Post on 18-Mar-2021
Univerzitet u Novom SaduPrirodno-matematički fakultetPrirodno matematički fakultetDepartman za hemiju, biohemiju i zaštitu životne sredineUdruženje za unapređenje zaštite životne sredine „Novi Sad“Fondacija "Docent dr Milena Dalmacija"
Kvalifikacija i verifikacija j jperformansi kod gasnih
hromatografahromatografadr Aleksandra Tubićdr Aleksandra Tubić
Novi Sad 23-25. septembar, 2015.
SADRŽAJ
• Definicije
Uvod• Definicije• Zahtevi standarda SRPS ISO/IEC
17025:2006; tačka 5.5 – Oprema• Međuprovere (verifikacija)• Međuprovere (verifikacija)
Primeri iz naše prakse -
kvalifikacija i GC/MSD GC/µECDkvalifikacija i verifikacija
performansi
GC/MSD GC/µECD
UVODUVOD
Etaloniranje, verifikacija i održavanje opreme su osnovne aktivosti akreditovanej , j j plaboratorije kojima se obezbeđuju odgovarajuće performanse analitičkihinstrumenata i pouzdanost merenja sprovedenih u analitičkoj laboratoriji.
OdržavanjeOdržavanje“Kombinacija svih tehničkih iodgovarajućih
EtaloniranjeEtaloniranje“Postupak koji u određenim slučajevima, u prvom koraku uspostavlja odnos izmeđuodgovarajućih
administrativnih aktivnostipredviđenih za očuvanjenekog instrumenta ili
prvom koraku uspostavlja odnos između vrednosti određene veličine koju odražava etalon sa određenom mernom nesigurnošću i odgovarajućeg odgovora merlila sanekog instrumenta ili
dovođenje istog u stanje ukojem on može obavljatipredviđenu funkciju”
i odgovarajućeg odgovora merlila sa pridruženom mernom nesigurnošću, i u drugom koraku koristi tu informaciju da uspostavi odnos između dobijanih rezultata p j
VerifikacijaVerifikacijaPostupak potvrđivanja na osnovu objektivnih dokaza da određeni
p jmerenja”
Postupak potvrđivanja, na osnovu objektivnih dokaza da određeni predmet ispunjava specificirane zahteve
SRPS ISO/IEC 17025:2006
Tačka 5.5 – Oprema
• Oprema mora biti etalonirana i proverena radi potvrde ispunjenosti zahteva tačnosti i drugih specificiranih zahtevazahteva
• Oprema mora biti obeležena• Odgovarajuća dokumentacija:
• Procedure za bezbedno rukovanje, transport,
Laboratorija mora da j , p ,
skladištenje, korišćenje i planiranje održavanja merne opreme radi• Uputstvo za međuproveru instrumentaK t
poseduje pogodnu opremu
• Karton opreme• Sveska opreme• Program etaloniranja
Verifikacija opreme
Međuprovere
Rezultati testa Rezultat testa verifikacije:
verifikacije će pokazati da li je
merna oprema u skladu sa
Laboratorija mora uspostaviti
• oprema je u dobrim radnim uslovima i njene performanse se smatraju ispravnim. Zakazuje se datum sledeće verifikacijeskladu sa
specificiranim zahtevima uz
odgovarajući opseg
kriterijume prihvatljivosti
datum sledeće verifikacije• oprema nije u savršenim
uslovima rada, ali se može koristiti sa ograničenjem
• oprema se ne može tolerancije. koristiti i treba biti
popravljena, servisirana ili rashodovana
IZVEŠTAJ O MEĐUPROVERI OPREMEMEĐUPROVERI OPREME
GC - verifikacija performansi
Izvodi se proverom svih važnih modula koji čine sistem
Verifikacija GC/MSD b h P i Li T P i P iobuhvata sledeće
verifikacione testove:
Preciznost protoka
Linearnost detektora
Test signal/šum
Preciznost odnosa masa
Preciznost injektiranja
Verifikacija / /GC/ECD/FID
obuhvata sledeće
verifikacione testove:
Preciznost protoka
Linearnost detektora
Test šuma i drifta
Stabilnost injektiranja
testove:
GC verifikacija performansiGC/MSDGC/ S
Verifikacija GC/MSD obuhvata Preciznost Linearnost Test Preciznost Preciznost
Test preciznosti sprovodi se petostrukim injektovanjem standardne smeše
sledeće verifikacione
testove:
protoka detektora signal/šum odnosa masa injektiranja
Test preciznosti sprovodi se petostrukim injektovanjem standardne smešen-alkana (C14, C15 i C16) u heksanu. Kriterijum prihvatljivosti: CV (%) ≤ 1.
C14 Retenciono vreme (min)1 2.4102 2.4103 2.4114 2.4095 2.4106 2.412Srednja vrednost (min) 2.410Standardna devijacija (min) 0.001Relativna standardna devijacija, sr 0.043Koeficijent varijacije, CV (%) 0.043Prihvatljivo/ Nije prihvatljivo Prihvatljivo, kriterijum
CV≤1%
GC verifikacija performansiGC/MSDGC/ S
Verifikacija GC/MSD obuhvata Preciznost Linearnost Test Preciznost Preciznost sledeće
verifikacione testove:
protoka detektora signal/šum odnosa masa injektiranja
Zaključak:Preciznost retencionih vremena n- 70000
75000
80000
85000
90000
Abundance
TIC: PREC_2.D\DATASIM.MS 2.410
2.996
3.890
alkana (C14, C15 i C16), sa koeficijentom variranja ≤ 1% ukazuje na preciznost protoka masenog
30000
35000
40000
45000
50000
55000
60000
65000
spektrometra.
2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50
5000
10000
15000
20000
25000
30000
Time-->
GC verifikacija performansiGC/MSDGC/ S
Verifikacija GC/MSD obuhvata Preciznost Linearnost Test Preciznost Preciznost
Linearnost detektora određuje se injektovanjem standardne smeše n
sledeće verifikacione
testove:
protoka detektora signal/šum odnosa masa injektiranja
Linearnost detektora određuje se injektovanjem standardne smeše n-alkana (C14, C15 i C16) u heksanu. Nakon završene analize izrađuje sekalibraciona kriva za C14, C15 i C16, koja daje zavisnost površine odkoncentracije standarda. Kriterijum prihvatljivosti: r ≥ 0.99
Linearnost kalibracione krive za C14 (na osnovu target jona 57)
Redni broj merenja Koncentracija (µg u injektu) Površina pika
1 0,0436 212966.7752 0 218 732496 065
14 ( g j )
2 0,218 732496.0653 0,436 1266599.88Koeficijent regresije, r 0,997Prihvatljivo/ Nije prihvatljivo Prihvatljivo
GC verifikacija performansiGC/MSDGC/ S
Verifikacija GC/MSD obuhvata Preciznost Linearnost Test Preciznost Preciznost
C14
sledeće verifikacione
testove:
protoka detektora signal/šum odnosa masa injektiranja
Zaključak:Analizom dobijenih rezultata se može 1.00e+006
Response
jkonstatovati linearna zavisnost površine pika C14, C15 i C16 od koncentracije, odn. mase analita u
5.00e+005
injektu. Detektor je u stanju da generiše linearne odgovore kada se menjaju koncentracije standarda i
00 0.2 0.4
Concentration
uzoraka. Dobijeni regresioni koeficijenti su u skladu sa kriterijumom prihvatljivosti r≥0,99.
GC verifikacija performansiGC/MSDGC/ S
Verifikacija GC/MSD obuhvata Preciznost Linearnost Test Preciznost Preciznost
Za ovaj test primenjuje se standard oktafluoronaftalen čija je koncentracija
sledeće verifikacione
testove:
protoka detektora signal/šum odnosa masa injektiranja
Za ovaj test primenjuje se standard oktafluoronaftalen, čija je koncentracijau tragovima u dve metode tako da obuhvati oba filamenta. Nakon analizepodešavaju se integracioni parametri (masa za evaluaciju OFN je 272 m/z),pri čemu je primenjen RTE integrator i automatski se određuje S/N, kojitreba da bude 100 ili veći.
Signal/šum testSignal/šum test
Filament Izmerena vrednost Prihvatljive granice
1 124 ≥100:1
2 151 ≥100:12 151 ≥100:1
GC verifikacija performansiGC/MSDGC/ S
Verifikacija GC/MSD obuhvata Preciznost Linearnost Test Preciznost Preciznost
Abundance
sledeće verifikacione
testove:
protoka detektora signal/šum odnosa masa injektiranja
Zaključak:Dobijeni rezultati ukazuju da je 2.2e+07
2.4e+07
2.6e+07
2.8e+07
3e+07
3.2e+07
TIC: OFN1.D\data.ms
j j jintenzitet signala oktafluoronaftalena u tragovima u odnosu na šum detektora za oba filamenta u 8000000
1e+07
1.2e+07
1.4e+07
1.6e+07
1.8e+07
2e+07
granicama prihvatljivosti ≥100:1 (124-151). 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00
2000000
4000000
6000000
Time-->
GC verifikacija performansiGC/MSDGC/ S
Verifikacija GC/MSD obuhvata Preciznost Linearnost Test Preciznost Preciznost
Primenjuje se standardna smeša n alkana (C C i C ) za određivanje preciznosti odnosa
sledeće verifikacione
testove:
protoka detektora signal/šum odnosa masa injektiranja
Primenjuje se standardna smeša n-alkana (C14, C15 i C16) za određivanje preciznosti odnosamasa fragmenata. Određuje se standardna devijacija i relativna standardna devijacija, RSD(%) pet automatskih injektiranja za masu 1 - 57±0.03 m/z i masu 2 - 71±0.03 m/z. Određuju sepovršine pikova za svaku od masa i njihov odnos m1/m2. Kriterijum prihvatljivosti: preciznostodnosa masa ≤5%.
e1
) e 1
) osa
st
Inje
ktira
nje,
re
dnib
roj
Povr
šina
mas
e(5
7±0.
03 m
/z)
Povr
šina
mas
e(7
1±0.
03 m
/z)
Odn
os m
asa
Sred
nja
vred
nost
odno
mas
a
Stan
dard
nade
vija
cija
odno
sam
asa
Rela
tivna
st
anda
rdna
de
vija
cija
Krite
rijum
Prih
vatlj
ivos
1 698985 418267 1 671145461 698985 418267 1.67114546
2 706127 422231 1.67237128
3 682541 407982 1.67296842
4 698554 419363 1.6657502
5 787850 473678 1.6632607
6 723509 432500 1.67285318 1.670 0.004 0.250 ≤5% Prihvatljivo
GC verifikacija performansiGC/MSDGC/ S
Verifikacija GC/MSD obuhvata Preciznost Linearnost Test Preciznost Preciznost
Z klj č k
sledeće verifikacione
testove:
protoka detektora signal/šum odnosa masa injektiranja
Zaključak:Određivanjem preciznosti odnosa masa fragmenata
t đ j d j d 1/ 2utvrđeno je da je odnos m1/m2 za alkane C14, C15 i C16 zadovoljavajući i RSD odnosispunjava kriterijum RSDispunjava kriterijum RSD odnosa masa: ≤5% i ukazuje na dobre performanse detektoradetektora.
GC verifikacija performansiGC/MSDGC/ S
Verifikacija GC/MSD obuhvata Preciznost Linearnost Test Preciznost Preciznost
injektiranjasledeće verifikacione
testove:
protoka detektora signal/šum odnosa masa injektiranja
Preciznost injektiranja dokazuje se praćenjem stabilnosti retencionog vremena standarda istabilnosti površine pikova standarda n-alkana (C14, C15 i C16) u heksanu.
roj
a a % a a a a og
jekt
iranj
e, re
dnib
r
ovrš
ina
(TIC
)
eten
cion
o vr
eme
redn
ja v
redn
ost
ovrš
ine
tand
ardn
a de
vija
cija
ovrš
ine
elat
ivna
stan
dard
naev
ijaci
ja p
ovrš
ine
%
riter
ijum
redn
ja v
redn
ost
eten
cion
og v
rem
en
tand
ardn
a de
vija
cija
eten
cion
og v
rem
en
elat
ivna
stan
dard
naev
ijaci
ja re
tenc
iono
rem
ena
%
riter
ijum
In Po Re Sr po St po Re de Kr Sr re St re Re de vr Kr
1 1116866 2.410
2 1127852 2.410
3 1090181 2.411
4 1117615 2.4094
5 1161139 2.410 1128268 26614 2.36 ≤5% 2.410 0.001 0.043 ≤1%
Zaključak:St bil t t i i t bil t šiStabilnost retencionog vremena i stabilnost površine ugljovodonika ukazuju na preciznost injektiranja primenom automatskog injektora.
GC verifikacija performansiGC/MSDGC/ S
Verifikacija GC/MSD obuhvata Preciznost Linearnost Test Preciznost Preciznostobuhvata sledeće
verifikacione testove:
Preciznost protoka
Linearnost detektora
Test signal/šum
Preciznost odnosa masa
Preciznost injektiranja
Kriterijum Zadovoljava Ne zadovoljava
Preciznost protoka koeficijent varijacije CV≤1% XPreciznost protoka, koeficijent varijacije CV≤1% XLinearnost detektora, regresioni koeficijent r≥0,99 X
Odnos signal/šum (≥100:1) X
Preciznost odnosa masa (≤5%) X
Z klj č k
Preciznost injektiranja (površina pika RSD≤5%, retenciono vreme RSD ≤1%) X
ZaključakVerifikacionim testovima kojim je ispitana: preciznost protoka, linearnost detektora, odnos signal/šum, preciznost odnosa masa i stabilnost injektiranja t rđeno je da s isp njeni s i kriterij mii stabilnost injektiranja utvrđeno je da su ispunjeni svi kriterijumi postavljeni za verifikaciju analitičke opreme GC/MSD sistema, što ukazuje na dobre performanse analitičke opreme.
GC verifikacija performansiGC/µECD
Verifikacija GC/ECD
obuhvata Preciznost Linearnost Test šuma i Stabilnost sledeće
verifikacione testove:
protoka detektora drifta injektiranja
Test preciznosti protoka je sproveden šestostrukim injektovanjemstandarda lindana i aldrina u izooktanu. Kriterijum prihvatljivosti: CV (%) ≤ 1
LindanLindan RetencionoRetenciono vremevreme (min)(min)1 9,8362 9,8333 9,8334 9,8335 9,8336 9,8376 9,837Srednja vrednost (min) 9,834Standardna devijacija (min) 0,002Relativna standardna devijacija, sr 0,019
f ( )Koeficijent varijacije, CV (%) 0,019Prihvatljivo/ Nije prihvatljivo Prihvatljivo, kriterijum
CV≤1%
GC verifikacija performansiGC/µECDGC/µ C
Verifikacija GC/ECD/FID
obuhvata Preciznost Linearnost Test šuma i Stabilnost sledeće
verifikacione testove:
protoka detektora drifta injektiranja
Zaključak:Preciznost retencionih vremena aldrina i lindana, sa koeficijentom variranja ≤ 1% ukazuje na preciznost protoka detektora sa zahvatom elektrona.
GC verifikacija performansiGC/µECDGC/µ C
Verifikacija GC/ECD
obuhvata Preciznost Linearnost Test šuma i Stabilnost sledeće
verifikacione testove:
protoka detektora drifta injektiranja
Test određivanja linearnosti detektora izveden je injektovanjem standardnesmeše lindana i aldrina u izooktanu. Nakon završene analize izrađuje sek lib i k i li d i ld i k j d j i t ši ik dkalibraciona kriva za lindan i aldrin, koja daje zavisnost površine pika odkoncentracije standarda, odn. mase analita u injektu. Kriterijum prihvatljivosti: r ≥0,99.RedniRedni brojbroj merenjamerenja KoncentracijaKoncentracija
(pg(pg uu injektu)injektu)PovršinaPovršina pikapika
1 6,6 889,712 16 5 4625 002 16,5 4625,003 33 9962,004 66 21135,00Koeficijent regresije, r 0,9982Prihvatljivo/Nije prihvatljivo Prihvatvljivo
GC verifikacija performansiGC/µECDGC/µ C
Verifikacija GC/ECD
obuhvata Preciznost Linearnost Test šuma i Stabilnost obuhvata sledeće
verifikacione testove:
protoka detektora drifta injektiranja
ZaključakAnalizom dobijenih rezultata može se k t t ti li i t šikonstatovati linearna zavisnost površine pika lindana i aldrina od koncentracije, odn. mase analita u injektu. Detektor sa zahvatom elektrona je u stanju dazahvatom elektrona je u stanju da generiše linearne odgovore kada se menjaju koncentracije standarda i uzoraka Dobijeni regresioni koeficijentiuzoraka. Dobijeni regresioni koeficijenti su u skladu sa kriterijumom prihvatljivosti r≥0,99.
GC verifikacija performansiGC/µECDGC/µ C
Verifikacija GC/ECD
obuhvata Preciznost Linearnost Test šuma i Stabilnost sledeće
verifikacione testove:
protoka detektora drifta injektiranja
Š
Određivanje detektorskog šuma: Izvodi se preko analize bez injektovanja supstanci. Na osnovu procedure za ručno računanje, određuje se detektorski šum i drift.
Šum se određuje preko matematičkog izraza merenja šuma u mmskala integratora u mV
i d t kt k b k A
A – merenje šuma u mmB – kompletna voltažna skala u mm (150 mm)C – atenuacija (-3)nivo detektorske buke u A
1mV =1x10-12 AŠum (A) = A/B xŠum (A) = A/B x 1x101x10--1212 A x 2A x 2CC
C atenuacija ( 3)
Šum odgovara udaljenosti između dve paralelne linije, kroz merene min i maxkroz merene min i max vrednosti i regresionu liniju.
GC verifikacija performansiGC/µECDGC/µ C
Verifikacija GC/ECD
obuhvata Preciznost Linearnost Test šuma i Stabilnost sledeće
verifikacione testove:
protoka detektora drifta injektiranja
A – merenje drifta u mm, određuje se merenjem razlike između početka i kraja hromatograma (A/h)B k l t lt ž k l (150 )B – kompletna voltažna skala u mm (150 mm)C – atenuacija (-3)
Drift se procenjuje iz nagiba regresione praveprave.
GC verifikacija performansiGC/µECDGC/µ C
Verifikacija GC/ECD
obuhvata Preciznost Linearnost Test šuma i Stabilnost sledeće
verifikacione testove:
protoka detektora drifta injektiranja
( ) d dŠum
ZaključakPoređenjem dobijenog nivoa šuma sa k it ij ih tlji ti ž
A (mm) srednja vrednost 0,630B (mm) teoretska vrednost 150C -3Šum (A) 1,05E-6kriterijumom prihvatljivosti može se
zaključiti da ECD detektor ne pokazuje značajan šum. Analizom dobijene drift vrednosti može se zaključiti da ECD
Šum (A) 1,05E 6Prihvatljivo/Nije prihvatljivo Prihvatljivo
DriftKriterijum prihvatljivosti: NOISE (AU) ≤ 1,5 E-5
vrednosti može se zaključiti da ECD detektor ne pokazuje značajnu vrednost drifta koji nema uticaja na izvođenje analize
A (mm) srednja vrednost 2B (mm) teoretska vrednost 150C -1Drift (AU/40 min) 1,33E-5analize. Drift (AU/40 min) 1,33E 5Drift (AU/min) 6,67E-7Drift (AU/h) 4E-5Prihvatljivo/Nije prihvatljivo Prihvatljivo
Kriterijum prihvatljivosti: drift (AU/h) ≤ 5E-4
GC verifikacija performansiGC/µECDGC/µ C
Verifikacija GC/ECD
obuhvata Preciznost Linearnost Test šuma i Stabilnost sledeće
verifikacione testove:
protoka detektora drifta injektiranja
Preciznost injektiranja dokazuje se praćenjem stabilnosti retencionog vremena i stabilnosti površine pikova standarda lindana i aldrina u izooktanu.
dni
me st ne ne st
Inje
ktira
nje,
red
broj
Povr
šina
Rete
ncio
novr
e m
Sred
nja
vred
nos
povr
šine
Stan
dard
nade
vija
cija
povr
ši
Rela
tivna
stan
dard
nade
vija
cija
povr
ši
Krite
rijum
Sred
nja
vred
nos
rete
ncio
nog
vrem
ena
Stan
dard
nade
vija
cija
rete
ncio
nog
vrem
ena
Rela
tivna
stan
dard
nade
vija
cija
rete
ncio
nog
vrem
ena
Krite
rijum
1 1174,3 9,836
1245,8 58,3 4,68 ≤5% 9,8342 0,002 0,019 ≤1%
2 1184,8 9,833
3 1281,3 9,833
4 1313,0 9,833
5 1229 7 9 8335 1229,7 9,833
6 1291,7 9,837
ZaključakStabilnost retencionog vremena i stabilnost površine pikova lindana ialdrina ukazuju na preciznost injektiranja primenom automatskog injektora.
GC verifikacija performansiGC/µECDGC/µ C
Verifikacija GC/ECD
obuhvata Preciznost Linearnost Test šuma i Stabilnost sledeće
verifikacione testove:
protoka detektora drifta injektiranja
Kriterijum Zadovoljava Ne zadovoljava
P i t t k k fi ij t ij ij CV≤1% XPreciznost protoka, koeficijent varijacije CV≤1% X
Linearnost detektora, regresioni koeficijent r≥0,99 X
Šum (≤ 1,5 E-5) i drift (≤ 5E-4) detektora X
Preciznost injektiranja (površina pika RSD≤5% retenciono vreme
Z klj č k
Preciznost injektiranja (površina pika RSD≤5%, retenciono vreme RSD ≤1%) X
ZaključakVerifikacionim testovima kojim je ispitana: preciznost protoka, linearnost detektora, test šuma i drifta, stabilnost injektiranja utvrđeno je da su ispunjeni s i kriterij mi posta ljeni a erifikacij analitičke opreme GC/ECD sistemasvi kriterijumi postavljeni za verifikaciju analitičke opreme GC/ECD sistema, što ukazuje na dobre performanse analitičke opreme.
HVALA NA PAHVALA NA PAŽŽNJI!NJI!