Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом

проточной цитометрии

Научный центр педиатрии и детской хирургии, г. Алматы

• Согласно мировой статистике, 3,3-4,7 детей из 100 тысяч заболевают лейкемией в возрасте до 15 лет. Около 40-46 % случаев приходится на детей 2-6 лет.

• В Казахстане ежегодно заболевают 130 детей.

• Хромосомные изменения обнаруживают приблизительно у 60-70 % больных.

• неблагоприятные факторы внешней среды: ионизирующее излучение, действие электромагнитного поля, химических веществ, бензола, медикаментов, в состав которых входят алкилирующие соединения.

• вирусы (HTLV-I - Т-клеточный лйкоз/лимфома взрослых; вирус Эпштейна-Барр – лимфома Беркитта, Лимфома Ходжкина)

! Особенно чувствительны к воздействию электромагнитного излучения дети школьного возраста, организм которых еще не сформировался: даже всего несколько часов в неделю, проведенных около компьютера, опасны для их здоровья. В 1997 году в США опубликованы данные по увеличению количества заболеваний детей лейкозом, которые более 2 часов в день играли на компьютере и в видео игры.

• Основной клинической симптоматикой ОЛ служат процессы гиперплазии опухолевой ткани (бластная трансформация костного мозга, увеличение лимфатических узлов, органов, появление опухолевых инфильтратов и т.д,) и признаки подавления нормального кроветворения.

Клиническая симптоматика развернутой стадии ОЛ складывается из 5 основных синдромов:

• 1. гиперпластического

• 2. геморрагического

• 3. анемического

• 4. интоксикационного

• 5. инфекционных осложнений

• Л.- опухолевые клональные заболевания кроветворной системы с первичным поражением костного мозга. Мишенью опухолевой трансформации являются стволовые кроветворные клетки и коммитированные клетки-предшественники. Субстрат опухоли представлен бластами.

FAB-классификация, 1976

• Лф: L1, L2, L3• Миело: М0, М1,

М2, М3,М4, М5,М6, М7

Иммунофенотипирование

• CD – кластер дифференцировки• Антитела (мембранные гликопротеины,

карбогидраты, гликолипиды)• Проточная цитометрия является

современной технологией быстрого оптического измерения параметров клетки, ее органелл и происходящих в ней процессов.

Образцы для проточной цитометрии

• кровь• костный мозг• ликвор• суставная жидкость• плевральная жидкость• асцитическая жидкость• клетки тканей (например, опухолей)

Проточные цитофлюориметры

• Концепция соответствия фенотипа злокачественной клетки фенотипу нормального клеточного аналога на каждом уровне дифференцировки. В большинстве случаев ОЛ бласты имеют иммунофенотип, сравнимый с нормальными гемопоэтическими клетками аналогичных стадий дифференцировки.

Иммунологическая идентификация включает:

• Определение линейной принадлежности злокачественных клеток

• Анализ клеточного созревания, т.е. уровня дифференцировки, степени гетерогенности популяции злокачественных клеток

• Аберрантности, т.е. отличия от нормальных аналогов• Клональности • Определение количества гемопоэтических клеток• Контроль и мониторинг эффективности терапии • Выявление минимальной остаточной болезни

• Лейкемические клетки можно отличить от их нормальных аналогов по ряду критериев. К основным типам аберрантности фенотипа л.клеток относятся:

• Коэкспрессия антигенов нескольких линий

• Асинхронная экспрессия антигена• Избыточная экспрессия антигенов• Отсутствие экспрессии или низкий

уровень экспрессии антигена• Фенотипический профиль,

практически не встречающийся в норме

Структура иммунологических вариантов острых лейкозов НЦПиДХ

ОЛЛ

ОМЛ

бифенотипы73,8%

24,6%

1,6%

Частота выявления различных фенотипических вариантов ОЛ1,91%

4,8%1,6%

4,0%

12,7%

6,4%

5,6%

54,0%9,5%

В1

В2

В3

Т

М0

М1-2

М3

М4

Иммунологическая диагностика бифенотипического лейкоза

• 1995, 2009• Балльная оценка экспрессии маркеров проводится для

того, чтобы отличить БОЛ от ОЛ с коэкспрессией маркеров «чужих» линий, если в популяции бластов не менее 20% клеток одновременно несут м. и л. маркеры. Диагноз БФЛ устанавливатся, если маркеры и м. и л. линии набирают более 2 баллов. Учитывается также СИФ.

Иммунологическая диагностика бифенотипического лейкоза

БаллыБаллы Маркеры В рядаМаркеры В ряда Маркеры Т рядаМаркеры Т ряда Маркеры Маркеры миелорядамиелоряда

22 CD79aCD79acyIgMcyIgMcyCD22cyCD22

CD3cy/memCD3cy/memTCRTCRαβαβTCRTCRγδγδ

MPOMPO

11 CD19CD19CD10CD10CD20CD20

CD2CD2CD5CD5CD8CD8

CD13CD13CD33CD33

0,50,5 TdTTdTCD24CD24

TdTTdTCD7CD7CD1aCD1a

CD14CD14CD15CD15CD64CD64CD117CD117

За последние 5 лет в НЦПиДХ было выявлено 6 бифенотипических лейкозов, причем 3 из них имели фенотип Т-линейной и миелоидной направлений дифференцировки, и 3 случая В-линейной и миелоидной направлений дифференцировки.

Суммарный иммунофенотип

Т+миело: CD7+mCD3+CD2+CD117+CD13+CD15+HLA-DR+CD34+MPO+

В+миело:CD19+CD22+CD79а+CD13+CD33+CD117+CD15+HLA-DR+CD34+MPO+TdT+

100 101 102 103 104

CD45 PerCP

R1

100 101 102 103 104

CD7 FITC100 101 102 103 104

CD2 FITC

100 101 102 103 104

CD45 PerCP

R1

100 101 102 103 104

CD22 FITC

100 101 102 103 104

CD10 FITC

100 101 102 103 104

CD22 FITC

Мегакариоцитарный лейкоз (М7)

• С 2010 по 2014гг - 12 больных: 6 – м, 6 – д, с-м Дауна - 3

• CD42a+CD42b+CD41+CD33+HLA-DR-CD34-MPO-

• CD33+CD41a+CD42a+CD42b+CD61+HLA-DR-CD34-MPO-,

• Коэкспрессия CD4, CD7, CD56

Мегакариоцитарный лейкоз (М7)07.12.10-Muhtarzhanova-pk.456

100 101 102 103 104

CD42a FITC

07.12.10-Muhtarzhanova-pk.458

100 101 102 103 104

CD37 FITC

07.12.10-Muhtarzhanova-pk.449

100 101 102 103 104

CD20 FITC

07.12.10-Muhtarzhanova-pk.444

100 101 102 103 104

CD45 PerCP

R1

Эритробластный лейкоз (М6)26.02.10-Atakulaev.334

0 200 400 600 800 1000FSC-Height

26.02.10-Atakulaev.334

100 101 102 103 104

CD45 PerCP

R1

26.02.10-Atakulaev.344

100 101 102 103 104

CD38 FITC

Плазмобластный лейкоз15.02.10-Soltanbaev.216

100 101 102 103 104

CD45 PerCP

R1

15.02.10-Soltanbaev.222

100 101 102 103 104

CD7 FITC

16.02.10-Soltanbaev.245

100 101 102 103 104

CD38 FITC

16.02.10-Soltanbaev.246

100 101 102 103 104

CD38 FITC

Спасибо за внимание!