KINGDOM Of SAUDI المملكة العربية السعوديةARABIA

Ministry of وزارة التعلـيم العالـيHigher Education عبد الرحمن جامعة االمــيرة نـورة بنت

Princess Nora Bint Abdul Rahman University

كلية العلوم College of Sciences

تقرير تقنية حيوية Biotechnology Report

321حياBIO321

CH1شعبة Group Ch1

اعداد كل من الطالبات:Prepare students:

والء علي القحطاني هنوف عبد العزيز البازAl-qahtani Wala'ali Al- baz

Hanouf abdulazizسارة محمد النفيع منى راشد الشايعAl-shaya Mona rashe Al-nafea

Sara mohammed سلوي علي القحطاني

Al-qahtani Salwa ali

(lab 1)احتياطات االمن والسالمه في المعامل والمختبرات 

مقدمه : المعمل هو مكان للتجارب العلميه وال يجب ان يكون مكان لعمل نشاطات

.اخرى

الهدف: معرفة احتياطات السالمه في مختبرات

التقنيه الحيويه : - اعملي بحذر وحرص شديد في١  

المختبرات لسالمتك و سالمة زمالئك. - يمنع االكل و الشرب داخل نطاق٢  

المختبر - رفع الشعر للوقايه و الحذر٣  - لبس االب كوت خطوه مهمه لوقاية الجسم٤  - تخصيص مكان واحد للعمل للتركيز و الدقه٥   - تعقيم المكان قبل و بعد العمل٦  - كتابة الرقم و االسم مهم حتى ال يختلط مع عينات آخرى٧  

النتيجه: *معرفة قانون حماية الصحه من المواد الخطره

*تصنيف مخاطر الموادCOSHHوفق نصائح

*اآللزام في الوقايهالشخصيه و أهميتها

(lab 2)

DNA Extraction

(DNAاستخالص الحمض النووي )مقدمة:

)االسم العلمي التوت األرضي  أو الفريز أو الشليك األناناسي أو الفراولةFragaria x ananassaالوردية الفصيلة من الشليك جنس يتبع نباتي نوع ( هي

أيضاً. وهي من محاصيل الثمرة ويدعى بفاكهة الرشاقة، وتطلق التسمية على الخضر غير التقليدية، ويمكن القول بأنها من المحاصيل البستانية ذات العائد

الكبير ويمكن تصديرها مجمدة أو مصنعة أو طازج وهي غنية باألمالح المعدنية والفسفور، كما تحتوي والحديد كالكالسيوم حيث تحتوي على األمالح المعدنية

سكر الفواكه، كما تحتوي على كميات وحامض التفاح، وعلى حامض الليمون علىA، B، Cعالية من فيتامينات

الهدف:االدوات:

أكواب بالستيكية ,. قطارات بالستيك,. ورق خاص للترشيح,. قمع ,. مجموعة من مالعق

القياس,. سكين من البالستيك أو الحديد لقطع الفراولة .,مالعق للخلط والهرس ., شامبو. ,ماء مقطر .,ملح الطعام )كلوريد

الصوديوم(.الطريقة:

إضافة ملعقة واحدة صغيرة من الشامبو في كوب من األكواب الورقية نضيف قليل من ملح الطعام بين قرصات األصابع.

1 / 3 مل أو حوالي 30 مل من الماء المقطر لجعل الحجم النهائي 25 أ- إضافة حجم الكوب المستخدم.

ب - نذوب الملح والشامبو وتحريكهم ببطءلتجنب الرغوة

حبة1 / 2باستخدام السكين، نقشر ونقطع الكيوي إلى قطع صغيرة

نأحذ ملعقة كبيرة من الكيوي المقطع ويضاف3على المحلول السائل في الخطوة رقم

10نخلط الخليط بحذر مع هرس الكيوي لمدة دقائق إلى أن يصبح الخليط شبه سائل

رشح الخليط الناتج بورق الترشيح ,ونصبالخليط لتصفيته وترك المحلول لعدة دقائق

مل من كحول اإليثانول البارد في أنبوب اختبار ,5نضع مل من محلول الكيوي ونضعه على الكحول1ونسحب

3 - 2نترك المحلول في درجة حرارة الغرفة لمدة دقائق على حامل األنابيب , مع مراعاة عدم رج أنبوبه

االختبار. نالحظ تجمع خيوط الحمض النووي البيضاء وتترسب

في طبقة الكحول

النتيجة: .رؤية خط فاصل بين االيثانول و محلولDNAالحصول على خيوط طويلة و هي

.DNAالفراولة و هو التعليق:

استخدم في هذه الطريقة )محلول( غسيل و تنظيف ( التي ساعدة علىDetergentاألطباق )

تكسيراألغشية البالزمية للخاليا وتكوين مركبات معقدة مع الدهون والبروتينات التي تدخل في تركيب الغشاء البالزمي مما ادء

إلى ترسيب الدهون والبروتينات وخروجهما من المحلول, يتحد مركب المنظف DNAمع الغشاء الخلوي وغشاء النوويه ويكونان معاً مركب بالتالي يستطيع

داخل النواة من التحرر , كما استخدم في هذه الطريقة المبسطة محلول )أو (( الذي يحتوى على إنزيماتMeat tenderizerمسحوق( معالجة اللحوم

(مثل إنزيم البابين هذه اإلنزيمات تعمل علىProteasesهدم البروتينات ) فيDNAتكسير البروتينات وخاصة البروتينات المرتبطة بالحامض النووي

بهذه الطريقةDNAداخل الكروموسوم بالخلية. كما يستخدم في عملية عزل ) وذلك ألن كاتيونات الصوديوم تعادلNaClملح الطعام )كلوريد الصوديوم

الشحنات السالبة الموجودة على مجموعات الفوسفات في الحامض النوويShiedingًمما يؤدي إلى إخفاء أو تغطية ) ( هذه الشحنات الموجودة طبيعيا

على الحامض النووي وهذا يجعل جزيئات الحامض النووي ال تتنافر مع بعضها البعض وبالتالي يمكن ترسيبها وخروجها من المحلول في وجود الكحول الذي

يسحب الماء من حول جزيئات الحمض النووي.

(lab 3) Micropipettes

Prior to lab you should understand: • The function of micropipettes in the laboratory

I. Objective: • Learn how to use a micropipettor II. Background:

Micropipettors are the standard laboratory equipment used to measure and transfer small volumes of liquids.

A. Parts of a micropipette a. Plunger button b. Tip ejector button c. Volume adjustment dial d. Digital volume indicator e. Shaft f. Attachment point for a disposable tip

abcdfeabcdfe  B. Three sizes of micropipettes

The micropipettors in this laboratory come in three different sizes each of which measures a different range of volumes. The three sizes are P20, P200 and P1000. These sizes are noted on the top of the plunger button.

Size Micropipette Range of volumes measured P20 0.5-20μl P200 20-200μl P1000                              100-1000μl

C. Adjusting Volume on micropipettes

The black volume adjustment dial near the top of the micropipette allows you to adjust the volume that is measured. It can be dialed to the left or right to increase or decrease the volume.

The digital readout shows the volume that will be measured. As you turn the volume adjustment dial, the numbers in the digital readout will change.

Prior to lab you should understand: • The function of micropipettes in the laboratory

a

bc

d

e

f

On each of the three sizes of micropipettes (P20, P200, P1000) the digital readout has three numbers. These three numbers correspond to different volumes on the different size pipettes. See the figure below for instructions on interpreting digital readout.

D. Pipette Tips

Liquids are never drawn directly into the shaft of the pipette. Instead, disposable plastic tips are are attached to the shaft. There are two sizes of tips. The larger blue tips are used for the P1000. The smaller clear tips are used for the P20 and P200. The tips are racked in plastic boxes with covers. When you receive a box, it will be sterile. Please be careful 

when touching box or tips not to contaminate them. The box should be closed when not in use to prevent airborn contamination.

Inserting the Tip

1. Select the correct size tips. 2. Open the box without touching the tips with your hands. 3. Insert the micropipette shaft into the tip and press down firmly. This will attach the tip to the shaft. 4. Remove the micropipettor with the tip attached. 5. Close the box without touching the tips with your hands.

)lab 4(( من الدمDNAاستخالص الحمض النووي )

الهدف :استخالص الحمض النووي

األدوات : (RBC Lysis Solutionعينات الدم محلول تكسير كريات الدم الحمراء )

( محلول تكسيرProtein Precipitation Solutionمحلول ترسيب البروتين) (Cell Lysis Solutionمحتويات الخلية )

%70كحول اإليثانول

الزجاجيات:Eppendorf tube(أنابيب اإلبندورف. ماّصات مختلفة الحجم ) )5مل , 1

مل(.ماّصات50مل , 15مل( أنابيب طرد مركزي بالستيك سعة)10مل , .بالستيك

وظيفة المحاليل خالل عملية االستخالص:1)  )RBC lysis solution.)وظيفته تكسير كريات الدم الحمراء 2)cell lysis solution  وظيفته تذويب محتويات الخلية ماعدا(DNA.)3) protein  precipitation solution.)وظيفته التخلص من البروتين( (.DNA )وظيفته تجميع خيوط    isopropanol( األيزوبروبانول 4  DNA )وظيفته غسل وتنظيفEthanol alcohol%، 70( كحول اإليثانول 5

من الشوائب(.

6)hydration solution  DNA وظيفته تذويب خيوط(  DNA .)

(جهاز طرد مركزيCentrifuge.)( جهاز الطيف المرئيSpectrophotometer)

الطريقة :بواسطة أنابيب تجميع الدم تجميع الدم

عمل فصل لها بواسطة جهاز الطرد المركزي دقيقة.15دورة في الدقيقة لمدة 3000

طبقات بعد عملية الفصل 3تظهر

سحب الطبقة العليا وهي البالزما و وضعها في أنابيب صغيرة

نعمل على الطبقة الوسطى والسفلى وذلك بإضافة محلول تكسير كريات الدم

(RBC Lysis Solutionالحمراء )

دقايق5يرج باليد لمده

Proteinنضيف محلول ترسيب البروتين) Precipitation Solution)

دقائق في درجة10نعمل لها رج ونتركها حرارة الغرفة

( centrifugeنضع العينات في جهاز الطرد المركزي )سوف يظهر طبقتين

نحتفظ بالرائق ونتخلص من الراسبوذلك بنقل الرائق ألنابيب جديدة

15% وتخلط باليد لمده 70اضافه اثانول دقيقه

نضع العينات في جهاز الطرد المركزي ويتم ازاله الرائق ومن ثم قلب االنبوبه على ورق ماص

دقيقه15تترك و

اضافه الماء المؤين و بعدها تحفظ بالثالجه

لمدة يوم كامل لتذوبDNAتترك عينة الحمض النووي الدنا ثم نقيس التركيز بجهاز الطيف المرئي )

Spectrophotometer)

النتيجه : و استخالصه من الدمDNAتظهر لنا فصل

(lab 5)

كيفية اعداد السماد العضويCompost

الهدف من التجربة : الحصول على سماد طبيعي )أورجانيك( وصحي للغاية لتغذية النبات دون الحاجة

الى استخدام أي سماد كيماوي ضار بالصحة ولتقليل مخلفات المنزل بشكل كبير مما يسهم في حل مشكلة المخلفات عن طريق اعادة التدوير

االدوات المستخدمة في التجربة : وعاء يحتوي على ثقوب وفتحات لغرض التهوية

مواد عضوية خضراء كالخضر الورقية وبقايا الخضروات والفواكة مواد عضوية بنية : قش , نشارة خشب ’ قش ’ مخلفات القهوة

رشاش ماء , تربة

طريقة العمل : نقوم بإضافة أوراق اشجار بنية جافة او اوراق

جرائد في الوعاء ثم نبللها بالماء ثم نقوم بوضع المخلفات النباتية فقط ونبللها بالماء

مرة أخرى ثم نقوم بدفن أي مخلفات نباتيةخضراء تحت طبقة من التربة ونرشها بالماء أي تكون الطبقات : مواد صلبة ثم تربة )مواد بنية( ثم مواد خضراء ثم تربة وهكذا ... بحيث يكون الوعاء يحتوي على طبقات متراصفة فوق بعضها كما في الصورة وبعد كل

طبقة نبللها بالماء ونعرضها مدة للهواء

النتيجة : يصبح الكومبوست جاهزا لالستخدام عندما تتحلل المخلفات تحلل كامال و تاما

وتصبح رائحة الكومبوست زكية مثل رائحة الحدائق .

(Lab 6)Plant tissue culture

النباتية االنسجة زراعةمقدمة:

المقصود بزراعة األنسجة هي زراعة أجزاء نباتية في نظام غذائي متوازن وتحت ظروف بيئية متحكم بها لتشجيع انقسام خاليا تلك األجزاء النباتية وبالتالي تكشفها

إلى أعضاء وتكوين نباتات كاملة.

الهدف من التجربة :

الحصول على نباتات خاليه من أي أمراض من بكتيريه أو فيروسيه او فطريه والحصول على أصناف جديده ومقاومه لألمراض والظروف

.الجويه

األدوات:ملقط.-1بيكر.-2بيئة.-3فالسك.-4قفازات.-5.كمامة-6

الطريقة: قص األجزاء المراد زراعتها.-1

2 نبدأ عملية تعقيم-

السطحي األجزاء المراد اإلكثار عن طريقها سواء كانت) أوراق،درنات، براعم عقد(

3 بعد ذلك يتم غمر النسيج-

لقتل الملوثات الموجودة علي النباتي في محلول التعقيم وذلك% محلول الكلوروكس . 5سطح النسيج النباتي بـ

- بعد أن تتم عملية التعقيم السطحي للنسيج النباتي يجب غسيل4 النسيج بالماء معقم والمقطر مرتين مع تكرار عملية الغسيل بالماء

حتى يتم إزالة المحاليل السابقة. - نقوم بإزالة حواف األنسجة المتضررة من المحاليل المنظفة ويتم5

سنتيمتر مكعب1-0.5تقسيم النسيج الي أجزاء بمساحات من زراعة األجزاء في الوسط الغذائي المناسب يلف على االنابيب-7

شريط محكم ثم نضعه في غرفة الحضن مع تعديل مدة اإلضاءة

ودرجة الحرارة والبد مراعاة العمل في غرفة حماية بقرب لهب وفي ظروف

معقمة وأدوات معقمة.

النتيجة: الحصول على نبات متكامل

.األجزاء

التعليق : أن النباتات الناتجة من

زراعة األنسجة تكون حساسة جداً نظراً لنموها وتطورها في مزارع ذات طبيعة خاصة

تتوفر فيها كل احتياجات النبات، و من ناحية أخري فإن عملية التمثيل الضوئي في مزارع األنسجة تتم بمعدالت ضئيلة جداً مقارنة بالنبات النامي في الخارج، و لذلك تحتاج نباتات زراعة األنسجة إلي

فترة أقلمة حتى يمكنها النمو في الصوب ثم الحقل بدون أيمشاكل.

( Lab 7)

عزل البالزميد من بكتيريا القولونالطريقة:

1M tris PH8:

EDTA M 0.5:

( :A1 هو )TAتحضير

خ

المطلوب:

طريقة العمل:تحضير البكتيريا.(1

تحليل الخاليا.(2