UNIVERSIDAD AUTONOMA DE CHIAPAS

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICASCAMPUS IV EXTENSIÓN OCOZOCOAUTLA

LICENCIATURA: QUIMICO FARMACOBIOLOGO

BIOLOGIA CELULAR

PRACTICA

“TINCION”

CATEDRATICO

DR. ANA OLIVIA CAÑAS URBINA

INTEGRANTES

ARÉVALO PÉREZ ALEXANDRA YURIKO

GÓMEZ DEL CARPIO GUADALUPE E.

MANGA CIGARROA JOSARY YAEL

GARCIA CARREÑO ILSE ALEJANDRA

GALVEZ GOMEZ MERLE YURIDIA

VISTO BUENO POR:

NUÑEZ GOMEZ JESUS WILFREDO

MARTINEZ JUARES BERENICE DEL ROSARIO

OCOZOCOAUTLA DE ESPINOSA, CHIAPAS A 5 DE MAYO DEL 2017

INDICE

RESUMEN...............................................................................................................2

MARCO TEORICO...................................................................................................3

OBJETIVO................................................................................................................5

METODOLOGIA.......................................................................................................5

RESULTADOS.........................................................................................................6

DISCUSION DE RESULTADOS..............................................................................8

CONCLUSIÓN.........................................................................................................8

REFERENCIAS........................................................................................................9

CUESTIONARIO....................................................................................................10

RESUMEN

Existen tinciones diferenciales y simples, todo tipo de tinción es empleada para

poder tener una mejor imagen de lo que se observa en el microscopio y poder

identificar estructuras.

Las tinciones diferenciales son aquellas donde se usan más de una sustancia para

poder realizar la tinción, como la tinción de Gram.

Dicha tinción es usada para identificar bacterias, poniendo o dando un color ya

sea rosa o azul, dependiendo del tipo de color que se observe se ira clasificando

en Gram positiva o Gram negativa.

Esta tinción se usará con el fin de poder observar cómo es que actúa una tinción

diferencial en una célula animal y en especial esta tinción.

En la tinción simple se usa solo un tipo de sustancia. Como el azul de metileno el

cual se empleó en células vegetales, con la finalidad de observar estructuras en

este tipo de células.

Las células es la principal unidad de todo ser vivo. Las células procariotas donde

se clasifican las bacterias y archea, este tipo de célula miden de 1000 a 5000 nm.

Cuenta con pared celular, capsula, nucleoide, ribosoma y tiene una división celular

directa.

Las células eucarionte, en ella se encuentran las células animal y vegetal, cuenta

con nuleolo, núcleo en el cual se encuentra el ADN, vacuola y tiene una división

por mitosis. Esta célula mide de 10 a 50 micras. En ella también se encuentran

organelos como el aparato de Golgi y el retículo endoplasmatico rugoso y liso.

Tener todos estos conocimientos, será importante para diferenciar una tinción

simple de una diferencial, cuando estas se observen en el microscopio; se pudo

visualizar con los diferentes objetivos una tinción de Gramm positivo, se sabe por

la coloración que se tuvo, al realizar esa tinción.

MARCO TEORICO

TINCIONES

La mayoría de las observaciones iniciales de los microorganismos se

realizan con preparados teñidos. El termino tinción significa simplemente

colorear los microorganismos con un colorante que destaque ciertas

estructuras. Sin embargo, antes de teñir los microorganismos se los debe

fijar (adherir) al portaobjeto. El proceso de fijación produce la muerte

simultánea de los microorganismos y su adherencia al portaobjeto. Cuando

se tiene que fijar una muestra se extiende una película delgada del material

que contiene los microorganismos sobre la superficie del portaobjeto, esta

película, denominada extendido, se deja secar al aire. En la mayor parte de

los procedimientos de tinción el portaobjeto se fija pasándolo varias veces a

través de la llama de un mechero bunsen con el lado del extendido hacia

arriba o cubriéndolo con alcohol metílico durante 1 minuto. Se aplica el

colorante, se lava con agua y se seca con papel absorbente. Una vez

efectuado el procedimiento, los microorganismos están listos para la

observación microscópica (Tortora, Funke, & Case, 2007).

“Los colorantes son sales compuestas por un ion positivo y un ion negativo, uno

de los cuales esta coloreado y se conoce como cromo foro” (Tortora, Funke, &

Case, 2007)

TIPOS DE TINCION

Tortora, Funke, & Case (2007) dice que la tinción simple es una solución

acuosa o alcohólica de un colorante básico único. Se utiliza para poder

visualizar las formas y las disposiciones celulares. Algunas de las tinciones

simples utilizadas con frecuencia en el laboratorio son el azul de metileno,

la carbolfucsina, el violeta de genciana (cristal violeta) y safranina. Se

puede usar un mordiente para mejorar la unión entre el colorante y la

muestra.

Tinción Diferencial

A diferencia de las tinciones simples, las tinciones diferenciales reaccionan de

modo diferente con las distintas clases de bacterias y por lo tanto pueden ser

empleadas para establecer una distinción entre ellas. Las tinciones

diferenciales utilizadas con más frecuencia para las bacterias son la tinción de

Gram y la tinción de ácido-alcohol resistencia (Tortora, Funke, & Case, 2007)

Tinción de Gram

Tortora, Funke, & Case (2007) dice que “la tinción de Gram fue desarrollada

por el bacteriólogo danés Hans Christian Gram en 1884 y es uno de los

procedimientos de tinción más útiles porque permite clasificar las bacterias

en dos grandes grupos: gram positivas y gram negativas” (Img 1).

En el procedimiento de tinción de Gram se utiliza un colorante de violeta

(violeta de genciana), el yodo como mordiente, un decolorante alcohólico y

un colorante rojo de contraste. Las bacterias grampositivas retienen la

coloración violeta después del paso de la decoloración; las bacterias gram

negativas no la retienen y aparecen de color rosado después del agregado

del colorante de contraste (Tortora, Funke, & Case, 2007).

OBJETIVO

Identificar las partes y sistemas que componen al microscopio, así como el

debido montaje y enfoque de diferentes muestras problema.

Saber diferenciar entre una tinción simple y una diferencial.

METODOLOGIA

Muestras

Preparación con tinciones simples

“Microfotografía de bacterias teñidas

con Gram los bacilos y los coco (de

color violeta) son grampositivas y los

vibriones (de color rosado) son gram

negativas” (Tortora, Funke, & Case,

2007) (Img 2).

Imagen 1. Preparado de tinción de Gram

Imagen 2. Microfotografia de bacterias teñidas con Gram.

Preparación con tinciones diferenciales

Montaje y enfoque de muestra

Coloque cada una de las muestras sobre la platina a una distancia focal apropiada

para el alumno; obtenga un mejor enfoque observando por los oculares y

manipulando los tornillos macro métrico y micrométrico. Para empezar a enfocar

siempre utilice el objetivo de menor resolución hasta llegar al objetivo que le

proporciona la mejor resolución y enfoque en una muestra específica. Se sugiere

iniciar el enfoque con el objetivo de 10X. Una vez enfocada la muestra, el alumno

buscará obtener una mejor nitidez de la muestra mediante la manipulación del

diafragma y centrará la iluminación del campo de observación con ayuda

del tornillo del condensador. Anote las observaciones en la tabla de registro y

discuta.

RESULTADOS

Como resultado de la práctica de microscopio se observó una tinción de Gram y

una hoja.

La muestra de tinción de Gram se observa las bacterias Gram positivas, con el

objetivo de 4x las bacterias se miraban en diminutos puntitos azules, se observó

muchos de ellos, la diferencia al ver con el objetivo de 10x la imagen de la

bacteria, se aumentó y se observó pequeños palitos alargados, con el objetivo de

40x se logró observar con más claridad a la bacteria.

Con la visualización de la hoja en el microscopio se observó con el objetivo de 4x

se miraban diminutos cuadros verdes, al pasar el objetivo a 10x la imagen de los

cuadros verde aumento, con el objetivo 40x los cuadros verdes se miran más de

cerca con más claridad.

Hoja vista en el microscopio con el

objetivo 40x.

Hoja, visto en microscopio con el

objetivo de 10x.

Tinción de Gram positivo con una

coloración azul, visto con el objetivo

de 4x.

Tinción de Gram positivo, con los

objetivos de 10x.

Tabla 1. Observaciones de la Tinción de Gram y la célula vegetal

Objetivo Observaciones

Objetivo 4 Se observan manchas y puntos

dispersos con un color morado.

Objetivo 10 Se observan las mismas manchas

Todas las imágenes fueron tomadas con la cámara de 13 megapíxel Huawei por Josary Yael Manga Cigarroa.

dispersas y puntos con mayor tamaño

y mejor visualización.

Objetivo 40 En este caso se observan pequeñas

bacterias, se observan las mismas

manchas con mayor definición y se

observan mejor las características.

Tabla 2. Resultados obtenidos de Tinción de Gram

DISCUSION DE RESULTADOS

“La tinción de Gram se informa con la identificación o no de bacterias. Si hay

bacterias, el microbiólogo indicará si son Gram positivas (púrpuras) o Gram

negativas (rosas), qué forma tienen, y cómo se organizan” (Webconsultas, 2016).

Por lo cual en el frotis se observó minúsculas manchas teñidas de azul-violeta las

cuales se identificó como las bacterias Gramm positivas, después se pasó a los

demás objetivos, una por una para ver cada vez más cerca la tinción, el color se

dispersaba más por el simple hecho que la tinción estaba lavada de más y se

dificulto reconocer el tipo de tinción debido a que la muestra usada fue un frotis el

cual estaba mal hecho. En cuanto lo observado con la hoja, no se pudo distinguir

bien la pared celular debido a que la hoja estaba un poco gruesa.

Al observar en el microscopio con una mejor resolución se identificó las paredes

celulares de las células que se encontraban en la hoja, aunque no se alcanzó a

observar algún otro organelo. En el frotis con tinción de Gram solo se pudo

observar Gram positivas en algunas partes del frotis.

CONCLUSIÓN

De acuerdo con los objetivos no se logró al cien por cierto cumplir con ellos debido

a que se tuvo problemas con la observación de la célula vegetal, como ya se

mencionó la muestra de este tipo de célula esta gruesa, en cuanto a las tinciones

diferenciales se logró reconocer entre una tinción simple y una diferencial, en este

caso una tinción de Gram.

REFERENCIAS

Alberts, B., Bray, D., Hopkin, K., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., . . . Walter, P. (2004). Introducción a las células. En B. Alberts, Introducción a la biología celular (págs. 8-10). España: Editorial medica panamericana.

Tortora, G., Funke, B., & Case, C. (2007). Bases de la microbiologia. En G. J. Tortora, Introduccion a la microbiologia (págs. 68-71). España: Editorial medica panamericana.

Vaivasuata. (28 de Septiembre de 2014). Diferencia entre globulos rojos y globulos blancos Obtenido de Salud: http://diferenciaentre.info/diferencia-entre-globulos-rojos-y-globulos-blancos/

Webconsultas. (2016). Pruebas medicas. Tinciòn de Gram. Obtenido de http://www.webconsultas.com/pruebas-medicas/resultados-de-la-tincion-de-gram-13403

CUESTIONARIO

1. Defina longitud de onda, espectro visible, resolución y apertura numérica

R. Longitud de onda: es la distancia que hay entre dos crestas.

Espectro visible: es la luz que alcanza a percibir el ojo humano.

Resolución: el alcance que tiene el ojo humano o ya sea un microscopio u otro aparato que se use para observar o percibir cosas.

Apertura numérica: magnitud del ángulo en donde llega de enfoque de luz.

2. ¿Cuál es la importancia del uso del condensador?

R. Nos ayuda a tener una mejor resolución de la muestra.

3. ¿Qué diferencia hay entre el ojo humano, microscopio óptico y microscopio electrónico?

R. Alberts et al, 2004, dice que el ojo humano tiene una resolución de aproximadamente 200 µm, el microscopio óptico tiene una mínima resolución de 200 nm y el microscopio electrónico tiene un resolución mínima de 0,2 nm

4. ¿Para qué se emplea el microscopio de campo oscuro, el microscopio de contraste de fases y el microscopio de fluorescencia? ¿Qué es microscopia led?

R. El microscopio de campo oscuro, se utiliza para examinar microorganismos vivos que no se pueden observar en un microscopio común, debido a que no pueden teñirse con los métodos estándares (Tortora, Funke, & Case, Bases de lamicrobiologia, 2007).

Microscopio de contraste de fase, permite observar con as detalle las estructuras internas de los microorganismos vivos.

Microscopio de fluorescencia, se utiliza cuando las células son teñidas con colorantes fluorescentes específicos, estos microscopios tienen esa capacidad de poder observar esas células, como el del DNA (Alberts, et al, 2004)

Microoscopia led, es un nuevo sistema de iluminacion para los microscopios y asi tener una mejor resolucion de las muestras.

5. Explique qué son tinciones simples y qué son tinciones diferenciales y dé 2 ejemplos de cada una de ellas.

R. Las tinciones simples son aquellas que solo tienen un solo componente, como el azul de metileno o safranina.

Las tinciones diferenciales, son las que tienen más un componente o donde se usan varias, como en la tinción de Gram y tinción de Wright.

6. ¿Por qué existen objetivos con diferentes aumentos? ¿Le sirvieron en la presente práctica? Explique sus respuestas ¿Qué dificultades se presentarían si se iniciara un enfoque de muestra con la lente de mayor aumento? ¿Por qué debe emplearse aceite de inmersión con el objetivo de 100X?

R. Existen varios objetivos con diferente aumento, para que tenga diferentes perspectivas de la muestra. Cada objetivo nos fue útil esta práctica, para observar con diferente resolución la muestra, en este caso fue un cabello.

No se va poder observar bien debido a que para el objetivo de 100x es necesario usar aceite de inmersión, este se usa para que los fotones no se escapen por completo y la luz sea dirigida hacia la muestra y tener una mejor resolución.