Post on 24-Jul-2015
Tema 9:
Bacilos productores de Zoonosis
Lcda. Liliana Gómez Gamboa (M.Sc.)
REPÚBLICA BOLIVARIANA DE VENEZUELA
UNIVERSIDAD DEL ZULIA
FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA DE MEDICINA
UNIDAD CURRICULAR: BACTERIOLOGÍA Y VIROLOGÍA
MARACAIBO, JUNIO 2012.
• 7 géneros
Familia
Brucellaceae
• B. melitensis (cabras)
• B. suis (cerdos)
• B. abortus (vacas)
• B. canis (perros)
Género
Brucella (10)
• Parásitos obligados de animales y humanos.
• Se localizan intracelularmente.
• Son metabólicamente inactivos.
• Cocos o bacilos Gram negativo (1,2µm de diámetro) con predominio de formas cocobacilares. Con frecuencia se colorean irregularmente.
• Aerobios, no mótiles y no formadores de esporas.
• Cultivo colonias pequeñas, convexas, lisas. 2-5 días.
• Están adaptados a un hábitat intracelular y sus requerimientos nutricionales son complejos (aminoácidos, vitaminas, sales y glucosa).
• Utilizan CHO sin producción de gas.
• Catalasa +, oxidasa +, H2S + y NO3 +. • Moderadamente sensibles al calor y
acidez. Son destruidos con la pasteurización.
El suero de animales susceptibles contiene una globulina y una
lipoproteína que suprime el crecimiento de cepas avirulentas
y favorece el crecimiento de tipos virulentos.
Colonias lisas (virulentas) colonias rugosas (avirulentas)
≠ de especies o Biovariedades: Sensibilidad Producción de H2S
TODAS LAS ESPECIES PUEDEN INFECTAR UN AMPLIO RANGO DE ANIMALES, INCLUYENDO HUMANOS.
Tracto intestinal
Membranas mucosas
Piel
RUTAS DE INFECCIÓN
Ingestión de leche o quesos de
leche de cabra infectada.
Gotas
Contacto con tejidos de
animales infectados.
Los organismos progresan de la puerta de entrada, vía linfática a la circulación sanguínea. Se pueden desarrollar abscesos en tejido linfático, hígado, bazo, médula ósea y otras partes del sistema retículo endotelial. En tales lesiones Brucella es principalmente intracelular. Pueden ocurrir: osteomielitis, meningitis o colecistitis.
PRINCIPALES REACCIONES
HISTOLÓGICAS EN BRUCELOSIS
1) Proliferación de células mononucleares
2) Exudación de fibrina
3) Coagulación necrótica
4) Fibrosis
Células gigantes y epitelioides con
necrosis central y fibrosis periférica.
GRANULOMAS
Incubación 1-6 semanas.
Inicio insidioso o gradual
malestar, fiebre, debilidad, dolores,
sudoración.
• La fiebre se eleva en la tarde y ↓ durante la
noche con mucha sudoración.
• Síntomas nerviosos y gastrointestinales.
• Agrandamiento de nódulos linfáticos.
• El bazo se vuelve palpable.
• Hepatitis acompañada de ictericia.
• Osteomielitis.
Debilidad.
Dolores.
Fiebre de bajo grado.
Manifestaciones no específicas
compatibles con síntomas
psiconeuróticos.
Brucella no puede ser aislada del
paciente en esta fase
Títulos de aglutininas ↑
Dx de brucelosis crónica es difícil de
establecer con certeza a menos que se presenten lesiones locales.
DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO
MUESTRAS
• SANGRE cultivo
• BIOPSIA (nódulos linfáticos, hueso) cultivo
• SUERO ensayos serológicos
CULTIVO
• Agar Brucella altamente enriquecido
• Atmósfera 8-10% CO2 T° 35-37%
• Tiempo de incubación 3 semanas
• En pocos días, se observan colonias < 1mm de diámetro, no hemolíticas.
• La observación de cocobacilos Gram negativo catalasa positivo y oxidasa positivo sugiere especies de Brucella.
DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO
ENSAYOS DE AGLUTINACIÓN (Aglutininas febriles)
ANTICUERPOS BLOQUEANTES
ELISA
SEROLOGÍA
Los niveles de IgM se elevan la primera semana de la enfermedad aguda, con un pico a
los 3 meses y persisten durante enfermedad crónica.
Aún con el tto antibiótico, los niveles de IgM pueden persistir hasta 2 años en un % bajo
de pacientes.
Los niveles de IgG se elevan después de 3 semanas de inicio de la enfermedad aguda,
con un pico a las 6-8 semanas y permanecen elevados durante la enfermedad crónica.
Los niveles de IgA se encuentran en niveles paralelos a los de IgG.
Los títulos de aglutininas IgG
superiores a 1:80 indican
infección activa.
Las aglutininas de Brucelosis
dan reacción cruzada con
aglutininas de tularemia.
DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO
ENSAYOS DE AGLUTINACIÓN
ANTICUERPOS BLOQUEANTES
ELISA Para detectar IgA, IgG e IgM.
Son IgA que interfieren con la
aglutinación por IgG e IgM y
ocasionan un resultado negativo
en bajas diluciones de suero y
positivo en diluciones más altas.
Estos anticuerpos aparecen
durante la fase sub aguda de la
infección, persistiendo por muchos
años independientemente de la
actividad de la infección y son
detectadas por el método de
Coombs. Mas sensible y específico
que los ensayos de
aglutinación.
Con la infección ocurre una respuesta de anticuerpos y es
probable que se produzca resistencia a ataques
subsecuentes.
Tetracicilina o Ampicilina S
Debido a su localización intracelular, los
organismos no son erradicados rápidamente
ni completamente del hospedador, por lo que
se requiere un tratamiento prolongado.
Combinaciones Te + doxyciclina y
streptomicina por 2-3 semanas o Ra por 6
semanas.
Brucella son patógenos animales transmitidos a humanos por
contacto accidental con heces, orina, leche o tejidos animales
infectados.
FUENTE COMÚN DE INFECCIÓN leche, productos lácteos
no pasteurizados y contacto ocupacional (granjeros,
veterinarios, ganaderos) con animales infectados.
Transmisión a través del aire (menos frecuente).
Mas frecuente en hombres.
La mayoría de las infecciones permanecen asintomáticas
(latentes).
Las tasas de infección varían enormemente con diferentes
animales y en diferentes países.
Inmunización activa de humanos contra la infección por
Brucella Experimental.
CONTROL:
Limitación de la diseminación
Erradicación de infección animal
Pasteurización de leche y sus productos
Reducción del riesgo ocupacional
Francisella
Familia
Francisellaceae
• 6 especies
• 8 subespecies
Género
Francisella
F. tularensis TULAREMIA (conocida también como fiebre glandular, fiebre de los conejos, fiebre de la garrapata o fiebre de la mosca del ciervo). Cocobacilo Gram negativo débil muy pequeño (0,2x0,2 a 0,7 µm). No mótil. Delgada cápsula lipídica. Exigente desde el punto de vista nutricional (cistina). Aerobio estricto.
Parásito intracelular puede sobrevivir durante períodos prolongados en los macrófagos del sistema reticuloendotelial como consecuencia de su capacidad de inhibición de la fusión fagosoma-lisosoma.
LPS (ENDOTOXINA)
CÁPSULA POLISACÁRIDA
ANTIFAGOCÍTICA
Distribución universal en el hemisferio
norte desde el círculo ártico hasta unos 20°
de latitud norte. Incidencia ↓.
No se ha descrito la enfermedad en
regiones meridionales (Centroamérica,
Sudamérica y Australia).
F. tularensis
Se encuentra en numerosos animales salvajes, aves y artrópodos hematófagos.
Focos endémicos frecuentes: conejos, garrapatas, liebres, ratones de campo, ratas almizcleras y castores.
En la mayor parte de los casos se adquiere por la picadura de una
garrapata de “caparazón duro”
(Ixodes, Dermacentor, Ambylomma)
TULAREMIA HUMANA
La enfermedad también se adquiere
por contacto con un animal
infectado o una mascota (gato) que
haya cazado a un animal infectado
(conejo).
• Las garrapatas “de caparazón duro” se alimentan
del anfitrión durante varias horas o días.
• La enfermedad también se adquiere por consumo
de carne o agua contaminada o bien por
inhalación de una partícula aerosolizada
infecciosa (generalmente en un laboratorio
mientras se cura a un animal infectado).
Sólo se necesitan 10 microorganismos
cuando la exposición tiene lugar por una
picadura de artrópodo o contaminación de
piel intacta.
Por inhalación 50 microorganismos
Por Ingestión 108 microorganismos
ÚLCERO GLANDULAR (úlcera cutánea y
ganglios linfáticos hipertrofiados)
ÓCULO GLANDULAR (afección ocular y ganglios linfáticos cervicales hipertrofiados)
TIFOIDEA (septicemia) NEUMÓNICA
(arma biológica)
BUCOFARÍNGEA
GASTROINTESTINAL
MUESTRAS
• RIESGOS PARA EL MÉDICO Y PERSONAL DE LABORATORIO.
• EL MICROORGANISMO PUEDE INOCULARSE A TRAVÉS DE LA PIEL INTACTA Y LAS MEMBRANAS MUCOSAS DURANTE LA RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA O SER INHALADO.
• GUANTES, TAPABOCA EN CAMPANA DE BIOSEGURIDAD.
MICROSCOPÍA
• Aspirados de ganglios linfáticos o úlceras infectadas No aporta resultados satisfactorio (pequeño tamaño y tinción débil con Gram).
• > Sensibilidad y especificidad TINCIÓN DIRECTA DE LA MUESTRA CON ANTICUERPOS FLUORESCENTES O INMUNOFLUORESCENCIA.
DIAGNÓSTICO MOLECULAR
• PCR
CULTIVO
• No se puede aislar F. tularensis de los medios habituales de laboratorio, debido a que requiere compuestos que contiene grupos sulfidrilos.
MEDIOS DE CULTIVO
• Agar chocolate o agar tamponado con extracto de levadura de carbón + cisteína
• Crecimiento lento (3 días)
IDENTIFICACIÓN
• Morfología colonial
• Morfología celular
• Aglutinación con anticuerpos específicos.
SEROLOGÍA
• Título de anticuerpos: incremento de los títulos a lo largo de la enfermedad o un único título de 1:160 o superior. IgM, IgG e IgA persistencia durante años
Estreptomicina (notable toxicidad).
Gentamicina, fluoroquinolonas, Doxiciclina.
Producción de ß-lactamasas.
Con tratamiento precoz tasa de mortalidad del 1%.
Evitar reservorios y vectores de infección (conejos,
garrapatas, insectos que pican).
Evitar manipular conejos que parezcan enfermos.
Uso de ropa protectora y repelentes de insectos.
Profilaxis con antibióticos en personal de riesgo.
• 15 géneros
Familia
Pasteurellaceae
• 21 especies
• 3 subespecies
Género
Pasteurella
• Formas cocoides pequeños a bacilos Gram negativo aislados, en pares o
en cadenas cortas.
• No mótiles.
• Anaerobios facultativos.
• Coloración bipolar frecuente.
• Requerimientos nutricionales sencillos excepto algunas especies que
requieren NAD (Factor V).
• Las colonias son de 1-2 mm de diámetro después de 24 horas de
incubación en SH, gris opacas, 37°C.
• Ampliamente distribuidos en nasofaringe y
encías de animales domésticos y salvajes
saludables y enfermos.
P. multocida
INFECCIÓN DE HERIDAS
TRAS MORDEDURA DE
ANIMALES
CÁPSULA (serotipos del A al F). A, D y F.
CITOTOXINAS.
HEMAGLUTININA FILAMENTOSA.
PROTEÍNAS PARA ADQUISICIÓN DE
HIERRO.
Infección de heridas o tejidos blandos después
de mordeduras, rasguños o lamidas de
lesiones de piel por carnívoros.
Infecciones de tracto respiratorio
(sinusitis, bronquitis,
neumonía, empiema)
Enfermedades sistémicas (meningitis, peritonitis, septicemia, artritis, endocarditis y
osteomielitis).
CULTIVO
SIEMBRA DE MUESTRAS CLÍNICAS
EN MEDIOS DE CULTIVO ENRIQUECIDOS
INCUBACIÓN EN AEROBIOSIS A 35-37°C durante 24-horas
IDENTIFICACIÓN:
Morfología colonial
Morfología celular
Pruebas bioquímicas
Susceptibilidad a los antimicrobianos (CLSI 2011).
Rickettsia
• Orientia
• Rickettsia
Familia
Rickettsiaceae
• 28 especies
Género
Rickettsia
• Bacilos Gram negativo pequeños (0,3 a 0,5x 1 a 2 µm) con una
capa de peptidoglucano mínima (débilmente coloreados con
Gram) y LPS (endotoxina débil).
• No mótiles.
• Rodeados de una biopelícula poco adherente.
• Parásitos intracelulares estrictos de vida libre en el citoplasma de
las células infectadas.
Epidemiología
de las
infecciones
frecuentes por
Rickettsia
• Lipopolisacárido.
• Peptidoglucano.
• Proteína principal (OmpB).
• Lipoproteína.
• Proteína de superficie (OmpA).
Las bacterias acceden al interior de las células eucariotas al estimular la fagocitosis. Luego degradan la membrana del fagolisosoma mediante la producción de fosfolipasa y pasan al citoplasma para poder sobrevivir. La multiplicación es lenta (9-12 h).El grupo de la fiebre maculosa se liberan de las células de manera continua a través de largas proyecciones citoplasmáticas, mientras que el grupo del tifus se acumula en el citoplasma celular hasta provocar lisis de las membranas celulares con destrucción de las células y liberación de las bacterias (principal diferencia en la movilidad celular).
R. rickettsii Patógeno del ser humano más frecuente.
Agente etiológico de la FIEBRE MACULOSA DE LAS
MONTAÑAS ROCOSAS.
No existen indicios de que R. rickettsii produzca toxinas o
de que la respuesta inmunitaria del anfitrión sea la
responsable de las manifestaciones patológicas de esta
enfermedad.
PRINCIPALES
MANIFESTACIONES
CLÍNICAS
Replicación de las
bacterias en las células
endoteliales
Daño ulterior a éstas
células y extravasación
de los vasos sanguíneos.
Pérdida de plasma hacia los tejidos Hipovolemia e
Hipoproteinemia reducción de perfusión de varios
órganos e insuficiencia orgánica.
Destrucción intracelular mediada por citocinas y
eliminación por linfocitos CD8 citotóxicos.
Respuesta humoral a las proteínas de la
membrana externa de las rickettsias.
Respuesta Inmunitaria
R. rickettsii
El RESERVORIO PRINCIPAL Y EL VECTOR de R.
rickettsii son las garrapatas duras infectadas:
Garrapata de la madera (Dermacentor andersoni),
en los estados de las Montañas Rocosas.
Garrapata del perro (Dermacentor variabilis) en los
estados del sudeste y en la costa oeste.
Otros reservorios de garrapatas son Rhipicephalus
sanguineus en México, y Amblyomma cajennense en
Centroamérica y en Sudamérica.
R. rickettsii
Las rickettsias se mantienen en la población de garrapatas por transmisión trans-ovárica. Algunos mamíferos, como los roedores salvajes, pueden actuar también como reservorios, pero este origen se considera infrecuente para las infecciones humanas transmitidas por garrapatas.
R. rickettsii
Las infecciones por rickettsias se transmiten al ser humano a
través de las garrapatas adultas cuando estas se alimentan.
Más del 90% de las infecciones ocurren entre los meses de abril y
octubre, lo que se corresponde con el período de máxima actividad
de las garrapatas.
Para infectarse, el individuo debe estar expuesto a la garrapata
durante un período de tiempo prolongado (p. ej., de 24 a 48 horas).
Las rickettsias avirulentas latentes se activan cuando el insecto se
alimenta con sangre caliente, y posteriormente se deben liberar de
las glándulas salivales del vector para penetrar en la sangre del
anfitrión humano.
R. rickettsii
CU
LT
IV
O
• Cultivos celulares o huevos embrionados
MIC
RO
SC
OP
ÍA
• Se tiñen débilmente con la tinción de Gram, mejor con Giemsa.
• Inmunofluorescencia diagnóstico clínico de la fiebre de las Montañas Rocosas.
SE
RO
LO
GÍA
Y
DIA
GN
ÓS
TIC
O M
OL
EC
UL
AR
• Prueba de Weü-Felix: ↓ sensibilidad y especificidad.
• Microinmunofluorescencia: detecta Ac frente a proteínas de la membrana externa (específicos de especie) y antígeno LPS. Reacciones cruzadas con Legionella.
Las rickettsias son sensibles a las tetraciclinas (p. ej., doxiciclina)
y las fluoroquinolonas.
El diagnóstico precoz y la instauración de un tratamiento
adecuado se asocian generalmente a un buen pronóstico; no
obstante, estas circunstancias pueden no ocurrir cuando los signos
clínicos claves (como el exantema) se desarrollan al final de la
enfermedad o no lo hacen en ningún momento de su evolución.
Además, los hallazgos no están disponibles generalmente antes de
2 o 3 semanas del inicio de la enfermedad, por lo que también se
retrasa el comienzo del tratamiento.
La morbimortalidad es elevada cuando existe un retraso en el
diagnóstico y el tratamiento específico.
No existe ninguna vacuna para la fiebre de las Montañas
Rocosas. Por lo tanto, las mejores medidas preventivas consisten
en evitar las zonas con garrapatas infestadas, usar ropa protectora
y repelentes para insectos y eliminar inmediatamente las garrapatas
adheridas.
Es prácticamente imposible eliminar el reservorio de garrapatas,
ya que pueden sobrevivir hasta 4 años sin alimentarse.
R. prowasekii Agente etiológico del TIFUS EPIDÉMICO O TIFUS
TRANSMITIDO POR PIOJOS.
Principal vector piojo del cuerpo humano
(Pediculus humanus).
Ser humano principal reservorio del tifus.
Hacinamiento y condiciones sanitarias
deficientes: propagación de los piojos corporales.
Los piojos mueren como consecuencia de la
infección en 2-3 semanas, lo que evita la
transmisión trans-ovárica.
La enfermedad se describe en Centro y
Sudamérica, África y con menor frecuencia en
EEUU.
R. prowasekii
La enfermedad esporádica en EEUU se restringe
fundamentalmente a las zonas rurales de los estados
orientales.
Se registra en estas áreas debido a que las ardillas
voladoras, al igual que las pulgas y los piojos de las ardillas,
están infectados por R. prowazekii.
Los piojos de las ardillas no se alimentan del ser humano,
pero las pulgas no discriminan y pueden ser las responsables
de la transmisión de las rickettsias de las ardillas al ser
humano.
R. prowasekii
SE
RO
LO
GÍA
• MÉTODO DIAGNÓSTICO DE ELECCIÓN Microinmunofluorescencia
R. prowasekii
Las tetraciclinas y cloranfenicol son muy eficaces en el tratamiento del tifus epidémico.
Combinar el tratamiento antibiótico con medidas eficaces para el control de los piojos.
Se dispone de una vacuna para el tifus inactivada con formaldehído, y se recomienda su administración en las poblaciones de alto riesgo.
R. prowasekii
Familia
Anaplasmataceae
• 9 especies
Género
Ehrlichia
• Bacterias Gram negativa intracelulares obligadas que se propagan y residen en vacuolas intracitoplasmáticas en células derivadas de la médula ósea (granulocitos, monocitos, eritrocitos y plaquetas).
• Son pequeñas (0,2-0,4 µm) y se tiñen débilmente con la tinción de Gram.
• A diferencia de Rickettsia, Ehrlichia permanece en la vacuola fagocítica después de entrar en la célula. Impiden la fusión de los lisosomas al inhibir la expresión de receptores adecuados en la superficie de dicha vacuola.
• Las bacterias en proceso de replicación se organizan en masas rodeadas de membrana denominadas mórulas (diagnóstico).
• ESTRUCTURA DE LA PARED CELULAR: Carecen de peptidoglucano y LPS.
La localización intracelular de los microorganismos les
confiere protección frente a la respuesta inmunitaria del
anfitrión.
Sin embargo, se cree que la estimulación bacteriana de la
producción de interferón-λ (IFN-λ) desempeña una función clave
en la activación de los macrófagos, los cuales actúan
directamente sobre las células infectadas o bien sobre bacterias
opsonizadas con anticuerpos durante su fase extracelular.
ERLIQUIOSIS MONOCÍTICA HUMANA
ERLIQUIOSIS GRANULOCÍTICA
Ehrlichia chaffeensis
Ehrlichia ewingii y Anaplasma
phagocytophilum
La enfermedad se observa fundamentalmente en zonas del
sudeste, Atlántico medio y central meridional. Esta área se
corresponde con la distribución geográfica de Amblyomma
amerícanum (garrapata Lone Star), el vector primario en la
transmisión del microorganismo, y del ciervo de cola blanca, un
importante reservorio de E. chaffeensis.
La transmisión transovárica de Ehrlichia en garrapatas es poco
eficiente (a diferencia de Rickettsia y Orientia), por lo que deben
mantenerse en anfitriones vertebrados. Otros animales que pueden
actuar como anfitriones son los perros domésticos, los zorros, los
coyotes, los lobos, los mapaches, las zarigüeyas, las cabras y los
ratones.
ERLIQUIOSIS MONOCÍTICA
HUMANA
E. chaffeensis origina la erliquiosis monocítica humana tras
infectar monocitos sanguíneos y fagocitos mononucleares en tejidos y
órganos.
Entre 1 y 3 semanas después de la picadura de la garrapata se
observa una enfermedad seudogripal que cursa con fiebre, cefalea y
mialgias.
En una proporción inferior al 50% de los sujetos infectados
aparecen síntomas gastrointestinales, y un 30% a 40% de los
pacientes desarrolla un exantema de inicio tardío (siendo más
frecuente en los niños que en los adultos).
La mayoría de los pacientes presenta leucopenia, trombocitopenia
y elevación de las transaminasas séricas, las cuales pueden oscilar de
leves a severas.
Aunque la mortalidad es reducida (2% a 3%), más de la mitad
de los individuos infectados requiere hospitalización y precisa de
una prolongada recuperación.
La patología de esta infección es desproporcionada con
relación al número de células infectadas o la carga microbiana
presente en los tejidos.
Se estima que E. chaffeensis altera la función de los fagocitos
mononucleares y la regulación de la respuesta inflamatoria. En
consecuencia, la respuesta inmunitaria destruye el patógeno y
genera gran parte del daño hístico.
Los reservorios son mamíferos pequeños (como ratones de pies
blancos, ardillas listadas y ratones de campo), y los vectores son
las garrapatas Ixodes.
ERLIQUIOSIS
GRANULOCÍTICA
E. ewingii origina principalmente enfermedad en cánidos y el ser humano constituye un anfitrión accidental.
Presentación clínica semejante a la de la enfermedad por E. chaffeensis de modo que el paciente presenta fiebre, cefalea y mialgias. Leucopenia, trombocitopenia y elevación de transaminasas séricas.
La microscopía tiene un valor limitado en el diagnóstico de la
enfermedad humana. Se deben teñir las preparaciones de sangre
periférica con Giemsa, dado que la detección de los
microorganismos intracelulares (mórulas) es diagnóstica.
No obstante, las mórulas se detectan en menos del 10% de los
sujetos aquejados de erliquiosis monocítica y en un 20% a 80% de
aquellos con erliquiosis granulocítica y anaplasmosis.
Métodos confirmatorios PCR y estudios serológicos. Por lo
general se observa un incremento del título de anticuerpos entre 3 y
6 semanas después del comienzo del cuadro, por lo que las pruebas
se utilizan fundamentalmente para confirmar el diagnóstico.
Los pacientes con sospecha de erliquiosis deben recibir
doxiciclina.
El tratamiento nunca se debe retrasar a la espera de la
confirmación de laboratorio de la enfermedad.
Se ha utilizado también: rifampicina (en mujeres
embarazadas).
La infección se previene al evitar las zonas infestadas con
garrapatas, el uso de ropa protectora y la aplicación de
repelentes de insectos. Las garrapatas adheridas a la piel se
deben eliminar sin demora.
No se dispone de vacunas.
Gracias por su atención…!