Post on 30-Jan-2016
description
MATERIEL BIOLOGIQUE et APPROCHES
EXPERIMENTALES
Biologie clinique – prélèvements méthodes -
valeurs
MATERIEL BIOLOGIQUE et APPROCHES EXPERIMENTALES
Biologie clinique - domaine
analyses de base• urgentes, souvent de caractère vital• nombre limité (20 à 30)• part importante de l'activité des laboratoires au plan économique• 8 analyses biochimiques essentielles représentent 1/3 des analyses
remboursées (lipides, NF, glycémie, urée créatinine, VS, bilan électrolytique, coagulation (temps de Quick), transaminases, acides urique et microbiologie de base)
analyses spécialisées• grande valeur informative, rarement vitales• nombre > 1000 mais demande faible• domaine privilégié de l'innovation
analyses non validées • transfert technologique non fait ou analyse abandonnée• résultat de l'échange d'informations entre scientifiques, industriels, cliniciens,
biologistes• témoins de la vitalité de la recherche en biologie clinique
MATERIEL BIOLOGIQUE et APPROCHES EXPERIMENTALES
Biologie clinique – évolution technologiques
• Disparition presque totale des techniques chimiques au profit des techniques enzymatiques pour les paramètres courants automatisation complète et performante
• Explosion des techniques immunologiques au dépend des techniques de radioanalyse automatisation
• Explosion des techniques de biologie moléculaire simplification des techniques et formation des personnels des laboratoires privés
• Développement des analyses délocalisées (méditests, autotests, tests rapides d'orientation clinique TROC) utilisant chimie sèche, automates portables, immunotests simples
• Diversification des procédures de séparation et analyses de mélanges complexes
MATERIEL BIOLOGIQUE et APPROCHES EXPERIMENTALES
Biologie clinique - qualité d'une analyse biologique
la qualité de l'analyse biologique correspond à la qualité de l’acte médical
qualité technique proprement dite : précision, exactitude, sensibilité, spécificité valeurs les plus précises et exactes possibles
qualité chronologique (réponse à l'urgence)qualité informative :
dépend en partie des 2 premièresdépend du contexte scientifique et médical valeurs significatives et utilisables Valeurs obtenues à comparer aux valeurs de références Nécessaire maîtrise de la variation analytique et des variations biologiques
qualité économique paramètre de + en + important !!
la biologie clinique = discipline de nature quantitative existence déjà ancienne de méthodes chiffrées d'évaluation de la qualité contrôle soigneux de tous les facteurs.
MATERIEL BIOLOGIQUE et APPROCHES EXPERIMENTALES
Biologie clinique - qualité d'une analyse biologique
Référentiels :Guide des bonnes pratiques de laboratoire (UPPL)Guide de bonne exécution des analyses (GBEA)Référentiel d'accréditation et/ou de certification
Les différents types de contrôlePool de sérumMéthode économique (études de précision, dérives analytiques, erreurs fortuites)Contrôles commerciauxPool de sérums lyophilisés, contrôlés et garantis ( la sécurité)Contrôles par les résultats des patientsPool des valeurs obtenues sur les patients "tout venant" (exemple : bilan d'entrée)Contrôles interlaboratoires : 3 catégories- interhospitaliers- régionaux (Région Rhône-Alpes : Pro Bioqual)- national de qualité (CNQ, obligatoire depuis 1976, sous l'égide de l'Agence du
Médicament et sous contrôle de la SFBC depuis 1993, peut avoir pour conséquence des sanctions).
MATERIEL BIOLOGIQUE et APPROCHES EXPERIMENTALES
matériel biologique
SANGConditions de prélèvement
sujet à jeun depuis 10hprélèvement entre 7h et 10h (si possible après 7 à 8h de sommeil)pas d’exercice intense pendant les 2 jours précédant le prélèvementpas de tabac pendant les 2 heures précédant le prélèvementrepos assis 15 mn
Modes de prélèvement : veineux : veines superficielles, garrot éventuel peu serré, veinotubescapillaire : pulpe doigts, lobe oreille, talon, vaccinostyles, microtubes
sang artériolisé par massage du doigt, attention couveuses!!artériel : artères fémorale ou humérale (gaz du sang, ammoniaque)
ParticularitésVariations nycthéméralesClinostatisme, orthostatismeEtat pathologique ou physiologique particulier
Conservation : froid, obscurité, déprotéinisation
MATERIEL BIOLOGIQUE et APPROCHES EXPERIMENTALES
matériel biologique
SANGEtapes du prélèvement
Se préparer (habillage, désinfection des mains, gants stériles)Installer le patient pour le prélèvement,Recueillir et/ou vérifier les informations administratives, physiopathologiques et thérapeutiquesChoisir le matériel de ponction,Poser le garrot,Désinfecter le matériel de ponctionRéaliser le prélèvement,Éliminer le matériel de ponctionIdentifier les tubes de prélèvement,Poser un pansement,Viser la fiche de prélèvement,Transmettre les tubes et le dossier patient pour analyse
Important : étiquetage, choix du tube (granules de séparation, anticoagulant), penser à éviter l’hémolyse
MATERIEL BIOLOGIQUE et APPROCHES EXPERIMENTALES
matériel biologique
Ponction de sang veineux
MATERIEL BIOLOGIQUE et APPROCHES EXPERIMENTALES
matériel biologique
MATERIEL BIOLOGIQUE et APPROCHES EXPERIMENTALES
matériel biologique
MATERIEL BIOLOGIQUE et APPROCHES EXPERIMENTALES
matériel biologique
MATERIEL BIOLOGIQUE et APPROCHES EXPERIMENTALES
matériel biologique
SANG - EchantillonsSérum
Coagulation spontanée du sang sans anticoagulant : qques minutesRisques liés au contact prolongé avec éléments figurés
actuellement réduits (billes séparatives, silice activatrice)Intérêts : protéines spécifiques (immunochimie), lipides
électrophorèse des protéines ou lipoprotéinesplasma
intérêts : manipulation aisée, risques réduits d’hémolyse risques : interférence avec anticoagulants
sang totalvalable pour l’analyse si substance en concentration identiquedans globules rouges et plasma
sang deprotéinisélactate, pyruvate
éléments figurés séparation par sédimentation, centrifugation, gradients de densité
Interférences dans les dosages effectués sur sang et échantillons hémolyse, bilirubine, triglycérides, médicaments
MATERIEL BIOLOGIQUE et APPROCHES EXPERIMENTALES
matériel biologique
URINESDe 24 heures ou échantillon uniqueConditions de recueil standardisées
boire correctement le jour précédentélimination de la première urinenettoyage local soignéflacon ou cantine prévus à cet effet
Conservation : mercaptoethanol, HCLContrôle du débit (créatinine)Modification du pH
AUTRES LIQUIDESLarmes, sueur, saliveLiquides de ponction
Transsudats (pauvres en protéines)Exsudats (riches en protéines = perméabilité membranaire)
SELLES
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matériel biologique
TISSUS
Ponction biopsieTraitements - préservant la structure tissulaire
perfusion organe entierfragments ou tranches tissulaires (congelés ou en survie, Warburg 0,2 nm)coupes fines de tissus fixés (froid, paraformaldéhyde, glutaraldéhyde)
broyats (mixage)- modifiant la structure tisssulaire
homogénats (cylindre en verre + piston – Potter)destruction tissulaire (ultrasons, froid, tensio-actifs)isolement des constituants subcellulaires
centrifugation différentiellepurification par identification de marqueurs (enzymes)
Culture cellulaire
MATERIEL BIOLOGIQUE et APPROCHES EXPERIMENTALES
méthodes préparatives et/ou séparatives
DISSOCIATION CELLULAIREObtenir les informations métaboliques spécifiques de chaque type cellulaire nécessite
l’obtention de suspensions monocellulaires dont l’analyse est directe ou après prolifération en culture
Dissociation des tissusRupture mécanique (broyage, tamisage, fragmentation fine)Rupture de la MEC et des jonctions intercellulaires
Enzymes protéolytiquesAgents chélatantsMéthodes combinées
Prélèvements de suspensions cellulaires (sang, liquide amniotique…)Séparation cellulaire
Méthodes classiques de centrifugation (+ ou- gradients de densité)Différences d’adhésion au support
nature : verre, plastiquemodifié : chimie, immunochimie
Différences de croissance en culture (milieu sélectifs)Tri des cellules marquées (FACS, MACS)
MATERIEL BIOLOGIQUE et APPROCHES EXPERIMENTALES
méthodes préparatives et/ou séparatives
CULTURE CELLULAIRE
Définition système ex-vivo où les cellules, la plupart du temps isolées, survivent, se multiplient, expriment des propriétés différenciées
MéthodologieFragments tissulaires ou suspensions cellulairesSupports de culture (parfois, enceintes)Conditions environnementales
stérilitéatmosphère contrôléetempérature contrôléemilieu de culture (nutritif, stimulant)
MATERIEL BIOLOGIQUE et APPROCHES EXPERIMENTALES
méthodes préparatives et/ou séparatives
CULTURE CELLULAIRE
Systèmes cellulairesPrimoculture ou culture primaireCulture secondaire : souches ou lignées non définies
lignées continuesInterférences
Autres cellulesSupportContaminations
Conservation des cellulescryopréservation (-80°, - 196°)quiescence
Transport des cellulesen culturecongelées
Applications