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Universidad Andrs Bello Facultad de Ciencias Biolgicas
Departamento de Ciencias Biolgicas
GUIA DE TRABAJOS PRACTICOS
MICROBIOLOGIA GENERAL
BIOL 251
CARRERA: QUMICA Y FARMACIA
Valeska Herrera (coordinadora)
vale.herrera@uandresbello.edu
Rhonda Veas Rhondaveas@gmail.com
ANEXO DE PROGRAMA
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLGICAS
1er Semestre 2015
1. Identificacin de la Asignatura
Curso : Microbiologa General
Cdigo : BIOL251
Tipo de Actividad : Prctico
Carrera : Qumica y Farmacia
NRC : 17060 (Seccin 1) 17064 (Seccin 2)
Horario : Seccin 1 y 2 Mircoles y Viernes, Mdulos 3 y 4 (10:20
12:00 h).
2. Profesores
Seccin 1 2: Mg. Valeska Herrera; vale.herrera@uandresbello.edu
Lic. Rhonda Veas; rhondaveas@gmail.com
3. Cronograma
Cronograma
Mircoles Mdulos 1-2
Viernes Mdulos 1-2 Seccin TEMA A TRATAR
18 de Marzo 1 TP0. Presentacin del Curso.
20 de Marzo 2 TP0. Presentacin del Curso.
25 de Marzo 27 de Marzo 1 TP1. Procedimientos Bsicos
08 de Abril 10 de Abril 2 TP1. Procedimientos Bsicos
15 de Abril 17 de Abril 1 TP2. Muestras Clnicas Gram Positivo y Flora Normal
22 de Abril 24 de Abril 2 TP2. Muestras Clnicas Gram Positivo y Flora Normal
06 de Mayo 08 de Mayo 1 TP3. Muestras Clnicas Gram Negativo y Antibiticos
13 de Mayo 15 de Mayo 2 TP3. Muestras Clnicas Gram Negativo y Antibiticos
27 de Mayo
Mircoles
03 de Junio Mircoles 1 TP4. Bacterias Anaerobias y Fastidiosas
29 de Mayo
Viernes
05 de Junio
Viernes 2 TP4. Bacterias Anaerobias y Fastidiosas
10 de Junio 1 TP5. Levaduras y Hongos Filamentosos
12 de Junio 2 TP5. Levaduras y Hongos Filamentosos
17 de Junio 1 TP6. Parasitologa
19 de Junio 2 TP6. Parasitologa.
01 de Julio 1-2 Control Recuperativo y revisin de controles e informes (Asistencia obligatoria)
Mircoles 08 de Julio
(mdulos 3 y 4) 1-2 EXAMEN
Fechas Pruebas y Revisiones:
Controles. Se realizarn controles de carcter acumulativo en todos los trabajos prcticos (TP 1-5). stos se realizarn en los primeros 10 minutos de cada trabajo prctico y se evaluarn tanto conocimientos tericos como prcticos descritos en la Gua del Trabajo Prctico del curso.
Control recuperativo : Mircoles 01 de Julio (todas las secciones) (Mdulos 3 y 4)
Contenidos (todos los tratados en el curso)
Examen : Mircoles 08 de Julio (todas las secciones) (Mdulos 3 y 4)
Contenidos (todos los tratados en el curso)
3. Requisitos de asistencia:
La asistencia a clases es de un 100%, por lo que cualquier inasistencia no justificada significa reprobacin directa.
Se considerar automticamente reprobado el alumno(a) que presente inasistencia a 4 sesiones de laboratorio, aun cuando stas hayan sido debidamente justificadas. Para mayor seguridad entregue siempre una copia del documento firmado y timbrado a su profesor.
Nota: La inasistencia a la primera sesin de un trabajo prctico imposibilita al alumno de realizar la actividad correspondiente al trabajo prctico completo
Los alumnos deben ser puntuales en el ingreso a las clases, a objeto de no interrumpir dichas actividades. En el caso de que lleguen atrasados ms de 30 minutos al trabajo prctico, no podr ingresar a la sala y quedar como ausente. Si el alumno llega atrasado cuando an el curso est rindiendo el control de entrada, ste tendr el tiempo que resta de los 10 minutos para responder la evaluacin. Si el alumno llega despus de terminado el control, ste ser evaluado con una nota 1.
4. Condiciones para aprobar el curso:
La nota de presentacin a examen se obtiene a partir de las siguientes ponderaciones: Promedio de controles un 70% y promedio Informes 30%.
La nota final del curso ser el resultado de la nota de presentacin a examen, ponderada en un 70%, ms la nota del examen ponderada en un 30%.
Para aprobar el curso la nota final debe ser igual o superior a 4,0.
No existir ningn tipo de interrogacin y/o trabajo para subir nota.
La nota final se expresa con un slo decimal. En este caso, cuando la centsima sea igual o mayor a 0,05 se aproximar a la dcima superior. Por su parte, si la centsima es igual o menor a 0,04 se mantiene el decimal. Esto de acuerdo al siguiente ejemplo:
Nota final : 3,95 se aproxima a 4,0
3,94 se mantiene en 3,9
Tanto las notas parciales de controles e informes como la nota final del curso es la obtenida segn los clculos realizados exclusivamente por la planilla de Intranet.
Los alumnos que sean sorprendidos en actividades irregulares (plagio, copiar, uso de torpedos, soplar, uso de celulares durante la evaluacin, etc.) en controles y/o informes sern evaluados con nota 1 en esa evaluacin. Particularmente se considerar como plagio la utilizacin de imgenes de otros grupos del curso, as como el uso de figuras desde Internet sin citar como bibliografa. La evaluacin mnima ser registrada tanto para el(los) grupo(s) que realice(n) el plagio y para el(los) grupo(s) que faciliten la informacin copiada.
Los alumnos que presenten bloqueos de tipo acadmico y/o financiero y no aparezcan en las listas oficiales tienen como plazo mximo para regularizar su situacin el da 27 de Marzo, de lo contrario no podrn hacer ingreso a la sala de clases.
5. Control Recuperativo y Justificaciones.
Este curso contempla la realizacin de un control recuperativo. Si el alumno falta justificadamente a un control, se le realizar un control recuperativo que incluye toda la materia del curso.
La justificacin de inasistencia se debe realizar en la Direccin de la Facultad de Qumica y Farmacia, adems de presentar una fotocopia validada del justificativo al profesor encargado del curso dentro de 7 das hbiles despus de presentado el justificativo. No se recibirn certificados mdicos.
6. Condiciones de eximicin. En cualquier caso debe regirse segn Reglamento del Alumno de Pregrado, Artculo 37.
Todo alumno cuya nota de presentacin sea igual o superior a 5,0 puede eximirse de rendir examen, siempre y cuando NO tenga notas inferiores a 4,0 en algn control, informe o seminario.
7. Eliminacin de nota:
El Departamento de Ciencias Biolgicas, ha decidido NO suscribir a la disposicin del inciso 4to del Artculo 36 del Reglamento del Alumno, que dice: los estudiantes podrn eliminar una nota parcial (solemne o control) y reemplazarla con la nota de su examen.
De manera que no se eliminar ningn tipo de nota, sea esta de solemnes o eventuales controles.
8. Modalidad de los controles e informes
El curso se evaluar mediante controles de verdadero y falso. Un profesor realizar y revisar el control correspondiente a la semana, para asegurar un criterio homogneo en cada revisin para todas las secciones. Por esto las consultas y dudas se le realizarn a este docente en la entrega de la evaluacin o en la revisin fijada a final de semestre.
Luego de cada trabajo prctico los alumnos debern entregar un informe de las actividades realizadas, los resultados obtenidos y la correspondiente discusin de estos, para esto los alumnos tendrn 2 das hbiles para realizar la entrega de ste en el Laboratorio de Microbiologa y Biotecnologa Oral (6to piso- R8, Echaurren 237). Los
informes consistirn en una forma pre-establecida que se debe completar con los datos solicitados segn corresponda en cada actividad prctica. Ud. deber guardar la colilla con los datos de la entrega. Se descontar 0,2 pts de la nota final por cada minuto de atraso en la entrega de los informes.
9. Horario de atencin de estudiantes
El horario de atencin a estudiantes deber ser agendada va correo electrnico con al menos 24h de anticipacin. El horario y lugar sern fijados por cada docente.
10. Comunicacin alumno-profesor
Toda informacin para las distintas secciones de cursos ser comunicada a travs del mdulo de avisos de Intranet. Ningn otro canal se considera oficial.
11. Otros.
El ingreso al laboratorio debe ser con delantal blanco y una credencial para solicitar el material de trabajo. Adems, cada alumno debe tener un candado para guardar sus pertenencias en los casilleros disponibles fuera de la sala, ya que est prohibido ingresar con bolsos, chaquetas y/o artculos que no sean utilizados durante el trabajo prctico.
Queda estrictamente prohibido el uso de celulares dentro de la sala para actividades irregulares (cualquiera a excepcin de cmara fotogrfica o cronmetro).
Queda estrictamente prohibido utilizar celulares y reproductores (grabadoras, mp3, mp4, etc.), durante los controles, as como en las revisiones de evaluaciones.
El alumno deber leer con anterioridad la Gua de introduccin al Laboratorio de Microbiologa BIO253 que ser subida a intranet para seguir las instrucciones necesarias para cada prctico.
12. Formas de citar las referencias en el informe:
En los informes la bibliografa debe ser escrita de forma correcta, segn su procedencia. Algunos ejemplo:
1. Artculos en revistas: Nombre Autores, Ao de publicacin, Nombre Revista, Volumen, Pginas.
Ej: Woese, C.R., 1987, Bacterial evolution, Microbiol. Rev., 51:221-271.
2. Libros: Nombre Autores, Nombre Libro, Ao de publicacin, Edicin, Editorial, Pginas.
Ej: Madigan M. T., Martinko J. M., Dunlap P. V. y Clark D. P., Brock. Biologa de los Microorganismos. 2009, 12 ed., Editorial Pearson Educacin, 125 135.
3. Electrnicas: Temas principal, tema especfico, fecha de cuando se utiliz, direccin electrnica.
Ej: Infecciones por Staphylococcus, Staphylococcus aureus resistente a meticilina (SARM), martes 4 de marzo 2014,
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/007261.htm
Las citas electrnicas deben provenir de sitios confiables como Universidades, Sociedades Cientficas, Sitios de revistas electrnicas, etc.
13. Bibliografa recomendada
1. Brock (1998) Biologa de los Microorganismos. Prentice Hall Iberia, Madrid.
2. Mims C. A., Playfair J. H. L., Roitt I. M., Wakelin D., Williams R. y Anderson R.M., Microbiologa Mdica, 1999, Editorial Harcourt-Brace
3. Brooks, Butel y Morse (1999). Microbiologa Mdica de Jawetz, Melnick y Adelberg. Manual moderno 16 edicin.
4. Murray P., Rosenthal K y Pfaller M., Microbiologa Mdica, 2006, 6 ed., Editorial Elsevier.
5. Madigan M., Martinko J. y Parker J., 2004, Brock: Biologa de los Microorganismos, 10 ed., Editorial Pearson Educacin
6. Abbas A., Lichtman A. y Pillai H., Inmunologa celular y molecular, 2008, 6 ed. Editorial Elsevier Espaa
INTRODUCCIN AL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA
1.1 BIOSEGURIDAD
Un laboratorio de microbiologa debe contar con la infraestructura necesaria para manipular un
microorganismo de acuerdo a su riesgo biolgico cumpliendo con los procedimientos del
nivel de bioseguridad correspondiente (niveles del 1 al 4).
Nivel de Bioseguridad 1
En este nivel se trabaja con agentes que presentan un peligro mnimo para el personal del
laboratorio y para el ambiente. El acceso al laboratorio no es restringido y el trabajo se
realiza por lo regular en mesas estndar de laboratorio. En este nivel no se requiere equipo
especial ni tampoco un diseo especfico de las instalaciones. El personal de estos
laboratorios es generalmente supervisado por un cientfico con entrenamiento en
microbiologa.
Nivel de Bioseguridad 2
Es similar al nivel 1 y en l se manejan agentes de peligro moderado hacia el personal y el
ambiente, pero difiere del nivel 1 en las siguientes caractersticas:
1. El personal de laboratorio tiene entrenamiento especfico en el manejo de agentes
patgenos
2. El acceso al laboratorio es restringido cuando se est realizando algn trabajo
3. Se toman precauciones extremas con instrumentos punzocortantes contaminados
4. Ciertos procedimientos en los cuales pueden salpicar los agentes o aerosoles se
llevan a cabo en gabinetes de trabajo biolgico
Nivel de Bioseguridad 3
Este nivel es el que se encuentra en los laboratorios clnicos, de diagnstico, algunos
laboratorios universitarios y tambin de investigacin, en el cual se realiza trabajo con
agentes exticos o que pueden causar un dao serio y potencialmente mortal como
resultado de la inhalacin o exposicin a los mismos (por ejemplo, el Carbunco).
El laboratorio cuenta con un diseo y con caractersticas especiales y todos los materiales son
manipulados utilizando vestimenta y equipo de proteccin.
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Sin embargo, se reconoce que no todos los laboratorios llegan a cumplir con las normas
recomendadas para este nivel de bioseguridad. En estas circunstancias, es aceptable el
realizar las siguientes prcticas para poder seguir operando de una manera segura:
1. Ventilar el aire del laboratorio al exterior
2. La ventilacin del laboratorio se tiene que hacer con un flujo de aire direccional
controlado
3. El acceso al laboratorio est restringido
4. Seguir el estndar de prcticas microbiolgicas y equipamiento de seguridad
impuesto para el nivel de bioseguridad 2.
Nivel de Bioseguridad 4 Este nivel es el que se utiliza para trabajar con agentes biolgicos que representan un alto
riesgo individual de contagio y que adems son un riesgo para la vida. Los agentes nuevos que
tienen un cierto parecido con los antgenos de los agentes conocidos que operan en el nivel 4,
son confinados a este nivel hasta que se tiene suficiente informacin para confirmar que
pertenecen a este nivel o bien pasarlos al nivel adecuado.
El personal de estos laboratorios cuenta con entrenamiento especfico y extensivo en el
manejo de agentes infecciosos y cuentan con entrenamiento para trabajar en el ambiente
estril y controlado de los mismos.
Por lo regular los cientficos que trabajan aqu, utilizan trajes especiales que cubren la
totalidad de sus cuerpos y que adems tienen una leve sobrepresin para evitar que entren
partculas infecciosas al mismo si es que ste llega a desgarrarse.
Los laboratorios se mantienen con una presin de aire negativa, lo cual ayuda a impedir que los
agentes nocivos escapen al ambiente.
Nuestro trabajo en el laboratorio involucra microorganismos no patgenos, siendo nuestro nivel
de Bioseguridad de tipo 2. Es decir, se requiere de un espacio diseado especialmente para la
manipulacin del microorganismo y otros espacios para la preparacin del material estril y la
eliminacin o esterilizacin del material contaminado. Adems se deben seguir normas que
permitan una manipulacin libre de contaminacin para el microorganismo, el experimentador
y para el medio ambiente.
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1.2 MATERIALES PRESENTES EN UN LABORATORIO DE MICROBIOLOGA Es esencial que posea: microscopios, refrigeradores, cmaras de cultivo, balanzas,
centrfugas y destiladores de agua. En muchas ocasiones las cmaras de cultivo y
refrigeradores se ubican en una sala especial, o bien algunos de estos equipos son de uso
comn para varios laboratorios.
MICROSCOPIO OPTICO COMPUESTO:
Sistema ptico o OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Ampla la imagen del
objetivo.
o OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparacin. Ampla la imagen de
sta.
o CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la
preparacin. o DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
o FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.
Sistema mecnico o SOPORTE: Mantiene la parte ptica. Tiene dos partes: el pie o base y el
brazo.
o PLATINA: Lugar donde se deposita la preparacin.
o CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular o
binocular.
o REVLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar,
cambiar los objetivos.
o TORNILLOS DE ENFOQUE: Macromtrico que aproxima el enfoque y
micromtrico que consigue el enfoque correcto.
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Figura N1: Microscopio de luz.
1.2 OTROS MATERIALES UTILIZADOS SON:
a) De vidrio: placas de Petri, matraces Erlenmeyer, tubos de ensayo, pipetas Pasteur,
embudos, matraces aforados, pipetas graduadas, buretas, probetas, cristalizadores,
portaobjetos, cubreobjetos, desecadores, frascos (diferentes capacidades, transparentes o color
mbar), vasos de precipitado, frascos cuenta gotas, etc.
b) Otros: algodn, papel filtro, papel indicador de pH, papel de envolver, pinzas, bistures, asas
con hilos de platino, colorantes, reactivos diversos, etc.
Para realizar siembras y/o repiques, se utilizan asas con hilos de platino o de tungsteno. La
utilizacin de estos metales se debe a que son resistentes a la oxidacin y porque una vez
esterilizados a la llama, se enfran rpidamente sin riesgo de provocar la muerte de los
microorganismos con que se est trabajando. Adems, estos hilos son muy maleables
pudiendo ser transformados en un asa o en esptula, permitiendo repicar o resembrar desde un
medio lquido o slido. 6
Asa nquel-cromo
Matraz Erlenmeyer
Placa de Petri
Pipeta Pasteur
Placa de Petri con medio slido
INCUBADORA (Rango temperatura 5-100C, microprocesador regula la T +/- 0.5C.)
Control de la contaminacin en el laboratorio:
Dada la relevancia del diagnstico etiolgico que otorga el laboratorio, es de la mayor
importancia evitar la contaminacin de las muestras, ya sea desde el operador como desde
otras muestras procesadas sucesivamente (contaminacin cruzada). Para ello, es necesario
que el operador trabaje con tcnica asptica y que el material utilizado sea estril
1. Esterilizacin: Proceso que lleva a la eliminacin absoluta de microorganismos: bacterias (formas
vegetativas y esporuladas), virus y hongos en las superficies inanimadas.
Mtodos de esterilizacin:
a) Fsicos:
Calor seco: - Incineracin ( mechero)
- Horno Pasteur
Calor hmedo: - Ebullicin
- Autoclave
- Pasteurizacin
Luz ultravioleta
Radiaciones ionizantes
Ondas snicas y ultrasnicas
Filtracin
b) Qumicos:
Oxido de etileno
2. Tcnica asptica:
En el laboratorio de microbiologa es esencial trabajar con tcnicas estriles que eviten la
contaminacin de las muestras clnicas.
Dado que los medios de cultivo estn diseados para favorecer el crecimiento microbiano,
las bacterias y los hongos del ambiente (provenientes de los materiales, manos y faringe del
operador, etc.) depositados sobre el medio crecern y contaminarn los cultivos. Esto debe
ser evitado para tener la certeza que los microorganismos desarrollados correspondan a los
de la muestra.
Por lo tanto los medios de cultivo se esterilizan antes de su uso y se manipulan con tcnica
asptic
AUTOCLAVE
En trminos de Fsica experimental se define el punto de ebullicin de un lquido como la
temperatura a la cual se iguala el valor de la presin de vapor del fluido con el que
corresponde a la presin atmosfrica. El autoclave est formado por una vasija cilndrica de
hierro forjado, de paredes gruesas y con una tapa resistente que se cierra hermticamente
mediante la accin o giro de un tornillo conectado a una abrazadera. En un comienzo, antes
de que se alcance la temperatura de 100C, se elimina la presin del vapor de agua
(Flowing steam), de modo que suba la temperatura junto con la presin, sin alcanzar el
punto de ebullicin del agua. Este procedimiento aplicado sobre material resistente a la
temperatura elimina las bacterias, virus y esporas, es decir, queda estril.
1.4 Precauciones en el laboratorio y durante el trabajo prctico - Para evitar posibles contaminaciones, es esencial la limpieza y el orden en el laboratorio.
- Antes de comenzar a trabajar se debe limpiar el mesn con un algodn embebido en
alcohol etlico 70%.
- Se recomienda trabajar en forma cmoda en un mesn material sinttico duro y no
inflamable. Este mesn debe estar ubicado en un sitio con menor corriente de aire (las
ventanas deben estar cerradas), alejado de las zonas de circulacin de otras personas y debe
contar con un mechero.
- Los tubos de ensayo o matraces que contengan medios de cultivos o cultivos de
microorganismos, nunca deben abrirse en posicin vertical, sino lo ms horizontalmente
posible (inclinados) y para quitar el tapn de algodn se mantendrn inclinados con una mano
y se abrirn con la otra, la que sostendr a su vez el asa (con el dedo meique, se retira el
tapn de algodn que obtura el tubo). Una vez abierto de la forma sealada, se flamea por
algunos segundos el orificio, repitiendo dicha operacin una vez realizada la siembra (el tapn
nunca debe dejarse sobre el mesn).
- Antes de utilizar las asas con hilos de platino, que sirven para las siembras y/o repiques,
stas deben flamearse al rojo en posicin vertical bajo la accin de la llama. Antes de
efectuar la siembra y/o repique debe esperarse algunos segundos a que se enfren,
pudiendo enfriarse tambin en el borde de la placa de Petri que contiene el medio de
cultivo. Inmediatamente despus de haberlas utilizado, deben flamearse nuevamente,
evitando diseminar el microorganismo en el medio ambiente. 9
Partes de la llama
1.- Cono fro: no llega oxgeno
2.- Cono de reduccin: poco oxgeno
3.- Cono de oxidacin: abundancia de oxgeno
4.- Zona de fusin: alcanza los 1500 C (Zona
que esteriliza por calor)
El asa se flamea en la zona 4, hasta lograr la
Incandescencia.
- Las placas de Petri deben abrirse mantenindolas en lo posible en posicin vertical.
- El material de vidrio destinado a esterilizacin debe prepararse previamente (placas de
Petri envueltas en papel, etc.), estar bien lavado y seco. El lavado se realiza con
detergentes y/o soluciones especiales, luego debe enjuagarse con H2O corriente y
posteriormente con H2O destilada.
- Las observaciones microscpicas, tinciones y las diferentes pruebas bioqumicas deben
realizarse en el momento oportuno. 1.5 NORMAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO a) Dejar la ropa innecesaria en las perchas del laboratorio y usar delantal (blanco).
b) Nunca deben llevarse a la boca lpices, etiquetas o cualquier otro material. c) Los mesones del laboratorio deben limpiarse antes y al final de cada laboratorio con un
desinfectante apropiado.
d) Las asas con los hilos de platino deben esterilizarse a la llama del mechero en toda su
extensin antes y despus de su uso. El salpicado se evita sosteniendo el hilo alrededor
de la llama antes de flamearlo.
e) No se distraiga conversando mientras trabaja, as evitar quemarse con el mechero o
sufrir otros accidentes. 10
f) Si se derrama un cultivo en el mesn o piso, cubrir el rea con un desinfectante y
notificar al Instructor.
g) Nunca deben sustraerse cultivos de microorganismos del laboratorio. h) Los medios inoculados deben colocarse en las cmaras de cultivo con su identificacin
respectiva, ej.: nombre, naturaleza del espcimen, sustrato del cual se asla, fecha,
identificacin del manipulador.
i) Cuando no se utilizan los mecheros, stos deben guardarse y se debe estar seguro que
se les ha apagado al final de cada laboratorio.
j) Oculares, objetivos, como tambin otras partes del microscopio, debern limpiarse
antes despus de su uso. Los lentes deben limpiarse con papel especial para lentes o un
pao de batista.
k) Todos los reactivos y equipos deben dejarse en su lugar de origen al trmino de cada
laboratorio.
l) Todos los tubos, placas de Petri, pipetas, portaobjetos, etc., deben dejarse en los
recipientes adecuados una vez terminado el laboratorio.
m) Todos los materiales de desecho como trozos de papel, algodn, etc., deben colocarse
en los basureros adecuados y no en los mesones o suelo.
n) Accidentes personales, tales como derrame de reactivos, cortes y quemaduras, deben
comunicarse inmediatamente al Instructor.
o) Todos los estudiantes deberan lavarse las manos con jabn o con un desinfectante si es necesario, antes de dejar el laboratorio.
EVITE ACCIDENTES TRABAJANDO ORDENADAMENTE Y CON
PRECAUCION. Si en forma accidental entra en contacto con este material, avise
inmediatamente a su Instructor indicndole el origen de la contaminacin
TRABAJO PRCTICO N1: TCNICAS BSICAS DE MICROBIOLOGA
OBJETIVOS GENERALES
1. Identificar material bsico empleado durante la prctica bacteriolgica. 2. Adquirir la destreza para manipular materiales y cultivos bacterianos. 3. Adquirir la destreza y el cuidado para trabajar en esterilidad. 4. Conocer los diferentes medios de cultivo. 5. Conocer la utilidad de los medios de cultivo ms usados. 6. Conocer el concepto de siembra y aislamiento de bacterias. 7. Practicar diferentes tipos de siembra. 8. Practicar aislamiento bacteriano. 9. Conocer distintos tipos de tinciones y la utilidad de stas.
El primer trabajo prctico tiene como objetivo principal que el alumno adquiera los
conocimientos bsicos en lo que respecta a la manipulacin de cultivos bacterianos
poniendo nfasis en los conceptos de esterilidad, siembra en medios lquidos y slidos
(diferenciales, selectivos y enriquecidos) y manejo de microorganismos aerbicos.
El Laboratorio de Microbiologa cumple la misin de identificar el agente
etiolgico de una determinada patologa. Para lograr esto, es fundamental la obtencin de un
CULTIVO PURO, ya que por lo general la muestra que contiene al patgeno ha evaluar
viene contaminada con bacterias de la flora normal. Por otra parte, luego de la identificacin del
microorganismo, el Laboratorio de Microbiologa puede orientar respecto al tratamiento
antibitico a seguir, si este corresponde, ya que se puede evaluar la susceptibilidad del
patgeno a diferentes agentes antimicrobianos.
Como primera actividad prctica el alumno(a) debe concentrarse en realizar los
procedimientos microbiolgicos bsicos de manera adecuada, manteniendo siempre las
condiciones de esterilidad necesarias para un buen anlisis. Por lo tanto, como primeras
actividades el alumno deber familiarizarse con el material ESTRIL con el que trabajar
(Tabla N1) y los procedimiento de siembra y aislamiento de microorganismos desde
diferentes muestras.
. La siembra implica proporcionar a los microorganismos un ambiente que contenga todos los
nutrientes necesarios para su desarrollo y multiplicacin. En el laboratorio este medio
ambiente lo constituyen los medios de cultivo, cuyas caractersticas varan de acuerdo a los
requerimientos de los microorganismos o a los procedimientos experimentales que sea
necesario realizar a lo largo de su proceso de identificacin.
Debido a que el cuerpo humano es un lugar donde cohabitan un sin nmero de
microorganismos distintos, generalmente las muestras contienen una flora mixta, la que se
manifiesta por el desarrollo de distintas especies bacterianas. Por este motivo es de suma
importancia obtener una cepa bacteriana aislada para poder estudiar sus caractersticas
morfolgicas y bioqumicas y as lograr una identificacin correcta (Figura N2). Por lo
tanto, en una primera instancia, para obtener un cultivo puro se debe lograr primero el
AISLAMIENTO de UNA COLONIA en medio slido, puesto que por definicin una
colonia proviene de una sola bacteria y por ende correspondera a un cultivo puro. En el
caso de los medios lquidos, una vez obtenido el crecimiento bacteriano (enturbiamiento),
se debe realizar el aislamiento de UNA gota a un medio slido para obtener colonias
aisladas y puras
Colonia A
Colonias A y B se encuentran mezcladas Colonia B
Figura N 2: Aislamiento por estras o en cuadrantes en placa de agar MacConkey.
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