos de retención (flujo y composición).

Efficiency MessagingInfinity II – La clave de la Eficiencia




November 20, 2015

4



• Ciclos de inyección más rápidos: hasta 5 seg. con opción de doble

aguja y sin comprometer “carryover” o discriminación de muestras por el

solapamiento inyección & análisis.

• Mayor capacidad de muestras refrigeradas: hasta 6144 muestras en

microplacas, 432 viales 2ml, combinaciones entre múltiples tipos de placas,

viales, eppendforfs,…..

• Mayor Flexibilidad: para todo tipo de cromatografías UHPLC/ HPLC

/Semi-preparativo/ Muldimensional/….

• Trabajar con todo tipo de diámetros de columnas desde 1 hasta 8 mm. d.i.:

• Inyectar desde menos de 1µL hasta 900µL sin intervención del usuario y sin

comprometer prestaciones, gracias a la opción de doble aguja.

• Nuevos conectores para intercambiar muy fácilmente columnas hasta 1300

bars y SIN necesidad de herramientas

• Hasta 8 columnas de 20º por debajo de temperatura ambiente hasta 110ºC

• Mayor capacidad de Automatización:

• Múltiples tipos de válvulas muy fácilmente intercambiables, para selección

de disolventes, intercambio y regeneración de columnas, limpieza o

enriquecimiento de muestra.

• Inyectores programables para preparación de muestra: dilución, mezclado,

derivatización,……




November 20, 2015

5

Eficacia del Laboratorio• Emulación de otros U/HPLC’s (opción ISET): facilitar la transferencia de

métodos.

• Poder disponer de todas las prestaciones de los Agilent 1290 II Infinity

incluso controlándolos desde softwares de otras firmas, gracias a los nuevos

Drivers RC.net.

• Reducir el coste operativo

• Compatible con los módulos 1100/1200/1260/1290.

• “Early Maintenance Feedback” (EMF) y “Lab Advisor”: para que el propio usuario

pueda monitorizar, prever, mejorar el mantenimiento (guiado) del equipo.

• Compromiso Agilent de un mínimo de 10 años de valor de la inversión.


November 20, 2015

6

Nuevo 1290 Infinity II DAD

Nuevo 1290 Infinity II DAD FS

Nuevo 1290 Infinity II VWD

Nuevo 1290 Infinity II ELSD

Nuevo 1290 Infinity II

Multicolumn Thermostat

Nuevo 1290 Infinity II

Multisampler

Vialsampler

Nuevo 1290 Infinity II High Speed Pump

Nuevo 1290 Infinity II Flexible Pump

1290 Infinity II – Descripción del Sistema6

November 20, 2015

7

1290 Infinity II

Sistemas de

Bombeo

Evolución

• Nuevos modelos:

• 1290 Infinity II High Speed Pump (HPM)

• 1290 Infinity II Flexible Pump (LPM)

• Rango de Potencia mejorado con 1300bar

• Nuevo diseño con 2 puertas del

1290 Infinity II

Bombas1290 Infinity II¿Que es nuevo?

Mezcla en baja presión Mezcla en alta presión

Alta velocidad y resolución

1300 bar @ 2.0 mL/min

800 bar @ 5.0 mL/min

Volumen muerto: 10 µl / 45 µl

Amortiguador electrónico de pulsos

Procesador de doble nucleo

dedicado al control de pulsos

Motores de 300 picolitros por

paso

Largos intervalos de mantenimiento

“Automatic Leak-Correction“

150 Litros de disolvente

Automatismo

Purga automática

Válvula de

Selección de disolvente

Mezclador

“Jet Weaver“

Desgasificador

Pistones de

“Silicon –Carbide“ Válvula de

purga

Canal

B

Canal

A

1290 Infinity II LC Binary PumpLa siguiente generación en Tecnología de Bombas LC

ON

OFFMotor del Pistón

1290 Inifinity II

Chanel A

1290 Inifinity II

Chanel B

• Motores independientes

para cada pistón

• Pasos de 300 picolitros

HPLC 1200

UHPLC 1290-II

1290 Infinity Binary PumpAmortiguación electrónica de pulsos

1200 Series

Channel A

Passive Damper

0 - 300 µl

Passive Mixer

400 µl

1200 Series

Channel B

1290 Inifinity II

Chanel A

1290 Inifinity II

Chanel B

Very Low Noise

~ 800 µl

+ =Aktive Damping

10µl

Jet Weaver Mixer

35µl

Lowest Noise

• min. 50% lower

Delay Volume

• 10µl / 45µl

• 80x / 20x lower

1290 Infinity Binary PumpEl mas bajo volumen muerto y el mas bajo ruido de mezcla

El 1290 Infinity II “Flexible Pump” es la única Bomba con

mezcla en baja presión que combina el rendimiento de la

mezcla en alta presión de las bombas UHPLC, con la

flexibilidad de la Bomba Cuaternaria. Esta Bomba alcanza

la máxima calidad de gradiente en el rango de composición

del 1 to 99 %.

Mayor precisión del tiempo de retención para una

Identificación de picos mas segura

13

Nuevo mezclador InletWeaver

basado en la super-eficiente

tecnología Jet Weaver

Mezclador opcional en alta presión (sólo para

condiciones muy críticas- p.e. TFA)

Premezcla el eluyente

antes de entrar en el

cabezal de bombeo

Agilent Inlet WeaverPremezclador en baja presión de alta eficacia

14

0 10 20 30 40 50

mAU

0

50

100

150

200

250

Gradiente EscalonadoSaltos 1 % del 0 a 10 %

1290 Infinity II Quaternary systemQuaternary UHPLC from other vendor

1%

3%

7%

10%

Salto in

icia

l

Influencia Rango Composición: Prestaciones con Pequeñas Proporciones de % Orgánico

1290 Infinity II

Inyectores Automáticos

Evolución y Revolución

November 20, 2015

15

Nuevo Multisampler Revolución

1260 Multisampler

600 bar

Infinity II Multisampler

1300 bar

Refrigeración por compresor interno (opcional)

Doble puerto de Inyección (opcional)

Multi-lavado (opcional)

Infinity II 12901260

16

November 20, 2015

1290 Infinity LCpág.: 17

Opción Multi-lavado• Sofisticada opción de lavado integrada: para el asiento y el exterior de la la aguja en

“contra corriente”, con 3 disolventes.

Opción de refrigeración • Refrigeración basada en compresor, de: 4°C – en adelante!

• Integrada en el Inyector y auto instalable por el usuario

Programa Manual de Inyección• Permite realizar mezclas, derivatizaciones, diluciones …..

Alta capacidad de muestras• Hasta 16 Well Plates (8 Deep), 8 Vial Plates / 6144 muestras).

• 432 viales 2ml refrigerados

• Combinaciones de multiples tipos de placas, viales, eppendfor’s,….

Opción Doble Jeringa de Inyección• La Inyección con doble jeringa permite realizar inyecciones cada “5 sec”

• La Inyección con doble jeringa permite configurar los dos puertos con loops

preparativos / analíticos sin contaminaciones ni cambios en el Hardware

Nuevo Agilent 1290 Infinity “Multisampler”Capacidades principales

pág.: 181290 Infinity LC

Bomba de lavado de aguja

Dispositivos de medida de muestra

Opciones de cabezales:

• 40 µL (1300 bars)

• 100 µL (1300 bars)• 500 µL (600 bars) / 900µL (400bars)

• Opción Multi-draw

Doble Aguja setup

• Idénticos o Diferentes

volúmenes de Inyección

Válvula de 6 puertos

• Rápido intercambio

• 1300 bar

• Bomba peristaltica

• Lavado de aguja (1 solvente)

Hidraulica del MultisamplerDoble-aguja setup


Único sistema de Doble Aguja

• Incremente la velocidad de Inyección

Eliminando el tiempo extra necesario para la

aspiración de la muestra y de lavado de la

aguja, al usar 2 bucles de tamaño similar

(e.g. 20µL/20µL)

• Flexibilidad única

Permite montar Loop´s analíticos y

Preparativos en cada puerto de Inyección, sin

compromisos de contaminación ni cambios en

el Hardware (e.g. 20µL/500µL)

• Sin Contaminación Cruzada

Se puede utilizar un puerto para los Standard y

otro para las muestras

1 ÚNICO

Meetering device

con 2 loops

Injection de Doble AgujaLa Inyección separada para calibrantes & muestras previene la

contaminación

1290 Infinity II Multisampler


Configurando el 1290 Infinity II Multisampler con una

segunda aguja de Inyección, se pueden reducir los ciclos de

Inyección a pocos segundos – eliminando los tiempo de

espera de los Inyectores convencionales incluso cuando se

utilizan altos volúmenes de inyección y procedimientos de

lavado.

Ciclos rápidos de inyección con inyector de doble aguja

pág.: 211290 Infinity LC

• 3 diferentes disolventes de lavado

• Bomba inerte para el lavado de la aguja

• Bomba de alta presión

• Lavado del asiento en contra

corriente

Dispositivos de medida de muestra

Opciones de cabezales:

• 40 µL

• 100 µL

• 500 µL / 900µL

• Opción Multi-draw

Valvula de selección de disolventes

Bomba de lavado

Válvula de 6 puertos

• Rápido intercambio

• 1200 bar

Hidraulica del MultisamplerMulti lavado setup


Lavado del interior de la aguja

Se hace pasar flujo por el interior de la

aguja.

Lavado del exterior de la aguja

Programa de selección de tres disolventes

externos para el lavado exterior de la aguja.

Lavado del asiento de la aguja en

contracorriente

Programa de selección de tres disolventes

externos para el lavado del asiento

Utilizando la nueva Opción de Multi-lavado se podrán

lavar interna y externamente todos los conductos y aguja

con tres distintos disolventes, así como el asiento de la

aguja, en contracorriente

Baja contaminación cruzada Para una alta calidad de sus datos


El 1290 Infinity II Multisampler con Multi-Lavado

reduce la contaminación cruzada a menos de 9 ppm!

Baja contaminación cruzada Para una alta calidad de sus datos

1290 Infinity II - Máxima EficienciaIntuitivo y fácil de usar

24

Entrada de Muestras Grafica

• Simple y efectiva herramienta

grafica para la entrada de

muestras en OpenLAB-CDS

• Para todos los Agilent LC

Autosamplers

• Configurable para cualquier

tipo de bandeja de viales o

pocillos

Blancos

Muestras?

Patrones?

November 20, 2015

Nuevo Vialsampler

G7129B with MCT G7116BG7129B with ICC Option

1260 Vialsampler

600 barInfinity II Vialsampler

1300 bar

Infinity II 1290Infinity 1260

ICC Compartimento de Columnas Interno (opcional)

Máximo 2 columnas, 30 cm

Nuevo Agilent 1290 Infinity II Vialsampler

132 viales

Refrigeración Liquida (opcional)

Bandeja de viales externa para funcionamiento en Open Access

Multidraw Kit para inyecciones hasta 1500 µl

Horno de Columnas

1290 Infinity II

Multicolumn

November 20, 2015

27

Máxima Eficiencia de la Industria- Significativas mejoras – MCT

Horno de Columnas Multicolumn con acceso a las

columnas mucho mas fácil

• Capacidad para 4 columnas de (30 cm)

• 4°C hasta110°C

Tapa vasculante: • Apertura 90°utilizable como soporte para facilitar la instalación de las columnas

• Apertura 180 ° para facilitar el acceso a las columnas

• Retirada de la Tapa para un acceso total

El 1290 Infinity II Horno Multicolumn con espacio para

alojar hasta ocho columnas cortas, o cuatro columnas

de 30 cm o cualquier combinación de columnas conectadas

a la válvula de selección interna, permite un rápido y simple

cambio de método.

Flexible para todas las aplicaciones

1290 Infinity II MCT

¿Que es Nuevo? Nuevos…Intercambiadores de calor

November 20, 2015

Agilent Confidential

30

Intercambiadores de

calor para su uso en el

modelo G1316C 1290

Infinity TCC

Baja Dispersión Intercambiador de Calor de

conexión rapida para su uso en el modelo G7116B ,

1290 Infinity II MCT

Nuevos intercambiadores de calor de Conexión Rapida

• Facilmente instalables e intercambiables

• Capacidad hasta 8 columnas individuales

• Diferentes volumenes (1, 1.6 ó 3µL) para cada tipo de

columna y flujo de trabajo

delicados

30

November 20, 2015

G1316-80022

31

Nuevos Conectores: Pequeños detalles que facilitan el trabajo

El muelle empuja al capilar constantemente hacia el puerto receptor

Volumen muerto

cero garantizado

Nuevo conector

Quick-Connect Conector sin Herramientas

hasta1300 bar

Nuevo conector

Quick-Turn Apretado manual hasta 600 Bar

Utilizando una llave hasta 1300 Bar

• Capilar intercambiable.

• Reutilizable (+200 veces)

para todos tipo de columnas.

1290 Infinity II

Detectores

November 20, 2015

32

Evolución

1290 Infinity II VWD (G7114B) Doble Longitud de Onda (hasta 5 Hz) con mejores especificaciones

de ruido

Velocidad de adquisición 240 Hz para separaciones ultra rápidas

3 Celdas Preparativas compatibles con 1290 Infinity I VWDs

1290 Infinity II DAD (G7117B) Rendija programable 1,2,4 8 nm

Velocidad de adquisición 240 Hz para separaciones ultra rápidas

Mejores especificaciones de precisión en la Longitud de Onda

Segunda generación de Control Electrónico de Temperatura ETC

proporciona la máxima estabilidad de línea de base haciendo el

Detector, insensible a las condiciones de temperatura y humedad del

laboratorio.

1290 Infinity II DAD FS (G7117A) Precio mas bajo que el 1290 Infinity DAD G7117B

Rendija fija de 4 nm

Velocidad de adquisición 120 Hz para separaciones rápidas

Resto de especificaciones similares al modelo1290 Infinity DAD G7117B

1290 Infinity II Detectores UV

34

1290 Infinity UHPLC Diode Array Detector- La necesidad de una nueva tecnología

10 mm camino óptico13 µL volumen

4.6 mm id column

+ =

Columna corta

d.i. 2.1 mm

?Dispersión pico• Pérdida de resolución• Menor señal (S/N)

¿Cómo lograr celdas de menor volumen?

Corto camino óptico (3 mm, 2 µL)

Alta transmisión de luz => bajo ruido Baja S/N Baja transm. de luz => elevado ruido Low S/N

Largo camino óptico (10 mm, 0.5 µL)

Guía de ondas Optofluídica

• Largo camino óptico

• Pequeño d.i./ volumen de celda

• Alta transmisión de luz La mayor S/N

Solución:

Non-coated fiber (fused

silica)

CELDA Estandard: De 10 mm de camino óptico y tan solo 1 µl de volumen

CELDA de Alta Sensibilidad: De 60 mm de camino óptico y tan solo 4,8 µl de volumen

DISEÑO OPTICO PARA OFRECER UNA MINIMA DISPERSIÓN

Cartucho de Celda “Max-Light“Tipos de Celda

36

Deuterium lamp

Max-Light cartridge cell

Programmable

slit

1024 element

diode-array

GratingMirror 240 Hz

Guía de ondas optofluídica

1290 Infinity II Detector Diode Array Como trabaja la óptica

min0 0.1 0.2 0.3 0.4

mAU

0

10

20

30

40

50

60

La nueva Celda de Flujo ULD optimizada y la velocidad de

adquisición hasta 240 Hz incrementan dramáticamente la

resolución Cromatográfica en sus separaciones ultra rápidas

min0 0.1 0.2 0.3 0.4

mAU

0

20

40

60

80

100

Data rate = 240 Hz

Data rate = 20 Hz

Baja dispersión para una alta resolución

Para las muestras con grandes diferencias de niveles de

concentración, la solución High Dynamic Range DAD del

1290 Infinity II ofrece un rango lineal 30x permitiendo

detectar y cuantificar todos los componentes de la mezcla

con una única inyección.

Capacidades de detección únicas

Infinity II

Aplicaciones

especiales

November 20, 2015

40

La innovadora tecnologia de emulación Agilent iSET permite

utilizar sus metodos validados sin ninguna modificación,

consiguiendo los mismos resultados en el 1290 Infinity II

que el LC de origen. Ya es posible reemplazar sus viejos

LC´s sin necesidad de modificar sus preciados métodos.

Todos los 1290 Infinity II pumps viene con iSET incluido.

Sistema de emulación iSET

42

Tecnología de Emulación Inteligente ISET¿Como funciona?

43

Programa de gradiente

1290 gradiente

1200 gradiente

0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5

0

50

100

150

200

250

300

350

400

min

mAU

InjecciónMismas condiciones de gradiente pero

desplazando el gradiente y emulando el

perfil de gradiente a clonar

Tecnología de Emulación Inteligente ISET¿Como trabaja (p.e. 1290 con un 1200)?

44

0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5

0

50

100

150

200

250

300

350

400

min

mAU

InyecctiónMismas condiciones de gradiente pero

desplazando el gradiente y emulando el

perfil de gradiente a clonar

Programa de gradiente

1290 gradiente

1200 gradiente

Tecnología de Emulación Inteligente ISET¿Como trabaja (p.e. 1290 con un 1200)?

45

Alliance

2695

345 bar

1290 Infinity

1200 bar

1290 Infinity

1200 bar

with ISET

EJEMPLO DE TRANSFERENCIA DE METODO4.6 x 100 mm Zorbax Eclipse Plus, 5 µm, flow: 2 mL/min, 25-95% ACN-Water

Used Method: % B: 25-95 %; Time : 8 min; Flowrate: 2 ml/min

1290

ISET

1200

1290

1260

EJEMPLO DE TRANSFERENCIA DE METODO4.6 x 100 mm Zorbax Eclipse Plus, 5 µm, flow: 2 mL/min, 25-95% ACN-Water

Seleccione el tipo de separación deseada con un simple giro de conmutador

para seleccionar Cromatografía convencional o 2D, dependiendo de la

complejidad de la muestra.


Cuando una dimensión no es suficiente…Análisis de muestras complejas con necesidad de alta capacidad de picos

min20 40 60 80 100

mAU

0

10

20

30

40

50

min10 20 30 40 50

mAU

0

20

40

60

Column: 2.1 x 150 mm, 1.8 µm

Back pressure: 402 bar

Peak capacity: 313

Column: 2.1 x 300 mm*, 1.8 µm

Back pressure: 598 bar

Peak capacity: 406

*300 mm column by coupling two 150 mm columns

Incremento de la Capacidad de picos…en la 2ª Dimensión

LC

Peak capacity = 10

+ LC

Peak capacity = 10 Peak capacity = 20

xLC

Peak capacity = 10

LC

Peak capacity = 10 Peak capacity = 100 !

50

Modos de Operación LC-2D Soportados

Comprehensive LCxLC:• Standard: muestreo en continuo

• Time-/Peak-triggered: ahorra disolvente de la 2ª

dimensión (muestreo discontinuo).

Heart-cutting LC-LC:• Time-triggered

• Peak-triggered

level

1D chromatogram

2D sampling

2D gradient

level

Muestras Desconocidas/ Complejas:

Biofarma, Alimentación, Polímeros....

Muestras Conocidas/Aumentar la Confianza:

Farma, Desarrollo de métodos,...

2D sampling

2D gradient

2D sampling

2D gradient

2D sampling

2D gradient

51

Hardware: Elevada Flexibilidad Modular

1. Dimensión

2. Dimensión

1290 Infinity

Binary Pump

1290 Infinity

Binary Pump

1290 Infinity

Autosampler or 1260

HiP Autosampler

Optional

1260/1290

Infinity

Detector

1 ó 2

1290 Infinity TCC

Optional

1260/1290

Infinity

Detector

1260/1290

Infinity

detector 2ª

dimensión

1260 Infinity Binary or

Quaternary Pump

1260 Infinity

Capillary Pump 1260 Infinity

Autosampler

Monitorizar

cromatograma 1ª

dimensión y

peak-triggering

Monitorizar línea

de desecho

Casi cualquier bomba, inyector automático Agilent puede utilizarse en la 1 ª dimensión!

Casi todos los detectores son compatibles!

Una bomba binaria 1290 Infinity es necesaria para la segunda dimensión.

Desecho

Loop1

Loop2

2pos/4port-duo

Nueva vávula exclusiva

Agilent 2D-LC con 2

rutas de flujo

completamente

simétricas y vaciado a

contracorriente de

ambos “loops“.

1D-LC 2D-LC


Technical Note 5991-4843EN

https://www.chem.agilent.com/Library/technicaloverviews/Public/5991-4843EN.pdf

Transferencia de métodos de HPLC a UHPLC

DMRM y tMRM

LC MS/MS

Mayor confianza en la

confirmación

Agilent Innovation Tour 201555

Reto analítico

Residuos:

>1000 Pesticidas

>300 Drogas veterinarias

Contaminantes

naturales:

>500 Micotoxinas

>500 Toxinas de plantas

>100 Biotoxinas marinas

>1000 Contaminanates:

Medioambientales:

Dioxinas, PCBs, HPAs,

Retardantes de llama, PFCs,

Biocidas, Disruptores

endocrinos, Metales pesados

>>Cientos de

contaminantes de

procesos y adulterantes:

Acrilamida, Aminas

heterocíclicas, Furanos,

desinfectantes, Melamina…

Niveles;

•0.001-10 mg/Kg

Múltiples

matrices

FDA

EPA

EU


Sistema Agilent 6495Nuevos desarrollos para la mayor sensibilidad

Tecnología de

Ionización y

Transferencia de Iones

• Agilent Jet Stream Ion

Generation

• Hexabore capillary

• Tecnología Dual ion funnel

(iFunnel)

Celda de colisión

• Campo Hexapolar, con foco

Axial y celda curvada

• Estructura cónica para

incrementar la entrada

de iones

• Reducción del ruido

Mejora an la

Electrónica del Quad

Drive

• Mejor respuesta de la

frecuencia Quad DC

• Mayor capacidad de

potencia RF

• Frecuencia del Quad drive

aumentada a 1.4 MHz


Herramientas para el enfoque dirigido en LCMSMS

El enfoque Dirigido basa la confirmación en la

respuesta relativa de una 2a o 3a MRM que en

demasiadas ocasiones la matriz desvirtúa por

interferencias o en técnicas de atrapado lentas que

deterioran la cuantificación.

• Dynamic MRM: Herramienta para

aumentar el rendimiento de los

métodos analíticos.

• tMRM : Para una mayor confianza en

la confirmación

Herramientas

Agilent

Muestra real– Napropamida en extracto de limón 1ug/Kg


x3 x4 x4 x3 x4 x2 x1

Nº de TransicionesConcurrentes =

Rt

Selección de 24 transiciones de analitosPara ilustrar la eficacia de los Tiempos de Ciclo usando dynamic MRMs.

Tiempo de Ciclo

MRM dinámico


Time >>>

Abundance

>>

>

Compuestos

adquiridos

MRM dinámico - Simulación


¿Para qué sirve el triggered MRM?Cuantificación y Confirmación : Fingerprinting

Enfoque de barrido:

Barrido de la huella del compuesto

Estrategia tMRM:

Foco en las características (fragmentos)

del compuesto

Dos posibles escenarios:

- Confirmación de positivos con información adicional (confirmación

espectral)

- Eliminación de negativos debido a interferencias de la matriz

Mayor confianza en la confirmación


Analisis con Triggered MRM (tMRM)

Threshold

MRM Secundarias

“Triggered”

MRMs Primarias (bajo threshold)

Triggered MRM (sobre threshold)

Compound Precursor Product

Analyte 1 334.0 145.0

Analyte 1 334.0 117.0

Compound Precursor Product

Analyte 1 334.0 145.0

Analyte 1 334.0 117.0

Analyte 1 334.0 132.1

Analyte 1 334.0 105.1

Analyte 1 334.0 91.1

Analyte 1 334.0 76.0

Analyte 1 334.0 119.0



Espectro tMRM Product Ion (344.2 > )

x103

8

7

6

5

4

3

2

1

080 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340

334.2171.1

145.0

132.1

117.0

105.191.176.0

Espectro tMRM Product Ion

x103

8

7

6

5

4

3

2

1

080

76.0

x103

8

7

6

5

4

3

2

1

080 100

91.1

x103

8

7

6

5

4

3

2

1

080 100 120

105.1

x103

8

7

6

5

4

3

2

1

080 100 120

117.0

x103

8

7

6

5

4

3

2

1

0100 140

132.1

x103

8

7

6

5

4

3

2

1

080 100 120

119.0

x103

8

7

6

5

4

3

2

1

0100 140 180

145.0x103

8

7

6

5

4

3

2

1

0100 140 180

147.0

x103

8

7

6

5

4

3

2

1

080 100 120 140 160 180

171.1

334 > 76 334 > 91 334 > 105 334 > 117 334 > 119

334 > 132 334 > 145 334 > 147 334 > 171


0 .1 .2 .3 .4 .5 .6 .7 .8 .9 1.0

Trap Product Ion Scan = 200ms

Acquisition Time (seconds)

Scanning por Atrapado vs tMRM

Trigger

Full Scan

Full Scan

Full Scan

Full Scan

Requiere analisis más largos con picos

más anchos

Perfil de pico pobre,

cuantificación no reproducible

MUY BAJA PRECISIÓN


Scanning por Atrapado vs tMRM

0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0

tMRM Scan < 50ms

Acquisition Time (seconds)

tMRM Scans

Compatible con UHPLC

buen perfil cromatográfico +

buena cuantificación

Trigger

tMRM



Busqueda en librerías tMRMTebufenpyrad Standard 50 ppb

Librería match score: 96.75

Análisis de Micotoxinas


MicotoxinasFundamentos

Bajo peso molecular, tóxicas, metabolitos secundarios del hongo

Producidos por diferentes tipos de hongos

• Fusarium esp., Aspergillus esp., Penicillium esp.

Diferente tipo de toxicidad

• carcinógenos, mutagénicos, teratogénico, estrogénicos e

inmunotóxicos.

pro

vid

ed

by P

rof.

Bü

rstm

ayr

MICOTOXINA

Toxicum

(Latin)

tóxico

Myces

(Griego)

hongo


• Cientos de compuestos

• Dos clases principales

• Diversidad química

• Aflatoxinas, Ocratoxinas (OTA), Tricotecenos, Zearalenona, Fumonisinas, PatulinaMicotoxinas mayoritarias

• Ergot alkaloides, Citrinina, Acido Ciclopiazonico, Esterigmatocistina, Monoliformina,

Gliotoxina, Citreoviridina, Tremorgenicas, Acido Penicillico, Roquefortina, Acido 3-

Nitropropionico, Fusaproliferina…)Micotoxinas minoritarias

MicotoxinasUn reto para la preparación de la muestra


Micotoxinas¿Porqué son una preocupación?

>25% de todos los productos

agrícolas se hayan contaminadas

por micotoxinas

A nivel mundial se producen

pérdidas de varios centenares de

millones de toneladas de

alimentos

Pérdidas económicas anuales :

1 billón de $ (sólo en EEUU)

Más de 100 países disponen de

regulación para el control de las

micotoxinas en alimentación

Se encuentran en cereales,

frutos secos, especias, uva,

café, cacao, zumos de fruta;

Como contaminación

secundaria se encuentran en

leche, huevos y carne;

Son resistentes al cocinado

doméstico

¿En que alimentos se encuentran?


Regulaciones (UE y FDA)


Muestra:

• triturada, homogeneizada y

pesada

Extracción

•AcN:Agua:AcFormico

(80:19.9:0.1 v:v:v)

•60 min a temp ambiente en

agitador

Centrifugación

Extracción

•AcN:Agua:AcFormico

(20:79.9:0.1 v:v:v)

•30 min a temp ambiente en

agitador

CentrifugaciónAdicion de ISTD C13

Secado Reconstitución

Sample preparationUniversal extraction procedure


Stable Isotope Dilution Assay (SIDA)HPLC method

Agilent 1290 Infinity LC system consisting of:

- binary pump

- wellplate sampler

- column compartment

HPLC method

Separation column: ZORBAX Eclipse Plus C-18 RRHD column,

100 x 2.1 mm, 1.8 µm @ 30°C

Mobile phase: A: 5 mM HCOONH4+ 0.1% formic acid

B: methanol + 5 mM HCOONH4 + 0.1% formic acid

Flow: 0.35 ml/min

Gradient: 0.00 min 30 % B

0.50 min 30 % B

8.00 min 100 % B

9.50 min 100 % B

9.60 min 30 % B

Inj.Vol.: 3 µl


Stable Isotope Dilution Assay (SIDA)MS methodSpray chamber conditions:

Gas temp.: 140°C

Dry gas: 16 l/min

Nebulizer: 25 psi

Sheath gas temp: 350°C

Sheath gas flow: 11 l/min

Positive Negative

CapVoltage: 4000 V 3000 V

Nozzle voltage 0 V 0 V

DMRM : Automatic setup of MRM tables based on selected cycle time, retention times and retention time windows for the individual compounds

• Cycle time 400 ms

• Interscan delay 3.5 ms

• Total No. of MRMs 33

• Maximum No. Of concurrent MRMs 12

• Minimum Dwell time 39.8 ms

• Maximum Dwell time 196.5 ms


5x10

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

1.4

1.6

1.8

2

2.2

2.4

2.6

2.8

3

3.2

3.4

3.6

3.8 3.87

4.42

4.17

6.44

3.58

5.40

5.961.50

3.37 5.55

Counts vs. Acquisition Time (min)0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6 1.8 2 2.2 2.4 2.6 2.8 3 3.2 3.4 3.6 3.8 4 4.2 4.4 4.6 4.8 5 5.2 5.4 5.6 5.8 6 6.2 6.4 6.6

Stable Isotope Dilution Assay (SIDA)Cromatograma Debido a las mismas transiciones, se requiere una buena resolución cromatogrçafica para :

• aflatoxina G1 y 13C-aflatoxina B1

• aflatoxina G2 y 13C-aflatoxina B2

DON T-2

FB1

FB2

ZEN

OTA

AFG2

AFG1

AFB2

AFB1

HT-2

Spiked maize sample,6490 QqQ


Debido a las mismas transiciones, se requiere una buena resolución

cromatográfica para :

• fumonisina B2 y B3

Stable Isotope Dilution Assay (SIDA)Cromatograma

FB3

FB2

4x10

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

1.4

1.6

1.8

2

2.2

2.4

2.6

2.8

3

Cpd 18: Fumonisin B2 + B3: +ESI MRM (706.4000 -> 336.4000)

6.46158157

6.06345538

Counts vs. Acquisition Time (min)

5.7 5.8 5.9 6 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8

FB3

FB2


Appendix - Validation of SIDA methodMethod characteristics vs. legal requirements

AnalytesLinear range

ng/mL

LOQs

(maize)

µg/kg

MRLs

(EC Reg. No

1881/2006)

Commodities

Aflatoxin B1 0.0075 - 74.6 0.04

0.1 processed cereal-based baby food

2.0-12

sum of aflatoxins:

4.0-15.0

nuts and cereals

Deoxynivalenol 0.23 - 225 2.5200

500 - 1750

processed cereal-based baby food

processed / unprocessed cereals,

bread, pasta, breakfast cereals

Fumonisin B1 0.075 - 249 2.5 200

800

1000 / 4000

processed maize-based baby food

maize-based breakfast cereals

maize / unprocessed maizeFumonisin B2 0.075 - 251 0.64

HT-2 toxin 0.2 - 202 2.0 implementation of

MRLs is expected in

the near future

unprocessed cereals and cereal

productsT-2 toxin 0.023 - 75.4 0.17

Ochratoxin A 0.023 – 23.0 0.23

0.5

3.0 / 5.0

10.0

15 / 20 / 80


processed / unprocessed cereals

dried vine fruit

spices / liquorice root / extract

Zearalenone 0.076 - 252 1.0

20

50

75-350


bread, biscuits, breakfast cereals

processed / unprocessed cereals


Muchas Gracias…

…por su atención

[email protected]

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