Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.
-
Upload
valerija-pride -
Category
Technology
-
view
614 -
download
3
description
Transcript of Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.
![Page 1: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/1.jpg)
Опыт работы и перспективы в области глубокой гипотермии и использовании газовых криопротекторов
Научно-технический центр
криобиологии и анабиоза,
февраль 2014 г., МоскваДокладчик к.м.н. Пульвер Наталья Александровна
![Page 2: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/2.jpg)
Вступление
В период 2009-2013 гг. в НТЦ КБА проводились многочисленные опыты по трем направлениям: Обратимая гипотермия крыс Витрификация различных органов животных Эксперименты с использование клатратообразующих
веществ в качестве криопротекторов при криоконсервации.
Дополнительно изучен опыт ведущих зарубежных исследовательских групп по темам конвенциональной, градиентной заморозки, перфузионного охлаждения жидкостных и газовыми хладагентами, комбинированных методов криоконсервации.
![Page 3: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/3.jpg)
Работа с крысамиГипотермия до 2° С
Часть первая
![Page 4: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/4.jpg)
Зачем?
Многие исследователи криоконсервации органов и тканей недооценивают важность для состояния донорских органов первичного этапа охлаждения до температуры льдообразования, а также согревания от этой температуры до нормальной температуры функционирования. Но только при получении хорошего результата на этом этапе возможно изучать влияние криопротекторов и методов криоконсервирования на органы при более низких температурах.
Этап обратимой глубокой гипотермии уже возможно осуществить для животных с полным восстановлением всех функций. Далее в презентации эта технология демонстрируется на крысах.
![Page 5: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/5.jpg)
Общий наркоз и усыпление
Нами был выбран самый щадящий и безболезненный способ усыпления – чистый "норфлюран" без добавления кислорода; газ не обладает раздражающим действием, обладает очень быстрой (даже быстрее ксенона) индукцией, слабо выраженной эректильной фазой шока (животное практически не мечется), затем у животного отключается дыхательный центр и оно перестает дышать. Данное состояние при необходимости полностью обратимо.
![Page 6: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/6.jpg)
Искусственная вентиляция лёгких (ИВЛ)
После получения аппарата ИВЛ "Inspira" искусственную вентиляцию легких стало возможно использовать в сочетании с ингаляционными средствами для наркоза.
![Page 7: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/7.jpg)
Искусственная вентиляция лёгких (ИВЛ)
![Page 8: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/8.jpg)
В процессе освоения методик разработано несколько видов самодельных эндотрахеальных канюль, освоена интубация крыс, изготовлены тройники, переходники и т. д.
Искусственная вентиляция лёгких (ИВЛ)
![Page 9: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/9.jpg)
Сосудистый доступ
Отработаны подкожные, внутримышечные, внутрибрюшинные и внутривенные инъекции, канюляция яремной и бедренной вены, сонной подключичной, бедренной и хвостовой артерий. Также отчасти отработан микрохирургический сосудистный шов (на слайде показан сосудистый анастомоз почечной артерии) в целях возможной пересадки органов в будущем.
![Page 10: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/10.jpg)
Электрокардиография и энцефалография
Освоена электрокардиография и электроэнцефалография крыс с использованием разных типов специально изготовленных электродов, в том числе съем электрокардиограммы с крысы, полностью погруженной в жидкость (в том числе электропроводящую).
![Page 11: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/11.jpg)
![Page 12: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/12.jpg)
Системавоздушного охлаждения
Гибернация при температуре 2°-3° С
Была создана система воздушного охлаждения крысы газовым потоком в герметичной емкости с регулируемыми температурой и газовым составом с возможностью измерения ректальной температуры и снятием ЭКГ.
![Page 13: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/13.jpg)
Системажидкостного охлаждения
Мы разработали улучшенную конструкцию, позволяющую как охлаждать, так и согревать крысу в одной и той же емкости, без частичной разборки/сборки конструкции, как было в первоначальных вариантах.
Гибернация при температуре 2°-3° С
Были опробованы различные температурные режимы согревания.
![Page 14: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/14.jpg)
Гибернация при температуре 2°-3° С
В результате всего вышеперечисленного освоена стабильная выживаемость молодых и здоровых крыс весом 220-280 гр. после клинической смерти длительностью до 2-2,5 часов (с ректальной температурой 2-3° С от 25 мин до 1 часа).
![Page 15: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/15.jpg)
Гибернация при температуре 2-3° С
этап охлаждения
![Page 16: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/16.jpg)
Гибернация при температуре 2-3° С
этап охлаждения
![Page 17: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/17.jpg)
Гибернация при температуре 2°-3° С
![Page 18: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/18.jpg)
Вспомогательное кровообращение
В результате нам удалось добиться 40 минут вспомогательного кровообращения у крысы. Разработан перфузионный контур и методика в целом освоена.
![Page 19: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/19.jpg)
Опыты с живыми сердцами крыс
Были проведены пилотные эксперименты на живых сердцах крыс
Результаты опытов:
1. Витрификационная смесь, состоящая из 35% этиленгликоля и 30% диметилсульфоксида, быстро проникает в клетки сердца крысы при его перфузии через аорту.
2. При ступенчатом насыщении сердца крысы этой смесью при пониженной температуре до -25°С и последующему ступенчатому отмыву от криопротекторов и инкубации при +37°С оно не восстанавливало биение.
![Page 20: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/20.jpg)
Опыты с живыми сердцами крыс
1. Сердца крыс полностью восстанавливали свою активность после насыщения их 35% этиленгликолем при 0С, отмывания от него и инкубацией при +37°С.
2. Сердца крыс только частично восстанавливали свою активность (фибрилляция) после насыщения их 35% этиленгликолем с 10% диметилсульфоксидом при 0°С, отмывания от этой смеси и инкубацией при +37°С.
Эксперименты следует продолжить.
![Page 21: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/21.jpg)
Конец первой части
![Page 22: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/22.jpg)
Ксенон как криопротектор
Часть вторая
![Page 23: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/23.jpg)
Подготовка
Эксперименты начались с осени 2010 г.
До этого приобреталось оборудование (ламинарный бокс, CO2-инкубатор, инвертированный микроскоп, нагревательный столик, культуральный пластик, среды и реактивы), в собственной мастерской изготавливалось уникальное дополнительное оборудование.
![Page 24: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/24.jpg)
В мастерской на токарном и фрезерном станке были изготовлены миниатюрные барокамеры под криопробирки из специальной бронзы, использующейся для изготовления криогенного оборудования.
Изготовление барокамер
![Page 25: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/25.jpg)
Изготовление барокамер
![Page 26: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/26.jpg)
Изготовление барокамер
![Page 27: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/27.jpg)
Эти барокамеры без вреда выдерживают охлаждение до температуры жидкого азота, к ним имеются термоизоляционные контейнеры.
Позднее для барокамер был создан дополнительный съемный балластный объем (примерно 150 мл), монтируемый во время декомпрессии.
Изготовление барокамер
![Page 28: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/28.jpg)
Тесты делались на дрожжах S. cerevisidae (пекарские дрожжи) .
Тестирование технологии на дрожжах
Криоконсервация дрожжей проводилась по стандартным протоколам с ксеноном или
газовой смесью № 1 вместо общепринятых криопроекторов.
![Page 29: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/29.jpg)
Тестирование технологии на
дрожжах
Мы установили, что для дрожжей ксенон обладает криопротекторным эффектом при всех опробованных давлениях от 3 до 7 ат. При 6 ат ксенона выживаемость клеток составила 68.5±6%, что сравнимо с эффектом глицерина или ДМСО (50±25%). Без криопротекторов выживаемость дрожжей (определяемая методом дифференциальной окраски трипановым синим) была порядка 20-40%.
Совместное применение глицерина или ДМСО с ксеноном синергетического эффекта не дало – выживаемость оказалась в среднем 71±15%.
![Page 30: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/30.jpg)
Эксперименты с культурами клеток млекопитающих
![Page 31: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/31.jpg)
Эксперименты с культурами клеток
млекопитающих
Были приобретены две адгезионные (CHO-K1 – с хорошей выживаемостью после криоконсервации, и NIH-3T3 – с плохой), а также одна суспензионная клеточная культура (SP 2/0).
Выживаемость NIH-3T3 у нас оказалась существенно выше, чем в паспорте (более 90%).
![Page 32: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/32.jpg)
Эксперименты с культурами клеток
млекопитающих Схема охлаждения: криопробирки с клеточной культурой при комнатной
температуре (в отсутствие DMSO) либо при на ледяной бане (в случае использования DMSO) помещаются в барокамеру, та герметизируется и продувается азотом, ксеноном или воздухом с добавлением 5% СО2, после чего давление доводится до запланированного путем добавления ксенона.
![Page 33: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/33.jpg)
![Page 34: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/34.jpg)
Эксперименты с культурами
клеток млекопитающих
![Page 35: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/35.jpg)
Эксперименты с культурами клеток
млекопитающих
Результаты: В экспериментальной группе в препаратах, замороженных с
ксеноном при P>3 ат любого протокола градиентной заморозки, после отмораживания при микроскопии целые клетки не находились, а тем более – жизнеспособные, вне зависимости от состава среды, наличия/отсутствия ДМСО и эмбриональной телячьей сыворотки и т. д.
В препаратах, замороженных с ксеноном при 2,5-3 ат, после размораживания микроскопически определялись части клеток, но, вне зависимости от наличия криопротекторов, все они были мертвы.
Эти результаты заставили нас провести дополнительные исследования по определению поведения клатратов
![Page 36: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/36.jpg)
Компьютерное моделирование взаимодействие ксенона с водой
В чем дело, помогло прояснить только компьютерное моделирование клатратообразования на суперкомпьютере.
![Page 37: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/37.jpg)
Результаты компьютерного моделирования взаимодействия ксенона с водой
Нами проведён большой объём молекулярно-динамических расчётов поведения растворённого в воде ксенона при температурах около 0°С и ниже. Получены значения температур и концентраций, при которых происходит выпадение из раствора кристаллогидратов ксенона или, наоборот, его разложение.
Полученные результаты позволили найти режим согревания, при котором гидраты ксенона разлагаются без образования газовой фазы – пузырьков, разрушающих клетки.
В данный момент статья находится на рецензировании в Журнале химической
физики AIP (Американского института физики)
![Page 38: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/38.jpg)
Результаты компьютерного моделирования взаимодействия ксенона с водой
Было также проведено моделирование роста кристаллов льда в водном растворе ксенона. Выяснилось, что рост кристалла (и возрастание концентрации ксенона в окружающей воде) происходит до тех пор, пока концентрация не достигнет достаточно высоких значений; после этого рост кристалла прекращается, а остающийся раствор представляет собой аморфный гидрат ксенона.
Как только клатрат перестает быть стабильным, он тут же переходит в газовую фазу и разрушает клетку, так как там его по объему на два или три порядка больше, чем может раствориться в цитоплазме при данной температуре.
![Page 39: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/39.jpg)
Результаты компьютерного моделирования взаимодействия ксенона с водой
Выводы:
чтобы клетки остались целыми и жизнеспособными, необходимо, во-первых, разрушать клатрат при таком давлении, когда выделяющийся газ может целиком раствориться в окружающей жидкости.
Во-вторых, после размораживания проводить постепенную декомпрессию, причем во время нее обеспечить как можно меньшую концентрацию ксенона во внеклеточном пространстве для большего облегчения выхода ксенона из клеток без перехода в газовую фазу.
![Page 40: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/40.jpg)
Результаты компьютерного моделирования взаимодействия ксенона с водой
В развитие данного исследования представляется важным смоделировать поведение ксенона и других инертных газов: при более низких температурах (потребуется ещё
бóльший объём вычислений); в присутствии NaCl и других веществ, характерных для
живой материи; в присутствии стандартных криопротекторов; в клеточных мембранах (есть основания считать, что
инертные газы могут являться эффективными мембранопротекторами).
![Page 41: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/41.jpg)
Результаты экспериментов с личинками комара-мотыля
Все выводы впоследствии также подтвердились и в экспериментах с личинками комара-мотыля, которые также сами по себе, без ксенона, не реагировал на взрывную декомпрессию и повышенное давление воздуха и азота, а вот при отогревании после охлаждении в присутствии ксенона – появлялось огромное количество пузырьков, как снаружи, так и внутри сегментов тел личинок.
![Page 42: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/42.jpg)
Результаты по клеточным культурам (декомпрессия после
размораживания)
Для новых экспериментов был создан дополнительный балластный объем (примерно 150 мл), монтируемый на криобарокамеру, а перед согреванием в охлажденную барокамеру добавлялся гелий при давлении 8-10 ат. После чего криобарокамера в течение 2-3 мин. согревалась на водяной бане при 37°С, затем переносилась в емкость с водою комнатной температуры, в которой и проводилась декомпрессия длительностью 30-50 мин.
![Page 43: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/43.jpg)
Результаты по клеточным культурам (декомпрессия после
размораживания) В результате, после такой декомпрессии у клеток,
замороженных с ксеноном с добавлением традиционных криопротекторов (ДМСО, глицерин) появилась сравнимая с безксеноновым (азот при тех же давлениях) контролем выживаемость клеток при всех опробованных давлениях, в среднем 60±25%. Примечателен тот факт, что, как и в случае дрожжей, само по себе повышенное давление на выживаемость культур клеток млекопитающих не влияет.
К сожалению, у клеток, замороженных по градиентным протоколам только с ксеноном, выживаемость была нулевая. Хотя сами клетки были целыми, оформленными, но – мертвыми. НО!
![Page 44: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/44.jpg)
НО!
Контрольные эксперименты дали совершенно другие результаты. Препараты, замороженные по “дрожжевому протоколу” (2 ч. при -20°С, погружение барокамеры в жидкий азот) с 7 ат ксенона, показали клеточную выживаемость в 2,8±2,3% (от 0,5% до 8,1%).
Препараты, замороженные по тому же протоколу с 6 ат газовой смеси №1 – 2,4±0,9% (от 1,6% до 4,4%). А препараты с разными вариантами ”шоковой заморозки” (максимально быстрое охлаждение от 0°С до -196°С путем погружения барокамеры в жидкий азот) с 7 ат ксенона дали выживаемость в 10,5±4,4% и 22,5±13,4%
![Page 45: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/45.jpg)
Результаты по клеточным культурам (декомпрессия после размораживания)
![Page 46: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/46.jpg)
Эксперименты с дафниями
В данной серии опытов мы использовали вместо ксенона газовую смесь № 2, которая способна образовывать гидраты при тех же условия, что и ксенон. Согласно гипотезе клатратного анабиоза, можно использовать любые клатратообразующие инертные газы для получения клатратного анабиоза.
В отдельных опытах мы убедились, что газовая смесь № 2 не токсична для дафний.
После серии предварительных опытов мы нашли оптимальные условия образования гидратов газовой смеси № 2 как в воде, так и в самих дафниях, а затем научились удалять газ без образования пузырьков в телах дафний.
![Page 47: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/47.jpg)
![Page 48: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/48.jpg)
Дафнии до эксперимента
Однако, нам не удалось наблюдать живых дафний при самых оптимальных процедурах образования и разрушения газовых
гидратов смеси № 2.
![Page 49: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/49.jpg)
Мертвые дафниипосле эксперимента
Мы планируем повторить эти
опыты с применением
ксенона.
![Page 50: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/50.jpg)
Выводы и планы
Все вышеперечисленное говорит о том, что применение газовых криопротекторов оказалось потенциально весьма перспективным, но требует разработки новых протоколов заморозки и программной декомпрессии.
Мы готовы продолжать исследования в данном направлении и надеемся получить при надлежащей поддержке и развитии дополнительных, связанных технологий работающую технологию обратимой криоконсервации сначала мелких объектов, а потом и целых органов животных, в том числе, человека.
![Page 51: Работа НТЦ Криобиологии и анабиоза за 2009-2013 г.](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022062319/558d1c59d8b42a7d258b464e/html5/thumbnails/51.jpg)
Благодарим за внимание
Доклад «Опыт работы и перспективы в области глубокой гипотермии и использовании газовых криопротекторов»
Докладчик
к.м.н. Пульвер Наталья Александровна
Научно-технический центр криобиологии и анабиоза,
февраль 2014 г., Москва, [email protected]