第五章 中药制剂的含量测定第五章 中药制剂的含量测定（（ Content DeterminationContent Determination ））

概 述概 述一、含量测定的定义和意义

中药制剂的含量测定是指用适当的化学方法或仪中药制剂的含量测定是指用适当的化学方法或仪器分析方法对制剂中某种（些）有效成分或有效部器分析方法对制剂中某种（些）有效成分或有效部位进行的定量分析。并以其测定结果是否符合药品位进行的定量分析。并以其测定结果是否符合药品标准的规定来判断药品的优劣，是控制和评价药品标准的规定来判断药品的优劣，是控制和评价药品质量的重要方法。质量的重要方法。

二、含量测定方法二、含量测定方法 中药制剂含量测定的方法包括化学分析法和仪中药制剂含量测定的方法包括化学分析法和仪

器分析法两大类。由于中药制剂组成复杂，仪器器分析法两大类。由于中药制剂组成复杂，仪器分析法更为常用。《中国药典》中药制剂含量测分析法更为常用。《中国药典》中药制剂含量测定方法概况见下表。定方法概况见下表。

本章重点介绍浸出物测定法、挥发油测定法、本章重点介绍浸出物测定法、挥发油测定法、分光光度法 、分光光度法 、 TLCSTLCS 、 、 HPLC HPLC 和和 GCGC 等。等。

方法 总数 修订 新增 删除方法 总数 修订 新增 删除 HPLC 339 30 282 0HPLC 339 30 282 0 TLC 32 3 12 12TLC 32 3 12 12 GC 23 3 19 0GC 23 3 19 0 分光光度法 分光光度法 18 0 3 918 0 3 9 滴定法 滴定法 13 0 3 013 0 3 0 重量法 重量法 5 0 1 15 0 1 1 氮测定法 氮测定法 5 1 1 05 1 1 0 挥发油测定法 挥发油测定法 3 0 0 13 0 0 1 浸出物测定法 浸出物测定法 13 1 2 1 13 1 2 1 总计 总计 456 37 327 23456 37 327 23

仪器分析法

化学分析法

第一节 浸出物测定法第一节 浸出物测定法（（ Determination of ExtractiveDetermination of Extractive ））

一、定义一、定义

浸出物测定法系根据制剂中化学成分的溶解性，浸出物测定法系根据制剂中化学成分的溶解性，选择适当的溶剂浸提选择适当的溶剂浸提 (( 提取提取 )) 样品，并测定浸出物样品，并测定浸出物（提取物）的含量，以此来控制药品的质量。（提取物）的含量，以此来控制药品的质量。

二、意义二、意义

这是一种较为粗略的定量分析方法。但对于有效成这是一种较为粗略的定量分析方法。但对于有效成分不明确或无法建立确切的定量分析方法的中药材及分不明确或无法建立确切的定量分析方法的中药材及其制剂，尚具有一定的意义。其制剂，尚具有一定的意义。

《中国药典》附录收载了三种测定方法：水溶性浸《中国药典》附录收载了三种测定方法：水溶性浸出物测定法、醇溶性浸出物测定法和挥发性醚浸出物出物测定法、醇溶性浸出物测定法和挥发性醚浸出物测定法。有的品种还采用了乙酸乙酯浸出物测定法。测定法。有的品种还采用了乙酸乙酯浸出物测定法。《中国药典》收载的中成药浸出物测定品种及其规定《中国药典》收载的中成药浸出物测定品种及其规定见表见表 4-184-18 。。

供试品需粉碎，使能通过二号筛，并混合均匀供试品需粉碎，使能通过二号筛，并混合均匀。。

类别 品名 溶剂 方法 限度（ % ）醇 溶性 浸出 物测 定

七厘散 乙醇 热浸法 ≥60.0刺五加浸膏 甲醇 热浸法 ≥60.0

刺五加片 甲醇 热浸法 ≥80mg/ 片

儿康宁糖浆 正丁醇 ≥3.0

独一味胶囊 正丁醇 ≥8.0

鼻窦炎口服液 正丁醇 ≥1.2

挥 发性 醚浸 出物 测定

午时茶颗粒 乙醚 ≥0.35沉香化气丸 乙醚 ≥0.40

乙醚 ≥0.10九味羌活丸 乙醚 ≥0.30

龟龄集 乙醚 ≥0.25水浸出物测 定 暑症片 冷浸法 ≥25.0

乙酸乙脂浸出物测定

三、水溶性浸出物测定法三、水溶性浸出物测定法 本法系以水为溶剂，对制剂中水溶性成分进行提取，并计本法系以水为溶剂，对制剂中水溶性成分进行提取，并计

算其在制剂中的含量算其在制剂中的含量 (%)(%) 。本法包括冷浸法和热浸法。后者。本法包括冷浸法和热浸法。后者适用于不含或少含淀粉、粘液质等成分的样品。适用于不含或少含淀粉、粘液质等成分的样品。

11 ．冷浸法．冷浸法 取供试品约取供试品约 4g4g ，称定重量，置，称定重量，置 250~300ml250~300ml 的锥形瓶中，精的锥形瓶中，精密加入水密加入水 100ml100ml ，塞紧，冷浸，前，塞紧，冷浸，前 66 小时内时时振摇，再静小时内时时振摇，再静置置 1818 小时，用干燥滤器迅速滤过，弃去初滤液，精密量取滤小时，用干燥滤器迅速滤过，弃去初滤液，精密量取滤液液 20ml20ml ，置己干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴蒸干后，于，置己干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴蒸干后，于 1105℃05℃干燥干燥 33 小时，移置干燥器中，冷却小时，移置干燥器中，冷却 3030 分钟，迅速精密称分钟，迅速精密称定重量，除另有规定外，以干燥品计算供试品中水溶性浸出物定重量，除另有规定外，以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量（的含量（ W/W %W/W % ）。）。

含量（含量（ W/W %W/W % ） ） = = ×100%×100%

mmii 为水溶性浸出物重量（为水溶性浸出物重量（ gg ））

mmss 为干燥供试品的重量（为干燥供试品的重量（ gg ）） == 供试品重量供试品重量 ××（（ 1﹣1﹣含水量含水量 %)%) ））

2.2. 热浸法热浸法 (( 中成药较少用 自学中成药较少用 自学 ))3.3.实例 暑症片的水溶性浸出物测定（实例 暑症片的水溶性浸出物测定（ P128P128 ））

mi×100

20 × ms

四、醇溶性浸出物测定法四、醇溶性浸出物测定法 本法系以甲醇、乙醇或正丁醇为溶剂，提取药品中相应的醇溶性成分，并计本法系以甲醇、乙醇或正丁醇为溶剂，提取药品中相应的醇溶性成分，并计

算其含量（ 算其含量（ %% ）。正丁醇浸出物测定法主要用于含较多皂苷类成分的制剂，）。正丁醇浸出物测定法主要用于含较多皂苷类成分的制剂，更具专属性。更具专属性。

1.1. 甲醇、乙醇浸出物的测定甲醇、乙醇浸出物的测定 照水溶性浸出物测定法测定。照水溶性浸出物测定法测定。 2.2. 正丁醇浸出物的测定正丁醇浸出物的测定 按各品种项下规定的方法测定。一般说来，水溶液制剂可直接用水饱和的正按各品种项下规定的方法测定。一般说来，水溶液制剂可直接用水饱和的正

丁醇提取数次，合并提取液，置已干燥恒重的蒸发皿中，蒸干，置丁醇提取数次，合并提取液，置已干燥恒重的蒸发皿中，蒸干，置 105℃105℃干燥干燥33小时，移置干燥皿中，冷却小时，移置干燥皿中，冷却 3030 分钟，迅速精密称定重量，计算供试品中正丁分钟，迅速精密称定重量，计算供试品中正丁醇浸出物的含量（醇浸出物的含量（W/V %W/V % ）。固体制剂可先加水溶解，移至分液漏斗中，用水）。固体制剂可先加水溶解，移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取数次，合并提取液，照上述方法蒸干，干燥，称定浸出物重饱和的正丁醇提取数次，合并提取液，照上述方法蒸干，干燥，称定浸出物重量，计算出制剂中正丁醇浸出物的含量（量，计算出制剂中正丁醇浸出物的含量（W/W %W/W % ）。）。

3.3.注意事项注意事项 （（ 11 ）回流加热乙醚须在水浴上进行。）回流加热乙醚须在水浴上进行。 （（ 22 ）蒸发皿中挥去乙醚须在室温下风橱中进行。）蒸发皿中挥去乙醚须在室温下风橱中进行。 （（ 33 ）加热挥去浸出物中挥发性成分时，应缓缓）加热挥去浸出物中挥发性成分时，应缓缓

加热至 加热至 105℃105℃ 4.4.实例实例 （（ 11 ）儿康宁糖浆正丁醇浸出物的测定）儿康宁糖浆正丁醇浸出物的测定 （（ 22 ）刺五加浸膏的甲醇浸出物测定）刺五加浸膏的甲醇浸出物测定

五、挥发性醚浸出物测定法五、挥发性醚浸出物测定法 本法以乙醚为溶剂，对制剂中挥发性醚溶性成分进行提取，并计算本法以乙醚为溶剂，对制剂中挥发性醚溶性成分进行提取，并计算

其在制剂中的含量（其在制剂中的含量（ W/W %W/W % ）。本法主要用于含挥发性成分较多的）。本法主要用于含挥发性成分较多的制剂，专属性较强。制剂，专属性较强。

1.1. 测定法测定法 取供试品（过四号筛）取供试品（过四号筛） 2~5g2~5g ，置五氧化二磷干燥器中，干燥，置五氧化二磷干燥器中，干燥 1212 小小

时，精密称定重量（时，精密称定重量（ mmss）） ,, 置索氏提取器中，加乙醚适量，除另有置索氏提取器中，加乙醚适量，除另有规定外，加热回流提取规定外，加热回流提取 88 小时，取乙醚液，置干燥至恒重的蒸发皿中，小时，取乙醚液，置干燥至恒重的蒸发皿中，放置，挥去乙醚，残渣置五氧化二磷干燥器中，干燥放置，挥去乙醚，残渣置五氧化二磷干燥器中，干燥 1818 小时，精密小时，精密称定（称定（ mm11 ），缓缓加热至），缓缓加热至 105℃105℃ ，并于，并于 105℃105℃ 干燥至恒重（干燥至恒重（ mm22 ）。）。其减失重量即为挥发性醚浸出物的重量（其减失重量即为挥发性醚浸出物的重量（ mm11-m-m22 ）。计算，即得。）。计算，即得。

含量（含量（ W/W %W/W % ） ） = = ×100%×100%ms

m1- m2

2.2.实例实例 九味羌活丸的挥发性醚浸出物测定九味羌活丸的挥发性醚浸出物测定 本品由羌活、防风、苍术、细辛、川芎、白芷、本品由羌活、防风、苍术、细辛、川芎、白芷、黄芩、甘草、地黄等九味中药组成，其主要有效成黄芩、甘草、地黄等九味中药组成，其主要有效成分为挥发油，故测定其中挥发性醚浸出物的含量。分为挥发油，故测定其中挥发性醚浸出物的含量。

第二节 挥发油测定法第二节 挥发油测定法（ （ Determination of Volatile OilDetermination of Volatile Oil ））

一、意义一、意义 某些药品中的主要有效成分为挥发油，故《中国药典》收载某些药品中的主要有效成分为挥发油，故《中国药典》收载

了挥发油测定法，采用水蒸气蒸馏法对药品中挥发油总量进行了挥发油测定法，采用水蒸气蒸馏法对药品中挥发油总量进行测定，以控制药品质量。例如，正骨水、牡荆油胶丸、保妇康测定，以控制药品质量。例如，正骨水、牡荆油胶丸、保妇康栓和满山红油滴丸等中挥发油的测定。栓和满山红油滴丸等中挥发油的测定。

二、测定原理二、测定原理 首先利用挥发油的挥发性用水蒸气蒸馏法将其提取完全；再首先利用挥发油的挥发性用水蒸气蒸馏法将其提取完全；再利用其较强的亲脂性与水不相溶而分层，即可读取油的总量并利用其较强的亲脂性与水不相溶而分层，即可读取油的总量并求算出含量。求算出含量。

三、挥发油测定装置三、挥发油测定装置（（图图））

四、测定方法四、测定方法 供试品需粉碎后过二号至三号筛，混匀再测定。供试品需粉碎后过二号至三号筛，混匀再测定。 1.1. 甲法甲法 本法适用于测定相对密度在本法适用于测定相对密度在 1.01.0 以下的挥发油。取供试品适以下的挥发油。取供试品适

量（约相当于挥发油量（约相当于挥发油 0.5ml0.5ml ～～ 1.0ml1.0ml ），称重（准至），称重（准至 0.01g0.01g ），），置烧瓶中，加水置烧瓶中，加水 300ml300ml ～～ 500ml500ml （或适量）与玻璃珠数粒，（或适量）与玻璃珠数粒，振摇混合后，连接挥发油测定器与回流冷凝管。自冷凝管上端振摇混合后，连接挥发油测定器与回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止。加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止。置电热套中或用其他适宜方法缓缓加热至沸，并保持微沸约置电热套中或用其他适宜方法缓缓加热至沸，并保持微沸约 55小时，至测定器中油量不再增加，放置片刻，开启测定器下端小时，至测定器中油量不再增加，放置片刻，开启测定器下端的活塞，将水缓缓放出，至油层上端到达刻度的活塞，将水缓缓放出，至油层上端到达刻度 00 线上面线上面 5mm5mm处为止。放置处为止。放置 11 小时以上，再开启活塞使油层下降至其上端恰小时以上，再开启活塞使油层下降至其上端恰与刻度与刻度 00线平齐，读取挥发油量，计算即得。线平齐，读取挥发油量，计算即得。

2.2. 乙法乙法

本法适用于测定相对密度在本法适用于测定相对密度在 1.01.0 以上的挥发油。取水约以上的挥发油。取水约300ml300ml 与玻璃珠数粒，置烧瓶中，连接挥发油测定器。自与玻璃珠数粒，置烧瓶中，连接挥发油测定器。自测定器上端加水使充满刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，测定器上端加水使充满刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，再用移液管加入二甲苯再用移液管加入二甲苯 1ml1ml，然后连接回流冷凝管。将烧，然后连接回流冷凝管。将烧瓶内容物加热至沸，并继续蒸馏，其速度以保持冷凝管的瓶内容物加热至沸，并继续蒸馏，其速度以保持冷凝管的中部呈冷却状态为度。中部呈冷却状态为度。 3030 分钟后，停止加热，放置分钟后，停止加热，放置 1515 分分钟以上，读取二甲苯的容积。然后照甲法自“取供试品适钟以上，读取二甲苯的容积。然后照甲法自“取供试品适量”起，依法测定，自油层中减去二甲苯量，即为挥发油量”起，依法测定，自油层中减去二甲苯量，即为挥发油量，计算即得。量，计算即得。

五、含量计算五、含量计算 含量（含量（ V/W V/W ％）％） = ×100%= ×100%

含量（含量（ V/W V/W ％）％） = ×100%= ×100% 含量（含量（ V/W V/W ％）％） = ×100%= ×100%

挥发油体积（挥发油体积（ mlml） ） 样品体积（样品体积（ mlml） ） 样品重量（样品重量（ gg ）） 挥发油密度（挥发油密度（ g/mlg/ml））

VO

WS

WS

VO ×DO

VS

VO

VO

WS

DO

VS

第三节 可见第三节 可见 -- 紫外分光光度法紫外分光光度法（（ Ultraviolet and Visible SpectrophotometrUltraviolet and Visible Spectrophotometr

yy ）） 一、定义一、定义 根据被测物质在可见根据被测物质在可见 -- 紫外光的特定波长处或紫外光的特定波长处或

一定波长范围内光的吸收度对该物质进行定性定一定波长范围内光的吸收度对该物质进行定性定量分析的方法称可见量分析的方法称可见 -- 紫外分光光度法。紫外分光光度法。

紫外分光光度计工作原理 紫外吸收光谱图

二、特点二、特点 本法操作简便，灵敏度高，常用于中成药含测。但本本法操作简便，灵敏度高，常用于中成药含测。但本

法不具分离功能，常用于总成分的测定。法不具分离功能，常用于总成分的测定。三、定量分析的理论基础三、定量分析的理论基础 朗伯比尔定律朗伯比尔定律

A = K C LA = K C L AA为吸收度为吸收度 KK为吸收系数为吸收系数 CC 为溶液浓度为溶液浓度 LL 为溶液厚度为溶液厚度

四、药典收载了三种测定方法四、药典收载了三种测定方法

1.1.吸收系数法 仅用于吸收系数法 仅用于 UV,UV,不需对照品。不需对照品。

2.2. 对照品比较法 主要用于对照品比较法 主要用于 Vis,Vis,需用对照品。需用对照品。

3.3. 标准曲线法 主要用于标准曲线法 主要用于 Vis,Vis,需用对照品。需用对照品。

（原计算分光光度法取消）（原计算分光光度法取消）

第四节 薄层扫描法第四节 薄层扫描法（ （ Thin Layer Chromatography Scan TLCS Thin Layer Chromatography Scan TLCS ））

一、定义一、定义

薄层扫描法（薄层扫描法（ TLCSTLCS ）系指用一定波长的光照射在薄层板）系指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱中有紫外或可见吸收的斑点或经照射能激发上，对薄层色谱中有紫外或可见吸收的斑点或经照射能激发产生荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分值用于产生荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分值用于药品定性定量分析的方法。药品定性定量分析的方法。

二、特点二、特点 具有分离分析双重功能。与高效液相色谱法比具有分离分析双重功能。与高效液相色谱法比

较，具有多通道效应，可同时平行分离分析多个较，具有多通道效应，可同时平行分离分析多个样品；流动相用量少且选择范围宽、更换方便；样品；流动相用量少且选择范围宽、更换方便；固定相为一次性使用，对样品的预处理要求不高固定相为一次性使用，对样品的预处理要求不高等优点。目前随着制板、点样、展开等操作的仪等优点。目前随着制板、点样、展开等操作的仪器化及仪器性能的改进，该法检测的灵敏度，结器化及仪器性能的改进，该法检测的灵敏度，结果的精密度与准确度均大大提高，在中药及其制果的精密度与准确度均大大提高，在中药及其制剂检验中，已成为重要的分析方法。《中国药剂检验中，已成为重要的分析方法。《中国药典》中有典》中有 3232个中成药品种采用该法进行含量测定。个中成药品种采用该法进行含量测定。

三、仪器及其工作原理三、仪器及其工作原理 1.1.薄层扫描仪薄层扫描仪 中国药典采用 中国药典采用双波长双波长薄层扫描薄层扫描

仪。常用的有岛津仪。常用的有岛津 CS-930CS-930 型和型和 CAMAG-ⅡCAMAG-Ⅱ 型型等。 等。

2.2.扫描仪工作原理扫描仪工作原理

3.3. 测定方式测定方式

（（ 11 ）吸收法）吸收法

适用于有紫外（可见）吸收的成分，较常用。该法又可采适用于有紫外（可见）吸收的成分，较常用。该法又可采用反射法或透射法测定。理论上讲，透射法比反射法优越，用反射法或透射法测定。理论上讲，透射法比反射法优越，但实际工作中常用反射法，因为紫外光不能通过玻板。但实际工作中常用反射法，因为紫外光不能通过玻板。

（（ 22 ）荧光法）荧光法

适用于有荧光性质的成分，例如小檗碱等。该法仅采用反适用于有荧光性质的成分，例如小檗碱等。该法仅采用反射法测定，其灵敏度比吸收法高。射法测定，其灵敏度比吸收法高。

4.4. 测定波长测定波长 （（ 11 ）单波长）单波长 一般用于荧光测定法，即用某一波长的紫外光（激发一般用于荧光测定法，即用某一波长的紫外光（激发

光）进行扫描。对玻板和斑点的质量要求较高。光）进行扫描。对玻板和斑点的质量要求较高。 （（ 22 ）双波长）双波长 主要用于吸收测定法。该法可消除背景干扰，对玻板和主要用于吸收测定法。该法可消除背景干扰，对玻板和斑点的质量要求不高，故较常用。测定时，样品波长（斑点的质量要求不高，故较常用。测定时，样品波长（ λλss）和参比波长（）和参比波长（ λλRR）依次扫描斑点，所测吸收度为）依次扫描斑点，所测吸收度为 ΔΔA=A=AAλλs s －－ AAλλRR

样品波长（样品波长（ λλss）：即被测成分的）：即被测成分的 λλmaxmax 参比波长（参比波长（ λλRR）：即被测成分的）：即被测成分的 λλminmin或此波长处无吸或此波长处无吸

收。收。

5.5. 光束扫描方式光束扫描方式（（ 11 ）直线扫描）直线扫描 适用于规则的斑点，仅用于荧光测定法。适用于规则的斑点，仅用于荧光测定法。（（ 22 ）锯齿扫描）锯齿扫描 适用于不规则的斑点，测量误差小，被测成分积分值重现性好，故吸适用于不规则的斑点，测量误差小，被测成分积分值重现性好，故吸

收测定法常用此扫描方式。收测定法常用此扫描方式。 6.6. 光源光源（（ 11 ）钨灯（）钨灯（ WW ）） 供可见光（供可见光（ 350350 ～～ 800nm800nm ）测定，扫描有色成分的斑点。）测定，扫描有色成分的斑点。（（ 22 ）氘灯（）氘灯（ D2D2 ）） 供紫外光（供紫外光（ 200200 ～～ 400nm400nm ）测定，扫描有紫外吸收的成分斑点。）测定，扫描有紫外吸收的成分斑点。（（ 33 ）氙灯（）氙灯（ XeXe ）） 供荧光测定，发射不连续光谱，常用波长为供荧光测定，发射不连续光谱，常用波长为 365nm365nm 。。

四、含量测定方法（外标法）四、含量测定方法（外标法） TLCSTLCS 含量测定有含量测定有外标法和内标法外标法和内标法，中国药典仅采用，中国药典仅采用外标法外标法。。 1.1.原理原理 外标法系将一定量的供试品溶液和对照品溶液分别点加在外标法系将一定量的供试品溶液和对照品溶液分别点加在同一块薄层板上，展开，显色，定位，扫描被测成分和对照品同一块薄层板上，展开，显色，定位，扫描被测成分和对照品斑点，测得相应的吸收度或荧光强度积分值，根据定量关系，斑点，测得相应的吸收度或荧光强度积分值，根据定量关系，计算出被测成分的含量。计算出被测成分的含量。

2.2. 类型类型 根据对照品标准曲线性质的不同，外标法又分为外标一点根据对照品标准曲线性质的不同，外标法又分为外标一点

法和外标两点法。法和外标两点法。 若标准曲线通过原点，采用外标一点法。若标准曲线通过原点，采用外标一点法。 若标准曲线不通过原点，采用外标两点法。若标准曲线不通过原点，采用外标两点法。

外标一点法的直线方程： 外标一点法的直线方程： C = F A F C = F A F 为斜率为斜率外标两点法的直线方程：外标两点法的直线方程：

21 FAFC

12

121 AA

CCF

12

21122 AA

CACAF

、

F1 为斜率 F2 为截距

3.3.操作步骤操作步骤（（ 11 ）对照品溶液的制备）对照品溶液的制备（（ 22 ）供试品溶液的制备）供试品溶液的制备（（ 33 ）点样）点样 一般要求使用市售薄层板。一般要求使用市售薄层板。 ① ①外标一点法外标一点法：至少：至少 66个原点个原点 对照品（对照品（ RR）） 22个（同一质量）：个（同一质量）： 2R2R 供试品（供试品（ SS ）） 44个（同一质量）分个（同一质量）分 22 组：组： 2S2S1 1 2S2S22

②② 外标两点法外标两点法：至少：至少 88个原点个原点 对照品（ R） 4个 分 2 组 大质量的 2个： 2R1 小质量的 2个： 2R2

供试品（ S ） 4个（同一质量）分 2 组： 2S1 2S2

对照品与供试品应交叉点加在同一块薄层板上，目的在于消除各种误差。测定时应保证供试品原点的量在线性范围内，必要时可适当调整供试品溶液的点样量。

外标两点法外标一点法

（（ 44 ）展开）展开（（ 55 ）显色定位）显色定位 供试品色谱中待测斑点的比移值（供试品色谱中待测斑点的比移值（ RfRf值）和光谱扫描得到值）和光谱扫描得到

的吸收光谱最大吸收与最小吸收应与对照品相符，以保证测定的吸收光谱最大吸收与最小吸收应与对照品相符，以保证测定结果的准确性。结果的准确性。

（（ 66 ）扫描）扫描 应 应沿展开方向沿展开方向扫描，扫描，不得横向不得横向扫描。扫描。（（ 77 ）含量计算）含量计算 ①① 外标一点法外标一点法 ▲ ▲求出供试品被测成分（斑点）的质量求出供试品被测成分（斑点）的质量 Ms = MR X As

AR

Ms 被测成分的质量（M n=2 ）MR被测对照品的质量As 被测成分吸收度（荧光强度）积分值（ A n=2 ）AR被测对照品吸收度（荧光强度）积分值（ A n=2 ）

__

_

_

▲▲求出供试品中被测成分的含量求出供试品中被测成分的含量

含量（W/W） =Ms X 稀释倍数取样量

含量（W/ 片） =Ms X 稀释倍数 X 平均片重 取样量

② 外标两点法 ▲求出供试品斑点中被测成分的质量

Ms = • C +V1C(V2-V1) (A-A1)

(A2-A1)Ms 被测成分的质量（ mg n=2 ） A1 对照品小点样量吸收度V1 对照品小点样量（ μl） （荧光强度）积分值（ A n=2 ） V2 对照品大点样量（ μl ） A2 对照品大点样（荧光强度）A被测成分吸收度（荧光强度） 积分值（ A n=2 ） 积分值（ A n=2 ） C 对照液的浓度（ mg/ml）-

-

-

__

五、应用实例五、应用实例 1.1. 九分散中士的宁的含量测定九分散中士的宁的含量测定 九分散是由马钱子粉、麻黄、乳香和没药等制成。马钱子粉九分散是由马钱子粉、麻黄、乳香和没药等制成。马钱子粉

中含有士的宁、番木鳖碱等生物碱，具生理活性但也有毒性，中含有士的宁、番木鳖碱等生物碱，具生理活性但也有毒性，故需控制马钱子含量。中国药典规定按干燥品计每包含马钱子故需控制马钱子含量。中国药典规定按干燥品计每包含马钱子以士的宁计应为以士的宁计应为 4.54.5～～ 5.5mg5.5mg 。 。

供试品溶液的制备供试品溶液的制备 取本品取本品 1010 包，混合研匀。精密称取包，混合研匀。精密称取 2g2g置具塞锥形瓶中，置具塞锥形瓶中，精密加氯仿精密加氯仿 20ml20ml 与浓氨试液与浓氨试液 1ml1ml，轻轻摇匀，称重，于室温，轻轻摇匀，称重，于室温下放置下放置 2424小时，再称重，补足氯仿减失的重量，充分振摇，小时，再称重，补足氯仿减失的重量，充分振摇，滤过。精密量取滤液滤过。精密量取滤液 10ml10ml，用硫酸溶液（，用硫酸溶液（ 3→3003→300 ）分次提）分次提取，至生物碱提尽，合并硫酸液，置另一分液漏斗中，加浓氨取，至生物碱提尽，合并硫酸液，置另一分液漏斗中，加浓氨试液使呈碱性，用氯仿分次提取，合并氯仿液，蒸干，放冷，试液使呈碱性，用氯仿分次提取，合并氯仿液，蒸干，放冷，残渣中精密加氯仿残渣中精密加氯仿 5ml5ml使溶解，作为供试品溶液。使溶解，作为供试品溶液。

对照品溶液的制备对照品溶液的制备

取士的宁对照品，加氯仿制成每取士的宁对照品，加氯仿制成每 1ml1ml 含含 0.4mg0.4mg 的溶液，作为对照品的溶液，作为对照品溶液。溶液。

测定法测定法

吸取上述两种溶液各吸取上述两种溶液各 55μμll ，分别点于同一硅胶，分别点于同一硅胶 GF254GF254 薄层板上，以甲薄层板上，以甲苯苯 -- 丙酮丙酮 -- 乙醇乙醇 -- 浓氨试液。（浓氨试液。（ 16∶12∶1∶416∶12∶1∶4 ）的上层溶液为展开剂，）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。照薄层色谱法进行扫描，波长：展开，取出，晾干。照薄层色谱法进行扫描，波长： λλs=254nm s=254nm ，， λλRR

=325nm =325nm ，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得。已知：得。已知： AARR＝＝ 19663.0719663.07 ， ， AsAs＝＝ 20617.2520617.25 ，取样量，取样量 2.098g2.098g 。。

解答问题解答问题

① ① 采用外标一点法还是外标两点法？ 采用外标一点法还是外标两点法？

② ② 采用什么方法显色定位？采用什么方法显色定位？

③ ③ 计算每包药品中马钱子的含量。（保留两位有效数字）计算每包药品中马钱子的含量。（保留两位有效数字）

①①求出供试品斑点中士的宁的质量求出供试品斑点中士的宁的质量

②②求出供试品中士的宁的含量求出供试品中士的宁的含量Ms = MR X =5 μl x 0.4 μg/ μl x =2.1μg

AsAR 19663.07

20617.25

含量（ mg/ 包） = Ms X 稀释倍数 X 标示重量

取样量

=0.0021mg X 5ml X 20ml X 2.5g/ 包

0.005ml X 10ml X 2.098g

= 5.0 （ mg/ 包）

2.2.枳实导滞丸中橙皮苷的含量测定枳实导滞丸中橙皮苷的含量测定

本品系由枳实、大黄和黄连等八味药材制成的水丸。中国药典规定按干燥品计算，每本品系由枳实、大黄和黄连等八味药材制成的水丸。中国药典规定按干燥品计算，每 11

gg 含枳实以橙皮苷（含枳实以橙皮苷（ CC2828HH3434OO1515 ） 计，不得少于） 计，不得少于 20.0mg20.0mg 。 。

供试品溶液的制备供试品溶液的制备

取本品粉末（过三号筛）约取本品粉末（过三号筛）约 0.5g0.5g ，精密称定（，精密称定（ 0.5124g0.5124g ），置索氏提取器中，加甲醇），置索氏提取器中，加甲醇

90ml90ml，加热回流，加热回流 4 4 小时，趁热滤过至小时，趁热滤过至 100ml 100ml 量瓶中，用少量甲醇洗涤容器，洗液与滤量瓶中，用少量甲醇洗涤容器，洗液与滤

液合并，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取液合并，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取 5ml 5ml ，置，置 25ml25ml量瓶中，加甲醇至刻度，量瓶中，加甲醇至刻度，

摇匀，作为供试品溶液。摇匀，作为供试品溶液。

对照品溶液的制备对照品溶液的制备

精密称取橙皮苷对照品，加甲醇制成每精密称取橙皮苷对照品，加甲醇制成每 1ml 1ml 含含 0.05mg0.05mg 的溶液，作为对照品溶液。的溶液，作为对照品溶液。

测定法测定法

精密吸取供试品溶液精密吸取供试品溶液 55㎕、对照品溶液㎕、对照品溶液 2 2 ㎕ 与㎕ 与 5 5 ㎕ ，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以㎕ ，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以

甲醇为展开剂，展开，展距约甲醇为展开剂，展开，展距约 3cm 3cm ，取出，晾干，喷以 ，取出，晾干，喷以 11％三氯化铝的甲醇溶液，放置％三氯化铝的甲醇溶液，放置

3 3 小时，在紫外光灯小时，在紫外光灯 (365nm) (365nm) 下定位。上机进行荧光扫描，激发波长：下定位。上机进行荧光扫描，激发波长： 330nm ,330nm , 线性扫线性扫

描，测量供试品与对照品荧光强度的积分值（描，测量供试品与对照品荧光强度的积分值（ AR(2 AR(2 ㎕㎕ ) =885.7 AR (5 ) =885.7 AR (5 ㎕㎕ ) =979.4 AS=83) =979.4 AS=83

5.65.6 ），计算，即得。），计算，即得。

★①★①聚酰胺聚酰胺 TLCTLC 分离黄酮类成分效果较好故选之。 分离黄酮类成分效果较好故选之。

② ②橙皮苷与橙皮苷与 AlClAlCl33反应显色，在反应显色，在 330nm330nm紫外光下发射较强的绿色荧光（波长：紫外光下发射较强的绿色荧光（波长：

500nm500nm ）。）。

　　　　

回答问题：回答问题：

① ①本法采用的是吸收测定法还是荧光测定法？外标一点法还是本法采用的是吸收测定法还是荧光测定法？外标一点法还是

外标两点法？透射法还是反射法？直线扫描还是锯齿扫描？外标两点法？透射法还是反射法？直线扫描还是锯齿扫描？

光源是什么？ 光源是什么？

② ②求算枳实（橙皮苷）的含量（保留三位有效数字），并判断求算枳实（橙皮苷）的含量（保留三位有效数字），并判断

是否符合药典规定。是否符合药典规定。

(V2-V1) (A-A1)(A2-A1)

①①求算出斑点中橙皮苷的质量求算出斑点中橙皮苷的质量 MMs s = • C +V= • C +V11CC

= • 0.05mg/ml +2ul • 0.05mg/ml(979.4 － 885.7)

(5ul － 2ul) (835.6 －885.7)

=0.0198ug(1.98 X10 mg)

②② 求算出枳实（橙皮苷）在药品中的含量求算出枳实（橙皮苷）在药品中的含量含量（ mg/g ） =Ms X 稀释倍数

取样量

=

-5

1.98 X10 mg X 2.5 X 10 ul X 1.0 X 10 ul-5 5 5

5ul X 5 X 10 ul X 0.5124g 3

=38.6

第五节第五节 高效液相色谱法高效液相色谱法（（ High Performance Liquid Chromatograph HPLCHigh Performance Liquid Chromatograph HPLC ））

一、定义一、定义 以高压液体为流动相的液相色谱分析法称为高效液相以高压液体为流动相的液相色谱分析法称为高效液相色谱法。色谱法。

二、特点二、特点 高分辨，高灵敏，快速，适用范围宽，自动化程度高。高分辨，高灵敏，快速，适用范围宽，自动化程度高。 特别适合中药的定性定量分析，《中国药典》中大多 特别适合中药的定性定量分析，《中国药典》中大多

数中成药的含量测定采用此法。 数中成药的含量测定采用此法。

三、类型三、类型 按原理分类主要有：按原理分类主要有： ① ①键合相键合相 HPLCHPLC 正相键合相正相键合相 HPLC HPLC 少用少用 反相键合相反相键合相 HPLC HPLC 最常用十八烷基键合固定相 最常用十八烷基键合固定相 (C18(C18 或或 ODS)ODS) 常常

用甲醇用甲醇 -- 水、乙腈水、乙腈 -- 水作为流动相水作为流动相

② ②吸附吸附 HPLCHPLC ③ ③ 离子交换离子交换 HPLCHPLC ④ ④凝胶过滤凝胶过滤 HPLCHPLC ⑤ ⑤亲和亲和 HPLCHPLC ⑥ ⑥胶束胶束 HPLCHPLC ⑦ ⑦手性手性 HPLCHPLC

四、色谱仪及其工作原理（四、色谱仪及其工作原理（ PP图）图） 1.1.高效液相色谱仪高效液相色谱仪 一般由高压输液泵、进样阀、色谱柱、检测器和数据处一般由高压输液泵、进样阀、色谱柱、检测器和数据处理系统或色谱工作站组成。理系统或色谱工作站组成。 2.2.工作原理工作原理 系用高压泵将流动相泵入装有填充剂的色谱柱，通过进系用高压泵将流动相泵入装有填充剂的色谱柱，通过进样阀注入样品溶液，流动相携带样品进入色谱柱进行分离，样阀注入样品溶液，流动相携带样品进入色谱柱进行分离，被分离成分依次进入检测器，转变成相应的电信号，由数被分离成分依次进入检测器，转变成相应的电信号，由数据处理系统或色谱工作站进行处理而得到分析结果。据处理系统或色谱工作站进行处理而得到分析结果。

二、含量测定方法（外标法 ）二、含量测定方法（外标法 ） 内标法内标法 外标法外标法 药物分析大多采用此法 药物分析大多采用此法 1.1. 系统适应性试验系统适应性试验 包括色谱柱的理论板数、分离度、重复性包括色谱柱的理论板数、分离度、重复性

和拖尾因子等四个指标。其中分离度和重复性和拖尾因子等四个指标。其中分离度和重复性更具实用意义。更具实用意义。

系统适应性试验即用各品种项下规定的对照系统适应性试验即用各品种项下规定的对照品和条件对色谱系统进行试验，应符合要求。品和条件对色谱系统进行试验，应符合要求。否则可对色谱分离条件作适当的调整。否则可对色谱分离条件作适当的调整。

（（ 11 ）色谱柱的理论板数（）色谱柱的理论板数（ nn）考察柱效）考察柱效 在选定的条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的对照物质溶液，记录色谱图，量出在选定的条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的对照物质溶液，记录色谱图，量出

供试品主成分或内标物质峰的保留时间供试品主成分或内标物质峰的保留时间 tRtR（以分钟或长度计，下同（以分钟或长度计，下同 ,,但应取相同单位）和半但应取相同单位）和半

高峰宽高峰宽 ((WWh/2h/2),), 按下式计算色谱柱的理论板数。如果测得理论板数低于各品种项下规定的最按下式计算色谱柱的理论板数。如果测得理论板数低于各品种项下规定的最

小理论板数，应改变色小理论板数，应改变色

谱柱的某些条件（如柱谱柱的某些条件（如柱

长、载体性能、色谱柱长、载体性能、色谱柱

充填 的优劣等），使充填 的优劣等），使

理论板数达到要求。理论板数达到要求。 2)(54.52

1W

tn R

（（ 22 ）分离度（）分离度（ RR） 考察分离效果） 考察分离效果 在规定的条件下，注入对照液或供试液，记录色谱图，在规定的条件下，注入对照液或供试液，记录色谱图，按下式计算待测峰（定量峰）与相邻峰的分离度。除另按下式计算待测峰（定量峰）与相邻峰的分离度。除另有规定，分离度应大于有规定，分离度应大于 1.51.5 。。

21

)(212

WW

ttR RR

（（ 33 ）重复性 考察测量的精密度）重复性 考察测量的精密度 在规定条件下，取一定量的对照液，连续进样在规定条件下，取一定量的对照液，连续进样 33～～ 55次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差（（ RSDRSD）应不大于）应不大于 2.02.0％％。。

（（ 44 ）拖尾因子（）拖尾因子（ TT ）） 考察色谱峰的对称性，保证测量的考察色谱峰的对称性，保证测量的准确度准确度。特别是采。特别是采

用峰高法测量时，应检查待测峰的用峰高法测量时，应检查待测峰的 TT 是否符合规定。除是否符合规定。除另有规定外，另有规定外， TT应在应在 0.950.95～～ 1.051.05之间。之间。

1

05.0

2d

WT h

式中 :W0.05h 为 0.05峰高处的峰宽；d1 为峰极大至峰前沿之间的距离。

hW 05.0

2.2. 对照品溶液的制备对照品溶液的制备 3.3. 供试品溶液的制备供试品溶液的制备 4.4. 测定法测定法 将上述两种溶液分别注入色谱仪，记录色谱图，按下式计将上述两种溶液分别注入色谱仪，记录色谱图，按下式计

算被测成分的含量。算被测成分的含量。 （（ 11 ）求出供试液中被测成分的浓度）求出供试液中被测成分的浓度 CC 供供

（（ 22 ）求出药品中被测成分的）求出药品中被测成分的含量含量

C 供＝ C 对A 对

A 供

C 供 X 稀释倍数含量（ W/W ）＝

取样量

三、应用实例三、应用实例 1.1.牛黄解毒片中黄芩的含量测定牛黄解毒片中黄芩的含量测定 本品由牛黄、大黄、黄芩、冰片、石膏等八味中药制成。本品由牛黄、大黄、黄芩、冰片、石膏等八味中药制成。

中国药典以中国药典以黄芩苷黄芩苷为指标，采用为指标，采用 HPLCHPLC 测定其中黄芩的含测定其中黄芩的含量。量。

（（ 11 ）色谱条件与系统适应性试验）色谱条件与系统适应性试验 固定相：用十八烷基硅烷键合硅胶；固定相：用十八烷基硅烷键合硅胶； 流动相：甲醇流动相：甲醇 -- 水水 -- 磷酸磷酸（（ 45∶55∶45∶55∶0.20.2 ），流速），流速 1ml/1ml/

minmin ；； 检测器：紫外检测器，检测波长为检测器：紫外检测器，检测波长为 315nm315nm；理论塔板数；理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于按黄芩苷峰计算应不低于 30003000 。。

（（ 22 ）对照品溶液制备）对照品溶液制备 精密称取在精密称取在 60℃60℃减压干燥减压干燥 44小时的黄芩苷对照品适量，小时的黄芩苷对照品适量，

以甲醇溶解配成每以甲醇溶解配成每 1ml1ml中含中含 31.2µg31.2µg 的对照品溶液。的对照品溶液。

（（ 33 ）供试品溶液制备）供试品溶液制备 取牛黄解毒片取牛黄解毒片 2020 片，剥去糖衣，精密称定（片，剥去糖衣，精密称定（ 6.2546.254

gg ），研细，精密称取），研细，精密称取 1.045 g1.045 g ，加，加 70%70% 乙醇乙醇 30ml30ml，，超声处理超声处理 2020 分钟，放冷，滤过，滤液置分钟，放冷，滤过，滤液置 50ml50ml量瓶中，量瓶中，用少量用少量 70%70% 乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤于同一乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤于同一量瓶中，加量瓶中，加 70%70% 乙醇至刻度，摇匀，即得。乙醇至刻度，摇匀，即得。

（（ 44 ）测定法）测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10µl10µl进样，进样，

测得对照品及供试品中黄芩苷的峰面积分别为测得对照品及供试品中黄芩苷的峰面积分别为 AA 供供＝＝ 44340441340441 ，， AA 对对＝＝ 39458563945856 。。

【解答】【解答】 ①采用的是外标法还是内标法？ ①采用的是外标法还是内标法？ ② ②流动相中为什么要加入少量磷酸？流动相中为什么要加入少量磷酸？ ③ ③计算黄芩苷的含量 （保留两位有效数字）。 计算黄芩苷的含量 （保留两位有效数字）。 求算供试液中黄芩苷的浓度求算供试液中黄芩苷的浓度

3945856=31.2(µg/ml) × =34.3(µg/ml)4340441

对

供对供 A

ACC

▲▲求算药品中黄芩苷的含量求算药品中黄芩苷的含量

黄芩苷（ mg/ 片） =C 供×稀释倍数×平均片重

取样量

=34.3 （ µg/ml ） ×10 ×50ml×312.7mg/ 片

1045mg

=0.51

-3

2.2.藿香正气水中厚朴酚与和厚朴酚总量的测定藿香正气水中厚朴酚与和厚朴酚总量的测定 本品由苍术、陈皮、厚朴（姜制）、白芷等十味中药制成的本品由苍术、陈皮、厚朴（姜制）、白芷等十味中药制成的

液体制剂，每支装液体制剂，每支装 10ml10ml（标示装量）。其中厚朴为要药之一，（标示装量）。其中厚朴为要药之一，故《中国药典》采用故《中国药典》采用 HPLCHPLC ，以厚朴酚及和厚朴酚的总量为指，以厚朴酚及和厚朴酚的总量为指标，控制厚朴的含量。标，控制厚朴的含量。

（（ 11 ）色谱条件与系统适用性试验）色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇 -- 乙腈乙腈 -- 水（水（ 50:20:50:20:

4040 ）为流动相；检测波长）为流动相；检测波长 294nm294nm 。理论板数按厚朴酚峰计算。理论板数按厚朴酚峰计算应不低于应不低于 50005000 。。

（（ 22 ）对照品溶液的制备）对照品溶液的制备 取厚朴酚、和厚朴酚对照品适量，精密称定，分别加甲醇制取厚朴酚、和厚朴酚对照品适量，精密称定，分别加甲醇制

成每成每 1ml1ml含厚朴酚含厚朴酚 0.2mg0.2mg 、和厚朴酚、和厚朴酚 0.1mg0.1mg 的溶液，摇匀，的溶液，摇匀，即得。即得。

（（ 33 ）供试品溶液的制备）供试品溶液的制备 精密量取装量项下的本品精密量取装量项下的本品 5ml5ml ，加盐酸，加盐酸 22 滴，用氯仿振摇提取滴，用氯仿振摇提取 33 次，每次次，每次

10ml10ml ，合并氯仿液，蒸干，残渣用甲醇溶解并精密稀释至，合并氯仿液，蒸干，残渣用甲醇溶解并精密稀释至 10ml10ml ，精密量取，精密量取5ml5ml ，置，置 10ml10ml 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

（（ 44 ）测定法）测定法 精密吸取上述三种溶液各精密吸取上述三种溶液各 10μl10μl ，分别注入液相色谱仪测定，根据对照品的，分别注入液相色谱仪测定，根据对照品的峰面积（峰面积（ AARR 厚 厚 AARR 和和）以及供试品中被测成分的峰面积（）以及供试品中被测成分的峰面积（ AASS 厚 厚 AASS 和和）计算厚）计算厚朴的含量。本品每支含厚朴以厚朴酚（ 朴的含量。本品每支含厚朴以厚朴酚（ CC1818HH1818OO22 ）及和厚朴酚（）及和厚朴酚（ CC1818HH1818OO22 ）的总量计，不得少于）的总量计，不得少于 5.8mg5.8mg 。。

2.2. 和厚朴酚 和厚朴酚 3.3. 厚朴酚 厚朴酚 5.6.5.6. 其他成分峰其他成分峰

混合对照品 . 和厚朴酚 厚朴酚 样品

【解答】【解答】 ①采用的是外标法还是内标法？②为什么要酸化样品溶 ①采用的是外标法还是内标法？②为什么要酸化样品溶液，再用氯仿萃取？③计算厚朴的含量 （保留两位有效字）。液，再用氯仿萃取？③计算厚朴的含量 （保留两位有效字）。

【含量计算】【含量计算】 ① ① 分别求算供试液中厚朴酚及和厚朴酚的浓度（分别求算供试液中厚朴酚及和厚朴酚的浓度（ mg/mlmg/ml））

②②分别求算药品中厚朴酚及和厚朴酚的含量（分别求算药品中厚朴酚及和厚朴酚的含量（ mg/mg/支）支）

③③求算厚朴酚及和厚朴酚的求算厚朴酚及和厚朴酚的总量总量 （参考习题集第六章第（参考习题集第六章第 3737题 三黄片中大黄的含量测定）题 三黄片中大黄的含量测定）

对

供对供 A

ACC

C对为厚朴酚或和厚朴酚对照溶液的浓度；A供为供试品中厚朴酚或和厚朴酚的峰面积；A对为对照品厚朴酚或和厚朴酚的峰面积。

含量（ mg/支）＝ 5ml ×5ml （ 取样量）C 供 mg/ml ×10ml ×10ml× 标示装量 ml/支

四、安全操作注意事项四、安全操作注意事项 1.1.流动相需用微孔滤膜（流动相需用微孔滤膜（ 0.45μm0.45μm ）滤过并脱气才可使用。）滤过并脱气才可使用。 2.2.开泵后，先打开冲洗键（开泵后，先打开冲洗键（ PURGEPURGE）进行泵排气。然后将流）进行泵排气。然后将流动相接入色谱柱充分冲洗平衡，待基线稳定后方可进样。动相接入色谱柱充分冲洗平衡，待基线稳定后方可进样。

3.3. 测试溶液需用微孔滤膜（测试溶液需用微孔滤膜（ 0.45μm0.45μm ）滤过。）滤过。 4.4. 使用键合硅胶柱，流动相的使用键合硅胶柱，流动相的 PHPH值应控制在值应控制在 22～～ 88 ，否则色，否则色谱柱很容易损坏。谱柱很容易损坏。

5.5. 由于由于 C18C18链在水相环境中不易保持伸展状态，故对于使用链在水相环境中不易保持伸展状态，故对于使用 CC1818柱的反相色谱系统，流动相中有机溶剂的比例通常应不低柱的反相色谱系统，流动相中有机溶剂的比例通常应不低于于 55％。否则％。否则 C18C18链的随机卷曲将导致组分保留值的改变，链的随机卷曲将导致组分保留值的改变，造成色谱系统的不稳定。造成色谱系统的不稳定。

6.6.工作完毕，应先后用水和甲醇充分冲洗液路系统，尤其是使工作完毕，应先后用水和甲醇充分冲洗液路系统，尤其是使用了含盐的流动相，更应充分冲洗。用了含盐的流动相，更应充分冲洗。

第六节 气相色谱法第六节 气相色谱法 （（ Gas Chromatography GCGas Chromatography GC ）） 一、定义一、定义 以气体为流动相（亦称载气）的色谱分析法以气体为流动相（亦称载气）的色谱分析法称气相色谱法（称气相色谱法（ GCGC ）。）。

二、特点二、特点 分离效能高、选择性好、灵敏度高、分析速分离效能高、选择性好、灵敏度高、分析速

度快等。在主要用于中药制剂中挥发油及其他度快等。在主要用于中药制剂中挥发油及其他挥发性组分的含量测定，还可用于水分、乙醇挥发性组分的含量测定，还可用于水分、乙醇量的测定。但本法也存在一定局限性，它对挥量的测定。但本法也存在一定局限性，它对挥发性差或遇热易分解破坏的物质难以分析。发性差或遇热易分解破坏的物质难以分析。

三、分类三、分类

1.1.按固定相状态分类：气固按固定相状态分类：气固 GCGC 、气液、气液 GCGC

2.2.按分离原理分类：吸附按分离原理分类：吸附 GCGC 、分配、分配 GCGC

3.3.按色谱柱分类：填充柱按色谱柱分类：填充柱 GCGC 、毛细管柱、毛细管柱 GC GC （分辨率高（（分辨率高（ n>10 n>10 ）常用于农残分析））常用于农残分析）

四、仪器及其工作原理四、仪器及其工作原理

工作原理工作原理 加热分析样品使其气化，由载气带入色谱柱，由于各组分加热分析样品使其气化，由载气带入色谱柱，由于各组分

在固定相与载气间分配系数不同，故在色谱柱中移动速度不同，在固定相与载气间分配系数不同，故在色谱柱中移动速度不同，经一段时间后彼此得到分离，再依次被载气带入检测器，将各经一段时间后彼此得到分离，再依次被载气带入检测器，将各组分的浓度或质量转换成电信号并记录成色谱图，根据色谱图组分的浓度或质量转换成电信号并记录成色谱图，根据色谱图的峰高或峰面积而进行定量分析。的峰高或峰面积而进行定量分析。

五、含量测定五、含量测定

内标法内标法 常用于药物分析。 常用于药物分析。

外标法 少用，因为外标法 少用，因为 GCGC 进样量小，造成的误差较大。进样量小，造成的误差较大。

1.1.色谱条件和系统适应性试验色谱条件和系统适应性试验

（（ 11 ）色谱条件）色谱条件

主要包括载气、色谱柱、检测器、固定液（相）测试温度、主要包括载气、色谱柱、检测器、固定液（相）测试温度、进样量、载体等。其中检测器种类、固定液品种、以及色谱进样量、载体等。其中检测器种类、固定液品种、以及色谱柱的材质不得改变，其它的如柱子的内径和长度、载体的种柱的材质不得改变，其它的如柱子的内径和长度、载体的种类和粒度、固定液涂布的浓度、载气的流速、柱温、进样量、类和粒度、固定液涂布的浓度、载气的流速、柱温、进样量、检测器的灵敏度等可适当改变，以适应系统适用性试验的要检测器的灵敏度等可适当改变，以适应系统适用性试验的要求。求。

① ①载气载气：一般为：一般为 NN22 ，还可用，还可用 HH22 、、 HeHe。。 ②②色谱柱色谱柱：玻璃柱和不锈钢柱。：玻璃柱和不锈钢柱。 ③ ③检测器检测器 : : 氢火焰离子检测器（氢焰检测器 氢火焰离子检测器（氢焰检测器 FIDFID）） 适合有机物检测，灵敏度高，应用广泛。适合有机物检测，灵敏度高，应用广泛。 热导检测器（热导检测器（ TCDTCD）） 无机物、有机物均可检测，灵 敏度较低，用于水分测定。无机物、有机物均可检测，灵 敏度较低，用于水分测定。 电子捕获检测器（电子捕获检测器（ ECDECD）） 适合含卤素、硫、氮等电 负性强的元素的化合物测定。适合含卤素、硫、氮等电 负性强的元素的化合物测定。

用于农残测定。用于农残测定。

④④柱填料柱填料：：

吸附剂：硅胶、氧化铝等。较少用。吸附剂：硅胶、氧化铝等。较少用。

高分子多孔小球：常用二乙烯苯乙基乙烯苯型的。气固吸附高分子多孔小球：常用二乙烯苯乙基乙烯苯型的。气固吸附 GCGC

例如甲（乙）醇量、水分的测定。例如甲（乙）醇量、水分的测定。

涂渍固定液的载体（多用）：常用经酸洗并硅烷化的硅藻土（涂渍固定液的载体（多用）：常用经酸洗并硅烷化的硅藻土（

红色载体、 白色载体）属气液分配红色载体、 白色载体）属气液分配 GCGC 。。

⑤⑤固定液固定液：常用甲基聚硅氧烷（如：常用甲基聚硅氧烷（如 SE-30SE-30 、、 OV-17OV-17 等）、 聚乙 等）、 聚乙

二醇（如二醇（如 PEG-20PEG-20 等），一般涂布浓度为等），一般涂布浓度为 55 ～～ 2525 ％％。。

（（ 22 ）系统适应性试验（同）系统适应性试验（同 HPLCHPLC ））

2.2.内标法（同乙醇量测定法）内标法（同乙醇量测定法）（（ 11 ）标准液的制备）标准液的制备（（ 22 ）供试液的制备）供试液的制备（（ 33 ）校正因子（）校正因子（ ff ）的测定）的测定 内标法内标法特有特有的参数。的参数。

内标法测定时，同一检测器对不同（被测成分和内标物）具内标法测定时，同一检测器对不同（被测成分和内标物）具有不同的响应值，故不能用峰面积直接计算的被测成分的含量，有不同的响应值，故不能用峰面积直接计算的被测成分的含量，要引入校正因子。要引入校正因子。

校正因子（校正因子（ f f ） 药典中采用的是相对重量校正因子（） 药典中采用的是相对重量校正因子（ fwfw）。）。其定义为：被测成分（其定义为：被测成分（ ii）单位峰面积所相当的物质量（）单位峰面积所相当的物质量（ Mi/AMi/Aii）是内标物（）是内标物（ ss）单位峰面积所相当的物质量（）单位峰面积所相当的物质量（ Ms/AsMs/As）的）的多少倍。多少倍。

内标物的选择原则： ①应是样品中不存在的纯物质。②加内标物的选择原则： ①应是样品中不存在的纯物质。②加入量应接近于被测成分。③其色谱峰应位于被测成分色谱峰附入量应接近于被测成分。③其色谱峰应位于被测成分色谱峰附近且与之完全分离。近且与之完全分离。

Mi/Aifw =

Ms/As

六、应用实例六、应用实例

十滴水软胶囊中樟脑含量的测定十滴水软胶囊中樟脑含量的测定

本品由樟脑、干姜、大黄、小茴香、肉桂、辣椒、桉油等七味中药本品由樟脑、干姜、大黄、小茴香、肉桂、辣椒、桉油等七味中药制成，制成，樟脑樟脑是其主成分之一，具是其主成分之一，具升华性升华性，故采用气相色谱法，以樟脑，故采用气相色谱法，以樟脑为对照品，薄荷脑为内标物，对其进行含量测定。为对照品，薄荷脑为内标物，对其进行含量测定。

1.1.色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验

以聚乙二醇（以聚乙二醇（ PEGPEG ）） -20M-20M为固定相，涂布浓度为为固定相，涂布浓度为 10%10% ，柱温，柱温 150150℃℃。理论塔板数按樟脑峰计算应不低于。理论塔板数按樟脑峰计算应不低于 20002000 ，樟脑峰与内标物质峰的，樟脑峰与内标物质峰的分离度应大于分离度应大于 22 。。

2.2.校正因子测定校正因子测定 精密称取樟脑对照品（精密称取樟脑对照品（ rr ）） 50mg50mg ，置，置 10ml10ml 量瓶中，量瓶中，精密加入薄荷脑内标物质精密加入薄荷脑内标物质 (s)50mg(s)50mg ，加无水乙醇至刻度，，加无水乙醇至刻度，摇匀，精密量取摇匀，精密量取 11～～ 2μl2μl，注入气相色谱仪， ，注入气相色谱仪， Ar=211948Ar=211948 、、As=215835As=215835 ，计算校正因子（保留四位有效数字） 。，计算校正因子（保留四位有效数字） 。

3.3. 测定法测定法 取装量差异项下的内容物，混匀，取取装量差异项下的内容物，混匀，取 0.8g0.8g ，精密称定，精密称定

（（ 0.7956g0.7956g ），置具塞试管中，用无水乙醇提取），置具塞试管中，用无水乙醇提取 55 次，每次，每次次 4ml4ml ，分取乙醇提取液，合并，转移至，分取乙醇提取液，合并，转移至 25ml25ml 量瓶中，量瓶中，精密加入薄荷脑精密加入薄荷脑 125mg125mg ，使溶解，加无水乙醇稀释至刻，使溶解，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液度，摇匀，作为供试品溶液 (i(i ＋＋ s)s) 。精密量取。精密量取 11 ～～ 2μl2μl ，，注入气相色谱仪测定， 注入气相色谱仪测定， AiAi ＝＝ 108685108685 、 、 AsAs ＝＝ 123544123544 ，，计算即得（保留两位有效数字计算即得（保留两位有效数字 )) 。。

解答问题解答问题 ①本法属于气液分配 ①本法属于气液分配 GCGC 还是气固吸附还是气固吸附 GCGC？ ？ ② ②使用哪种载气？哪种检测器？ 使用哪种载气？哪种检测器？ ③ ③采用的是外标法还是内标法？ 采用的是外标法还是内标法？ ④ ④求算樟脑的含量。药典规定，本品每粒含樟脑不求算樟脑的含量。药典规定，本品每粒含樟脑不得少于得少于 53mg53mg 。（平均粒重。（平均粒重 0.425g0.425g／粒）／粒）

求算校正因子（求算校正因子（ ff）） f =(As/Af =(As/ARR) X(M) X(MR R / Ms )/ Ms ) = (215835/ 211948)/(50mg/50mg)= (215835/ 211948)/(50mg/50mg) ＝＝ 1.1081.108求算供试液中樟脑的浓度求算供试液中樟脑的浓度 CiCi（（ mg/mlmg/ml））

Ci= f Cs=1.108 X X 5mg/ml=6.30 mg/mlAsAi

123544

108685

求算药品中樟脑的含量（求算药品中樟脑的含量（ mgmg／粒）／粒）

含量＝795.6mg

6.30mg/ml X 25ml X 425mg/ 粒

＝ 84