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Laboratoire de Virologie Pôle de Biologie-Pathologie-Physiologie
Hôpital C. Nicolle
CHU Rouen
Laboratoire associé au Centre National de Référence du VIH
TROD et autotests de dépistage
de l‘infection à VIH, VHB (AgHBs) & VHC
COREVIH 26-03-2019
Véronique Lemée Laboratoire de Virologie, CHU de Rouen
Le TROD (Test Rapide d’Orientation Diagnostique)
Trod facile
• Équipement limité
• Simple et rapide
• Réalisable par n’importe qui (mais formé!)
• Réalisable probablement n’importe où
L’autotest = le TROD à domicile
Fenêtre sérologique (ELISA
négatif)
ADN proviral
Signes cliniques
11 16 21 26 29 Temps en jours Contage
Concentrations des marqueurs
Antigène p24 ELISA
Anticorps détectés en ELISA
Anticorps détectés par WB
ARN plasmatique « CV » (cop/ml)
Seuil détection des marqueurs
Combinés ELISA
TROD Ac (3ème G)
Dynamique des marqueurs viraux au cours de la PI VIH sans traitement : où sont les TROD ?
TROD « combo »
Trod : limites
• Dans le choix : multiple fabricants et fournisseurs
Trod : limites
• Dans le choix : multiple fabricants et fournisseurs
• Dans l’interprétation : ‐ lecture subjective Prazuck, PLoS One 2016
‐ bande faible ‐ résultats « indéterminés », tests invalides Prazuck, PLoS One 2016
• Dans certaines situations viro-cliniques : - diversité virale VIH Aghokeng, PLoS One 2009
- primo-infection/infection récente Laperche, JID, 2012
- « guérison » pour le VHC - sous traitement (PreP??) Pavie, PLoS One 2009
- réactivités non spécifiques ou croisées Gautheret-Dejean, J Med Virol, 2015
• Utilisation extensive des TROD hors laboratoires • Promotion des autotests
• OMS : Guidelines on HIV self-testing and partner notification
(12/2016)
Déplacement ++ du dépistage vers “non-experts”
- besoin d’évaluer les performances tests disponibles en France et à l’international (multiplication de l’offre globale et internet ++)
- besoin d’informer les usagers
Trod : utilisateurs
Modalités d’évaluations TROD/autotest
• majorité évaluations sur sérum ou plasma
• utilisation TROD/autotests hors laboratoire : sang total/salive
• essais praticabilité sur sang total :
• essais performances sur sang total : très rares pas ≠ situations viro-cliniques
• offre du marché (distribution classique) ++
• offre internet ++ non réglementaire (France) : qualité ??
nécessité de surveiller les performances sur sang total et des produits de différents marchés
Evaluation de 9 TROD/autotests
Name Manufacturer /
Supplier CE
approved RDT / HT Detection
Differenciation HIV-1 / HIV-2
Matrix Volume Technology¤ Early
reading time Final
reading time
EXACTO PRO TEST HIV
Biosynex N RDT/HT Ab N Capillary or veinous whole blood, serum
or plasma 5 µL IC 10 min 20 min
EZ- TRUST HIV 1 & 2 Rapid Screen Test
CS Innovation Ltd / Web
N HT Ab N Capillary whole blood, serum or
plasma 1 drop IC 10 min 10 min
Genie Fast HIV1/2 Bio-Rad Y RDT Ab N Capillary or veinous whole blood, serum
or plasma 80 µL IC 10 min 30 min
HIV TOP Biosynex Y RDT Ab Y Capillary or veinous whole blood, serum
or plasma 50 µL IC 10 min 20 min
INSTI bioLytical / Nephrotek
Y RDT/HT Ab N Capillary or veinous whole blood, serum
or plasma 50 µL IF immediatly NA
STAT-VIEW HIV 1/2 Chembio
Diagnostic systems / AAZ
Y RDT/HT Ab N Capillary or veinous whole blood, serum
or plasma 2,5 µL IC 15 min 20 min
VIKIA HIV 1/2 bioMérieux Y RDT Ab N Capillary or veinous whole blood, serum
or plasma 75 µL IC 30 min 30 min
BioTechMed HIV1/2 Rapid-4
BioTechMed / Web
N HT Ag/Ab Y Capillary whole
blood 1 drop IC 15 min 20 min
HIV Combo Alere Y RDT Ag/Ab N Capillary or veinous whole blood, serum
or plasma 50 µL IC 20 min 40 min
¤ : IC= Immunochromatography; IF= Immunofiltration
Echantillons (n=500)
200 négatifs
100 VIH-1/M naïfs ARV
125 VIH-1/M positifs
25 VIH-1/O ou VIH-2
50 primo infections VIH-1/M
CeGGID
Collections CNR
Sang total reconstitué (validation protocole) CGR O nég. ; hématocrite 45%
Sang total frais et
reconstitué
VIH-2 (A-I)
VIH-1/M
VIH-1/N
VIH-1/O
VIH-1/P
Diversité panel A
B
C
D
F
G
H
J
CRF01_AE
CRF02_AG
CRF06_cpx
CRF09_cpx
CRF11_cpx
CRF18_cpx
CRF31_BC
CRF37_cpx
CRF43_02G
CRF45_cpx
CRF60_BC
Complex recombinant
HIV-1/O
HIV-2
N=250 hors primo-infections
B
CRF02
VIH-1/O VIH-2
Spécificité = les échantillons VIH négatifs doivent être négatifs !
Negative samples
EXACTO PRO TEST
HIV
EZ-TRUST HIV 1 & 2
RST
Genie Fast HIV1/2
HIVTOP INSTI STAT-VIEW
HIV 1/2 VIKIA HIV
1/2
BioTechMed HIV1/2
Rapid-4 a HIV Combo
Ag Ac
N=200 3 0 0 2 0 0 1 0 1 0
Specificity 98,50% 100% 100% 99% 100% 100% 99,50% 100% 99,50% 100%
a : N=30 samples
Spécificité <100% EXACTO PRO TEST HIV HIVTOP VIKIA HIV 1/2 HIV Combo (partie Ag)
Spécificité web 100% !
Sensibilité 100% (situations viro-clinique/diversité des virus)
Positive samples N=225
EXACTO PRO TEST
HIV
EZ-TRUST HIV 1 & 2
RST
Genie Fast HIV1/2
HIVTOP INSTI STAT-VIEW
HIV 1/2 VIKIA HIV
1/2
BioTechMed HIV1/2
Rapid-4 a HIV Combo
Ag Ac
N=100$ 100 100 100 100 100 100 100 50 6 100
N=125£ 125 125 125 125 125 125 125 10 0 125
Sensitivity 100% 100% 100% 100% 100% 100% 100% 100% NA 100% $: corresponding to ARV naive patients; £ : corresponding to ARV experienced patients
a : N=60
Sensibilité VIH-1/M = les échantillons VIH positifs doivent être positifs !
Sensibilité VIH-1/O – VIH-2 – VIH-1+2
Mauvaise sensibilité pour les VIH-1/O (20%-90%): 2 = 100% !
Mauvaise sensibilité VIH-2 pour BioTechMed (web)
Positive samples
EXACTO PRO TEST
HIV
EZ-TRUST HIV 1 & 2
RST
Genie Fast HIV1/2
HIVTOP INSTI STAT-VIEW
HIV 1/2 VIKIA HIV
1/2 BioTechMed
HIV1/2 Rapid-4 HIV Combo
T1 T2 T1 T2 Ag Ac
HIV-1/O
N=10 8 6 6 8 0 6 9 10 2 0 0 10
Sensitivity 80% 60% 60% 80% NA 60% 90% 100% 20% NA NA 100%
HIV-2
N=13 13 13 13 4 13 13 13 13 1 7 0 13
Sensitivity 100% 100% 100% NA 100% 100% 100% 100% NA 54% NA 100%
HIV-1+2
N=2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 1 0 2
Sensitivity 100% 100% 100% 100% 100% 100% 100% 100% 100% 50% 100% 100%
Réactivité croisée ++ VIH-2 sur VIH-1 pour HIVTOP
Conclusion VIH
Utilisation/vente élargie TROD/autotests aux non-spécialistes
• Pas d’évaluation de performances
• Soumis à marketing « agressif »
• Contraintes financières
• Confrontés à l’interprétation subjective
essentiel de surveiller performances et leur fournir conseils
Utilisation hors les murs/pays ressources limitées
• Nécessité de revoir modalités d’évaluation - Sur sang total
- Panel représentatifs de diversité virale et situations viro-cliniques
intérêt sang reconstitué, mais limite et chronophage
Conclusion VIH
Diversité des performances des tests
• Très bonne sensibilité infection chronique
• Toujours difficultés avec VIH-1/O et discrimination VIH-1+2
• Performances variables pour infection récente/primo-infection = argument marketing !
• Intérêt 4G : bonne performance Alere (autres à tester), proche EIA 4G ?
Offre internet = loterie
• EZ-Trust 3G : pas plus mauvais que certains 3G CE
• BioTechMed 4G = 3G = publicité mensongère + très mauvaise détection variants
• Offre pléthorique
• Aucun service associé (pas aide téléphonique, notice succincte si elle existe…)
• Frais livraison + frais bancaires…
• Non-livraison sans recours
Informer usagers des limites et risques de ce type d’achat
Sensibilité primo-infection VIH-1/M
Patient No 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 12 14 13 11 18 16 15 19 17 20 21 22 23 24 25 27 26 28 29 30 31 32 33 34 36 35 40 41 37 38 39 43 44 45 42 46 47 48 49 50 Nb of positive test
Nb Western blot lines 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 2 2 2 3 3 3 3 4 4 4 4 4 5 5 5 5 5 6 6 6 6 8 8 8 8 9
Alere HIV Combo Ag+Ab 43
EXACTO PRO TEST HIV 36
Genie Fast HIV1/2 31
HIVTOP 30
BioTechMed HIV1/2 Rapid-4 Ag+Ab 29
VIKIA HIV 1/2 29
EZ-TRUST HIV 1 & 2 RST 28
INSTI 27
STAT-VIEW HIV ½ 26
Vérification sur des cultures de virus : - Alere HIV Combo : tous les surnageants (sauf VIH-2) sont détectés - BioTechMed = pas de détection de p24
Publicité mensongère
Des tests et des tests…et pas que des tests
Et pour les hépatites ?
Et pour les hépatites ?
• Contage 1-3 mois.
• Ag HBs précède de 2-4 semaines ALAT et clinique.
• Anti HBc: pas de signification évolutive.
• Anti HBc IgM peuvent persister 1 an (70% des cas).
• Ag HBe = réplication virale.
• Séroconversion Hbe avant HBs
Hépatite B, quels marqueurs ? À quel stade ?
Hépatites B chroniques : quels profils sérologiques ?
AgHBs > 6 mois
1ere séroconversion: système
HBe.
2éme séroconversion: système
HBs.
Et le VHC ?
ANRS 12379 (Etude rétrospective bicentrique)
Performances des TDR pour la Détection des
anti-VHC et de l’AgHBs à partir de sérum/plasma
Stéphane Chevaliez/Richard Njouom
CNR hépatites virales B, C et delta & Centre Pasteur du Cameroun
(Henri Mondor)
Hépatites : des études en cours …
Mais résultats non diffusables … en dehors de la présentation !
Tests VHC sérum Spécificité Sensibilité
SD Bioline HCV
Hexagon HCV
First Response® HCV Card Test
Multisure® HCV
Anti-HCV Card Cypress
TOYO® anti-HCV test
Tests VHB Sérum
SD Bioline HBsAg
Hexagon HBsAg
First Response® HBsAg
HBsAg Card Cypress
TOYO® HBsAg
VIKIA HBsAg
Hépatites : des données déjà disponibles…
Tests HCV Spécificité Sensibilité
Sang total capillaire
OraQuick® HCV Rapid Ab Test 100% 99,4%
TOYO® anti-HCV test 98,8% 95,8%
Labmen® HCV test * 100% 63,1%
Liquide craviculaire **
OraQuick® HCV Rapid Ab Test 100% 97,6%
Chevaliez et al.,. Clin Microbiol Infect 2016;22(5):459.e1-6.
* Retiré du marché ** cf ultérieurement
318 patients avec une infection chronique C, 25 patients avec une infection guérie et 170 individus VHC-séronégatifs (N=513)
Hépatites : des données déjà disponibles…
Tests HCV Matrices Spécificité Sensibilité
OraQuick® HCV Rapid Ab Test Sang total, sérum, plasma
99,8% 99,5%
OraQuick® HCV Rapid Ab Test Liq. craviculaire 99,4% 95,9%
SD Bioline HCV Sérum 99,5% 93,5%
WHO guidelines HBV and HCV testing, Geneva 2017; Khuroo et al., PLoS One 2015;10(3):e0121450.
Tests HBV Matrices Spécificité Sensibilité
Determine HBsAg Sérum, plasma 99,1% 90,8%
VIKIA® HBsAg Sérum, plasma 99,9% 82,5%
WHO guidelines HBV and HCV testing, Geneva 2017; Amini et al., BMC Infect Dis 2017;17(Suppl 1):698.
Le futur ?
• Les tests mixtes ?
• Tests POCT moléculaires ?
• Autres matrices ?
• Papier filtre ou dried blood spot (DBS) pour collecter le sang total = « buvard »
Les tests mixtes ?
Trousses de Détection-Quantification de l’ARN VHC & VHB au laboratoire
VHC RealTime HCV (Abbott)
CAP/CTM HCV 2.0 (Roche)
Xpert® HCV VL (Cepheid)
Xpert HCV VL FS (Cepheid)
Genedrive® HCV ID Kit
Aptima® HCV Quant Dx (Hologic)
Principe Real-time PCR Real-time PCR Real-time PCR Real-time PCR PCR Real-time TMA
Volume nécessaire (µL) 500 650 1 000 100 30 500
Matrice biologique Plasma/serum Plasma/serum Plasma/serum Whole blood Plasma/serum Plasma/serum
Extraction Automated Automated Automated Automated - Automated
Délai (min) 276* 345* 105 <60 90 150*
“Random access“ No No Yes Yes Yes Yes
Tests POCT moléculaires ?
VHB RealTime HBV (Abbott)
CAP/CTM HBV 2.0 (Roche)
Xpert® HBV (Cepheid)
VERIS HBV (Beckman)
Aptima® HBV Quant (Hologic)
Principle Real-time PCR Real-time PCR Real-time PCR Real-time PCR Real-time TMA
Volume required (µL) 500 650 600 700 500
Biological matrix Plasma/serum Plasma/serum Plasma/serum Plasma Plasma/serum
Time to have results (min) 321* 330* <60 105 150*
Random access No No Yes Yes Yes
Principe *
Collecter 100 µL de sang capillaire après auto-piqure
Déposer l’échantillon dans la cartouche
Résultat ≤ 60 minutes
1
2
3
*CE IVD; not available in the US
Tests POCT moléculaires ?
Abbott RealTime HCV
No. of quantifiable No. of unquantifiable No. of total
Xpert HCV VL FS
No. of quantifiable 59 0 59
No. of unquantifiable 0 108 108
No. of total 59 108 167
Lamoury et al., J Infect Dis 2018;217(12):1889-1896.
Quantification/Detection ARN VHC (Xpert HCV VL FS, Cepheid)
Tests POCT moléculaires ?
Quantification/Detection ARN VHC (Xpert HCV VL FS, Cepheid)
Abbott RealTime HCV
No. of quantifiable No. of unquantifiable No. of total
Xpert HCV VL FS
No. of quantifiable 59 0 59
No. of unquantifiable 0 108 108
No. of total 59 108 167
Abbott RealTime HCV
No. of detectable No. of undetectable No. of total
Xpert HCV VL FS
No. of detectable 59 0 59
No. of undetectable 1 107 108
No. of total 60 107 167
Lamoury et al., J Infect Dis 2018;217(12):1889-1896.
Tests POCT moléculaires ?
= Valeurs très faibles !
Le Liquide Craviculaire … ? • Simple, indolore, non invasif, peu couteux à collecter
• Contient des immunoglobulines (et des marqueurs viraux) en quantité plus faible que le sang
• Taux d’acceptation du test salivaire 100% chez des Jeunes Détenus au Royaume Uni
McKie et al., Lancet Infect Dis 2002;2(1):18-24.
Matrices IgG (mg/L) IgM (mg/L) IgA (mg/L)
Plasma 14730 1280 2860
Salive mixte 14,4 2,1 19,4
Salive parotidienne 0,36 0,43 39,5
Liq. craviculaire 3500 250 1110
Candfield et al., Int J STD AIDS 2017;28(12):1234-1238.
Autres matrices ?
• 318 patients « chronique », 25 patients « guéris » et 170 « séronégatifs » (VIH négatif)
Tests Spécificité Sensibilité
Sang total capillaire
OraQuick® HCV Rapid Ab Test 100% 99,4%
TOYO® anti-HCV test 98,8% 95,8%
Liquide craviculaire
OraQuick® HCV Rapid Ab Test 100% 97,6%
Chevaliez et al.,. Clin Microbiol Infect 2016;22(5):459.e1-6.
Autres matrices ?
• 318 patients « chronique », 25 patients « guéris » et 170 « séronégatifs » (VIH négatif)
Tests Spécificité Sensibilité
Sang total capillaire
OraQuick® HCV Rapid Ab Test
100% 99,4%
TOYO® anti-HCV test 98,8% 95,8%
Liquide craviculaire
OraQuick® HCV Rapid Ab Test
100% 97,6%
Chevaliez et al.,. Clin Microbiol Infect 2016;22(5):459.e1-6.
• 63 patients VIH-pos incluant 18 patients avec une infection chronique C, 32 avec une infection guérie et 13 patients séronégatifs pour le VHC • => diminution de la sensibilité, et ce quelquesoit
la matrice !
Tests Spécificité Sensibilité
Sang total capillaire
OraQuick® HCV Rapid Ab Test
100% 89,8%
TOYO® anti-HCV test v1.0 100% 71,4%
TOYO® anti-HCV test v2.0 100% 92,0%
Multisure™ HCV Antibody Assay
100% 87,8%
Liquide craviculaire
OraQuick® HCV Rapid Ab Test
100% 79,6% Chevaliez et al., AASLD 2018; Abstract 1633.
Autres matrices ?
• Accès « universel » : éloignement géographique, précarité veineuse, problèmes de stockage, absence de tests …
• Faible volume de sang (1 à 2 gouttes), facile à collecter, indolore et possibilité d’acheminement par courrier à température ambiante, possibilité d’auto-prélèvement
• Bonne stabilité
• Diminution des coûts (personnel formé, facilité de transport et de stockage)
• Détection de nombreux analytes : recommandé par l’OMS pour certaines maladies tropicales (Trachome, filariose lymphatique, schistosomiase, onchocercose, helminthiase) ;
• Prévention de la résistance aux ARV (détermination des profils de résistance du virus)
Buvard ? Leurs avantages :
• Nature de l’échantillon biologique • Perturbations analytiques dues à l’hémolyse
• Quel papier filtre ? Quel volume ? Quelle extraction ?
• Faible sensibilité analytique • Quels seuils d’inteprétation ?
=> Absence de procédures standardisées !
Buvard ? Quelques inconvénients :
- Détection des Anticorps VHC (aHCV Vitros, Ortho-Clinical Diagnostics)
Soulier et al., J Infect Dis 2016;213(7):1087-95.
Sensibilité = 99,1% Spécificité = 98,2%
Buvard ? Quelques exemples :
- Détection des Anticorps VHC (aHCV Vitros, Ortho-Clinical Diagnostics)
Sensibilité = 99,1% Spécificité = 98,2%
- Quantification de l’ARN VHC (Abbott RealTime HCV, CAP/CTM HCV v2.0)
Soulier et al., J Infect Dis 2016;213(7):1087-95.
Buvard ? Quelques exemples :
- Détection des Anticorps VHC (aHCV Vitros, Ortho-Clinical Diagnostics)
Sensibilité = 99,1% Spécificité = 98,2%
- Quantification de l’ARN VHC (Abbott RealTime HCV, CAP/CTM HCV v2.0)
- Quantification de l’ARN VHC (Xpert HCV VL, Cepheid)
Wlassow et al., submitted
Buvard ? Quelques exemples :
- Détection des Anticorps VHC (aHCV Vitros, Ortho-Clinical Diagnostics) Sensibilité = 99,1%
Spécificité = 98,2%
- Quantification de l’ARN VHC (Abbott RealTime HCV, CAP/CTM HCV v2.0)
- Quantification de l’ARN VHC (Xpert HCV VL, Cepheid)
- Sang Total Déposé sur DBS sur 129 patients avec une infection chronique VHC, 10 patients avec une infection guérie et 68 individus séronégatifs
Tests Spécificité Sensibilité
OraQuick® HCV Rapid Ab Test 100% 100%
First Response® HCV Card test 100% 99,3%
Assure HCV Rapid Test 100% 98,6%
MultiSure ™ HCV Antibody Assay 100% 98,6%
Poiteau et al.,. J Viral Hepat 2016;23(5):399-401.
Test Point-of-care : une seule visite suffirait …!
Grebely et al., Expert Rev Mol Diagn 2017;17(12):1109-1115.
Remerciements très sincères
À Stéphane Chevaliez du CNR hépatites virales B, C et delta (Henri Mondor), pour ses diapositives concernant les hépatites, avec ou sans retouches …
Suivez le logo !
Sans oublier toute l’équipe du laboratoire de virologie, et du COREVIH … !