Post on 10-Jan-2017
UNIVERSITA’ DEGLI STUDI DI PALERMO
SCUOLA DELLE SCIENZE DI BASE E APPLICATE
LAUREA MAGISTRALE BIOTECNOLOGIE PER L’INDUSTRIA E LA RICERCA SCIENTIFICA
Dipartimento di Scienze e Tecnologie Biologiche Chimiche e Farmaceutiche
“Metodologie atte a individuare la funzione di alcuni fattori di
sopravvivenza/morte in cellule del cumulo ooforo, di pazienti che si
sottopongono a procedure di procreazione medicalmente assistita.”
Tesi di laurea di:Dott.ssa Valeria Prestigiacomo
Relatore:Prof.ssa Maria Carmela RoccheriCorelatore:Dott.ssa Liana Bosco
ANNO ACCADEMICO 2013-2014
Valeria Prestigiacomo-UNIPA
APOPTOSI FOLLICOLARE
Per un follicolo è più facile morire
piuttosto che ovulare!
Valeria Prestigiacomo-UNIPA
Induzione della crescita follicolare multipla
Prelievo ovocitario o pick-up
Fecondazione
Trasferimento embrionario
TECNICHE DI PROCREAZIONE MEDICALMENTE ASSISTITA
Valeria Prestigiacomo-UNIPA
MARCATORI DI SOPRAVVIVENZA E DI MORTE
AKT Signali
ngValeria Prestigiacomo-UNIPA
https://www.youtube.com/watch?v=hcGrpd0CRV0
MARCATORI DI SOPRAVVIVENZA E DI MORTE
ERK1/2 Signali
ng
Valeria Prestigiacomo-UNIPA
https://www.youtube.com/watch?v=oDjDUUhGVsI
ERK, possibile marcatore di morte
Cagnal e , Chambrad, 2009
Evan e Littlewood, , 1998
Valeria Prestigiacomo-UNIPA
SCOPO DEL LAVORO
Marcatori di qualità oocitaria
pAKT
pERK1/2 colocalizzat
e con Caspasi-3
Frammentazione
DNA
Valeria Prestigiacomo-UNIPA
Materiali e MetodiLo studio è stato condotto su 15 pazienti che rispondono ai criteri di inclusione:
• Normo-responder con normale livello basale di FSH;
• Normale indice di massa corporea;• Età inferiore ai 38 anni.
Preparazione del campione
Valeria Prestigiacomo-UNIPA
Saggio TUNEL
Saggio Immunofluorescenza
% di frammentazione del DNA
Livelli di espressione delle proteine pAKT e
pERK1/2
Materiali e Metodi
Valeria Prestigiacomo-UNIPA
Saggio Immunofluorescenza in situ di pERK1/2 in colocalizzazione con Cleaved-Caspasi-3
Valeria Prestigiacomo-UNIPA
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 160
4,000,000
8,000,000
12,000,000
16,000,000
20,000,000
24,000,000
pERK1/2 -caspasi3
pERK nucleare-caspasi3
Densitometria
Pz
Pz
Densitometria
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 160
2,000,000
4,000,000
6,000,000
8,000,000
10,000,000
12,000,000
14,000,000
16,000,000
pAKT
pAKT
Valeria Prestigiacomo-UNIPA
Conclusioni
Valutazione delle proteine pAKT & Cleaved-Caspasi-3 /pERK1/2 in cellule del cumulo ooforo umano
Relazione fra la molecola Cleaved-Caspasi-3 e la percentuale di frammentazione del DNA Possibile uso di questi marcatori oocitari per la scelta di migliori oociti da fecondare nei cicli di ICSI
pAKT , Apotposi
pERK1/2 Apotposi
da singolo ovocita
da pool ovocitiValeria Prestigiacomo-UNIPA
Ringrazio il Centro di Biologia della Riproduzione nella
figura del Dott. Ruvolo per averci fornito il materiale di ricerca e di aver contribuito alla stesura di questa tesi
Valeria Prestigiacomo-UNIPA