Post on 07-Apr-2016
Histologia e seus métodos de estudo
Rosiane Nascimento Alves
Tecidos do corpo órgãos
4 tipos de tecidos fundamentais:
◦ Tec. Epitelial
◦ Tec. Conjuntivo
◦ Tec. Muscular
◦ Tec. Nervoso
Histologia
Constituição:
◦ Células + matriz extracelular (MEC)
Cada tecido:
◦ Células + MEC característicos
Distinção no reconhecimento
Tecidos
Método mais utilizado MO
◦ Feixe de luz atravessa a estrutura
Tecidos e órgãos são espessos
◦ Fixação da amostra, inclusão em parafina, corte
histológico, coloração.
Preparação de tecido para microscopia
Fixação
◦ Evitar autólise e preservar estrutura e composição
◦ Física (congelamento) ou química (formaldeído 4%)
Inclusão
◦ Desidratação em etanol e clareamento em xilol
◦ Inclusão em parafina
Preparação de tecido para microscopia
Bateria de inclusão
Blocos de parafina
Microtomia
◦ Cortes de 4µm de espessura em lâmina de vidro
1µm = 0,001mm
Preparação de tecido para microscopia
Coloração Evidenciar os vários componentes dos tecidos,
células e MEC Corantes: caráter ácido ou básico que formam ligações
eletrostáticas (salinas) com componentes ionizados dos tecidos
Ácido
Básico Básico
Hematoxilina e Eosina (HE) Hematoxilina: corante básico (azul ou violeta)
Liga-se à estruturas basófilas (núcleo) Eosina: corante ácido (rosa)
Liga-se à estruturas acidófilos (citoplasma)
Células intestinas de camundongos
Hematoxilina e Eosina (HE) Aplicações:
Caracterização do tecido Identificação de carcinoma Identificação de infiltrado inflamatório → PATOLOGIA
Células renais humanas
Células renais de carcinoma humano
Hematoxilina e Eosina (HE) Infiltrado Inflamatório
Células hepáticas de camundongo
Hematoxilina e Eosina (HE) Necrose
Células hepáticas de camundongo
Microscópio de luz
Imagem aumentada e com detalhes
Limite de resolução:
◦ A menor distância entre 2 partículas que permite
visualizá-las como 2 objetos separados.
◦ MO: 0,2µm (0,002mm)
◦ MET: 3nm (0,003µm ou 0,00003mm)
Resolução
Contraste de fase
◦ Células e cortes não corados (transparentes)
Outras microscopias
Microscopia convencional
Contraste de fase Contraste diferencial
Reação de Imunohistoquímica (IH)
Infecção por Leishmania sp. Amastigotas extracelulares (A) e intracelulares (B).
Detecção da reação química:
Anti-Leishmania + enzimaSubstrato da enzima PRECIPITADO
MARROM
Reação de Imunofluorescência (IF)Baseada na excitação de átomos de fluorocromo
1. Emissão de luz (fotons) com pequeno (comprimento de onda).
2. Excitação de elétrons, os quais saltam de camada.
3. Estes retornam à sua camada original.
4. Liberação de luz (fotons) em um maior comprimento de onda (visível).
5. Visualização com microscópio de fluorescência. (confocal)
UV(Não
visível)Espectr
o visível
Infecção por Listeria monocitogenes
LaranjaMarcador anti-L. monocitogenes
VerdeFilamentos de actina
AmareloSobreposição das duas marcações:Laranja e verde
Microscopia de Fluorescência (MF)
Microscopia Confocal O espécime é iluminado por um feixe de luz muito estreito A imagem coletada deve passar por um orifício muito
pequenoFocalizar um único plano de cada vez sem deterioração da
imagem• Luz fora do foco é eliminada
• Definição melhorada do objeto
• Localização mais precisa de componentes do espécime
Reunir os vários planos = objeto 3D
Cultura de plasmócitos
AzulDNA
VerdeFimamentos intermediários
VermelhoFilamentos de actina
Microscopia Confocal
Microscopia Confocal
Fases do ciclo celular
Microscopia Eletrônica de Transmissão
Microscopia Eletrônica de Transmissão
Cardiomiócitos de Tilápia tailandesa
Microscopia Eletrônica de Transmissão
Microscopia Eletrônica de Transmissão Marcação citoquímica para detecção enzimática:
Incubação em meio Gormori
-glicerofosfato + Pb(NO3)2 → ↓Pb(PO4)
Fosfatase ácida
Célula renal de rato
Microscopia Eletrônica de TransmissãoN
MIL
N
CE L
LL
L
Microscopia Eletrônica de Varredura Imagens pseudotridimensionais das superfícies de células,
tecidos e órgãos
• Os elétrons não atravessam o espécime
• Os elétrons varrem uma delgada camada de metal aplicada ao espécime e são refletidos pelos átomos do metal
Microscopia Eletrônica de Varredura
Eritrócitos humanos
Microscopia Eletrônica de Varredura
Mucosa respiratória de rato